siRNA沉默Pokemon基因抑制人非霍奇金淋巴瘤Raji细胞的增殖

目的采用siRNA干扰技术沉默人非霍奇金淋巴瘤Raji细胞中Pokemon基因,观察Raji细胞增殖活性的变化,并探讨其可能的分子机制。方法构建靶向Pokemon基因的siRNA重组慢病毒载体并转染Raji细胞。采用实时定量PCR法和Western blotting法检测Raji细胞Pokemon基因的沉默效果,在Raji细胞中沉默Pokemon基因的表达后采用实时定量PCR法和Western blotting法检测bcl-6和突变型p53表达水平的变化;采用流式细胞术检测Pokemon基因沉默后Raji细胞凋亡的情况。结果利用Pokemon靶向siRNA重组慢病毒载体感染Raji细胞有效沉默Raji细胞Pokemon基因表达(P<0.05)。沉默Pokemon基因后,bcl-6和突变型p53基因和蛋白表达均显著降低(P<0.05),细胞凋亡率增高(P<0.05)。结论 siRNA沉默Pokemon基因有效降低了人非霍奇金淋巴瘤Raji细胞的bcl-6和突变型p53基因和蛋白表达,促进细胞凋亡,抑制其增殖。Pokemon基因有望成为非霍奇金淋巴瘤治疗的新靶点。     

和厚朴酚对人宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨和厚朴酚抑制人宫颈癌Hela细胞增殖及诱导其凋亡的作用。方法利用MTT检测和厚朴酚在不同浓度和时间下对Hela细胞增殖的影响;用流式细胞术、Hoechst 33258荧光染色和DNA ladder检测和厚朴酚作用下Hela细胞的凋亡。结果MTT结果显示和厚朴酚可明显抑制Hela细胞的增殖,且抑制率存在剂量和时间依赖性;流式结果表明10μg/mL和20μg/mL和厚朴酚作用细胞24h后,凋亡细胞的比例分别为22.5%和62.2%,而对照组为8.7%;和厚朴酚处理过的Hela细胞,经Hoechst33258染色后细胞、细胞核出现明显的凋亡形态学变化,在DNA琼脂糖凝胶上可见特征性的梯状条带。结论和厚朴酚具有抑制Hela细胞增殖和诱导凋亡的作用。     

厚朴酚诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展

厚朴酚是从药用厚朴Magnolia officinalis Rehd.et Wils.或凹叶厚朴Magnolia officinalis Rehd.et Wils.var.biloba Rehd.et Wils.的皮、根和茎中提取出的烯丙基连苯二酚类化合物,分子式C18H18O2,分子量266.32,与和厚朴酚互为同分异构体。它在东亚地区通常用于治疗急性疼痛、咳嗽、焦虑和胃肠功能紊乱等。     

非霍奇金淋巴瘤组织中bcl-6及细胞凋亡检测

目的:检测非霍奇金淋巴瘤组织中bcl-6的表达和肿瘤细胞凋亡情况.方法:应用免疫组化SP法观察50例非霍奇金淋巴瘤(B细胞淋巴瘤30例,T细胞淋巴瘤20例)和30例淋巴结炎组织中bcl-6的表达水平,并应用TUNEL法检测细胞凋亡.结果:淋巴结炎、B细胞淋巴瘤和T细胞淋巴瘤组织中bcl-6阳性表达率分别为40.0%、46.7%、35.0%,3组差异无统计学意义(P＞0.05),但B细胞淋巴瘤组织中bcl-6强表达率达36.7%,高于T细胞淋巴瘤的20.0%和淋巴结炎组织的6.7%(P＜0.05).bcl-6阳性表达的非霍奇金淋巴瘤组织细胞凋亡指数低于阴性表达组(P＜0.05).结论:B细胞淋巴瘤组织中bcl-6过表达可能与淋巴瘤的发生发展有关.     

丁酸钠选择性诱导子宫颈癌细胞凋亡及其机制

目的 研究丁酸钠诱导子宫颈癌细胞株HeLa和原代培养的人胚肺成纤维细胞凋亡情况,建立丁酸钠选择性诱导子宫颈癌细胞凋亡模型,并探讨其诱导凋亡机制。方法 倒置相差显微镜下观察细胞形态改变;MTT法检测药效动力学特征;流式细胞仪检测药物作用前后细胞凋亡情况;琼脂糖凝胶电泳观察凋亡特征性梯状条带,RT-PCR检测凋亡相关基因Bax和Bcl-2转录水平。结果 丁酸钠抑制细胞生长呈时效和量效关系,其对HeLa细胞的生长抑制作用较对人胚肺成纤维细胞的作用明显;亚G1峰和AnnexinV／PI、DNA Ladder结果显示,丁酸钠作用后HeLa细胞72h后出现的凋亡率显著高于人胚肺成纤维细胞;RT-PCR结果显示丁酸钠作用前后HeLa细胞中凋亡相关基因：Bax和Bcl-2表达水平无明显改变。结论 一定浓度的丁酸钠可以选择性诱导子宫颈癌细胞株HeLa凋亡,而对正常人二倍体细胞毒性较小,并且这种凋亡诱导作用并非通过调控：Bax和Bcl-2的转录水平而实现。     

