Bax和P53蛋白在肝硬变和肝细胞肝癌组织中的表达及其间的…

目的：检测肝硬变和肝细胞肝癌中Ｂａｘ基因产物及Ｐ５３蛋白的表达并分析其间的关系。方法：免疫组织化学ＳＡＢＣ法。结果：Ｂａｘ蛋白定位于细胞浆中，Ｐ５３蛋白定位于细胞核或（和）细胞浆中，Ｂａｘ蛋白在肝硬变中和ＨＣＣ中表达阳性率分别为９６．２％和５０％（Ｐ〈０．０１），Ｐ５３蛋白在两者中的表达率分别为３．８％和３０．９％（Ｐ〈０．０１），Ｂａｘ和Ｐ５３蛋白在肝硬变和ＨＣＣ中的表达均有明显差异。结论：Ｂａ     

胃腺癌发生过程中Fas、Bax蛋白表达的变化

目的：为探讨Ｆａｓ、Ｂａｘ基因在胃癌发生过程中的意义。方法：用免疫组化ＡＢＣ方法检测了４８例胃腺癌组织，７４例非癌胃粘膜组织。结果：重度不典型增生组织及癌组织中Ｆａｓ蛋白表达率分别为３７５％、４５８％较正常胃粘膜上皮的８２３％显著下降（Ｐ＜００５），轻、重不典型增生组织及癌组织中Ｂａｘ蛋白表达率为４２８％，５００％，４３６％较正常胃粘膜上皮的８８２％显著下降（Ｐ＜００５）。中、高分化胃癌Ｆａｓ、Ｂａｘ蛋白阳性表达率显著高于低分化癌（Ｐ＜００５）。并且Ｆａｓ与Ｂａｘ在组织中的表达呈相关性（Ｐ＜００５）。结论：Ｆａｓ、Ｂａｘ蛋白表达变化发生在胃粘膜癌变的早期阶段，并可能与癌的进展密切相关，Ｆａｓ与Ｂａｘ在胃癌发生发展中有显著的相关性。     

整合蛋白α5亚基在肝癌中的表达

探讨整合蛋白α５与肝癌某些临床病理特征的关系。方法应用免疫组化技术（ＡＢＣ法）检测整合蛋白α５亚基在７９例原发性肝癌组织及其相应癌周组织中的表达。结果癌组织及其相应癌周组织中α５阳性率分别为３２．９％和８１．０％，差异有非常显著意义（Ｐ＜０．０１）。直径≤５ｃｍ的小肝癌α５阳性率高于直径＞１０ｃｍ的大肝癌（分别为５５．６％，１０．０％，Ｐ＜０．０１）；分化较好的肝癌，α５阳性率高于分化不良者（分别为４０．６％、１６．０％，Ｐ＜０．０５）；已发生包膜侵犯和肝内转移的侵袭性肝癌，其α５阳性率低于包膜未受侵犯和无发生肝内转移的肝癌（分别为１６．０％、６８．７％，２０．４％、４２．２％）。α５亚基表达与患者年龄、血清甲胎蛋白水平、ＨＢＶ感染、肝硬化等因素均无显著相关（Ｐ＞０．０５）。结论整合蛋白α５低表达与肝癌生长、低分化、包膜侵犯、肝内侵袭转移发生及病情进展相关，可能是肝癌的一种负性调节因子。     

Ki-67及Bax基因产物在肾癌组织中的表达及相关性研究

目的：通过研究Ｋｉ－６７和Ｂａｘ基因产物在肾癌组织中的表达,探讨二者的相关性。以及Ｋｉ－６７／Ｂａｘ比率的意义。方法：对４３例肾癌组织石蜡标本与９例正常肾组织对照。采用Ｓ－Ｐ法观察Ｋｉ－６７与Ｂａｘ产物阳必冢表达率的统计分析。结果：Ｂａｘ阳性表达定位于细胞浆,肾癌组织中阳性表达率１７．８％,与正常肾组织３０．２％相比,差异十分显著（Ｐ〈０．０１）。但其表达与肿瘤分级、分期无关（Ｐ〉０．０５）;Ｋｉ     

抑制素α、βA、βB亚基在乳腺和生殖系统肿瘤组织中的表达

目的：抑制素（ＩＮＨ） 单克隆抗体α、βＡ、βＢ亚基在生殖系统肿瘤组织中的免疫组化定位研究,并探讨ＩＮＨ与乳腺癌的关系。方法：应用免疫组化ＳＰ法,检测４ 例卵巢颗粒细胞瘤、４ 例睾丸支持细胞瘤,５ 例睾丸精原细胞瘤及４０ 例乳腺浸润性导管癌ＩＮＨα、βＡ、βＢ各亚基的表达。结果：卵巢颗粒细胞瘤、睾丸支持细胞瘤,睾丸精原细胞瘤各亚基皆呈阳性反应。４０ 例乳腺癌浸润性导管癌中ＩＮＨα、βＡ、βＢ阳性率分别为７２．５％ ,７７．５％ 和７０．０ ％ ,各亚基阳性率无明显差异（ Ｐ＞ ０．０５） 。结论：ＩＮＨ除在生殖细胞中阳性表达外,在乳腺癌表达阳性率超过７０ ％ 。     

