近交系豫医无毛小鼠微卫星DNA多态性分析

目的:研究微卫星DNA多态性在豫医无毛小鼠等近交系小鼠遗传监测中的应用.方法:选取小鼠不同染色体上的18个微卫星位点(D3Mit17、D3Mit18、D3Mit15、D3Mit21、D3Mit22、D6Mit192、D6Mit81、D6Mit36、D6Mit149、D16Mit4、D7Nds1、D2Nds3、D3Mit16、D3Mit85、D3Mit41、D4Mit2、D5Mit66、D7Mit164),应用PCR技术对7个近交系小鼠(豫医无毛小鼠、BALB/C、C57、CBA、DBA/2、C3H/HeJ、FVB/NJ)进行了微卫星多态性分析.结果:18个微卫星DNA具有稳定扩增效果.不同品系个体之间11个位点(D3Mit17、D3Mit18、D3Mit15、D3Mit21、D3Mit22、D6Mit192、D6Mit81、D6Mit36、D6Mit149、D16Mit4、D7Nds1)具有多态性,其中5个位点(D6Mit36、 D6Mit81、 D16Mit4、D6Mit149、D7Nds1)具有显著多态性;同一品系不同个体之间表现为单态性.结论:所检测的小鼠符合近交要求,运用筛选出的11个位点(D3Mit17、D3Mit18、D3Mit15、D3Mit21、D3Mit22、D6Mit192、D6Mit81、D6Mit36、D6Mit149、D16Mit4、D7Nds1)进行微卫星多态性分析,能够快速、经济地对近交系小鼠进行品系鉴别和遗传背景监测.同时也反映了近交系豫医无毛小鼠与其他品系小鼠之间亲缘关系的远近.     

中国TA1等三个近交系小鼠线粒体DNA内切酶图谱分析

本文对由中国自行培育且应用较为广泛的三个近交系小鼠TA1,TA2,615及兰州野生小鼠进行了线粒体DNA(mt DNA)内切酶图谱的分析。经BamHI,BgLI,EcoRI,HaeⅡ,HincⅡ,HindⅢ,HpaⅠ,HpaⅡ,PstⅠ,XbaⅠ10个内切酶消化后TA1,TA2,615小鼠表现出与老近交系BALB/c,DBA/2,C57BL/6小鼠的mtDNA内切酶图谱相一致。说明TA1,TA2,615小鼠与老近交系有相同的起源,即起源于Mus musculus domesticus。而兰州野生小鼠mtDNA在某些内切酶消化后呈现出与TA1,TA2,615小鼠不同的酶切图谱,也说明兰州野生小鼠与中国TA1,TA2,615小鼠分属于不同的两个亚种。     

微卫星DNA多态性在十种近交系小鼠遗传监测中的应用研究

目的：研究微卫星DNA多态性在近交系小鼠遗传监测中的应用。方法：选取小鼠不同染色体上的16个微卫星位点，应用PCR技术对常用的10个近交系小鼠进行了微卫星DNA多态性分析。结果：14个微卫星DNA具有稳定扩增效果，在同一品系不同个体之间表现单态性；在不同品系之间表现多态性。结论：运用所筛选的14个位点进行微卫星多态性分析，能够快速、经济地对近交系小鼠进行遗传监测。     

乳腺癌线粒体DNA拷贝数改变的研究及意义

目的:用实时定量PCR对乳腺癌组织线粒体DNA的拷贝数进行检测,探讨线粒体DNA拷贝数改变与乳腺癌的关系。方法:对30例乳腺癌患者组织及其相应外周全血、30例健康献血员外周全血标本的线粒体DNAD-loop区克隆并制备标准品;用实时定量PCR检测标本线粒体DNA的拷贝数。结果:乳腺癌组织线粒体DNA的拷贝数平均值为7.75×1013copy/μgDNA,高于其相应外周血的平均值3.22×1011copy/μgDNA(P<0.05)和对照的平均值6.55×1010copy/μgDNA(P<0.05)。结论:线粒体DNA拷贝数改变与乳腺癌发生有关。     

