胎兔成骨细胞与复合肝细胞生长因子/异种脱蛋白松质骨的体外培养

目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)对体外培养的胎兔成骨细胞在异种脱蛋白松质骨(DPB)支架上黏附行为及增殖和分化功能的影响.方法:成骨细胞从胎兔中分离,实验组为HGF/DPB与成骨细胞复合培养,对照组为DPB与成骨细胞常规培养.通过电镜观察成骨细胞在HGF/DPB表面生长与附着状态,同时检测细胞增殖状况和碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性等,评价成骨细胞生长情况和细胞活性.结果:成骨细胞在复合肝细胞生长因子脱蛋白骨外表面及孔隙内表面均可贴附生长,增殖、分化良好.HGF/DPB对成骨细胞的ALP活性有明显的促进作用,并能促进成骨细胞的增殖.结论:HGF/DPB具有良好的生物相容性和骨诱导作用,可作为骨组织工程备选的复合支架材料.     

新型生物玻璃支架细胞相容性的实验研究

目的探讨新型生物玻璃支架BG-20的细胞相容性,为组织工程支架材料的选择提供依据。方法将骨髓基质干细胞（BMSc）与BG-20体外复合培养,进行形态学观察、细胞增殖、碱性磷酸酶（ALP）测定。结果BMSc能贴附在BG-20上,增殖、生长不受影响,且BG-20有一定的促细胞增殖的作用。ALP测定结果BG-20组与对照组的差异无统计学意义（P〉0.05）。结论BG-20具有良好的细胞相容性,能作为BMSc的载体用于组织工程骨的构建。     

骨髓基质细胞和胶原膜BME-10X生物相容性的实验研究

目的 观察胶原膜BME-10X与Beagle犬骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells, BMSCs)的生物相容性,为将其运用于组织工程技术修复牙周缺损提供理论依据.方法 体外培养Beagle犬BMSCs,并与胶原膜BME-10X复合培养.HE染色检测细胞与材料的黏附,MTT法检测细胞的增殖,并行碱性磷酸酶(ALP)活性检测.结果 BMSCs复合胶原膜后生长良好,MTT及ALP结果均显示,在各时间点,对照组和实验组间增殖及ALP活性均无显著性差异(P>0.05).结论 胶原膜BME-10X有良好的生物相容性,有望成为BMSCs的载体材料应用于牙周组织工程研究.     

兔骨髓基质细胞与聚DL-乳酸/羟基磷灰石生物相容性的实验研究

目的检测聚DL-乳酸/羟基磷灰石（PDLLA/HA）复合材料的特性,探讨骨髓基质细胞（BMSCs）与PDLLA/HA的生物相容性,为筛选骨组织工程的支架材料提供依据.方法将BMSCs与PDLLA/HA复合体外培养,通过形态学的观察、细胞增殖率及ALP活性的测定,观察PDLLA/HA对培养细胞的影响.结果复合培养时BMSCs能在PDLLA/HA上贴附、繁殖,其生长及功能不受影响.结论 PDLLA/HA具有良好的细胞相容性,能作为骨组织工程种子细胞的支架材料.     

脱细胞骨软骨支架的细胞相容性测定及与软骨细胞体外的复合

目的测定脱细胞和脱钙处理的脱细胞骨软骨支架的细胞相容性及该支架与软骨细胞体外复合培养的生物学特性和黏附关系,以探讨脱细胞骨软骨支架作为软骨组织工程支架的可行性。方法采用自制脱细胞骨软骨支架与软骨细胞体外复合培养,用细胞增殖度法测定脱细胞骨软骨支架的细胞相容性,并行电镜观察其相互黏附关系。结果脱细胞骨软骨支架的细胞相容性良好;体外复合实验中,软骨细胞可贴附于材料上生长增殖,并分泌细胞外基质。结论细胞增殖实验显示脱细胞骨软骨支架的细胞相容性良好;体外复合实验显示脱细胞骨软骨支架可与软骨细胞良好复合,适于软骨细胞贴附生长。     

