腺病毒介导的p53和顺铂的联合应用对胆管癌细胞系QBC939的生长抑制作用

目的：研究ｐ５３基因和顺铂联合应用对胆管癌细胞的作用。方法：将重组体腺病毒ｐ５３和顺铂联合作用于人胆管癌细胞ＱＢＣ９３９，对ｐ５３基因的表达、细胞的生长抑制及机制进行分析。结果：用Ａｄ－ＬａｃＺ进行复组腺病毒转导效率的检测，发现当ＭＯＩ为１００以上时，重组腺病毒可使９０％以上的培养的人胆管癌ＱＢＣ９３９细胞被传导，用ＲＴ－ＰＣＲ方法，在胆管癌ＱＢＣ３９细胞系中ｐ５３无表达。重组体腺病毒能介导外源基     

腺病毒介导多基因对胆管癌细胞凋亡的诱导和肝细胞毒性损害

目的 研究腺病毒介导的多基因（ＧＭ－ＣＳＦ、Ｂ７－１、ｐ５３、ＩＬ－２）对胆管癌细胞系ＱＢＣ９３９凋亡的诱导作用和对正常肝细胞的作用。方法 应用ＴＵＮＥＬ细胞凋亡检查法和光镜观察，分析同时含ＧＭ－ＣＳＦ、Ｂ７－、ｐ５３、ＩＬ－２４种目的基因的重组腺病毒载体（Ａｄ－ｍｕｌｔｉｇｅｎｅｓ）对胆管癌细胞系ＱＢＣ９３９和肝细胞系Ｌ０２的作用以及对大鼠肝脏的毒性损害。结果 Ａｄ－ｍｕｌｔｉｇｅｎｅｓ与化疗药     

腺病毒介导多基因对胆管癌细胞凋亡的诱 导和肝细胞毒性损害

目的：研究腺病毒介导的多基因（ＧＭ－ＣＳＦ、Ｂ７－１、ｐ５３、ＩＬ－２）对胆管癌细胞系ＱＢＣ９３９ 凋亡的诱导作用和对正常肝细胞的作用。方法：应用ＴＵＮＥＬ细胞凋亡检测法和光镜观察,分析同时含ＧＭ－ＣＳＦ、Ｂ７－１、ｐ５３、ＩＬ－２ ４ 种目的基因的重组腺病毒载体（Ａｄ－ｍ ｕｌｔｉｇｅｎｅｓ）对胆管癌细胞系ＱＢＣ９３９ 和肝细胞系Ｌ０２的作用以及对大鼠肝脏的毒性损害。结果：Ａｄ－ｍｕｌｔｉｇｅｎｅｓ与化疗药物顺铂协同,能诱导３０％ 左右的ＱＢＣ９３９发生凋亡,并对肝细胞系Ｌ０２ 和大鼠肝细胞无明显毒性损害。结论：Ａｄ－ｍ ｕｌｔｉｇｅｎｅｓ能诱导胆管癌细胞ＱＢＣ９３９ 发生凋亡,且与化疗药物顺铂具有协同增强作用。初步分析对人肝细胞及大鼠肝脏无明显毒性损害,具有一定的临床应用前景。     

腺病毒介导的p16和顺铂的联合应用对胆管癌细胞系QBC939裸鼠皮下移植瘤模型的治疗实验

目的 研究ｐ１６基因和顺铂联合应用对细胞系ＱＢＣ９３９裸鼠皮下移植瘤模型的治疗作用。方法 将重组体腺病毒ｐ１６（Ａｄ－ｐ１６）和顺铂联合作用于胆管癌细胞系ＱＢＣ９３９裸鼠皮下移植瘤,观察和分析其对肿瘤的生长抑制作用。结果 用Ａｄ－ＬａｃＺ进行重组体腺病毒转导效率的检测,发现当感染强度在１００ＭＯＩ（Ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ ｏｆ ｉｎｆｅｔｉｏｎ）以上时,Ａｄ－ｐ１６可使９０．０％以上的培养的人胆     

腺病毒介导多基因在胆管癌细胞中的表达

研究腺病毒介导的多基因（ＧＭ－ＣＳＦ,Ｂ７－１,ｐ５３、ＩＬ－２）在胆管癌细胞系ＱＢＣ９３９中的表达及对其生长的影响。方法：构建同时含ＧＭ－ＣＳＦ、Ｂ７－１、ｐ５３、ＩＬ－２ ４种目的基因的重组腺病毒载体Ａｄ－ｍｕｌｔｉｇｅｎｅｓ,应用流式细胞仪、ＥＬＩＳＡ、免疫组化等方法。     