6个近交系小鼠线粒体DNA D-Loop区PCR-RFLP分析

分析Ｔ７３９等６个近交系小鼠线粒体ＤＮＡＤ－Ｌｏｏｐ区的多态性,探讨近交系小鼠的遗传监测方法。方法：ＰＣＲ－ＲＦＬＰ技术,即ＰＣＲ技术结合限制性片段长度多态分析。结果Ｄ－Ｌｏｏｐ片段经ＨａｅⅢ、ＨｉｎｆⅠ、ＥｃｏＲⅤ、ＩＮＤⅢ、ＨｐａⅠ、ＢａｍＨⅠ、ＡｐａⅠ、ＮｄｅⅡ、ＸｈｏⅠ、ＸｂａⅠ内切酶消化后,Ｔ７３９、ＴＡ２、６１５、ＢＡＬＢ／Ｃ、Ｃ３Ｈ、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠表现出完全相同的酶切栈局,未发     

微卫星DNA监控技术培育近交系大、小鼠的研究

目的采用微卫星DNA技术来监控大、小鼠仔代基因状况，有选择性地进行交配繁殖，以达到快速培育新的近交系动物。方法利用PCR扩增微卫星DNA技术对封闭群SD和Wistar大鼠交配以及近交系C57和BALB／c小鼠所交配繁殖的仔代鼠进行了微卫星DNA多态性分析，与母代SD大鼠（母代C57小鼠）相似系数高的与中的、中的与低的进行定向交配繁殖。结果对于大鼠F2代均为杂合多态的位点，没有纯合位点；到F10代时基因纯合位点达28个，纯合基因位点率为93．3％。每代相似系数具有不断上升的趋势，上升率为6％～20％。对于小鼠F2代多态性位点为14个，纯合基因率为53．3％；到F10代时基因纯合位点达29个，纯合基因位点率为96．7％。每代相似系数具有不断上升的趋势，上升率为3％～10％。采用皮肤移植方法验证了F10代大、小鼠为近交系。结论建立了一种新的快速培育近交系动物的方法，打破了传统近交系的培育方法，为今后研究分析动物间的血缘关系和遗传距离奠定了基础。     

近交系小鼠微卫星位点的多态性观察

目的:观察不同品系小鼠微卫星位点的多态性.方法:取6～10周龄近交系BALB/C、豫医无毛小鼠、C57、CBA及DBA/2小鼠各5只,颈椎脱臼处死后取新鲜的脑组织0.3～0.5 cm3,提取DNA.随机选择位于小鼠2、3、4和16号染色体上的5对微卫星引物(D2Nds3、D3mit17、D3mit18、D4mit2、D16mit4),应用PCR技术对5种近交系小鼠的DNA多态性进行研究.结果:5对引物在近交系小鼠各基因座上均出现一清晰条带,D16mit4、D3mit17、D3mit18具有多态性,D4mit2、D2Nds3不具有多态性.结论:筛选出的引物D16mit4、D3mit17、D3mit18可用于检测近交系小鼠的品系来源和遗传背景,且所检测的小鼠符合近交要求.     

应用RAPD方法对近交系小鼠进行遗传检测的研究

目的　为实验室日常检测近交系小鼠的遗传背景提供一种分子生物学方法。方法　用 6条随机引物对 6个品系近交系小鼠基因组DNA进行PCR扩增。结果　 6条随机引物中p2、p3、p5和p6四引物扩增的条带差异较为明显。结论　RAPD方法是一种有效的近交系小鼠遗传检测手段     

DNA指纹技术在近交系小鼠遗传监测中的应用

目的 :建立利用DNA指纹技术对近交系小鼠进行遗传监测的方法及其应用的可行性和准确性初步探讨。方法 :利用DNA指纹法 ,以JL 0 2多位点探针 ,Southern杂交技术对 5个品系的近交系小鼠 (BALB/c、C5 7、6 15、DBA/2、ICR)建立DNA指纹图谱进行分析。结果 :不同品系近交系小鼠的DNA指纹图差异很大 ,其相似系数为0 196± 0 86 ;而同一品系的近交系小鼠的DNA指纹图相一致 ,其相似系数为 1 0± 0 0 ;同一窝母鼠与仔鼠间的DNA指纹图也基本一致 ,相似系数为 0 982± 0 0 15。结论 :利用DNA指纹技术完全可以反映出近交系小鼠的遗传质量 ,可以应用于对近交系小鼠进行遗传质量监测 ,从而从分子水平上对近交系实验动物进行遗传监测奠定了基础     