免疫组化法检测卵巢肿瘤P53蛋白表达

该组研究采用免疫组化法对正常卵巢组织３０例，良性上皮肿瘤３０例，交界性肿瘤１１例，性索间质瘤２１例，上皮性癌４０例，恶性生殖细胞瘤２１例进行了抑癌基因Ｐ５３蛋白表达的检测。Ｐ５３蛋白表达阳性例数分别为０，１（３．３％），２（１８．２％）。５（２３．８％）。２２（５５％），２３（６１．９％）。结果显示：卵巢良性上皮肿瘤、交界性肿瘤和性索间质瘤。上皮性癌和恶性生殖细胞性肿瘤三组间Ｐ５３蛋白阳性表达差异有显著性。（Ｐ＜０．０５）     

倾斜试验加硝酸异山梨醇酯舌下含化在不明原因晕厥诊断中的价值

目的：探讨倾斜试验和硝酸异山梨醇酯舌下含化倾斜试验在不明原因晕厥诊断中的价值。方法：６８例不明原因晕厥者随机均分为直立倾斜试验（ＴＴＴ）组及硝酸异山梨醇酯舌下含化倾斜试验（ＩＤ＋ＢＴＴＴ）组。结果：ＴＴＴ组总阳性率为７３．５％,ＩＤ＋ＢＴＴＴ组为６０．６５％,两组阳性率无统计学差异（ｘ＾２＋１．２６８,Ｐ〉０．０５）,特异性亦无显著性差异（９２．９％与９３．３％,Ｐ〉０．０５０。ＩＤ＋ＢＴＴＴ组诱     

促凋亡基因Bax在膀胱癌表达的免疫组化检测

目的：研究促凋亡基因Ｂａｘ在膀胱移行细胞癌（ＴＣＣ）中的表达，探讨Ｂａｘ在ＴＣＣ发生、发展中的作用和预后复发中的意义。方法：采用兔抗人Ｂａｘ多克隆抗体及Ｓ－Ｐ免疫组化法检测。结果：５６例ＴＣＣ中有３４例Ｂａｘ蛋白表达阳性，阳性率６０．７％。２０例正常膀胱粘膜中有６例表达阳性，阳性率３０％。两组差异显著（Ｐ＜０．０５）。Ｂａｘ蛋白表达部位在细胞胞浆中。Ｂａｘ蛋白表达与病理分级、临床分期及肿瘤复发无显著相关性。结论：促凋亡基因Ｂａｘ在大部分ＴＣＣ中具有不同程度的表达与其发生有关，与ＴＣＣ分级、分期及复发无关。     

P53及Bcl-2蛋白在大肠腺瘤及腺癌中的表达

目的：检测大肠腺瘤及腺癌中Ｐ５３蛋白及Ｂｃｌ－２蛋白的表达，探讨ｐ５３基因、ｂｃｌ－２基因在大肠癌发生发展过程中的作用。方法：应用免疫组织化学ＡＢＣ法检测１０例正常大肠粘膜、３０例大肠腺瘤、１００例大肠腺癌及癌旁粘膜中Ｐ５３蛋白及Ｂｃｌ－２蛋白的表达。结果：大肠腺瘤Ｐ５３、Ｂｃｌ－２蛋白阳性率分别为２６．７％及７６．７％，大肠腺癌Ｐ５３、Ｂｃｌ－２蛋白阳性率分别为４３％及６７％，均显著高于正常粘膜与癌旁粘膜（Ｐ＜０．０１）；随着腺瘤不典型增生程度的加重，Ｐ５３蛋白阳性率显著增高（Ｐ＜０．０１），而Ｂｃｌ－２蛋白表达与腺瘤分级无关；大肠腺癌Ｐ５３蛋白阳性率显著高于腺瘤Ⅰ级不典型增生（Ｐ＜０．０１），与Ⅱ、Ⅲ级不典型增生间差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），分化差的大肠腺癌Ｐ５３蛋白阳性率显著高于分化好的大肠腺癌（Ｐ＜０．０１），而分化差的大肠腺癌Ｂｃｌ－２蛋白阳性率显著低于分化好的大肠腺癌（Ｐ＜０．０５），大肠腺癌Ｐ５３、Ｂｃｌ－２蛋白表达呈负相关（Ｐ＜０．０５）；Ｐ５３蛋白表达患者复发率高、５年生存率低（Ｐ＜０．０５），Ｂｃｌ－２蛋白过度表达的大肠癌患者复发率低、５年生存率高（Ｐ＜０．０５）。结论：ｂｃｌ－２     

