首页 | 本学科首页   官方微博 | 高级检索  
相似文献
 共查询到18条相似文献,搜索用时 125 毫秒
1.
陈源红  赵丽娟  梁有龙  张卓华  曾怡 《重庆医学》2015,(8):1091-1093,1096
目的:制备高效价卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)病毒ORF65衣壳蛋白抗体并检测其特异性。方法将人工合成的ORF65蛋白抗原肽经弗氏佐剂乳化,在家兔背部、颌下等皮下多点免疫注射,间隔2周免疫,共4次。末次免疫后1周取兔血清,ELISA法检测兔免疫血清抗体IgG抗体水平。进一步采用免疫荧光、Western blot检测制备的抗血清中与ORF65结合的特异性。结果家兔在全程免疫后产生了高效价的特异性抗体,最高滴度达1∶12800。免疫荧光检测显示,与未经佛波酯(TPA)刺激的BCBL‐1细胞相比,兔抗血清主要结合于BCBL‐1细胞胞质,与ORF65蛋白在细胞内表达位置一致。Western blot结果显示在21 kD处有特异性蛋白条带,其大小与预期的ORF65蛋白大小相符,同时经T PA刺激的BCBL‐1细胞中ORF65蛋白表达量高于对照组,与ORF65蛋白裂解期蛋白的特性相符。结论用ORF65衣壳蛋白抗原肽段免疫家兔,可成功制备高效价的特异性抗血清,该抗体可与KSHV病毒ORF65蛋白特异性结合。  相似文献   

2.
EB病毒IgA滴度在鼻咽癌诊断的敏感性和特异性   总被引:5,自引:0,他引:5  
目的评价EB病毒壳抗原IgA抗体(VCA-IgA)和EB病毒早期抗原IgA抗体(EA-IgA)滴度在鼻咽癌(NPC)筛查及鼻咽癌诊断上的敏感性和特异性。方法应用免疫酶法对5196例鼻咽癌病人EBV VCA-IgA和EBV EA-IgA抗体滴度的检测,评价其敏感性和特异性。结果在检测5196例NPC标本中,EB病毒VCA-IgA滴度<1∶5者69例,>1∶5以上5127例,鼻咽癌诊断的敏感性和特异性分别为94%和80%,EB病毒EA-IgA滴度>1∶5的敏感性和特异性分别为63%和97%。结论虽然EB病毒VCA-IgA抗体滴度作为鼻咽癌诊断有较高的敏感性,但在鼻咽癌的流行病学筛查中不能作为单独的诊断方法,必须结合临床确诊。  相似文献   

3.
目的:制备高效价E血清型沙眼衣原体(CT)的多克隆抗体.方法:用hep-2细胞培养制备并用超速离心方法纯化E血清型CT作为抗原,采用弗氏佐剂乳化抗原,背部皮下多点免疫4只家兔,收获免疫后血清制备多克隆抗体,用Western blot方法进行鉴定,ELISA法检测抗体水平.结果:所有家兔在全程免疫后都产生了高效价的血清抗体,最高滴度达1∶1600.Western blot实验结果显示,本研究制备的CT血清抗体能与CT全菌体抗原发生b异结合.结论:CT菌体抗原免疫家兔可成功制备高效价的血清抗体,为建立沙眼衣原体免疫检测方法打下了基础.  相似文献   

4.
流行病学调查研究一致显示,几乎所有多发性硬化症患者存在EB病毒(EBV)感染,并且疾病进展的风险随EB病毒特异性抗体滴度水平的增高而增加。EBV编码的核抗原-1(EBNA1)在被感染的人类B细胞的复制中仍保留病毒的基因组,在健康人群中,EBNA1特异性CD4 T细胞被认为是EBV特异性免疫控制  相似文献   

5.
目的 ELISA法检测双黄连注射剂中小分子半抗原成分野黄芩苷致敏家兔血清中的特异性抗体效价。方法取新西兰兔,随机分为野黄芩苷组和对照组,采血,制备血清。分别将野黄芩苷与野黄芩苷组家兔血清体外孵育,与弗氏完全佐剂混合制成野黄芩苷-血浆蛋白完全抗原。多次免疫动物后获得针对双黄连注射剂中过敏性半抗原成分野黄芩苷的特异性抗体,ELISA法检测抗血清的抗体效价,间接竞争ELISA法测定血清的特异性,采用ELISA试剂盒检测抗血清中IgE抗体的含量。结果对照组家兔抗血清中无额外的特应性抗体产生。野黄芩苷组抗血清中产生了高滴度的抗体,该抗体是由野黄芩苷致敏产生的,具有一定的特异性。野黄芩苷组家兔抗血清中产生了高滴度的IgE型抗体,比对照组高出了63.3%,提示野黄芩苷有潜在的致敏性。结论野黄芩苷在此实验条件下对家兔能够产生特异性的高效价抗体,可能具有潜在的致敏性。  相似文献   