微卫星DNA分析国内24个近交系小鼠遗传状况

目的利用微卫星位点对国内24种近交系小鼠进行遗传状况分析。方法用前期筛选的富含多态性和等位基因数多的30个小鼠微卫星位点,合成荧光标记引物,对近交系小鼠基因组DNA进行PCR的扩增,经STR扫描对各近交系小鼠品系进行基因分型。结果在24个近交系小鼠品系中,有16个品系在品系内在30个位点上均具有相同基因型。而在不同品系间同一位点具有多态性,可初步对不同品系进行鉴别区分。其余品系内个别动物存在多态性。结论所选位点可以参考用于近交系小鼠遗传质量检测分析,并进行初步品系检测鉴定。     

微卫星DNA监控近交系小鼠的重组近交系培育研究

目的采用微卫星DNA技术监控近交系小鼠仔代基因状况，有选择性地进行交配繁殖，以达到快速培育新的重组近交系动物。方法利用PCR扩增微卫星DNA技术对近交系C57和BALB／c小鼠所交配繁殖的仔代鼠进行了微卫星DNA多态性分析，与母代C57小鼠相似系数高的与中的进行定向交配繁殖。结果F2代小鼠多态性位点为14个，纯合基因率为53．3％；到F10代时基因纯合位点达29个，纯合基因位点率为96．7％。每代相似系数具有不断上升的趋势，上升率为3％一10％。采用皮肤移植方法验证了F10代小鼠为近交系。结论建立了一种新的快速培育重组近交系动物的方法，打破了传统近交系的培育方法，为今后研究分析动物间的血缘关系和遗传距离奠定了基础。     

基因组简并寡核苷酸引物聚合酶链反应的影响因素

目的:对影响现有微量基因组扩增方法--简并寡核苷酸引物聚合酶链反应(degenerate oligonucleotideprimed PCR,DOP-PCR)的因素进行探讨.方法:针对现有DOP-PCR扩增过程中存在的影响产物产量和特异性的因素进行分析,分别从不同的DNA模板来源、模板梯度稀释与否以及DOP-PCR扩增产物是否采用低熔点胶回收去除干扰分析的小片段等方面进行研究,最后以特异性基因(FTCD和CBS)PCR扩增的结果作为评价指标,了解上述因素对DOP-PCR扩增的影响.结果:以小鼠单个卵细胞基因组为模板与以肝基因组DNA为模板相比,在产量上前者明显低于后者,特异性上两者相当.小鼠肝基因组DNA梯度稀释作为模板进行扩增的结果没有明显差异.与未经低熔点胶回收的DOP-PCR产物相比,经低熔点胶回收的DOP-PCR产物在常规PCR扩增反应中得到的产物特异性更好.结论:应用DOP-PCR方法进行扩增时,小鼠单个卵细胞可以用来进行DOP-PCR的扩增从而用于对特异性基因的检测,但是在扩增产量方面需要进一步的改进或优化.对现有DOP-PCR反应进行产物低熔点胶回收纯化,能够增加产物的特异性,效果满意.     

SX1近交系小鼠生长繁育主要指标的测定

目的测定SX1近交系小鼠的生长繁育指标，为建立该品系小鼠的生物学特性资料提供实验数据。方法从采用全同胞兄妹交配方式繁殖获得的F20、F21代仔鼠中选择30对小鼠，连续繁殖5胎，分别测定窝产仔数、24h窝重、仔鼠均重、离乳仔数、离乳均重、胎间隔等几项指标；以第2胎小鼠作为生长发育观察对象，测定1-10周间每周的体重变化，计算每周体重增长情况。结果SX1小鼠1-5胎平均窝产仔数5.42±0.76只；平均窝重10.36±1.45g；仔鼠均重1.93±0.07g；离乳仔数5.21±0.95只；离乳窝重61.41±9.67g；离乳均重11.98±0.50g；离乳成活率96.09%；平均胎间隔33.63±0.68。1-10周平均每周增重雄鼠3.08±2.40g，雌鼠2.76±2.01g。3-5周时为生长发育旺盛期，平均每周增重雄鼠5.95±1.41g，雌鼠5.18±0.96g。结论SX1近交系小鼠具有稳定的繁殖性能，幼鼠离乳成活率高，各项主要指标基本符合近交系小鼠的特征。     

