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相似文献
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1.
为探讨生存素反义寡核苷酸(生存素-ASODN)对化疗药多西紫杉醇(泰索帝)诱导膀胱癌细胞系BIU87细胞凋亡的影响。将已构建成功的生存素-ASODN真核表达载体pcDNA3-Swas通过脂质体介导转染膀胱癌细胞系BIU87,并筛选转染成功的阳性克隆;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测其生存素mRNA表达;锥虫蓝拒染法观察生存素-ASODN与泰索帝联合应用对BIU87细胞生存的影响;  相似文献   

2.
张建华  杨为民  周四维 《医学研究生学报》2005,18(11):969-971,i0007
目的:研究外源性抑癌基因PTEN转染对人膀胱癌细胞系BIU-87凋亡的影响,探索膀胱癌基因治疗的新途径.方法:将携有PTEN基因的真核表达载体体外转染BIU-87细胞,筛选稳定转染的细胞并扩增培养,用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测PTEN的表达情况,应用细胞原位凋亡检测试剂盒和流式细胞仪分别研究PTEN基因转染前、后膀胱癌细胞凋亡的变化.结果:转染PTEN基因的膀胱癌细胞系BIU-87中PTEN mRNA能稳定表达,肿瘤细胞凋亡明显增多,与对照组比较有显著性差异.结论:转染外源性PTEN基因能显著诱导膀胱癌细胞凋亡,从而达到抑制肿瘤发生、发展的目的.  相似文献   

3.
运用原位杂交技术检测脂质体介导增殖细胞核抗原(PCNA)反义寡脱氧苷酸抑制人膀胱癌细胞BIU-87 PCNA mRNA的表达水平。结果表明脂质体介导PCNA反义寡脱氧核苷酸处理组中BIU-87细胞PCNA mRNA的表达水平明显低于对照组。结果提示脂质体介导PCNA反义寡脱氧核苷酸可抑制人膀胱癌细胞BIU-87体外增殖活性,其抑制作用可通过阻断PCNA蛋白表达来实现。  相似文献   

4.
目的 观察凋亡素基因(VP3)在卵巢癌细胞株CoCl中诱导凋亡的情况。方法 用Kpn Ⅰ、Xba Ⅰ分别双酶切pMD18-CAVP3和pcDNA3.1(+),分别回收365bp和5.0kb大小的片断,然后常规行连接反应,构建重组凋亡素真核表达栽体pcDNA3.1-VP3。采用Lipofectamine^TM 2000介导的基因转染法,在体外将pcDNA3.1-VP3转染入卵巢癌细胞株CoCl中,RT—PCR检测凋亡素在细胞中的表达,用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 酶切鉴定及测序结果表明重组凋亡素真核表达载体pcDNA3.1-VP3构建成功。RT—PCR证实VP3基因在COCl中存在并在转录水平表达。转染pcDNA3.1-VP3细胞凋亡率明显高于转染空质粒组(P〈0.01)。结论 凋亡素可有效诱导卵巢癌细胞COCl凋亡。  相似文献   

5.
《中医学报》2013,(12):1792-1793
目的:研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对人膀胱癌BIU87细胞葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein78,GRP78)基因表达的影响,探讨ICA抑制BIU87细胞增殖的作用及机制。方法:用不同浓度的ICA作用于体外培养的人膀胱癌BIU87细胞株,流式细胞仪Annexin/PI双染法检测细胞凋亡率;RT-PCR检测GRP78 mRNA的表达。结果:浓度为0.2 mg·L-1、0.4 mg·L-1的ICA可显著促进BIU87细胞凋亡,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);RT-PCR结果显示浓度为0.2mg·L-1、0.4 mg·L-1的ICA作用于BIU87细胞48 h后,GRP78 mRNA表达水平显著降低,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:ICA抑制BIU87细胞增殖,促进其凋亡,GRP78基因可能是其作用靶点之一。  相似文献   