6.
重组结核分支杆菌16000蛋白抗原(rPA16)的免疫原性研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的:研究结核分枝杆菌重组16000蛋白(rPA16)诱发家兔产生抗体的能力并评价其血清学诊断的价值。方法:家兔按注射的抗原及佐剂的不同分组,皮下多点注射分别进行免疫,6次免疫后采血,双向琼脂扩散试验和酶联免疫吸附试验(ELISA)跟踪兔血清抗体效价的时间效应并检测兔血清与所试各类分支杆菌PPD有无交叉反应;同时检测rPA16与各分支杆菌PPD的免疫羊血清的反应,并用rPA16抗原检测人血标本,分析该抗原的临床检测的敏感性和特异性。结果:兔血清抗体效价结果显示:5个月后,加佐剂的抗原组的兔免疫血清仍能检测到抗体,不加佐剂组2个月后血清抗体检测即为阴性,ELISA检测兔免疫血清比双向琼脂扩散方法要更敏感,rPA16抗原加佐剂引起的兔血清抗体滴度最高可达1:6400,不加佐剂组的血清抗体滴度仅为1:400,ELISA法分析抗rPA16的兔血清的特异性表明其特异笥较好,仅与牛、人型结核分支杆菌的PPD呈阳性反应,与其他所试分支杆菌PPD反应均为阴性,同时又分析了rPA16抗原的特异性,与人型PPD相比,该抗原只与所试各类分支杆菌,BCG、牛分支杆菌免疫的血清呈阳性反应,而人型PPD则基本上与结核分支杆菌免疫的血清均呈阳性反应,ELISA检测血清标本结果:肺结核病组中rPA16和PPD检测敏感性分别为64.8%和75.2%;健康组,卡介苗接种阳转健康组,rPA16和PPD检测特异性分别为96.2%,88.5%和94.3%,66.7%。结论:rPA16具有较强的免疫原性和一定的特异性,可能成为结核病血清学诊断试剂之一。  相似文献   

7.
目的:制备M13K07辅助噬菌体多克隆抗体。方法:将M13K07辅助噬菌体进行大量扩增,以此作为免疫原于1、3、5周进行兔免疫,收集0周和免疫后2、4、6、8周免疫血清,用间接ELISA法对免免疫血清的效价进行检测,进一步用免疫斑点实验检测免多克隆抗体与M13K07辅助噬菌体的特异性结合能力。结果:M13K07辅助噬菌体免疫兔可产生高效价的多克隆抗体,效价达1:3200,并能特异性识别M13K07辅助噬菌体。结论:成功制备了高效价的M13K07辅助噬菌体多克隆抗体,为噬菌体展示技术研究提供了检测抗体。  相似文献   

8.
鼻咽癌患者放疗前后血清EB病毒特异性DNA酶抗体的变化   总被引:2,自引:1,他引:1  
目的:了解鼻咽癌(NPC)患者放疗前后血清EB病毒特异性DNA酶(EBV-DNase)抗体的变化,以评估其预后。方法:用WesternBlot及放射免疫法检测24例NPC患者放疗前后BV-DNase抗体,并用免疫酶法测定血清EB病毒壳抗原IgA(EBVCA-IgA)。结果:(1)WesternBlot法检测NPC患者放疗前后血清EBV-DNaes抗体,放疗前抗体阳性率87.50%(21/24),放疗后为29.16%(7/24),差异显著(P<0.01);(2)放免法测得两组血清抗酶率(AER)平均值分别为74.02%、31.75%,二者有显著差异(P<0.05)。(3)放疗后的血清EBVCA-IgA平均几何滴度(GMT)为1:23.4,较放疗前明显降低(P<0.05)。结论:PNC放疗后血清EBV-DNase抗体水平有明显下降,比EBVCA-IgA检测更加准确地反映了病情变化。提示血清EBV-DNase抗体检测对评估NPC预后,疗效监测可能有帮助。  相似文献   