清洁级BALB/c近交系小鼠常规生物学特性研究

目的建立BALB/c近交系小鼠常规生物学特性指标.方法采用日本光电MEK-5126血球计数仪、荷兰半自动生化仪、流式细胞仪及常规的实验方法检测.结果血液细胞计数、血液生化指标、体重、脏器重量、脏器指数等常规生物学指标结果比较均一;清洁级BALB/c近交系小鼠的血液细胞计数和血液生化指标同普通级BALB/c近交系小鼠比较差异显著;普通级的CD4^＋/CD8^＋指标雌雄之间及普通级与清洁级的CD4^＋/CD8^＋差异显著.结论清洁级BALB/c近交系小鼠具有比较稳定的生物学特性.     

用皮肤移植法对培育近交系大小鼠进行遗传监测

目的 采用皮肤移植技术对利用微卫星DNA监控所培育的近交系大小鼠进行遗传监测。方法利用背部皮肤移植法和尾部皮肤移植法同时对所培育的近交系大小鼠进行遗传监测。结果 对所培育12只大鼠的背部皮肤移植全部成活，没有排斥反应；12只小鼠的背部皮肤移植有1只出现技术失败，其余未出现排斥反应。对所培育12大鼠的尾部皮肤移植除有1只技术失败外，其他未出现排斥反应。小鼠的尾部皮肤移植有1只技术失败，1只死亡外，其他未出现排斥反应。结论 通过皮肤移植遗传监测初步证实了所培育的大小鼠群为近交系。     

小鼠11个品系20个微卫星基因位点的遗传分析

目的利用PCR对近交系小鼠11个品系的20个微卫星基因座进行遗传检测,为实验室日常检测近交系小鼠的遗传背景提供一种分子生物学方法.方法用20个微卫星引物对11个品系近交系小鼠的基因组DNA进行PCR扩增.根据MMDBJ数据库信息,已知品系C3H、DBA、BALB/c和C57BL/6的多态性位点大小,由此可推知其他品系C57BL/6-Bg、C57BL/10、TA1、TA2、T739、M615和SCID的多态性位点大小.结果应出现的220条条带中有193条与预期的一致.结论利用这20个微卫星基因位点可以将11个品系的近交系小鼠区分开来,近交系小鼠具有丰富的遗传多样性,这些结果对于近交系小鼠的遗传检测具有重要指导意义.     

聚合酶链反应扩增大片段mtDNA

目的 :探讨聚合酶链反应 (PCR)扩增大片段线粒体DNA方法。方法 :快速碱裂解法提取线粒体DNA ,长时程PCR扩增出 5 430bp线粒体DNA。结果 :扩增出 5 430bp线粒体DNA产物特异性强 ,产量高。 结论 :该方法反应条件简便、稳定 ,也可用于其它大片段的扩增 ,有一定的实用价值。     

转人组织蛋白酶K基因鼠系的PCR检测

目的用PCR技术检测转人组织蛋白酶K基因鼠系,筛选携带目的基因的阳性小鼠。方法用PCR技术,对显微注射后出生的转人组织蛋白酶K基因小鼠、首建鼠的F1、F2、F3及F2代与野生型ICR小鼠的回交后代进行检测。结果共检测显微注射后出生的小鼠25只,阳性为1只,阳性率为4%;检测F1、F2、F3代小鼠分别为60、77和69只,阳性仔鼠数为35、56和63只,阳性率分别为550%、727%和913%;对回交后代进行检测,未见纯合的F2代小鼠。结论外源基因(人组织蛋白酶K基因)已经整合到小鼠的染色体上,并且按孟德尔遗传定律中的分离定律进行遗传。     

近交系小鼠过氧化氢酶-2遗传生化标记位点的研究

目的 为了进一步完善近交系小鼠遗传生化标记检测方法,对近交系小鼠过氧化氢酶-2生化标记位点进行研究.方法 将CBA/Ca与BALB/c交配得到杂交F1代动物,同时将CBA/Ca与C57BL/6交配得到杂交F1代动物,然后通过F1代动物之间的交配,以及F1代动物与母代的回交,得到F2动物,对F2代动物进行过氧化氢酶-2生化标记检测.结果 在杂交F1代不表现的过氧化氢酶-2的b型基因,在F2代出现.结论 近交系小鼠过氧化氢酶-2遗传生化标记位点的等位基因a是完全显性的.