6.
目的: 构建人颗粒溶素(GNLY) 全长编码序列的真核表达载体,转染肿瘤细胞,观察GNLY在细胞内的表达及其对细胞增殖的抑制作用. 方法:用RT-PCR技术获取人GNLY 全长编码序列cDNA,克隆至pGEM-T 载体进行测序,再将克隆片段插入质粒pcDNA3.1(+)中,构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/GNLY,用阳离子聚合物转染试剂转染肝癌细胞系SMMC-7721,检测目的基因mRNA的表达,WST-8法检测细胞增殖活性. 结果:获得人GNLY全长编码序列cDNA ,并成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/GNLY;转染SMMC-7721细胞后,检测出目的基因mRNA的表达;重组质粒转染组与空质粒对照组细胞增殖活性有非常显著性差异(P〈0.01和P〈0.001),并且随着转染基因浓度的增加,细胞增殖活性逐渐降低,2.0μg/ml pcDNA3.1(+)/GNLY转染组细胞增殖活性下降至0.329. 结论:pcDNA3.1(+)/GNLY真核表达载体构建成功,GNLY基因转染对SMMC-7721细胞能产生细胞毒性效应,对肝癌细胞具有一定的杀伤作用.  相似文献   

7.
目的:研究外源性野生型p53(wtp53)基因对人肺腺癌细胞系A549血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响. 方法:将含有wtp53基因的pcDNA3.1-wtp53和空载体pcDNA3.1-neo质粒,通过阳离子脂质体转染A549细胞,应用半定量RT-PCR和ELISA技术检测其对VEGF表达情况的影响;将A549,A549/pcDNA3.1-neo和A549/ pcDNA3.1-wtp53细胞分别接种至裸鼠皮下,观察成瘤时间及瘤块大小;免疫组化法计数VEGF阳性细胞百分数并进行半定量分级. 结果:pcDNA3.1-wtp53转染组VEGF mRNA和蛋白表达均明显低于其他2组. pcDNA3.1-wtp53转染后裸鼠成瘤时间延长,瘤块生长缓慢. 结论:wtp53基因转染可抑制VEGF表达和肿瘤的生长.  相似文献   

8.
芹菜素诱导膀胱癌细胞株BIU-87凋亡及机制的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:探讨芹菜素(Apigenin)在体外诱导膀胱癌细胞株BIU-87凋亡的作用及其机制.方法:MTT法测定不同浓度芹菜素作用后BIU-87细胞的生长情况;流式细胞术检测细胞周期情况;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术观察芹菜素作用后细胞的凋亡情况;RT-PCR法检测Survivin mRNA表达的变化;免疫细胞化学SP法检测Survivin和Caspase-3蛋白表达的变化.结果:①MTT法证实芹菜素能明显抑制膀胱癌细胞株BIU-87的生长.②22.03 μmol/L芹菜素作用72 h后,流式细胞仪检测发现芹菜素可使BIU87细胞阻滞在G2/M期;流式细胞术双染法检测细胞凋亡显示:芹菜素可使BIU-87细胞发生凋亡.③RT-PCR检测发现芹菜素可使BIU-87细胞Survin mRNA表达显著减少(P<0.05),免疫细胞化学SP法检测显示Survivin蛋白表达亦显著减少(P<0.05),Caspase-3蛋白表达则明显增加(P<0.01).结论:芹菜素在体外可抑制BIU-87细胞增殖,诱导其发生凋亡.芹菜素诱导BIU-87细胞发生凋亡的生物学效应可能与Survivin的表达下降,Saspase-3的表达上升有关.  相似文献   

9.
目的:探讨surv iv in反义核酸对阿霉素诱导胰腺癌细胞系PANC-1细胞凋亡的影响。方法:将已构建成功的surv iv in反义核酸真核表达载体pcDNA 3-SVV as电转染胰腺癌细胞系PANC-1,并筛选转染成功的阳性克隆;台盼蓝拒染法观察surv iv in反义核酸与阿霉素联合应用对PANC-1细胞生存的影响;细胞计数和M TT试验测定转染细胞对阿霉素敏感性;琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡DNA断裂情况。结果:转染surv iv in反义核酸的PANC-1/SVV as细胞增殖明显受抑,与PANC-1/neo细胞、PANC-1细胞进行比较,具有显著性差异(P<0.05);M TT实验显示,阿霉素对PANC-1/SVV as、PANC-1/neo、PANC-1细胞的IC50值分别为0.285±0.012μm o l/L、1.528±0.317μm o l/L和1.540±0.253μm o l/L。统计分析证明差异具有显著性(P<0.01);经琼脂糖凝胶电泳,PANC-1/SVV as细胞可见到DNA梯形条带,而PANC-1/neo、PANC-1细胞未见到。结论:surv iv in反义核酸可促进阿霉素诱导PANC-1细胞凋亡,为胰腺癌的基因治疗研究提供了实验依据。  相似文献   