9.
目的:克隆单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因,并在大肠杆菌中表达,通过免疫家兔,获得HSV-TK多克隆抗体,为进一步研究HSV-TK 的功能奠定基础。方法:从纯化的单纯疱疹病毒(HSV)中提取病毒基因组,用PCR特异性扩增HSV-TK全长基因,克隆入表达载体pRSET B中进行表达,以纯化的表达产物免疫家兔制备多克隆抗血清,进行Western blotting 鉴定。结果:用IPTG诱导后,表达出相对分子质量(Mr)约43 000的融合蛋白,免疫家兔制备的兔血清,第2~5周每周采血1次,Western blotting检测均获得特异性蛋白带;最后一次样品3个稀释度(1∶1 000、1∶3 000、1∶5 000)的Western blotting分析仍可以检出蛋白质带。结论:成功获得了特异性强和滴度高的HSV-TK多克隆抗体。  相似文献   

10.
<正> 由于一些人类癌瘤(鼻咽癌,Burkitt's淋巴瘤)细胞中存在EB 病毒(Epstein-BarrVirus)基因和患者血清中EB 病毒抗体增高,因此,EB 病毒在人类癌瘤病因学上的意义已引起人们广泛的重视。为了解该病毒在西安地区人群中的感染状况,以便探讨其可能与鼻咽癌等疾病发生的关系,作者应用免疫荧光细胞化学方法检测了100名正常成人血清EB 病毒壳抗原抗体(VCA-IgG,VCA-IgA)。检测对象为100名输血员,年龄在26岁至41岁,近期体格检查身体健康;每人取血清0.5毫升。测定抗体的靶细胞是带有EB 病毒壳抗原的B95-8细胞。加不同稀释度血清于B95  相似文献   

11.
人磷酯酰蛋白聚糖3N端融合蛋白多克隆抗体制备及鉴定   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:制备人磷酯酰蛋白聚糖3(Glypican3,GPC3)N端蛋白的多克隆抗体。方法:在大肠埃希菌Rosetta中诱导表达磷酯酰蛋白聚糖3N端融合蛋白,从SDS-PAGE中切胶纯化,免疫新西兰兔,制备多克隆抗体。用辛酸-硫酸铵分步沉淀法初步纯化抗血清,并用ELISA、Westen-blot检测抗体的灵敏度和特异性。结果:成功制备了抗磷酯酰蛋白聚糖3N端的多克隆抗体,抗体滴度为1:64000,经Western blot检测特异性良好。结论:成功制备了抗人磷酯酰蛋白聚糖3N端融合蛋白多克隆抗体。  相似文献   

12.
Verylowdensitylipoproteinreceptor (VLDL R)belongstothelowdensitylipoproteinreceptor(LDL R)superfamily .ItmaybindsthelipoproteinsandlipoproteinlipasescontainingapoE ,participatinginthemetabolismoftriglyceride richlipoproteins,whichplayanimportantroleinpath…  相似文献   

13.
目的:制备兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)多克隆抗体。方法:应用原核表达的兔NRDR免疫豚鼠,制备豚鼠抗兔NRDR多克隆抗体,并以Western blot法分析抗体特异性。结果:免疫豚鼠获得了高效价抗血清,效价为1:2000时检测极限为160rig蛋白,与NRDR蛋白能特异性结合。结论:获得的多克隆抗体应用于Western blot中检测兔NRDR效果良好。为NRDR的进一步研究打下基础。  相似文献   

14.
目的:在大肠杆菌中表达Clusterin蛋白,并制备其兔抗Clusterin蛋白的多克隆抗体。方法:从MCF-7细胞提取mRNA,逆转录为eDNA,以此为模板PCR扩增Clusterin编码基因;将Clusterin编码区eDNA插入的pRSET-A原核表达载体,构建pRSET-A-elusterin;将重组质粒转化BL21(DE3)感受态细菌,以IPTG诱导6×His-C1usterin融合蛋白的表达,经亲和纯化柱与凝胶柱进行层析纯化。经SDS-PAGE和Western-blot鉴定后,将纯化的融合蛋白与弗氏佐剂混合制备成油包水悬液,常规免疫新西兰大白兔制备多抗,Western-blot检测该抗体识别内源性clusterin的特异性。结果:成功构建了Clusterin蛋白的原核表达载体pRSETA-clusterin;经表达并纯化的Clusterin蛋白纯度达到98%以上,免疫新西兰大白兔后制备得到了特异性的抗Clusterin的多抗。结论:成功地表达并纯化了Clusterin蛋白,并制备了特异性抗Clusterin多抗。  相似文献   