丝素蛋白/壳聚糖/纳米羟基磷灰石骨组织工程支架材料的体外细胞毒性评价

目的 探讨丝素蛋白/壳聚糖/纳米羟基磷灰石生物支架与兔骨髓间充质干细胞的体外细胞毒性.方法 采用丝素蛋白/壳聚糖/纳米羟基磷灰石构建的生物支架与兔骨髓间充质干细胞体外共培养,用材料的细胞毒性、细胞黏附率、细胞增殖活力指标以MTT法、倒置显微镜及电镜观察来评价.结果 细胞在支架材料上黏附、生长良好,分裂增殖活跃,细胞毒性检测CTG均为0级,实验组与时照组细胞黏附率比较无统计学差异（P＞0.05）,实验组与对照组细胞增殖活力随着时间增加,细胞在支架增殖速度增快.第1、3、5、7天实验组与对照组比较有统计学差异（P＜0.05）.扫描电镜观察发现细胞培养7天后生长良好,分裂正常,与支架材料黏附紧密.结论 支架材料对细胞无毒性,具有很好的细胞相容性.     

脱细胞骨软骨支架的细胞相容性测定及与软骨细胞体外复合的实验研究

目的 测定经自创的去垢剂--酶法进行脱细胞和脱钙处理的脱细胞骨软骨支架的细胞相容性,及该支架与软骨细胞体外复合培养的生物学特性和粘附关系, 以探讨脱细胞骨软骨支架作为软骨组织工程支架的可行性。方法 采用自制脱细胞骨软骨支架与软骨细胞体外复合培养，用细胞增殖度法测定脱细胞骨软骨支架的细胞相容性，并行电镜观察其相互粘附关系。结果 脱细胞骨软骨支架的细胞相容性良好；体外复合实验中，软骨细胞可贴附于材料上生长增殖，并分泌细胞外基质。结论 细胞增殖实验显示脱细胞骨软骨支架的细胞相容性良好；体外复合实验显示脱细胞骨软骨支架可与软骨细胞良好复合，适于软骨细胞贴附生长。     

BG/PHBV复合多孔支架材料与成骨细胞体外复合培养

目的用生物活性玻璃BG/聚羟基烷酸酯PHBV复合多孔支架材料与骨髓基质细胞来源的成骨细胞体外复合培养了解其生物相容性,为骨组织工程支架材料选择提供依据。方法:将体外培养的兔骨髓基质细胞诱导分化的成骨细胞,与BG/PHBV复合多孔支架材料体外复合培养,对复合体进行形态学、扫描电镜、细胞增长能力的测定,评价细胞与材料的相容性。结果:骨髓基质细胞有较强的向成骨细胞分化和繁殖能力成骨细胞与BG/PHBV复合多孔支架材料体外复合培养8d,分布于支架材料的成骨细胞迅速分化增殖,分泌细胞外基质并形成钙结节。结论:骨髓基质细胞是骨组织种子细胞的良好来源BG/PHBV复合多孔支架材料与成骨细胞具有良好的生物相容性,是构建组织工程骨的一种理想支架材料。     

I型胶原支架材料与人脂肪干细胞体外生物相容性研究

目的观察人脂肪干细胞与I型胶原支架材料的生物相容性,为脂肪组织工程选择适宜的种子细胞载体。方法将人脂肪干细胞与I型胶原支架体外培养复合,采用倒置相差显微镜和扫描电镜,观察细胞在支架上黏附、生长及增殖情况并计算细胞黏附率,XTT比色法检测细胞增殖率。结果脂肪干细胞能良好的在支架上黏附、生长和增殖。结论I型胶原支架材料具有良好的细胞相容性,可作为脂肪组织工程的种子细胞载体。     