10.
程跃  蒋军辉  施小东  胡嘉盛 《现代实用医学》2010,22(4):369-371,F0003
目的研究抑癌基因PTEN转染对人膀胱癌细胞系BIU-87化疗敏感性的影响。方法将携有PTEN基因的重组真核表达质粒pBp-PTEN体外转染BIU-87细胞(pBp-PTEN-BIU87),筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pBp的BIU-87细胞(pBp-BIU87)和正常BIU-87细胞为对照,用RT-PCR检测PTEN的表达情况,应用MTT分别研究转染前、后膀胱癌细胞对不同浓度抗癌药物丝裂霉素MMC(1、10和100g/mL)、康朴赛星(0.25、2.5和25g/mL)和吡柔比星(2、20和200g/mL)的抑制率和敏感性的变化。结果 RT-PCR证实PTEN在转染的BIU-87细胞中能稳定表达。PTEN转染后,BIU-87细胞对MMC的药物抑制率和敏感性明显提高,对吡柔比星和康朴赛星的药物抑制率和敏感性无明显变化。结论 PTEN基因转染能提高人膀胱癌细胞系BIU-87对某些抗癌药物的敏感性,作用的强弱取决于药物的作用机制。  相似文献   

11.
The effects of survivin antisense RNA on proliferation of leukemia cell line HL-60 and taxol-induced chemotherapy was explored. A cDNA fragment of survivin obtained by RT-PCR was inserted into a plamid vector named pcDNA3 in the reverse direction. The vector encoding antisense RNA of survivin was confirmed by restriction enzyme digestion and DNA sequencing. The recombinant plasmid was delivered into HL-60 cells by electroporation. Growth curves were plotted based on cell counting. Trypan blue dye exclusion assay and MTT assay were carried out after the cells were incubated with taxol. DNA gel electrophoresis and nuclear staining were performed for cell apoptosis assay. The correct construction of the recombinant plasmid has been identified by restriction enzyme digestion and DNA sequencing. A stable down-regulation has been achieved in HL-60 SVVas cells after G418 selection. Compared to HL-60 cells, the proliferation of HL-60 SVVas cells was significantly inhibited (P〈0.05). Cytotoxicity assays indicated that IC50 of HL-60 SVVas for taxol was relatively lower than controls (P〈0.01). Apoptosis assays revealed that taxol-induced apoptosis was detected in HL-60 SVVas cells incubated with 50 ng/ml taxol for 12 h, while in HL-60 cells incubated with 100 ng/ml taxol for 72 h. It was suggested that Survivin antisense RNA could inhibit the proliferation of HL-60 cells and enhance taxol-induced apoptosis in HL-60 cells, which may lay an experimental foundation for further research on gene therapy in leukemia.  相似文献   

12.
Survivin反义核酸对SKoV3细胞生长及Survivin基因表达的影响   总被引:2,自引:1,他引:1  
目的 :观察Survivin反义核酸对人卵巢癌细胞系SKOV3的生长及Survivin基因表达的影响。方法 :应用基因重组技术 ,将在真核细胞中能稳定表达反义Survivin的pcDNA3 SVVas经脂质体LipofectamineTM2 0 0 0 介导转染人卵巢癌细胞株SKOV3,经G4 1 8筛选得到抗性克隆 (SKOV3/SVVas) ,同时以空载体pcDNA3转染SKOV3作为对照(SKOV3/neo) ;绘制细胞生长曲线 ;采用免疫组化、RT PCR和流式细胞仪检测SKOV3、SKOV3/neo及SKOV3/SVVas细胞的内源性SurvivinmRNA及蛋白的表达和凋亡细胞。结果 :与SKOV3及SKOV3/neo细胞比较 ,SKOV3/SVVas细胞增殖和代谢能力均明显降低 ,Survivin蛋白阳性表达率及mRNA相对表达量明显降低 (P <0 .0 1 ) ,细胞凋亡率显著增加 (P <0 .0 1 )。结论 :稳定表达的反义Survivin能够有效抑制SKOV3细胞内源性Survivin蛋白的表达 ,诱导SKOV3细胞凋亡。  相似文献   