15.
目的 制备人补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白1(hCTRP1)的特异性抗体.方法 合成了hCTRP1的C端抗原肽并免疫新西兰大白兔,利用亲合纯化色谱柱对抗体进行了纯化.结果 间接ELISA测定表明,抗血清效价达1∶64 000,Western印迹及ELISA验证表明纯化抗体具有很高的特异性.结论 人工合成的hCTRP1抗原肽免疫新西兰大白兔,制备了高效价的抗血清,并纯化制备了hCTRP1特性抗体.  相似文献   

16.
目的筛选癌胚抗原含T、B细胞表位的短肽并分析其诱导机体产生体液免疫的特性。方法利用免疫信息学方法预测CEA CTL表位,结合我们早期对CEA B表位预测的结果,选择含多个CTL表位肽和B表位肽的CEA氨基酸序列580~598处短肽作为目的基因。目的基因密码子优化后采用pET32a(+)原核表达系统表达融合蛋白,经SDS-PAGE和Western blot-ting鉴定融合蛋白的抗原性;经镍螯合亲和层析柱(Ni-NTA Agarose)纯化CEA580~598全长融合蛋白,纯化蛋白用佐剂乳化后经日本大耳白家兔背部皮下多点免疫注射,采用Western blotting检测血清抗体的特异性,采用ELISA法检测血清抗体水平及变化趋势。结果含多个T、B细胞表位的短CEA580~598在大肠杆菌中获得了高效表达,表达量占总蛋白的25.6%;表达产物的相对分子质量(Mr)约21kDa,与预期Mr相符;Western blotting分析结果显示,在21kDa处出现特异性条带。日本大耳白兔经CEA580~598融合蛋白免疫后产生高水平的特异性抗体,与空载体和PBS对照组比较具有显著性差异(P<0.05),制备的免疫血清不但能特异识别CEA580~598短肽,而且能特异识别天然CEA抗原。结论 CEA580~598短肽融合蛋白具有较强的免疫原性,诱导的兔免疫血清能特异性结合CEA抗原,为基于CEA表位疫苗的研究奠定理论和实验基础。  相似文献   

17.
目的制备ANXA2特异性单克隆抗体(McAb),为研究ANXA2的生物学功能和检测该蛋白提供有力的抗体工具。方法用经IPTG诱导表达的基因重组PGEX-4T-1-ANXA2抗原免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法筛选抗ANXA2杂交瘤细胞,用ELISA法鉴定所得单抗腹水的效价及Western blot鉴定McAb特异性。单抗纯化和Eu3+标记后,分别包被聚苯乙烯板及作为铕标单抗,利用时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)筛选出检测ANXA2蛋白的最佳配伍单抗。结果经细胞融合、筛选、克隆化,获得了16株可分泌高效价单抗的杂交瘤细胞,间接ELISA显示16株McAb与空载体PGEX-4T-1均未发生交叉反应,抗体特异性良好,16株抗体腹水效价为1∶8 000~1∶256 000,培养上清效价为1∶256~1∶512,纯化的腹水单抗经配对试验,2D6和9H9-Eu3+配对最佳。结论获得16株能稳定分泌高特异性抗ANXA2的杂交瘤细胞,能用于后续研究。  相似文献   

18.
 目的制备鼠抗人精胺/精眯N1鄄乙酰基转移酶(SSAT)单克隆抗体,分析该抗体的效价、抗原特异性及其在Western blot和免疫组织化学等分析技术中的可用性。方法在BL21(DE3)中原核表达带6伊His 标签的SSAT 重组蛋白,并用Ni鄄NTA 树脂亲和层析纯化。用SSAT 重组蛋白免疫Balb/C 小鼠,通过杂交瘤技术制备抗SSAT 单克隆抗体,所得抗体的特异性及效价用ELISA、Western blot及免疫组织化学技术检测。结果成功建立了稳定分泌鼠抗人SSAT的单克隆抗体杂交瘤细胞株,该单克隆抗体可用于ELISA、Western blot、免疫组织化学、免疫荧光等分析技术。结论成功制备SSAT 单克隆抗体,为SSAT 相关的分子和病理研究奠定了基础。  相似文献   

设为首页 | 免责声明 | 关于勤云 | 加入收藏

Copyright©北京勤云科技发展有限公司  京ICP备09084417号