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相似文献
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1.
目的:制备人纤维连接蛋白(fibronectin,FN)羧基端细胞结合域的单克隆抗体,并以该抗体检测心脏瓣膜基质蛋白中FN蛋白的表达情况.方法:用RT-PCR方法获取人FN羧基端细胞结合域基因序列,通过pET32质粒表达获得TRX融合蛋白.并以纯化的融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠后,按常规方法制备成单克隆抗体,获得分泌抗FN单克隆抗体的杂交瘤细胞株.结果:蛋白电泳结果显示,所获TRX融合蛋白条带与理论计算值相符,免疫动物后获得2株分泌抗FN羧基端细胞结合域不同位点单克隆抗体的杂交瘤细胞株,抗体亚型为IgG2a,免疫组化显示该抗体能特异性地结合人心脏瓣膜基质中的FN.结论:成功制备了分泌抗FN单克隆抗体,为FN结构、功能和机制的研究提供了有效工具.  相似文献   

2.
人CTLA4单克隆抗体的制备和鉴定   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的 :制备人的细胞毒性T淋巴细胞相关抗原 4 (CTLA4 )的单克隆抗体。 方法 :利用蛋白纯化技术获得人CTLA4Ig蛋白免疫Balb/c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞NS1融合 ,用ELISA法筛选分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株 ,并用Western印迹和流式细胞检测仪鉴定所制备的单克隆抗体。 结果 :获得一个稳定的分泌抗人CTLA4的杂交瘤细胞株。该细胞克隆培养上清中所含的单抗能和经过PHA刺激后的人T细胞结合 ,但不能和经过PHA刺激后的小鼠T细胞结合。 结论 :利用重组人CTLA4Ig制备获得高特异性的抗人CTLA4单克隆抗体。  相似文献   

3.
目的制备人骨髓间充质干细胞(MSCs)的特异性细胞表面抗原的单克隆抗体.方法以人骨髓MSCs为抗原,常规方法免疫Balb/c小鼠,细胞融合制备杂交瘤细胞,并用免疫荧光法在流式细胞仪上对杂交瘤产生的抗体进行初测和复测.结果通过分泌的抗体与人MSCs表面抗原特异性结合的鉴定,进行杂交瘤筛选,将复测为阳性的克隆连续克隆化培养,获得两株持续分泌抗人MSCs的杂交瘤细胞株:8g8、8f9.两株单抗经体外连续传代培养,生长良好,稳定分泌抗体.结论人骨髓MSCs的特异性细胞表面抗原单克隆抗体可望在MSCs的提纯和体外富集、特异性骨病的诊断等方面有广阔的应用前景.  相似文献   

4.
目的:制备卵巢癌抗抗独特型单克隆抗体并进行初步鉴定,为深入研究卵巢癌疫苗的主动免疫机制奠定基础.方法:以卵巢癌抗独特型单克隆抗体6B11作为免疫原,采用杂交瘤技术制备抗抗独特型单克隆抗体3D12.经酶联免疫吸附实验(ELISA)、免疫组织化学、流式细胞学、免疫印迹杂交等检测其特异性结合抗原的性质;竞争抑制实验鉴定其特异性结合的抗原表位.结果:获得1株稳定分泌3D12的杂交瘤细胞,所分泌的3D12能够特异性结合6B11及卵巢癌初始抗原OC166-9,并能竞争抑制COC166-9(抗OC166-9的单克隆抗体Ab1)与OC166-9的结合.免疫印迹杂交显示,3D12与COC166-9免疫沉淀的蛋白的相对分子质量相同.该抗体为IgM,亲和力约为8.34×107 L/mol.结论:卵巢癌抗抗独特型单克隆抗体3D12属Ab1样Ab3,间接证实6B11为抗原内影像型抗独特型抗体.  相似文献   

