氧化应激在高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡中的作用

目的:探讨氧化应激在高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡中的作用。方法:分离培养SD乳鼠心肌细胞,分别用10～50mmol/L终浓度的葡萄糖进行干预,MTT测定各组心肌细胞的生长活力;激光共聚焦显微镜、脱氧核糖核酸转移酶原位缺口末端标记法(TUNEL)和流式细胞术用于观察和检测心肌细胞凋亡;将心肌细胞分为3组:对照组、高糖组和抗氧化剂组,分别检测各组上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量以反映心肌细胞的氧化应激水平。结果:MTT结果显示高糖能浓度依赖性地抑制心肌细胞的生长活力;激光共聚焦显微镜、TUNEL染色和流式细胞术均表明高糖能诱导心肌细胞凋亡;与对照组相比,高糖组LDH、MDA含量明显增高,SOD含量显著下降,与高糖组相比,抗氧化剂组LDH,MDA含量明显下降,SOD含量显著升高;流式细胞检测显示高糖组细胞凋亡率较对照组明显增加,而抗氧化剂组细胞凋亡率较高糖组则显著下降。结论:氧化应激是高糖诱导心肌细胞凋亡的一个重要机制。     

P53在高糖诱导心肌细胞凋亡中的作用

目的 探讨P53在高糖诱导心肌细胞凋亡中的作用.方法 将培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞随机分为4组:对照组、P53抑制剂组(葡萄糖浓度为5.5mmol/L,P53抑制剂浓度为50μmol/L)、高糖组(葡萄糖浓度为25mmol/L)和高糖+P53抑制剂组(P53抑制剂浓度为50μmol/L).噻唑盐比色法(MTT法)检测心肌细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot对各组细胞P53、BAX和Caspase-3进行半定量分析.结果 与对照组相比,高糖组心肌细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,Caspase-3、BAX和线粒体蛋白P53表达增多.与P53抑制剂组相比,高糖组心肌细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,Caspase-3、BAX和线粒体蛋白P53表达增多;高糖+P53抑制剂组心肌细胞活力也有所降低,凋亡率升高,Caspase-3、BAX和线粒体蛋白P53表达增多.与高糖组相比,高糖+P53抑制剂组的心肌细胞活力增高,凋亡率明显降低,Caspase-3、BAX和线粒体蛋白P53表达减少.结论 高糖可能通过介导P53转位到线粒体激活凋亡通路,引起心肌细胞凋亡.     

活性氧激活线粒体凋亡通路介导高糖诱导心肌细胞凋亡的研究

目的探讨氧化应激和p53介导的线粒体凋亡通路在高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡的作用。方法将培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞随机分为四组：对照组、高糖组（葡萄糖浓度为25mmol/L）、高糖＋抗氧化剂组（抗氧化剂浓度为10mmol/L）和高糖＋p53抑制剂组（p53抑制剂浓度为50μmol/L）。荧光分光光度计检测细胞内的活性氧,分光光度计检测上清液中的超氧化物歧化酶,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot对各组细胞p53和Caspase-9进行半定量分析。结果与对照组相比,高糖组心肌细胞凋亡率（P〈0.01）和ROS明显升高（P〈0.01）,上清液中的SOD含量明显降低（P〈0.01）,Caspase-9（P〈0.01）和线粒体蛋白p53表达增多（P〈0.01）。与高糖组相比,高糖＋抗氧化剂组心肌细胞凋亡率（P〈0.01）和ROS明显降低（P〈0.01）,上清液中SOD明显升高（P〈0.01）,Caspase-9（P〈0.01）和线粒体蛋白p53表达减少（P〈0.01）。与高糖组相比,高糖＋p53抑制剂组的心肌细胞凋亡率（P〈0.01）和ROS明显降低（P〈0.05）,上清液中SOD含量升高（P〈0.05）,Caspase-9（P〈0.01）和线粒体蛋白p53表达减少（P〈0.01）。结论高糖可能通过产生的活性氧介导p53转位到线粒体激活线粒体凋亡通路,引起心肌细胞凋亡。     

氯化锂对高糖致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用及其机制

目的： 观察不同浓度氯化锂（LiCl）对高糖环境培养下乳鼠心肌细胞的影响,探讨经典Wnt信号途径对高糖致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用。方法： 40只1~3 d SD乳鼠,原代心肌细胞培养后,随机分为对照组、高糖损伤组、氯化锂5、10 mmol/L组。倒置显微镜下观察心肌细胞形态学改变,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫细胞化学方法检测心肌细胞磷酸化糖原合成酶激酶-3β（p-GSK-3β）、β-连环蛋白(β-catenin)的表达变化。结果： 与高糖损伤组比较,LiCl 5 、10 mmol?L-1组心肌细胞的搏动频率趋于正常,心肌细胞的凋亡减少（P<0.05）,p-GSK-3β和β-catenin的表达增多（P<0.05）。随着LiCl浓度的增加,p-GSK-3β和β-catenin的表达增强。结论： LiCl明显抑制高糖致乳鼠心肌细胞的损伤,该效应可能与经典Wnt信号途径的激活有关。     