和厚朴酚对人黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨和厚朴酚在体外对人黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响。方法应用MTT法检测不同浓度的和厚朴酚对A375细胞增殖的影响,相差显微镜观察和厚朴酚作用后A375细胞的形态学改变,流式细胞仪测定和厚朴酚对A375细胞凋亡率的影响。结果和厚朴酚可明显抑制A375细胞增殖,抑制作用呈明显的浓度和时间依赖性。相差显微镜下可见典型凋亡细胞形态学改变。和厚朴酚可使A375细胞凋亡率明显升高。结论和厚朴酚可抑制A375细胞增殖,并诱导细胞凋亡。     

和厚朴酚对人肺小细胞癌N446细胞增殖与凋亡的影响

目的在体外培养条件下,研究不同浓度的和厚朴酚对人肺小细胞癌N446细胞的影响,探讨和厚朴酚对增殖与凋亡的作用,评价和厚朴酚的抗肿瘤作用。方法应用MTI＇法检测不同浓度的和厚朴酚对N446细胞增殖的影响,用流式细胞仪测定和厚朴酚对N446细胞凋亡率的影响。结果各种浓度的和厚朴酚均可抑制N446细胞增殖,且抑制作用随浓度的增加和时间的延长呈明显增强趋势。3种不同浓度的和厚朴酚（5、10、20μg/ml）培养48h均可使N446细胞凋亡率升高,与对照组比较有统计学意义。结论和厚朴酚可抑制N446细胞的增殖,并诱导N446细胞的细胞凋亡。     

B细胞非霍奇金淋巴瘤Bcl-2与Bcl-10基因表达及临床意义

目的:研究癌基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)以及B细胞淋巴瘤/白血病-10(B cell lymphoma/leukemia-10,Bcl-10)在B-NHL组织及外周血中mRNA的表达水平,评价Bel-2和Bcl-10 mRNA的检测作为协助病理诊断B-...     

和厚朴酚对人白血病细胞系U937细胞增殖和凋亡的影响

 【目的】 探讨和厚朴酚(HNK)对白血病细胞系U937细胞增殖和凋亡的影响&#65377;【方法】 将U937细胞和正常外周血单核细胞分别与HNK共培养,Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡形态,用噻唑蓝比色法(MTT)检测HNK对细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测凋亡;罗丹明123检测线粒体膜电位;Caspase3/7活性检测试剂盒检测Caspase3/7活性;荧光定量PCR(FQ-PCR)检测Caspase-3&#65380;Caspase-7 mRNA水平变化&#65377;【结果】 HNK对U937的体外增殖有显著抑制作用,48 h半数抑制浓度(IC50)为11.8 μg/mL,而对正常外周血单核细胞的IC50为40.3 μg/mL,Annexin V/PI双标染色显示,细胞凋亡与和厚朴酚呈浓度和时间依赖相关&#65377;HNK明显降低U937细胞线粒体膜电位,增加Caspase3/7活性及mRNA表达水平,但对正常外周血单核细胞的增殖抑制和凋亡作用不明显&#65377;【结论】 HNK可能通过激活caspase-3/7抑制U937细胞增殖&#65380;诱导U937细胞凋亡&#65377;     

厚朴及其炮制品中厚朴酚与和厚朴酚含量测定

采用薄层扫描法测定生品、炒黄、炒焦、姜炙厚朴及市售商品厚朴、姜炙厚朴中厚朴酚、和厚朴酚的含量，结果表明，厚朴炮制后，该2成分含量均有下降，炒焦降低3O％以上，炒黄、姜炙降低约20％。市售商品厚朴含量差异较大。     

Expression of survivin in Human Non-Hodgkin Lymphoma and Its Correlation with Proliferation and Angiogenesis