5.
目的 应用杂交瘤技术,制备鼠抗人OX40单克隆抗体.方法 以本室纯化的OX40胞外段融合蛋白免疫6~8周龄的雌性BalB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,筛选分泌鼠抗人OX40单克隆抗体的杂交瘤细胞阳性克隆.用杂交瘤细胞接种小鼠腹腔诱生腹水,腹水经饱和硫酸铵纯化沉淀后用间接ELISA法测定抗体的Ig类别.SDS-PAGE分析抗体的纯化程度,用免疫组化技术鉴定单克隆抗体与表达有OX40分子的组织及细胞特异性结合的情况.结果 获得1株能稳定分泌鼠抗人OX40单克隆抗体的杂交瘤细胞,细胞株诱生的小鼠腹水纯化后抗体纯度较高,Ig类别为IgG,蛋白浓度为6.129g/L.制备的单抗经淋巴细胞免疫组化及炎性淋巴组织免疫组化技术初步鉴定结果表明,该抗体与OX40单克隆抗体标准品制剂相比具有类同的特异性.结论 成功获得能稳定分泌鼠抗人OX40单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备的单克隆抗体具有较高的纯度和活性.  相似文献   

6.
目的:制备抗-lamp2单克隆抗体,并对其生物学特性进行初步鉴定.方法:根据已发表的文献通过人工合成多肽,并将此多肽分别连接KLH和BSA,以peptide-KLH作为抗原免疫BALB/c小鼠,取血清效价大于 1:10000 的小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0 进行融合,以peptide-BSA包被,通过酶联免疫吸附实验(ELISA)检测杂交瘤细胞的上清进行筛选;得到能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株;通过鼠单克隆抗体亚类分型试剂盒鉴定单克隆抗体的亚类,采用免疫组化方法证明新制备的单克隆抗体能识别目的蛋白.结果:得到一株能稳定分泌抗-LAMP2单克隆抗体的杂交瘤细胞株,应用免疫组化方法证明新制备的抗-LAMP2单克隆抗体能识别天然的 LAMP2;此单克隆抗体的亚类为.结论:杂交瘤细胞株能稳定分泌目的单克隆抗体;免疫组化方法证明新制备的单克隆抗体能识别自己天然的目的蛋白,为更好地研究LAMP2的生物学功能奠定了基础.  相似文献   

7.
目的 研制抗人转运调节因子(FXYD)6功能区单克隆抗体库,筛选分泌胞内、胞外区单克隆抗体的杂交瘤细胞株并对鉴定胞外区单克隆抗体生物学作用.方法 原核表达并纯化去除跨膜区域FXYD6功能区重组蛋白,FXYD6重组蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫后的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,多次筛选及克隆化,建立稳定分泌抗人FXYD6胞外区或胞内区的单克隆抗体杂交瘤.分别应用间接酶联免疫吸附法(ELISA)、Western blot和免疫组织化学法鉴定抗体特异性及亚型,细胞流式技术筛选可识别天然构象的胞外区单克隆抗体,用腹水诱导法对胞外区单抗进行制备、纯化并检测亲和常数,高表达FXYD6的HepG2细胞系检测胞外区单抗的功能.结果 成功获得分泌抗人FXYD6胞外区或胞内区单克隆抗体的杂交瘤细胞库,制备出具有功能阻断性的胞外区单抗.结论 制备的抗人FXYD6胞外区单抗可抑制HepG2细胞的增殖.  相似文献   

8.
目的:制备并鉴定抗人蛋白酶激活受体3(PAR3)单克隆抗体(mAb).方法:以人PAR3为免疫原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备抗PAR3 mAb.采用捕获ELISA法鉴定mAb的Ig亚类;通过ELISA、流式细胞分析、激光共聚焦显微镜技术、免疫组织化学染色法、斑点杂交技术鉴定mAb的特异性.结果:获得2株可稳定分泌抗人PAR3 mAb的杂交瘤细胞,其分泌的mAb均为IgM.斑点杂交技术分析表明,其mAb能与PAR3抗原有效结合.免疫组织化学染色表明,mAb与肺组织中的巨噬细胞、结肠组织中的淋巴细胞及疑似肥大细胞、扁桃体和包皮组织中的淋巴细胞的反应呈阳性.流式细胞仪分析及激光共聚焦显微镜观察显示,2株mAb与人肺腺癌A549细胞胞内及膜上的PAR3均呈阳性反应.结论:成功地制备抗PAR3 mAb,为变态反应性和炎症性疾病的研究提供了有用的试剂.  相似文献   