丹参对乳鼠心肌细胞凋亡的影响

目的 :观察丹参对乳鼠心肌细胞凋亡的影响 ,并探索其作用机制。方法 :体外培养的 Wistar乳鼠心肌细胞缺糖缺氧 6 h后 ,采用心肌酶检测其代谢及流式细胞术检测心肌细胞凋亡。结果 :缺糖缺氧组心肌细胞凋亡数量及酶指数显著高于正常对照组 ,大、小剂量丹参液组心肌细胞凋亡及酶指数明显下降 ,与缺糖缺氧组比较有显著性差异。结论 :丹参对缺糖缺氧心肌细胞凋亡有明显的抑制作用     

重组bcl-xL腺病毒对心肌细胞凋亡的影响

[目的]探讨转染人类抗凋亡基因bcl-xL能否提高心肌细胞对缺氧的耐受性,评价它对心肌细胞的抗凋亡作用.[方法]体外培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,建立模拟心肌缺氧模型;将携带人类bcl-xL基因的重组腺病毒感染心肌细胞;免疫细胞化学染色法分析bcl-xL蛋白的表达;TUNEL法检测凋亡指数;荧光显微镜下观察心肌细胞表达绿色荧光蛋白,用Hoechst33342染色观察细胞核的形态变化.[结果]转染rAd-bcl-xL/s的心肌细胞表达bcl-xL蛋白阳性单位(PU)(17.84±3.42)明显高于正常对照组(11.02±2.56)与rAd-bcl-xL/as转染组(8.53±2.25)(P＜0.01);缺氧诱导后心肌细胞凋亡指数为(45.67±8.47)%,而转染rAd-bcl-xL/s后的细胞凋亡指数减少至(9.42±2.48)%,有显著性差异(P＜0.01),未见典型的凋亡小体.[结论]腺病毒介导的bcl-xL基因能高效转染心肌细胞,并表达目的基因;外源性bcl-xL基因对体外培养的心肌细胞具有抗凋亡作用,能够提高心肌细胞对缺氧的耐受性,促进损伤心肌的恢复.     

NF-κB在高糖诱导“代谢记忆”致心肌细胞损伤的作用机制

目的探讨代谢记忆损伤心肌细胞的分子机制。方法体外培养20只SD大鼠乳鼠心肌细胞,每组5只,分为4组:持续低糖组、持续高糖组、代谢记忆组和PDTC组。计算细胞凋亡指数,免疫组化检测核内NF-κB的表达,Western Blot检测NF-κB蛋白,TUNEL检测细胞凋亡。结果代谢记忆组蛋白表达水平(1     

视黄酸对乳鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关因子表达的影响

目的探讨视黄酸对乳鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关基因、蛋白表达的影响。方法原代培养Balb/c乳鼠心肌细胞,并纯化获得心肌细胞。用不同浓度视黄酸(0.5、1.0、2.0、4.0μmol/L)进行处理,24h后倒置显微镜下观察各组心肌细胞的形态、搏动情况;流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率;RT-PCR检测凋亡相关基因———Fas,Fasl mRNA的表达。Western blot测定乳鼠心肌细胞Fas,Fasl蛋白的表达。结果不同浓度的视黄酸对心肌细胞的影响不同。与对照组相比,低浓度组(0.5、1.0μmol/L)对心肌细胞形态、搏动影响不明显,Fas、Fasl mRNA及蛋白表达增加,差异无统计学意义(P>0.05);当视黄酸的浓度大于2.0μmol/L时,心肌细胞损伤明显,搏动力减弱、凋亡增加,Fas、Fasl mRNA及蛋白表达均明显增高(P<0.05)。结论高浓度视黄酸对心肌细胞有明显的抑制及促凋亡作用,与Fas,Fasl介导的死亡受体信号转导途径密切相关。     