In order to investigate the expression change of survivin in non-Hodgkin lymphoma (NHL) and its possible effects on NHL development, the expression of survivin, Ki-67, caspase3 and FVIIIRAg in reactive lymphoid hyperplasia (RH) and NHL was detected by immunohistochemical assay, and apoptosis index (AI) in RH and NHL by TUNEL analysis. The results showed that the expression of survivin is significantly higher in aggressive NHL than in indolent NHL (P<0.01), while there was no statistically significant difference between RH and indolent NHL (P>0.05). The expression of survivin had a significantly positive correlation with the expression of Ki-67 and FVIIIRAg (r=0.6495, 0.6635, respectively, both P<0.01), and a negative correlation with the expression of cas-pase3 and AI (r=-0.5820, -0.6013, respectively, P<0.01). It was suggested that survivin may contribute to the progression of NHL by playing an important role in promoting cell proliferation, inhibiting cell apoptosis and enlisting angiogenesis. Survivin expression is closely related to malignant grade and therefore may be considered an important prognostic factor of NHL.     

苦参碱诱导A549细胞凋亡的机制研究

目的:观察苦参碱抑制人肺腺癌细胞A549的增殖作用,并探讨其分子机制.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、电子显微镜、细胞周期分析法检测A549细胞凋亡;采用流式细胞术(FCM)测定细胞Bcl-2, Bax及caspase-3蛋白表达水平.结果:苦参碱对A549细胞的增殖具有明显的抑制作用,并呈现剂量和时间依赖关系;电镜观察呈现典型的凋亡形态改变;细胞周期分析显示细胞增殖发生S/G2期阻滞;苦参碱能显著降低Bcl-2蛋白表达(P＜0.01);而显著升高Bax蛋白表达水平及caspase-3活性.结论:苦参碱可显著抑制A549细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与下调Bcl-2表达水平改变线粒体膜通透性有关.     

黄芩苷对人结肠癌SW480细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的:探讨黄芩苷对人结肠癌SW480细胞凋亡的影响,并阐明其作用机制。 方法:SW480细胞分为空白对照组,25、50和100 μmol·L^-1黄芩苷组,采用CCK-8法检测SW480细胞增殖活性,Annexin Ⅴ-FITC和DAPI染色观察SW480细胞凋亡的形态学表现,Western blotting法检测凋亡蛋白Bcl-2、caspase 3和caspase 9表达水平。 结果:与空白对照组比较,50和100 μmol·L^-1黄芩苷组SW480细胞增殖活性在24、48和72 h均明显降低( P<0.01),25 μmol·L^-1黄芩苷组SW480细胞增殖活性在48和72 h明显降低( P<0.01)。50 μmol·L^-1黄芩苷作用48 h时SW480细胞处于早期或晚期凋亡状态,细胞核呈浓缩和破碎状态。与空白对照组比较,25、50和100 μmol·L^-1黄芩苷组caspase 3和caspase 9蛋白表达水平明显升高 (P<0.05或P<0.01),Bcl 2蛋白表达水平明显降低 (P<0.05或P<0.01)。结论:黄芩苷可以诱导SW480细胞凋亡,其机制可能与线粒体途经有关。     

粉防己碱逆转膀胱癌BIU-87/ADM的凋亡抗性及可能机制的研究

目的 探讨粉防己碱(Tet)逆转人膀胱癌耐阿霉素细胞株BIU-87/ADM的凋亡抗性及其可能机制.方法 将膀胱癌耐药株和敏感株分为对照组、粉防己碱组、阿霉素组和阿霉素联合粉防己碱组(n=6),其中阿霉素药物作用浓度为1.5 μg/ml,粉防己碱为1 μg/ml.应用AO/EB染色结合荧光显微镜技术检测细胞凋亡,JC-1...     

越橘提取物对宫颈癌Hela细胞凋亡及其作用机制的研究

目的:越橘提取物具有抑制肿瘤生长的作用,但其对宫颈癌生长的影响鲜有报道.探讨越橘提取物对Hela细胞Bcl-2、Bax、Fas及FasL表达的影响. 方法:用浓度为0、0.025、0.25、2.5和25μg/ml的越橘提取物处理Hela细胞24 h后,采用Hoeehst33342/PI染色、DNA ladder法和Annexin V/PI双染观察越橘提取物对Hela细胞凋亡的诱导作用,并采用Western blot法检测Bcl-2、Bax、Fas及FasL蛋白表达. 结果:0.25～25 μg/ml的越橘提取物处理组细胞呈现明显的凋亡形态学改变和凋亡特异性条带,细胞凋亡率依次为(4.13±0.63)%、(5.41±0.77)%、(8.74±1.27)%和(12.05±1.03)%.同时Western blot结果显示越橘提取物处理组细胞中bax、Fas及FasL蛋白表达增加,而Bcl-2蛋白表达减少. 结论:越橘提取物通过调节一些与凋亡相关蛋白的表达诱导Hela细胞的凋亡.     