9.
目的运用杂交瘤技术制备抗血红蛋白(hemoglobin,Hb)单克隆抗体,为进一步探讨Hb在帕金森病中的发病机制及早期诊断中的意义奠定基础。方法用重组人Hb作为抗原免疫Balb/c小鼠,并将其脾细胞与同系骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤,经3次有限稀释法及酶联免疫吸附试验法筛选获得抗人Hb单克隆抗体杂交瘤株5B1。腹腔注射于免疫抑制Balb/c小鼠产生腹水,并利用Dot blotting、酶联免疫吸附实验,免疫共沉淀、Western blotting法及免疫组织化学染色法进一步测定抗体效价,获得一特异性抗Hb单克隆抗体。结果成功制备出1株高亲和力、特异性好的抗Hb单克隆抗体。结论制备的单克隆抗体对Hb具有特异性(包括人血、猴及小鼠),为进一步研究Hb在帕金森病(Parkinson's disease,PD)中的作用提供了有力的特异性工具。  相似文献   

10.
目的建立通过单次细胞融合制备抗复合抗原(多种抗原)单克隆抗体的方法。方法用复合抗原(甲胎蛋白、癌胚抗原、乙型肝炎表面抗原、乙型肝炎核心抗原、乙型肝炎e抗原)免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备单克隆抗体。通过Protein-G亲和层析纯化阳性杂交瘤细胞株腹水,并通过亚类试剂盒法和非竞争ELISA法分别测定抗体亚类和亲和常数,同时应用免疫印迹分析其特异性。结果通过单次细胞融合共获得20株抗上述复合抗原的单克隆抗体,其中针对甲胎蛋白的单克隆抗体5株、针对癌胚抗原的单克隆抗体6株、针对乙型肝炎表面抗原的单克隆抗体3株;针对乙型肝炎核心抗原的单克隆抗体4株、针对乙型肝炎e抗原的单克隆抗体3株。已鉴定的部分阳性杂交瘤细胞株亚类均为IgG1,抗体亲和常数介于1×109M-1~2.8×1011M-1,免疫印迹分析显示,所获得的单抗都与其抗原发生特异性结合。结论建立了通过单次细胞融合制备针对复合抗原的单克隆抗体制备技术,使单克隆抗体的产出率显著提高,制备周期明显缩短,为建立规模化单克隆抗体制备平台奠定基础。  相似文献   

11.
Rabbits were immunized with the Fab fragment of a murine monoclonal antibody (McAb) PD4 against human gastric cancer to produce anti-PD4-idiotypic antibody (alpha PD4-Ab2). The alpha PD4-Ab2 could not only competitively inhibit binding of McAb PD4 to gastric cancer cell MGC803, but also induce delayed-type hypersensitivity (DTH) to MGC803 in mice. Spleen cells of mice immunized with alpha PD4-Ab2 were fused with myeloma cell SP2/0 to form hybridoma secreting Ab3 which could be bound to target cell MGC803. McAb C7-Ab3, one of the Ab3, could selectively react with a 40 kD tumor-associated antigen located on MGC803 cell membrane, as well as McAb PD4. The results indicate that alpha PD4-Ab2 possesses determinants (internal image antigen) similar to those on MGC803, and could mimic human gastric cancer-associated antigen.
  相似文献   