13.
目的 探讨生存素(survivin)反义寡核苷酸(ASODN)对人胃癌细胞SGC7901增殖的抑制作用。方法 设计合成特异性靶向生存素的反义寡核苷酸。胃癌细胞株SGC7901分为4组:空白对照组、单纯脂质体对照组、正义链转染对照组、ASODN转染组。作用48h后收获各组细胞。Westernblot法检测各组细胞生存素表达情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,MTT法检测各组细胞的生长抑制率。结果 脂质体介导生存素反义寡核苷酸转染后的胃癌细胞出现生存素蛋白表达明显下降;ASODN转染组细胞凋亡率明显高于各对照组(P〈0.05),而各对照组问差异无显著性(P〉0.05);ASODN转染组细胞的抑制率明显高于各对照组(P〈0.05),而各对照组问差异无显著性(P〉0.05)。结论 生存素反义寡核苷酸转染胃癌细胞能下凋生存素蛋白表达,诱导胃癌细胞凋亡,抑制细胞增殖,具有明显的抗癌作用。  相似文献   

14.
目的探讨survivin反义寡核苷酸(ASODN)对乳腺癌细胞系MCF 7的诱导凋亡、抑制增殖和对长春瑞滨的增敏作用。方法采用脂质体介导survivin ASODN转染乳腺癌细胞系MCF 7,半定量RT PCR方法检测survivin基因mRNA表达,Western blot方法检测survivin基因蛋白表达,AnnexinⅤ/PI双染法通过流式细胞仪检测细胞凋亡率变化,PI染色通过流式细胞仪检测细胞周期时相变化,MTT比色法检测转染细胞的生长抑制情况及对长春瑞滨的敏感性,电镜观察反义转染对乳腺癌细胞系MCF 7的凋亡诱导作用。结果survivin反义复合物下调MCF 7细胞的survivin mRNA和蛋白表达,并呈剂量依赖性。细胞周期被阻滞于G2/M期,细胞凋亡率明显升高(P<0.05),反义组细胞生长抑制率明显上升(P<0.05)。透射电镜下转染组细胞呈凋亡晚期变化。600?nmol/L反义转染组长春瑞滨的IC50值为(3.7±0.42)μg/mL,正常组为(7.1±0.68)μg/mL,差异有统计学意义(P<0.05)。结论survivin反义寡核酸可有效下调MCF 7的survivin mRNA及蛋白表达水平,抑制增殖,诱导凋亡,并增强其对化疗药物长春瑞滨的敏感性。  相似文献   

15.
目的研究转染生存素(survivin)反义寡核苷酸诱导SGC7901胃癌细胞凋亡及其可能的作用机制。方法实验分为空白对照组(Control组)、脂质体组(Lip组)、正义寡核苷酸组(Sodn组)及反义寡核苷酸组(Asodn组)。人工合成正、反义寡核苷酸,经脂质体将survivin正、反义寡核苷酸转染人胃癌细胞48h后,MTT检测细胞增殖抑制率,Western blot检测caspase-3蛋白表达改变,Hoechst染色观察细胞凋亡形态改变及流式细胞仪检测凋亡率。结果Hoechst染色荧光显微镜下Control组、Lip组及Sodn组细胞核呈正常的蓝色,而Asodn组细胞核染色增强、核质浓缩、核碎裂,呈凋亡改变;Asodn组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、caspase-3蛋白表达均增高,与Control组、Lip组及Sodn组相比差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论survivin反义寡核苷酸可诱导胃癌细胞凋亡,其作用机制可能是通过激活caspase-3表达,启动凋亡信号传导。  相似文献   

16.
目的 观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人卵巢癌细胞株SKOV3中survivin、Smac/DIABLO表达的影响,探讨survivin、Smac/DIABLO在ASODN诱导卵巢癌细胞凋亡和细胞周期改变中的作用和分子机制.方法 用脂质体(LipofectamineTM 2000)介导survivin ASODN转染人卵巢癌细胞株SKOV3,用MTT比色法检测细胞生长活性,流式细胞学技术检测细胞凋亡指数、细胞周期分布及survivin、Smac蛋白表达改变,逆转录酶链反应检测survivin、Smac/DIABLO基因表达改变.结果 同对照组比较,不同浓度ASODN作用后细胞生长明显减慢,转染后48 h IC50在600 nmol/1左右.用600 nmol/LASODN转染48h后,细胞凋亡指数(AI)明显增加,(t=6.3671,P<0.05);更多的细胞停留在G0/G1期(t=10.3832,P<0.01).Survivin mRNA和蛋白表达明显下调(t=3.5031,P<0.05,t=7.8146,P<0.01),SmacmRNA和蛋白表达上调(t=2.8011,P<0.05,t=11.3917,P<0.01).结论 ASODN诱导细胞凋亡,使更多的细胞停留在G0/G1期,减少进入有丝分裂细胞数的作用,是通过下调survivin基因,上调Smac基因表达来共同完成的,survivin、Smac/DIABLO基因在调节SKOV3细胞周期、凋亡的功能上密切相关,二者的相互作用是卵巢癌发生、发展的重要分子机制之一.  相似文献   