高分子支架复合骨髓源成骨细胞体外培养的研究

目的 观察高分子支架对成骨细胞的增殖和成骨活性的影响.方法 将新西兰幼兔骨髓基质细胞经分离、体外培养及诱导获得的成骨细胞接种在盘状LDIG高分子支架上复合培养,同时以多孔聚乙醇酸材料作为对照,通过细胞计数、Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶活性和扫描电子显微镜等手段检测成骨细胞增殖数量及成骨活性.结果 骨髓源成骨细胞在高分子支架上生长良好,其增殖数量及成骨活性均优于对照组.结论 用高分子材料制备的组织工程支架具有理想的多孔网状结构和良好的骨细胞相容性,可以用于构建组织工程骨.     

转BMP-7基因BMSCs复合nHAC体外培养的实验研究

目的建立能够稳定表达骨形态发生蛋白-7（BMP-7）的骨髓基质干细胞（BMSCs）,并与纳米羟基磷灰石胶原（nHAC）材料复合培养体外构建组织工程骨。方法用慢病毒把人BMP-7基因和增强型绿色荧光蛋白（eGFP）基因导入大鼠BMSCs,用G418筛选获得阳性细胞后接种于nHAC支架体外复合培养。荧光显微镜下观察eGFP表达,判断感染效率;以四唑盐（MTT）实验检测细胞活力;RT-PCR、ELISA检测目的基因表达;碱性磷酸酶（ALP）活性检测成骨能力;扫描电镜观察细胞在支架材料中的黏附、生长状况。结果慢病毒24h对BMSCs的转染率约为90%;MTT实验显示细胞活性较未转染组无明显差异（P〉0.05）;RT-PCR检测到BMP-7表达,在1300bp处出现特异性条带;ELISA检测24hBMP-7蛋白含量为（150.2±18.3）pg/ml;ALP活性以第16天左右最强;扫描电镜见细胞种植nHAC支架后粘附、生长良好。结论 BMP-7可在BMSCs内稳定表达,并诱导其向成骨分化;与nHAC复合培养可构建组织工程骨。     

MMT法评价多孔纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架材料的细胞毒性

目的制备多孔纳米羟基磷灰石/壳聚糖（nHA/CS）,对其进行细胞毒性检测。方法采用共沉淀法和粒子沥滤法制备多孔nHA/CS。分离培养大鼠成骨细胞,碱性磷酸酶（ALP）染色进行成骨细胞进行鉴定,倒置显微镜下观察培养过程中细胞的形态和增殖情况。MTT检测多孔nHA/CS支架材料对成骨细胞增殖的影响,评价细胞毒性。结果细胞可在多孔nHA/CS周围贴壁生长,并且附着、增殖,其生长及功能不受抑制。结论多孔nHA/CS无细胞毒性,有利于细胞的黏附和增殖,可以用于骨组织工程支架材料。     

曲古抑菌素A对大鼠脂肪干细胞在二维及三维培养下早期骨向分化的影响

目的:研究曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对大鼠脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)在二维培养板(TCP)和三维复合纳米羟基磷灰石/胶原(nano-hydroxyapatite/collagen,nHAC)支架上早期骨向分化的影响?方法:处理组分别在含75 nmol/L TSA的二维培养板和三维 nHAC上培养ADSCs(TCPT组和nHACT组),未添加TSA的两组(TCP组和nHAC组)为对照组?使用扫描电子显微镜(field emission scanning electron microscope,FESEM)对接种ADSCs 1?3 d后nHAC和nHACT组细胞的生长情况进行表征,以碱性磷酸酶(ALP)活性为早期骨向分化指标,分别检测3?5?7 d时的ALP活性,用Western blot检测成骨指标Runx2?骨桥蛋白(OPN)?骨形态发生蛋白2(BMP2)的表达?结果:ADSCs在三维培养中均表现出良好的粘附?铺展,其中经TSA诱导的细胞对支架的黏附?铺展更好;ALP值在3?5?7 d持续增高,其中以nHACT组最高,组间差异显著(P < 0.05);Western blot结果显示Runx2?OPN?BMP2在 nHACT组表达最高,与ALP结果一致?结论:TSA对ADSCs早期骨向分化有促进作用,复合三维支架共培养后促进作用显著?     