12.
抗人膀胱癌双功能抗体对荷瘤鼠的免疫治疗   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:建立抗人膀胱癌双功能抗体对荷人膀胱癌小鼠主动免疫的模型.方法:采用抗人膀胱癌双功能抗体免疫BALB/C小鼠,对照组采用生理盐水.免疫3次后,于末次免疫后1周,将新鲜的人膀胱移行细胞癌组织移植于小鼠肾包膜下,移植后第2、4、6、8和10天处死小鼠,取血清进行抗双功能抗体分析.移植瘤行组织学检查,观察宿主淋巴细胞浸润情况及瘤细胞可见率.结果:实验组小鼠肾脏包膜下人膀胱癌细胞很快受到排斥,在移植后第6天,淋巴细胞浸润即达高峰,而对照组在第10天淋巴细胞浸润才达高峰;实验组在移植后第6天瘤细胞可见率即明显降低,而对照组呈逐渐下降趋势;实验组抗双功能抗体为阳性,对照组为阴性.结论:抗人膀胱癌双功能抗体作为抗原免疫小鼠后,能够排斥小鼠体内人膀胱癌细胞的生长.  相似文献   

13.
OBJECTIVE: To explore the application of monoclonal antibody (McAb) to targeted treatment of bladder carcinoma through a series of in vitro and in vivo studies carried out in animal model and patients with bladder carcinoma. METHODS: Monoclonal antibody BDI-1 against bladder carcinoma was prepared by the lymphocyte hybridoma technique. McAb was conjugated with 99mTc by direct reduction method. Momodin (MD) was covalently linked to McAb by SPDP method. Radioimmunoimaging of nude mice xenografts and patients with bladder carcinoma were performed with BDI-1-99mTc conjugates. An immunotoxin (BDI-1-MD) was inducted via a catheter into the bladder. Targeted treatment with BDI-1-MD was carried out in 18 patients. RESULTS: This study showed the specificity of McAb, and clear imaging of nude mice bearing xenografts. Distribution analysis of 99mTc-BDI-1 in nude mice showed the highest value of T/NT in bladder tumor. Targeted diagnosis and treatment for patients by intravesical administration are very safe and effective. CONCLUSION: The bladder cancer seems an ideal model for diagnostic and therapeutic approaches using regional administration of McAb conjugates via a catheter direct into the bladder.  相似文献   

14.
目的 制备抗前列腺特异性膜抗原(PSMA)膜外段的单克隆抗体。方法 原核表达含有PSMA膜外段多肽的融合蛋白,免疫雌性Balb/c小鼠后取效价较高的小鼠行小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,以酶联免疫吸附实验(ELISA)、免疫细胞化学、免疫组织化学法筛选、鉴定分泌特异性抗:PSMA膜外段的单克隆杂交瘤细胞株。结果 经过ELISA初筛得到55个阳性杂交瘤细胞株,其中8株经免疫组化证实为可用于前列腺癌石蜡包埋组织切片的免疫组化染色。结论 获得了8株可持续分泌抗PSMA膜外段单克隆抗体的杂交瘤细胞株,产生的单抗以后可用于前列腺癌的诊断,并为前列腺癌的免疫治疗奠定了基础。  相似文献   

15.
抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体真核表达载体的构建和表达   总被引:8,自引:0,他引:8  
目的:构建嵌合型抗人膀胱癌抗体的真核表达载体,并实现其真核表达.方法:从杂交瘤细胞中克隆得到鼠源单抗的可变区基因,插入嵌合抗体IgG1真核表达载体pDHL中,转染 CHO细胞,实现其真核表达,并对抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体的功能进行初步鉴定.结果:成功构建抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体真核表达载体,并实现其真核表达. 初步的功能鉴定表明抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体具有较好的特异性和亲合力.结论 :构建的抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体真核表达载体在真核细胞内得到表达 ,且其功能较为理想.  相似文献   