乳化异氟醚对缺氧复氧乳鼠心肌细胞的保护作用及bcl-2、bar表达的影响

目的 观察乳化异氟醚(8%体积分数)对培养乳鼠心肌细胞模拟缺血再灌注损伤后心肌细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2、bax的mRNA与蛋白水平表达的影响.方法 利用原代培养的Wistar乳鼠心肌细胞建立模拟心肌缺血再灌注模型,分正常培养组、模型组、脂肪乳组、乳化异氟醚(终浓度0.28 mmol/L).各组心肌细胞做相应分组处理后,利用倒置显微镜观察心肌细胞的生长状态和搏动频率,并用透射电镜观察细胞超微结构改变;流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率;RT-PCR检测心肌细胞凋亡基因bcl-2 mRNA、box mRNA的表达.Western blot定量检测Bcl-2、Bax蛋白表达.结果 乳化异氟醚组和脂肪乳组均可显著降低细胞凋亡率(P＜0.05),但乳化异氟醚组与脂肪乳组比较降低更明显(P＜0.05).乳化异氟醚可显著上调Bcl-2表达(P＜0.05)、下调Bax表达(P＜0.05);脂肪乳对Bcl-2和Bax表达无影响(P>0.05).结论 乳化异氟醚及其其中的成分之一脂肪乳可抑制模拟缺血再灌注损伤心肌细胞的凋亡;乳化异氟醚对缺氧复氧损伤的抗凋亡作用与其心肌细胞Bcl-2表达上调和Bax表达下调有关.     

丹参对乳鼠心肌细胞凋亡的影响

观察丹参对乳鼠心肌细胞凋亡的影响,并探索其机理。采用体外培养的wistar乳鼠心肌细胞缺糖缺氧6h,用心肌酶检测其代射及流式细胞术检测心肌细胞凋亡。结果显示缺糖缺氧组心肌细胞凋亡数及酶指数显著高于正常对照组,大、小剂量丹参液组心肌细胞凋亡及酶数量明显下降,与缺糖缺氧组比较有显著性差异。说明丹参对缺糖缺氧心肌细胞凋亡有明显的抑制作用。     

氧化/还原修饰肝素对高糖诱导肾小球系膜细胞凋亡及其信号转导途径的影响

目的：考察化学修饰的非抗凝肝素（高碘酸氧化／硼氢化钠还原修饰肝素，OR-Heparin）对高糖诱导的人肾小球系膜细胞凋亡的保护作用及其可能的机制。方法：肾小球系膜细胞经高糖或高糖＋OR-heparin作用24h，Hoechest33258染色、AnnexinV-PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡，Westernblotting检测凋亡相关蛋白（p53，Bcl-2，Bax，cytosolic cytochromec）的表达，Cy3-标记抗体荧光显微镜观察NF-κB的转录激活，比色法测定Caspase-3酶活。结果：氧化／还原修饰的肝素显著降低高糖诱导的肾小球系膜细胞的凋亡，同时抑制凋亡相关蛋白的表达以及NF-κB的转录激活。结论：氧化／还原修饰肝素可以通过抑制凋亡相关蛋白的表达来抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞凋亡，这可能与抑制NF-κB转录激活相关。     

复方水蛭滴眼液抑制大鼠晶状体上皮细胞凋亡及其对Bcl-2和Bax基因的调控

目的:探讨复方水蛭滴眼液(compound leech eye drops,Co-SZ)对H_2O_2诱导的大鼠晶状体上皮细胞(lens epithelial cell,LEC)凋亡的抑制作用及其对凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的调控,为将Co-SZ作为防治白内障的有效药物提供科学的依据。方法:采用H_2O_2复制SD大鼠LEC凋亡模型,同时采用Co-SZ干预。置二氧化碳培养箱共同孵育24h后,以末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素化脱脲苷三磷酸末端标记法(terminal deoxynucleotidyl transferase mediated biotin-dUTP nick end labeling,TUNEL)检测LEC凋亡率;透射电镜观察LEC超徵结构改变及凋亡形成;免疫组化法检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax的蛋白表达并进行比较。结果:TUNEL法检测结果显示Co-SZ组LEC凋亡率显著低于H_2O_2组。Co-SZ组LEC超微结构凋亡变化也显著轻于H_2O_2组。与H_2O_2组比较,Co-SZ可明显上调Bcl-2表达,下调Bax表达。结论:Co-SZ能育效抑制H_2O_2诱导的LEC凋亡。调控凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达可能是其抑制LEC凋亡的分子机制。     

高浓度葡萄糖诱导HepG-2细胞的凋亡及其调控的相关机制

目的 探讨高浓度葡萄糖诱导HepG-2细胞的凋亡及其调控的可能机制.方法 用含不同浓度葡萄糖的DMEM处理HepG-2细胞,分为正常组(糖浓度为5.5 mmol/L)和高浓度葡萄糖组(糖浓度分别为25、40、100、150、200 mmol/L ),采用MTT、Hoechst染色法观察细胞的增殖和凋亡状况; Weste...     