c-Jun氨基末端激酶活化在三丁基锡诱导凋亡中的作用及机制

目的：研究c-jun氨基末端激酶（JNK）参与三丁基锡（Tributyltin, TBT）诱导正常人羊膜细胞FL凋亡的分子机制。方法：FL细胞经不同浓度TBT染毒1h后,PI/Annexin V双染色法检测FL细胞凋亡率。Western blot检测FL细胞JNK的磷酸化水平,Bax定位、Bcl-2的磷酸化水平及总Bax和Bcl-2表达水平。结果：与对照组相比,4μmol/L和6μmol/L的TBT染毒剂量组细胞凋亡率明显升高,2μmol/L～6μmol/L剂量组JNK磷酸化水平升高,差异有统计学意义（P〈0.01）。JNK特异抑制剂SP600125明显降低TBT诱导的FL细胞凋亡率,而JNK特异抑制剂SP600125对Bax定位、Bcl-2的磷酸化水平及总的Bax和Bcl-2表达量无影响。结论：JNK的活化是TBT诱导FL细胞凋亡的重要因素,但JNK介导凋亡的途径并非通过调控凋亡相关因子Bax和Bcl-2。     

塞来昔布与阿霉素对Raji细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的：观察塞来昔布(celecoxib)单用及联合阿霉素(adriamycin, ADM)对Raji细胞增殖和凋亡的影响。方法：MTT法测塞来昔布单用或联合阿霉素干预后Raji细胞的增殖率;流式细胞技术检测细胞凋亡率;RT-PCR检测caspase-9 mRNA变化;免疫组织化学法检测caspase-9蛋白的表达。结果：20~100 μmol/L塞来昔布干预Raji细胞后,随药物浓度增高细胞增殖率减低,凋亡率增高(P＜0.05)。联合阿霉素干预后细胞增殖率减低,凋亡率增高,与塞来昔布单用比差异有统计学意义(P＜0.05);且伴随细胞caspase-9 mRNA和蛋白的表达增高。结论：塞来昔布可抑制Raji细胞增殖,呈剂量和时间依赖;可诱导Raji细胞凋亡,伴有caspase-9的激活;塞来昔布联合小剂量阿霉素后以上作用增强。     

丁烯酸内酯诱导软骨细胞凋亡及其机制的研究

目的 研究丁烯酸内酯(BUT)致培养软骨细胞的凋亡损伤,探讨软骨细胞凋亡的机制及补硒对软骨细胞凋亡的保护作用.方法 体外单层及立体培养胎儿的软骨细胞.BUT毒素浓度分为0.1、1.0和5.0 μg/ml.脱氧核糖核酸末端转移酶介导的脱氧核糖核酸缺口标记技术和Annexin V染色定性和定量检测软骨细胞凋亡.用多克隆抗体免疫组化检测细胞凋亡相关调控因子Bcl-2、Bax在培养软骨细胞中的表达.结果 BUT毒素可引起体外培养软骨细胞凋亡,且与BUT毒素浓度有一定关系.在0～1.0 mg/ml之间时,BUT毒素浓度越大,凋亡细胞数量越多;各毒素组培养软骨细胞Bcl-2、Bax的表达显著增高(P＜0.05);BUT毒素加硒组软骨细胞凋亡较毒素组明显减少(P＜0.05),而且凋亡调控因子Bcl-2、Bax表达阳性率较毒素组降低(P＜0.05).结论 BUT毒素可以引起体外培养的软骨细胞凋亡,且与BUT毒素浓度有一定关系,各毒素组Bcl-2、Bax蛋白表达增多.补硒对BUT毒素所致软骨细胞凋亡有一定的保护作用.     

胰岛素样生长因子-1对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及Bcl-2,Bax蛋白表达的影响

目的研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及Bcl-2,Bax蛋白表达的影响,探讨IGF-1对脑缺血再灌注损伤的保护作用机制.方法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型.30只Wistar雄性大鼠被随机分为假手术组、缺血组及IGF-1治疗组.于缺血10min后经尾静脉给予IGF-1 10μg,应用TTC染色观察梗死灶体积,应用免疫组化染色和TUNEL法检测Bcl-2,Bax蛋白表达及神经凋亡细胞.结果与缺血组比较,IGF-1治疗组梗死体积明显减少(P＜0.01),凋亡细胞数明显减少(P＜0.01),Bcl-2蛋白表达明显升高(P＜0.01),Bax蛋白表达明显降低(P＜0.01).结论IGF-1通过增加Bcl-2蛋白表达,减少Bax蛋白表达,减少神经细胞凋亡,对脑缺血再灌注损伤起保护作用.