17.
目的:建立高效、稳定的人膀胱癌多药耐药性细胞模型。方法:采用基因重组技术构建真核表达载体pcDNA3.1( )/bcl-2,通过脂质体将人bcl-2基因转染膀胱癌细胞BIU-87,RT-PCR检测基因转录水平,应用MTT比色法进行耐药性检验。结果:酶切鉴定和基因测序证明真核表达载体pcDNA3.1( )/bcl-2构建成功;RT-PCR分析表明,转染bcl-2基因的BIU-87/bcl-2细胞的bcl-2基因表达水平较BIU-87细胞和转染空载体的BIU-87/neo细胞显著提高;与BIU-87细胞和BIU-87/neo细胞相比,BIU-87/bcl-2细胞具有较高的耐药性。结论:基因转染法是建立人膀胱癌多药耐药细胞模型的理想方法。  相似文献   

18.
 目的 探讨生存素(survivin)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASODN)对人子宫内膜癌细胞HEC-1B增殖的抑制作用。方法 实验分空白对照组(control组)、单纯脂质体对照组(Lip组)、正义链转染对照组(SODN组)、ASODN转染组(ASODN组)4组。人工合成正、反义寡核苷酸,经脂质体将survivin正、反义寡核苷酸转染入子宫内膜癌细胞48 h后收集各组细胞。免疫印迹(Western blot)法检测各组细胞生存素表达情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,四甲基偶氮唑蓝试验(MTT)法检测细胞生长抑制情况。结果 脂质体介导生存素反义寡核苷酸转染后的子宫内膜癌细胞出现生存素蛋白表达明显下降;ASODN转染组细胞凋亡率和增殖抑制率均明显高于各对照组(P<0.05),而各对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 生存素反义寡核苷酸转染子宫内膜癌细胞能下调生存素蛋白表达,诱导子宫内膜癌细胞凋亡,抑制细胞增殖,对子宫内膜癌是一种有效的基因疗法。  相似文献   

19.
目的研究survivin反义寡核苷酸对肾透明细胞癌786O细胞表达survivin蛋白、细胞凋亡、增殖的影响。方法设计并合成特异性靶向survivin的反义寡核苷酸(ASODN)。肾透明细胞癌细胞株786O分为6组:空白对照组、脂质体转染对照组、正义链转染对照组、200、400和600nmol/LASODN转染组。作用24h后收获各组细胞。倒置显微镜及透射电子显微镜观察细胞形态变化,免疫组化法检测各组细胞survivin表达情况和流式细胞术检测各组细胞周期变化和凋亡指数,MTT法检测survivin反义寡核苷酸对各组细胞的生长抑制率。结果电镜下可以见到典型凋亡样改变,而各对照组细胞生长良好;各ASODN转染组细胞survivin表达有不同程度减弱;各ASODN转染组细胞凋亡指数明显高于各对照组(P<0.05),以600nmol/LASODN转染组最为明显(P<0.05),而各对照组间差异无显著性(P>0.05)。结论不同浓度survivinASODN转染后能下调survivin蛋白表达,诱导肾透明细胞癌786O细胞凋亡,抑制786O细胞增殖。  相似文献   

20.
目的探讨靶向survivin基因的反义寡核苷酸(ASODN)对MCF-7细胞的增殖、凋亡及药物敏感性等生物学行为的影响。 方法采用脂质体介导survivin-ASODN转染MCF-7乳腺癌细胞系,RT-PCR检测survivin mRNA的表达,MTT法检测细胞增殖能力及对药物的敏感性,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。 结果survivin-ASODN可有效下调survivin表达水平,抑制细胞的生长,并呈时间剂量依赖关系;流式细胞术示,24h反义转染组细胞周期被阻滞于G2/M期,细胞凋亡率增加到15.23%。 紫杉醇作用早期(6h),survivin mRNA 表达增高,利于肿瘤细胞逃避紫杉醇诱导的细胞凋亡,增加肿瘤耐药的机会;反义转染组中细胞早期survivin mRNA表达上调受到抑制,对药物的敏感性增加。 结论survivin基因ASODN转染细胞后,下调survivin的表达,细胞凋亡增加,提高了对药物的敏感性。  相似文献   

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