红景天苷对H9c2心肌细胞应激高糖损伤的保护作用及机制研究

目的?利用氧化应激联合高糖复合损伤心肌细胞,建立H9c2心肌细胞应激及高糖损伤模型,探讨应激高糖H9c2心肌细胞线粒体动力学相关蛋白表达、线粒体膜电位水平及细胞凋亡的影响,以及红景天苷对应激高糖H9c2心肌细胞的保护作用及其机制。方法?将正常培养的H9c2细胞随机分为5组:①对照组（C组,正常培养基）;②高糖组（G组,高糖培养基）;③H₂O₂组（H组,H₂O₂处理2小时后,更换为正常培养基继续培养）;④高糖+H₂O₂组（GH组,H₂O₂及高糖处理2小时后,更换为高糖培养基继续培养）;⑤红景天苷+高糖+H₂O₂组（SGH组,H₂O₂+高糖+红景天苷处理2小时后,更换为红景天苷+高糖培养基继续培养）。分组加药培养后,利用流式细胞技术分析各组H9c2心肌细胞的凋亡率;Western blot分别检测线粒体动力学相关蛋白Drp1、OPA1的表达水平;JC-1荧光染色法检测各组心肌细胞的线粒体膜电位水平。结果?①与C组比较,G组H9c2细胞Drp1蛋白表达水平显著升高,OPA1蛋白表达水平显著降低（P<0.01）;线粒体膜电位下降,细胞凋亡率升高（P＜0.05）;与C组比较,H组及GH组H9c2细胞Drp1蛋白表达水平显著升高,OPA1蛋白表达水平显著降低,线粒体膜电位显著下降,细胞凋亡率显著升高（P<0.01）。②与GH组比较,SGH组Drp1蛋白表达水平显著降低,OPA1蛋白表达水平显著升高,线粒体膜电位显著升高,细胞凋亡率显著降低（P<0.01）。结论?①氧化应激联合高糖通过降低线粒体膜电位,抑制H9c2心肌细胞线粒体动力学平衡,增加心肌细胞凋亡,从而损伤心肌细胞。②红景天苷可抑制氧化应激联合高糖引起的H9c2心肌细胞凋亡,其机制与升高线粒体膜电位水平以及增加线粒体OPA1蛋白表达、抑制Drp1蛋白表达从而改善线粒体动力学平衡有关;红景天苷对应激高糖心肌细胞具有一定的保护作用,值得进一步深入研究。      

亚慢性苯吸入小鼠凋亡相关基因Survivin、Bcl2L13的表达与甲基化状态分析

目的：探讨亚慢性苯暴露小鼠凋亡相关基因Survivin、Bcl2L13的表达与启动子甲基化状态。方法：C57BL/6J雄性小鼠亚慢性动式吸入苯,暴露浓度分别为0 ppm（对照组）、1 ppm（低浓度组）和100 ppm（高浓度组）。收集骨髓细胞,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,实时荧光定量PCR（qPCR）检测Survivin、Bcl2L13基因的表达,基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析技术（MALDI-TOF）测定基因启动子区CpG岛甲基化水平。结果：与对照组比较,苯暴露组的细胞凋亡比例明显增大（P＜0.01）,低浓度组S期细胞比例增加,高浓度组S期和G2/M期细胞的比例均显著降低。低浓度组Survivin mRNA表达下降,高浓度组Survivin、Bcl2L13 mRNA表达均显著降低。两基因启动子区CpG岛均呈低甲基化状态,其甲基化水平未受苯暴露影响。结论：亚慢性苯吸入染毒影响小鼠骨髓细胞周期,增加细胞凋亡,降低Survivin、Bcl2L13 mRNA的表达,但不影响其基因启动子的甲基化状态。     

过表达C3G对高糖诱导H9C2心肌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨过表达C3G对高糖诱导 H9C2心肌细胞增殖和凋亡的影响.方法 分别用 pCXN2-Flag(空质粒)、pCXN2-Flag-hC3G(人过表达C3G mRNA)质粒通过瞬时转染 H9C2心肌细胞,并进行高糖干预.实验分为空白组、空载体组、过表达C3G组、空白+高糖组、空载体+高糖组、过表达C3G+高糖组,分别检测各组H9C2心肌细胞的C3G蛋白表达、增殖率及凋亡率.结果 空白+高糖组、空载体+高糖组较空白组、空载体组细胞增殖率均明显降低,凋亡率均明显升高.过表达C3G组较空白组与空载体组,过表达C3G+高糖组较空白+高糖组与空载体+高糖组H9C2心肌细胞的C3G蛋白表达增加,增殖率升高,凋亡率明显降低.结论 高糖抑制H9C2心肌细胞增殖、促进H9C2心肌细胞凋亡;过表达C3G可逆转高糖诱导H9C2心肌细胞增殖率的降低、凋亡率的升高.过表达C3G能促进高糖诱导H9C2心肌细胞的生存力.     