逆转录病毒介导IFN-γ基因对胆管癌细胞株的影响

目的：研究人ＩＦＮ－γ基因对胆管癌细胞株免疫原性的影响。方法：构建携带人ＩＦＮ－γ ｃＤＮＡ的逆转录病毒载体ｐＺＩＰ－ＩＦＮ－γ,导入人胆管癌细胞系ＱＢＣ９３９,运用Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ法分析ＭＨＣ Ｉ类分子的表达,体外混合淋巴细胞、肿瘤细胞培养（ＭＬＴＲ）和淋巴细胞杀伤试验研究导入ＩＦＮ－γ基因的ＱＢＣ９３９细胞免疫原性的变化。结果：Ｇ４１８阳性ＱＢＣ９３９－ＩＦＮ－γ细胞分泌ＩＦＮ－γ活性     

部分肿瘤抑制基因在新建骨肉瘤细胞系SOSP-9607中的表达及意义

目的：探讨骨肉瘤细胞系ＳＯＳＰ－９６０７的发生发展与部分肿瘤抑制基因及早期生长反应基因表达的关系。方法：采用原位杂交及免疫组织化学ＳＡＢＣ染色方法检测肿瘤抑制基因p５３,ｐ１６,Ｒｂ及早期生长反应基因ｅｇｒ－１在ＳＯＳＰ－９６０７细胞中的表达;用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测肿瘤抑制基因ＤＣＣ在ＳＯＳＰ－９６０７细胞中是否缺失。结果：ＳＯＳＰ－９６０７细胞中ｐ１６,Ｒｂ基因表达未见异常改变,未检测到突变型Ｐ     

胞嘧啶脱氨酸基因治疗人胰腺癌的实验研究

探讨腺病毒介导的大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因用于人胰腺癌基因疗法的可行性。方法将含癌胚抗原启动子的重组腺病毒感染人胰腺癌ＳＷ１９９０细胞和Ｃａｐａｎ－２细胞以及人宫颈癌Ｈｅｌａ细胞,用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ＣＤ基因在细胞中的表达,以ＭＴＴ法比较细胞对５－氟胞嘧（５－ＦＣ）的敏感性差异。建立胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,观察ＣＤ基因的原位治疗效应及安全性。结果腺病毒介     

尿激酶型纤维蛋白溶酶原激活物在胆管癌浸润过程中的作用

探讨胆管癌浸润和转移机制及尿激酶型纤维蛋白溶酶元激活物（ｕ－ＰＡ）在胆管癌浸润过程中的作用。方法利用羊膜浸润培养系统，观察胆管癌细胞系ＱＢＣ９３９分泌ｕ－ＰＡ和体外浸润能力。结果ＱＢＣ９３９细胞能够分泌ｕ－ＰＡ，并且具有体外浸润羊膜的能力。ｕ－ＰＡ抑制剂反－对氨基环己酸（ＴＡ）及纤维蛋白溶酶抑制剂６－氨基己酸（６－ＡＣＡ）能够降低ＱＢＣ９３９细胞ｕ－ＰＡ活性并显著抑制其体外浸润能力。结论ｕ－ＰＡ是参与胆管癌浸润过程的重要蛋白酶之一，同时提示，抑制ｕ－ＰＡ或其作用产物纤维蛋白溶酶在肿瘤治疗中可能具有良好的应用前景。     

腺病毒介导的野生型p53基因表达对入胰腺癌细胞生长的影响

目的探讨恢复野生型ｐ５３（ｗｔｐ５３）基因表达对胰腺癌细胞生长的影响。方法构建一个Ｅ１区缺失但能表达ｗｔｐ５３基因的５型腺病毒载体Ａｄ５ＣＭＶｗｔｐ５３，该载体含有人ＣＭＶ启动子、人野生型ｐ５３基因和ＳＶ４０ｐｏｌｙＡ信号。载体经腺病毒包装细胞２９３细胞包装、扩增后，转染人胰腺癌ＰＣ－２细胞。ＰＣＲ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析证实，转染的细胞有外源ｗｔｐ５３基因的表达。结果与对照组相比，转染有Ａｄ５ＣＭＶｗｔｐ５３的ＰＣ－２细胞生长速度减慢、增殖率降低，软琼脂集落形成能力丧失。结论以腺病毒为载体恢复野生型ｐ５３在胰腺癌细胞的表达，可抑制癌细胞的生长和部分逆转其恶性表型。     

腺病毒介导的p16对胆管癌细胞的生长抑制作用

目的 研究p16基因对胆管癌细胞的作用。方法 将重组体腺病毒p16转移到人胆管癌细胞QBC939,对p16基因的表达、细胞的生长抑制及机制进行分析。结果 用Ad-LacZ进行重组体腺病毒转导效率的检测,发现当MOI为100以上时,重组体朱病毒可使90%以上的培养的人胆管癌QBC939细胞被转导,用RT-PCR方法检测,在胆管癌QTBC939细胞系中p16呈低表达,重组体腺病毒能介导外源基因p16在胆管癌QBC939细胞系中高效表达,重组体朱病毒介导的p16在QBC939细胞中表达,能抑制QBC939细胞的生长和集落形成。流式细胞计数和细胞DNALadder,证实p16能诱导QBC939细胞发生凋亡并导致其发生G1期阻滞。结论 p16基因通过诱导肿瘤细胞凋亡及G1期阻滞在肿瘤的基因治疗方面发挥作用。     