食道鳞癌凋亡相关基因表达及原位凋亡的同步检测

用免疫组织化学染色法对食道鳞癌标本进行凋亡相关基因Ｐ５３、Ｆａｓ、Ｂｃｌ ２和Ｂａｘ表达的检测,同时采用ＴＵＮＥＬ方法原位探测细胞凋亡。检测结果显示：①５２例食道鳞癌标本中,Ｐ５３、Ｆａｓ、Ｂｃｌ ２、Ｂａｘ和细胞凋亡的阳性率分别是６１．５％、６１．５％、６９．２％、９８．１％和２８．８％。②１８例对照标本中相应指标的阳性率分别为１６．７％、１００％、３８．９％、１００％和６１．１％。③比较２组标本,肿瘤组Ｐ５３和Ｂｃｌ ２的阳性率显著高于对照组（Ｐ＜０．０１及Ｐ＜０．０５）,肿瘤组Ｆａｓ与ＴＵＮＥＬ的阳性率显著低于对照组（Ｐ＜０．０１及Ｐ＜０．０５）。④以上４种蛋白与细胞凋亡存在与否无独立相关性。上述结果表明,在食道癌变中,不仅存在细胞凋亡功能的减低,同时伴有多种凋亡相关基因的表达异常。凋亡功能的异常,可能是多基因共同调控的结果。     

沙眼衣原体ompA基因克隆及其在真核细胞中的表达

目的克隆D型沙眼衣原体(Ct)ompA基因,构建真核表达重组质粒,转染真核细胞,为核酸疫苗的研制作准备.方法用PCR技术从D型Ct基因组DNA中扩增ompA基因片段,重组入pUCm-T克隆载体.将pUCm-T/ompA中的ompA外源基因片段经酶切、连接等反应,亚克隆入pcDNA3.1真核表达载体,进行序列分析和酶切鉴定后,运用脂质体将重组体pcDNA3.1/ompA转染HeLa细胞,免疫组化法观察目的的基因的表达.结果从D型Ct基因组DNA中扩增出特异的ompA基因片段;序列测定证实与GenBank登陆的D型Ct一致;重组质粒pcDNA3.1/ompA在HeLa中获得表达.结论Ct ompA基因能够在体外真核细胞表达,为进一步研究Ct致病机制及DNA疫苗的研究提供理论依据.     

穿梭质粒pZH32的构建

以pS189、pSV_2gpt、pMCi5为材料,构建了以EB病毒为基础,以酪氨酸tRNA琥珀突变校正基因SupF为靶基因,以黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因Eco gpt为选择标记基因的穿梭质粒pZH32。pZH32长9.4kb,克服了以SV40为基础的穿梭质粒自发突变率高以及宿主范围局限的缺点。SupF基因遗传背景清楚,长度126bp,便于进行序列分析。gpt基因使转化克隆的筛选更加方便。有利于建立一种化学诱变剂的分子检测系统,研究基因突变的类型和突变机制。     

Ｌｉｍｓ Ｅ：一个新的ＬＩＭ同源域基因的克隆和初步分析

目的:克隆与分析小鼠不同剪切的Lims基因.方法:应用巢式RT-PCR,以小鼠cDNA为模板,扩增Lims基因不同剪切子,构入PinPointTM Xa-1T质粒,测序鉴定.结果:测序表明克隆了新的Lims基因变异剪切体Lims E,该变异剪切体编码区为1 164 bp.编码387个氨基酸.结论:比较基因组学分析显示,成功地克隆了一新的小鼠Liras基因剪切子Lims E,为进一步研究Lims基因在细胞发育中的功能打下了基础.     

