细胞端粒酶活性的定性及定量分析

对Ｋｉｍ等的端粒重复序列ＰＣＲ扩增法加以改进，用ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ染色代替ＥＢ染色，建立了细胞端粒酶活性的ＰＣＲ－ＴＲＡＰ定性分析法；同时，用γ－３２Ｐ－ＡＴＰ标记ＴＳ引物，加入内对照ＴＳＫ１，建立了ＰＣＲ－ＴＲＡＰ定量分析法。利用上述方法，对１２株人肿瘤或非肿瘤细胞株进行端粒酶活性分析，结果发现，所有被检细胞株均呈端粒酶阳性，但其活性水平在不同细胞株间有较大差异（２３～６５２ＴＰＧｕｎｉｔｓ）。作者认为，细胞端粒酶活性ＰＣＲ－ＴＲＡＰ分析法，特别是定量分析法的建立，为我们真实准确地了解细胞端粒酶活性水平提供了可能，亦为下一步通过抑制端粒酶活性诱迫肿瘤细胞进入程序性死亡的肿瘤基因治疗研究奠定了基础。     

用TRAP PCR ELISA及TRAP PCR PAGE测定鼻咽癌端粒酶活性的比较

目的：比较ＴＲＡＰ ＰＣＲ ＥＬＩＳＡ及ＴＲＡＰ ＰＣＲ ＰＡＧＥ检测鼻咽癌端 酶的活性。方法：分别采用ＴＲＡＰ ＰＣＲ ＥＬＩＳＡ及ＴＲＡＰ ＰＣＲ ＰＡＧＥ检测了３８例鼻咽癌（ＮＰＣ）、１５例癌旁组织、１９例慢性鼻咽炎和鼻咽癌ＨＮＥ１细胞株、其它２种癌细胞株及３种正常细胞的端粒酶表达,并探讨了在不同数量的ＨＮＥ１细胞中端粒酶表达的灵敏度及ＨＮＥ１细胞株、５例ＮＰＣ活检组织经热灭活后端粒酶检测的     

蠲哮汤对哮喘患者血栓素B2／6—酮—前列腺素F1α,超氧化物歧化…

报告以ＴＸＢ２／６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α，ＲＢＣ－ＳＯＤ为实验指标，探究蠲哮汤治疗轻，中度支气管哮喘发作的机理。在蠲哮喘汤药效的同时哮喘患者ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α，ＲＢＣ－ＳＰＤ较治疗前均下降，缓解组ＴＸＢ２／６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α较健康组升高，ＴＲＢＣ－ＳＯＤ则下降，表明蠲哮汤对轻，中度哮喘发作可能通过降低ＴＸＢ２／６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α值，增加了ＲＢＣ－ＳＯＤ调节值起治疗作用。     

单纯疱疹病毒TK基因介导GCV治疗人RB肿瘤的实验研究

为探讨ＨＳＶ－ＴＫ基因介导的ＧＣＶ系统对人视网膜母细胞瘤（ＲＢ）基因治疗的有效性,利用电穿孔技术把重组逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ－ＴＫ导入包装细胞ＰＡ３１７,筛选出逆转录病毒产生细胞ＰＡ３１７／ＴＫ,收获病毒。体外实验：用逆转录病毒感染ＲＢ细胞,筛选出含ＴＫ基因的ＲＢ细胞（ＲＢ／ＴＫ）,用ＧＣＶ分别处理ＲＢ,ＲＢ／ＴＫ及不同比例的混合细胞。体内实验：建立人ＲＢ裸鼠原位异种移植模型,瘤内注射病毒液后再     

甲状腺乳头状癌端粒酶活性的研究

目的 通过检测甲状腺乳头状癌中的端粒酶活性,探讨其在甲状腺乳头状癌中潜在的临床价值。方法 采用ＴＲＡＰ－ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ定量及ＴＲＡＰ－ＰＣＲ银染定性法,对４９份甲状腺组织进行端粒酶活性的分析。结果 ２３例甲状腺乳头状癌组织中端粒酶阳性率为８６．９％,其活性水平与组织学分级无关,病灶越大,年龄越大,病期越晚,端粒酶活性水平越高,淋巴结转移者高于无转移者。１０例甲状腺正常组织端粒酶皆为阴性。８例甲     