p16和p53基因及顺铂联用对胆管癌细胞系QBC939的生长抑制作用

目的：探索p16基因和p53基因及p16基因和顺铂（CDDP）联合应用对体内外胆管癌细胞系生长的抑制作用。方法：将重组体腺病毒p16（Ad-p16）和Ad-p53及Ad-p16和CDDP联合作用于人胆管癌细胞系QBC939，观察和分析其对体内外胆管癌细胞生长抑制作用及其机制，结果：Ad-p16在QBC939细胞中表达能抑制QBC939细胞的生长，与p53、CDDP联合应用能明显抑制QBC939细胞的生长，p16和p53基因诱导癌细胞发生G1期阻滞和细胞凋亡，CDDP能诱导癌细胞发生G2期阻滞和细胞凋亡；裸鼠皮下移植瘤模型瘤体内注射Ad-p16及腹腔内注射CDDP均能抑制QBC939肿瘤的生长，两者联合应用具有协同作用。结论：p16基因和p53基因及CDDP联合应用具有协同作用。     

去甲斑蝥素和阿霉素对人胆管癌细胞QBC939的联合作用

目的研究去甲斑蝥素与阿霉素对人胆管癌细胞OBC939体外作用。方法以体外培养的人胆管癌细胞OBC939为实验模型，分别或联合应用不同浓度的去甲斑蝥素与阿霉素作用于癌细胞，光学显微镜下观察药物处理后癌细胞的细胞形态学变化，四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法分析药物对癌细胞生长的抑制作用，流式细胞技术测定药物作用后癌细胞的细胞周期分布和凋亡率。结果去甲斑蝥素和阿霉素单独作用于癌细胞时都有增殖抑制作用，且呈剂量依赖性（P〈0．05）。两药合用对癌细胞的细胞毒作用优于两者的单纯相加。去甲斑蝥素和阿霉素两药联合使用可以使癌细胞阻滞于G0／C1期（P〈0．05），凋亡率明显升高（P〈0．05）。结论去甲斑蝥素、阿霉素无论单用或合用对癌细胞的增殖均有抑制作用，均能够明显改变癌细胞的细胞周期分布并诱导癌细胞出现凋亡，但二者合用有协同作用。     

PPAR-γ在肝门部胆管癌中的表达及其配体激活后对胆管癌细胞的作用

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR-γ）在人类肝门部胆管癌细胞系QBC939中的表达及经其配体吡格列酮（pioglitazone）激活后对QBC939细胞生长的影响。方法 培养QBC939细胞并分别加入不同浓度的吡格列酮进行干预培养，通过RT—PCR检测QBC939中PPAR—γmRNA的表达；光镜下细胞计数了解吡格列酮干预后对细胞增殖的作用；流式细胞技术了解吡格列酮对QBC939细胞周期及凋亡的影响。结果 QBC939中有PPAR—γmRNA表达；PPAR-γ经其配体激活后明显抑制细胞增殖，使细胞周期出现G2／M期停滞，并诱导细胞凋亡。结论 PPAR-γ经其配体激活后通过抑制细胞增殖及促使细胞周期G2／M期停滞而抑制细胞的生长，且诱导细胞凋亡的发生。因此PPAR-γ有可能成为胆管癌治疗的新的分子靶点。     

DHA和NS-398联合对人胆管癌QBC939细胞的抑制作用

目的 研究二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)和选择性环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂NS-398联合对人胆管癌细胞QBC939的抑制作用。 方法 体外培养人胆管癌QBC939细胞株,分别设立DHA浓度组、NS-398浓度组、二者联合组和空白对照组,即将0、15、30、45、60、75 μg/ml浓度的DHA和0、25、50、100、150、200 μmol/L浓度的NS-398分别联合作用于胆管癌QBC939细胞;应用CCK8法检测其分别对QBC939细胞生长的相对抑制率;采用流式细胞术检测QBC939细胞的凋亡情况;应用Transwell小室检测QBC939细胞的体外侵袭情况。 结果 DHA和NS-398在体外均能够单独抑制QBC939细胞生长,45 μg/ml的DHA联合100 μmol/L的NS-398经24 h作用后,细胞生长抑制率达到90%,实验组与DHA浓度组、NS-398浓度组和空白组差异均有统计学意义(P<0.05),继续增加2种药物浓度,细胞生长抑制率变化不明显;流式细胞术显示DHA和NS-398联合能明显促进QBC939细胞早期凋亡;15 μg/ml的DHA联合50 μmol/L的NS-398经24 h作用后,对胆管癌细胞生长无明显抑制作用,但QBC939的体外侵袭能力明显降低,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。 结论 DHA和NS-398联合能明显抑制胆管癌QBC939细胞生长,促进胆管癌细胞早期凋亡,抑制胆管癌细胞的侵袭,二者联合对胆管癌QBC939细胞生长的抑制作用可能是通过促进细胞早期凋亡实现的。