GFP-pl6融合基因表达载体的构建

本文报道了以ＧＦＰ（绿色荧光蛋白）基因为报告基因，ｐｌ６基因为目的基因，将ｐｌ６基因分别插入ＧＦＰ基因的上游和下游，构建成ＧＦＰ－ｐｌ６融合基因表达载体ｐＣｐｌ６Ｇ和ｐＣＧｐ１６，并通过酶切、电泳技术对重组体进行了鉴定。该表达载体的构建成功为开展ｐｌ６转基因动物模型的建立及其特性研究奠定了基础     

哺乳动物性别决定基因的研究进展

目的了解哺乳动物性别决定基因的作用与功能。方法查阅本领域国内外文献并进行综述。结果SRY、SOX9、WT1、SF1、AMH及DAX1等基因都参与哺乳动物性别决定。结论性别决定基因的研究对性分化与发育异常等临床疾病的诊断和治疗具有十分重要的意义。     

人B7-1/Sart3融合基因的克隆和表达

目的：构建人共刺激分子CD80(B7-1)、T细胞识别的鳞状细胞癌抗原3(Sart3)融合基因真核表达载体，并分别在原核和人成纤维细胞中表达。方法：采用RT-PCR技术，从人胎盘组织抽提的总RNA中克隆Sart3基因的部分cDNA序列(第1～1281bp)．此段序列包括已报道的能诱导HLA限制性细胞毒性T淋巴细胞的抗原表位。然后将不含终止密码子的B7-1 cDNA和Sart3 cDNA共克隆入真核表达载体pEGFP-N1，测定核苷酸序列确定重组成功后，分别转染大肠杆菌和人成纤维细胞，利用流式细胞仪和Western blot检测B7和Sart3的表达。结果：构建人B7、Sart3融合基因真核表达载体B7sart3／pEGFPN。测序结果与GenBank的B7、Sart3相应序列(NM_005191、NM_014706)一致．阅读框无改变。流式细胞仪测定发现在转染的人成纤维细胞表面有明显的荧光增强．免疫印迹发现融合蛋白可以与抗B7抗体反应，融合蛋白分子量与B7-Sart3-EGFP的预测分子量相当。结论：成功构建真核表达载体B7Sart3／pEGFPN，并在人成纤维细胞中表达。为下一步研究将SART3蛋白作为肿瘤疫苗应用于骨肉瘤的生物治疗打下基础。     

肿瘤特异性报告基因载体的构建

目的：将构建一种能在肿瘤组织中进行肿瘤行异性表达的逆转录病毒载体，增强肿瘤基因治疗的靶向性。方法：PCR法获得HER2基因的启动子片段并将其克隆至逆转录病毒载体P^LXSN中，再将突变型绿色荧光蛋白（mtGFP)基因克隆至该启动子下游。结果：质粒P^LHSN经EcoR I和BamH I酶切后可切出510bp和5.8kb两条片段；质粒P^LHGSN经BamH I酶切可切出520bp和6.7kb两条片段。结论：成功构建了携带HER2基因启动子和mtGFP报告基因的逆转录病毒载体。     

慢性胃炎胃粘膜上皮细胞中bax、fas、p16基因的表达

目的:探讨bax、fas和p16在胃粘膜病变发生发展过程中的作用及意义.方法:应用免疫组织化学方法,检测慢性浅表性胃炎(CSG)和轻、中、重度慢性萎缩性胃炎(CAG)患者胃粘膜上皮细胞中bax、fas(促凋亡基因)和p16(增殖负调控基因)基因蛋白的表达情况.结果:CSG和轻、中、重度CAG胃粘膜中bax的表达率分别为41.75%、72.41%和78.26%,fas的表达率分别为39.81%、65.52%和78.26%,p16的表达率分别为9.71%、24.14%和30.43%.轻、中、重度CAG与CSG比较,bax、fas、p16的表达差异有显著性意义P<0.05～0.01.轻、中、重度CAG间比较,差异无显著性意义.结论:bax、fas和p16的高表达,使得细胞增殖/凋亡的比例失衡,在胃粘膜病变的发生发展中可能有重要意义.     

Rh(-)献血者128例基因分型

目的：探讨Rh(-)献血者RhD基因分型的临床意义。方法：采用PCR－－SSP技术检测郑州市128例Rh（－）献血者的RhD基因结构，用氯仿／三氯甲烷法放散检测D^u检测，结果：RhD基因多态性存在3种基本形式，其中外显子完整存在32例（25．00％），全部为D^u型，完全缺失85例（66．41％），部分缺失11例（8．59％），其中2例为D^u型。结论：RhD基因的丰富多态性对于确保输血安全具有指导意义。     

食管癌相关基因2原核表达质粒的构建与诱导表达

目的：构建食管癌相关基因2（ECRG2）原核表达质粒，在大肠杆菌（E．coli）中诱导表达重组蛋白。方法：用聚合酶链反应法扩增ECRG2基因开放阅读框（ORF），构建表达载体pGDX-4T-1-ECRG2，测序鉴定后转化E．coli（BL21）进行异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达，目的蛋白进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、Western免疫印迹鉴定。结果：SDS-PAGE测定GSr／ECRG2蛋白分子质量约34ku，Western blot验证出目的蛋白特异表达。结论：ECRG2ORF插入pGEX-4T-1质粒并在E．coli中成功表达。