神经生长因子对兔牙髓干细胞体外增殖、成骨分化影响的实验研究

目的探讨神经生长因子（nerve growth factor,NGF）对兔牙髓干细胞（dental pulp stem cells,DPSCs）体外增殖及成骨分化的影响,为牙髓组织的损伤修复提供新线索。方法采用酶解组织块法分离培养健康新西兰兔的DPSCs,光镜下观察其形态学及生长变化。将培养的第3代DPSCs分为3组:空白组（只有DPSCs）、实验组（DPSCs混合100 μg/L NGF）和对照组（DPSCs混合矿化液）。观察实验7 d和14 d时3组的细胞形态及碱性磷酸酶活性结果,RT-qPCR检测各组Runx-2、COL-1以及OCN的基因表达水平。结果体外培养的DPSCs生长良好,贴壁生长,大多为多角形或长梭形,呈巢式或集落生长;3组的碱性磷酸酶活性在实验14 d时均高于实验7 d时的数值,且7 d和14 d时实验组与空白组、对照组差异均有统计学意义（P < 0.05）;RT-qPCR结果显示培养14 d时实验组中Runx-2、COL-1和OCN基因的表达量均高于空白组（P < 0.05）。结论NGF可以提高DPSCs的增殖和成骨分化能力,两者的联合应用修复效果优于DPSCs单独应用。     

去抗原异种松质骨的生物相容性研究

目的：了解去抗原异种松质骨（antigen—extracted xenogeneic cancellousbone，AEXCB）对骨髓基质细胞增殖的影响，为细胞移植载体的选择提供依据。方法：取新生小牛股骨下端松质骨，经物理化学处理，制成去抗原异种松质骨载体，与兔骨髓基质细胞bone marrow stromalcells，BMSC）体外复合培养，通过扫描电镜、MTF测试法、考马斯亮蓝和碱性磷酸酶（ALP）活性检测法，观察去抗原异种松质骨材料对细胞生长、增殖及功能表达的影响。结果：骨髓基质细胞能在AEXCB材料上粘附、增殖，细胞形态良好。去抗原异种松质骨与BMSC作用后ALP活性的吸光度（OD）值，与对照组比较无显著差异。结论：去抗原异种松质骨材料无细胞毒性作用，具有良好的细胞相容性，可用作骨组织工程的支架材料。     

壳聚糖-胶原支架与人牙周膜细胞复合培养的实验研究

目的 对不同比例的壳聚糖-胶原（chi—col）进行细胞相容性和细胞毒性的研究，以初步探讨其应用于牙周组织工程的可行性。方法 将体外培养的人牙周膜细胞（PDLCs）接种于不同比例的chi—col上复合培养，采用细胞计数评价PDLCs在clli—col上的附着、生长情况，并通过MTF测试法和碱性磷酸酶（ALP）活性检测法研究chi—col浸提液对PDLCs增殖和功能表达的影响。结果 人PDLCs在chi—col上形成良好贴附并增殖，而PDLCs在不同浓度的材料浸提液中的生长、增殖及ALP活性与对照组相比无统计学意义。结论 clli—col具有良好的三维空间结构和细胞相容性，且无细胞毒性，有望成为牙周组织工程的支架材料。     

rhBMP2对牙髓成纤维细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响

目的了解重组人骨形成蛋白(rhBMP2)对牙髓成纤维细胞增殖活性及碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。方法用MMT比色法检测不同浓度rhBMP2作用下,牙髓成纤维细胞增殖活性的变化;用酶动力学方法检测不同浓度rhBMP2作用下ALP活性的变化。结果低浓度的rhBMP2可提高体外培养人牙髓细胞的增殖活性,浓度为200ng/mL时,增殖活性达到最大值,与对照组间差异有统计学意义(P<0.05)。并可促进人牙髓细胞ALP活性,呈浓度依赖性,与对照组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论rhBMP2能够促进牙髓细胞增殖和ALP活性,是牙髓细胞增殖和分化的重要因子之一。     