16.
Background We have previously developed and characterized a monoclonal anti-idiotype antibody, designated 6B 11, which mimics an ovarian carcinoma associated antigen OC166-9 and whose corresponding monoclonal antibody is COC166-9 (Abl). In this study, we evaluate the humoral immune responses induced by the fusion protein 6B11 single-chain variable fragment (scFv)/human granulocyte macrophage colony-stimulating factor (hGM-CSF) and 6B 1 lscFv in BALB/c mice. Methods The fusion protein 6B 11 scFv/hGM-CSF was constructed by fusing a recombinant single-chain variable fragment of 6B11scFv to GM-CSE BALB/c mice were administrated by 6B11scFv/hGM-CSF and 6B11scFv, respectively. Results The fusion protein 6B11scFv/hGM-CSF retained binding to the anti-mouse F(ab)2' and was also biologically active as measured by proliferation of human GM-CSF dependent cell TF1 in vitro. After immunization with the 6B11scFv/hGM-CSF and 6BllScFv, BALB/c mice showed significantly enhanced Ab3 antibody responses to 6B11 scFv/hGM-CSF compared with the 6B11 scFv alone. The level of Ab3 was the highest after the first week and maintained for five weeks after the last immunization. Another booster was given when the Ab3 titer descended, and it would reach to the high level in a week. Conclusion The fusion protein 6B11scFv/hGM-CSF can induce humoral immunity against ovarian carcinoma in vivo. We also provide the theoretical foundation for the application of the fusion protein 6B11 scFv/hGM-CSF for active immunotherapy of ovarian cancer.  相似文献   

17.
一株抗人胆管癌相关抗原杂交瘤细胞株的建立及鉴定   总被引:2,自引:1,他引:1  
目的 建立能分泌与人胆管癌组织特异结合的高效价抗人胆管癌相关抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法 用2的人胆管癌细胞系Sk-CHA-1免疫BALB/c小鼠后,获取免疫小鼠的脾细胞。与小鼠骨髓瘤SP2/0融合,ELISA方法及免疫荧光染色法筛选细胞晤后生成的杂交瘤细胞株。结果 ELISA方法及免疫荧光染色法共筛选出5株能持续稳定分泌抗人胆管癌相关抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中2F4E8杂交瘤细胞株  相似文献   

18.
目的:研究膀胱癌肿瘤细胞冻融抗原负载的树突状细胞(DC)对特异性抗自身膀胱癌作用研究。方法:将膀胱癌肿瘤病人外周血单个核细胞来源的DC在体外用冻融负载,再与膀胱癌患者的经细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共同培养,应用乳酸脱氢酶释放法观察其对自身膀胱癌细胞杀伤活性,与未负载肿瘤抗原的CIK组进行比较。结果:DC经抗原负载后介导的CIK对自身膀胱癌细胞杀伤性活性明显增强。结论:用肿瘤抗原负载可进一步提高DC介导的CIK细胞对膀胱癌细胞的杀伤活性。  相似文献   

19.
目的 制备和鉴定具有鼻咽癌相关抗原内影像的抗独特型单克隆抗体 (Ab2 )。方法 用鼻咽癌单抗 (Ab1)免疫小鼠 ,免疫鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2 / 0融合获得杂交瘤细胞系。用SandwichELISA和结合抑制试验筛选阳性克隆。为进一步证实Ab2是否具有鼻咽癌相关抗原的内影像 ,用Ab2免疫小鼠获得抗血清 ,以ELISA和竞争抑制试验检测Ab3。用迟发性变态反应和T细胞增殖试验检测Ab2诱导的细胞免疫反应。结果 选用两株抗鼻咽癌单抗FC2、HNL5 (Ab1)为免疫原 ,制备两株抗相应Ab1独特型的抗独特型抗体 2H4和5D3(Ab2 )。 2H4、5D3能分别与FC2、HNL5特异性结合 ,并能抑制相应Ab1与靶细胞HNE2的反应 ,诱导产生能与相应Ab1竞争结合靶抗原的抗抗独特型抗体 (Ab3)。并能诱发特异性迟发型超敏反应 (DTH)和细胞增殖反应。结论 抗独特型抗体 2H4、5D3具有鼻咽癌相关抗原的内影像 (Ab2 β) ,能模拟鼻咽癌相关抗原诱导体液和细胞免疫反应。  相似文献   

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