Effects of adiponectin on oxidative stress and apoptosis in human cardiac myocytes cultured with high glucose

Background  Diabetic cardiomyopathy is the major cause of morbidity and mortality in diabetic patients. Oxidative stress plays an important role in diabetic cardiomyopathy. This study aimed to investigate the effects of adiponectin on oxidative stress and apoptosis in human cardiac myocytes (HCM) cultured with high glucose. 

Methods  The cells were assigned to three group: control group, high glucose group and high glucose plus adiponectin group. After culture for 24, 48, 72 hours, oxidative stress was evaluated by detecting levels of malondialdehyde (MDA) and superoxide dismutase (SOD) in the supernatant of culture media. The expression of p66Shc and Heme oxygenase-1 (HO-1) was detected by real-time polymerase chain reaction (PCR). Flow cytometry was designed to observe and detect cellular apoptosis.

Results  Our findings showed significant increase in MDA levels and decrease in SOD activity in the high glucose group compared with the control group (P <0.05). However, MDA levels were significantly decreased and SOD activity was significantly increased in the adiponectin group compared with those in the high-glucose group (P <0.05). The mRNA expression of HO-1 in the high glucose group was significantly increased in a time-dependent manner compared with that in the control group (P <0.05).  Adiponectin further increased the mRNA expression of HO-1 induced by high glucose in a time-dependent manner (P <0.05).The expression of p66Shc was significantly increased in high glucose group compared with that in the control group (P <0.05). Adiponectin significantly suppressed the upregulation of p66Shc induced by high glucose (P <0.05). The apoptotic rate of cardiomyocytes was significantly increased in the high glucose group compared with that in the control group while the apoptotic rate in the adiponectin group was remarkably declined in comparison with that in the high glucose group．

Conclusion  Adiponectin reduces high glucose-induced oxidative stress and apoptosis and plays a protective role in myocardial cells by upregulating the HO-1 expression and downregulating p66Shc expression.

     

8-Br-cAMP对Eca-109细胞凋亡的影响

目的：探讨8—Br—cAMP对人食管癌Eca—109细胞凋亡的影响及其相关基因表达的变化。方法：采用TUNEL法检测细胞凋亡,应用原位杂交、组织化学、免疫组织化学以及RNA和蛋白质斑点印迹技术相对定量,观察8—Br—cAMP对Eca—109细胞凋亡相关基因及凋亡效应分子表达的影响。结果：8—Br—cAMP作用48h后可显著诱导Eca—109细胞凋亡,并见到野生型(wt)p53及iNOS基因表达上调,bcl—2、c—myc基因表达下调,iNOS活性增强,Fas—IR减弱。结论：8—Br—cAMP通过调控凋亡相关基因及凋亡效应分子的表达,使之相互作用、相互协同,诱导人食管癌Eca—109细胞的凋亡。其中,wtp53在该凋亡的诸多因素中起着关键作用。     

卡托普利对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的:探讨血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)卡托普利对糖尿病(DM)大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响。方法:成年雄性SD大鼠30只,随机分为正常对照组(NC组)、DM组、卡托普利治疗组(Cap组),每组10只。应用链脲佐菌素(STZ)诱导构建DM大鼠模型,Cap组每日灌胃给予卡托普利50 mg/kg,其余两组给予等容积的0.9%氯化钠溶液。用药12周后,原位缺口末端标记法(TUNEL法)检测计算心肌细胞凋亡指数(AI),Western blot法检测心肌Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达,透射电镜观察心肌超微结构变化。给药期间动态观察测定大鼠行为、体质量及血糖水平的改变。结果:与NC组相比,DM组大鼠心肌细胞AI明显升高,Bcl-2蛋白表达减少,Bax、Caspase-3蛋白表达增加;电镜示心肌细胞超微结构呈明显损伤性变化。与DM组相比,Cap组心肌细胞AI明显降低,Bcl-2蛋白表达增加,Bax、Caspase-3蛋白表达减少;超微结构损伤不同程度减轻。结论:卡托普利可能通过上调Bcl-2表达,下调Bax表达,减少Caspase-3依赖性的心肌细胞凋亡,从而起到保护DM大鼠心肌细胞的作用。