1,25（OH）2D3对4种细胞碱性磷酸酶活性的影响

观察１，２５（ＯＨ）２Ｄ３对体外培养的人牙乳头细胞，牙髓细胞，牙龈细胞，成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响。方法；用组织块培养法和ＡＬＰ测定法。结果：在１，２５（ＯＨ）２Ｄ３ｄ和５ｄ下人牙乳头细胞，人牙髓细胞及人成骨细胞ＡＬＰ活性增加，第７日变化不明显，而人牙龈细胞未见明显变化。     

骨形态发生蛋白2／7异二聚体对人脂肪间充质干细胞成骨分化的促进作用

目的：探讨新型成骨诱导生长因子骨形态发生蛋白2/7异二聚体（bone morphogenetic protein 2/7 heterodimer,BMP-2/7）在诱导人脂肪间充质干细胞（human adipose-derived stem cells,hASCs）成骨分化中的作用。方法：体外培养hASCs,以成骨诱导培养基（osteogenic medium,OM）中添加150 μg/L BMP-2/7为实验组,以单纯OM为阳性对照组（OM组）, 以常规增殖培养基（proliferation medium,PM）为阴性对照组（PM组）。体外诱导的第1、4和7天检测细胞DNA含量,第7和14天进行碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色及定量检测,第21和28天进行茜素红染色及定量检测,第1、4、7和14天分别进行成骨相关基因的检测。体内实验使用6只裸鼠,于其背部正中做皮肤切口,向两侧分离出4个皮下植入腔,分别植入：（1）单纯β 磷酸三钙（β-tricalcium phosphate,β-TCP）支架（支架对照组）;（2）β-TCP支架+hASCs（体外PM培养1周）（增殖细胞对照组）;（3）β-TCP支架+hASCs（体外OM培养1周）（诱导细胞对照组）;（4）β-TCP支架+hASCs（体外OM+150 μg/L BMP-2/7培养1周）（实验组）。植入后4周进行取材,标本制成组织学切片,进行HE和Masson三色染色分析。结果：体外诱导后第1天,实验组细胞DNA含量与PM组差异没有统计学意义（P>0.05）,第4天时实验组细胞DNA含量较PM组升高（P<0.05）,第7天时组间DNA含量没有明显差异（P>0.05）。诱导7天和14天后,实验组的ALP染色及定量检测均高于OM组和PM组（P<0.05）;第21和28天矿化结节染色及钙沉积定量检测均高于OM和PM组（P<0.05）。诱导第1天时实验组的成骨相关基因（Runx2、ALP、COL-1A1）的表达量即高于PM组 (P<0.05),诱导第4天时骨钙素（osteocalcin,OC）基因表达量即开始升高,第4、7和14天的基因表达量较OM和PM组显著升高（P<0.05）。HE染色分析可见实验组和诱导细胞对照组的hASCs能分泌出嗜酸性较强的均质细胞外基质,出现了强嗜酸性的类骨组织;与诱导细胞对照组相比,实验组的细胞外基质嗜酸性更强,类骨组织的面积更大,结构更加典型;其他两对照组均未见矿化基质和类骨组织生成。Masson三色染色分析可见实验组呈强阳性表现,细胞基质中充满绿染的胶原;诱导细胞对照组和增殖细胞对照组的细胞基质中有不同程度的阳性表现,但较之实验组,胶原的数量明显减少;单纯支架组未见胶原的表达。结论：BMP-2/7在hASCs的成骨分化过程中发挥了重要作用,能够有效促进hASCs的体外和体内成骨分化。