HSV-TK基因逆转录病毒重组体的构建和鉴定

利用逆转录病毒载体ｐＬＮＳＸ构建了带ＨＳＶＴＫ基因的逆转录病毒重组体ｐＬＮＳＴＫ，用磷酸钙沉淀法转染ＰＡ３１７包装细胞，经Ｇ４１８筛选抗性克隆，建立了产生重组病毒的载体产生细胞系ＰＡ３１７／ＴＫ，用ＮＩＨ３Ｔ３细胞测定病毒（ＣＦＵ）滴度为３×１０８Ｌ－１。提取ＰＡ３１７／ＴＫ细胞的ＤＮＡ和细胞上清液的ＲＮＡ，在特异性引物引导下，分别用ＰＣＲ和ＲＴＰＣＲ检测证实ＰＡ３１７／ＴＫ细胞整合了ＨＳＶＴＫ基因并产生重组病毒，为ＨＳＶＴＫ基因治疗恶性肿瘤的实验研究打下了基础。     

逆转录病毒介导癌基因疗法体外安全实验

从逆转录病毒ｐＬＸＳＮ与人ＩＬ－２ｃＤＮＡ基因进行重组，包括ＰＡ３１７细胞，建立逆转录病毒包装体系细胞ＰＡ３１７／ｐＬＩＬ－２ＳＮ。用病毒上清液转导人淋巴细胞（ＴＩＬ，ＰＢＬ）和３株人腺癌细胞株（ＳＰＣ－Ａ１，ＭＫＮ－ＨｅｐＧ２）对转ＩＬ－２基因的淋巴细胞（ＴＩＬ／ＩＬ－２，ＰＢＬ／ＩＬ－２）和转ＩＬ－２基因的人癌细胞（ＳＰＣ－Ａ２／ＩＬ－２，ＭＫＮ－４５／ＩＬ－２，ＨｅｐＧ２／ＩＬ２）进行体外安     

日本血吸虫谷胱甘肽转移酶基因在真核表达载体中的亚克隆

目的 将日本血吸虫谷胱甘肽转移酶（ＧＳＴ）基因片段克隆到真核表达载体ＰＢＫＣＭＶＫ ,以便以进行酸疫苗的研究。方法 特定核苷酸引物的设计和合成,ＴＲＩＺＯＬ试剂以日本血吸虫成虫ＲＮＡ〈ＲＴ－ＰＣＲ法扩增ＧＳＴ基因编码序列,将扩增产物连接ＰＧＥＭ－Ｔ克降体,再亚克隆到真核表达载体ＰＢＫＣＭＶ中。结果 ＲＴ－ＰＣＲ法特异性扩增出ＳｊＧＳＴ编码基因片段。其大小约为６７０ｂｐ,经双酶切、ＰＣＲ鉴定表明所构     

PCR—SSCP应用于HLA—DRB基因分型重现性的影响因素

本文探讨了ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法应用于ＨＬＡ－ＤＲＢ基因分型重现性的主要影响因素。结果表明，ＰＣＲ－ＳＳＣＰ应用于ＨＬＡ－ＤＲＢ基因分型中受到的影响因素较多，如电泳温度、样品预处理，聚胶时间、ＴＢＥ缓冲液贮存时间及银染色过程等。     

端粒酶活性及其hTR表达在诱导大肠癌分化细胞中的变化

目的 观察全反式维甲酸（ＡＴＲＡ０和１，２５－二羟维生素Ｄ３（ＶＤ３）大肠癌细胞株诱导分化过程中粒酶活性的变化，并对其ＲＮＡ组分ｈＴＲ进行检测。方法 ＡＴＲＡ和ＶＤ３对大肠癌细胞进行诱导分化，在进行细胞活力测定，细胞增殖测定，流式细胞仪（ＦＣＭ）分析细胞周期及碱性磷酸酶比活性测定的时时，分别在诱导后第２天，第４天和第６天用ＴＲＡＰ法检测其端粒酶活性的变化，并同时用ＲＴ－ＰＣＲ的方法对端粒酶的ＲＮＡ