用流式细胞术检测人肿瘤组织细胞多药耐药基因表达产物P170

为研究检测人肿瘤组织细胞多药耐药基因表达产物，采用间接标记法，用鼠抗人Ｐ１７０单克隆抗体，二抗为ＦＩＴＣ标记兔抗鼠Ｉｇ，应用流式细胞仪检测了２９例新鲜实体肿瘤组织和一株多药耐药的Ｋ５６２细胞株。结果显示：１８例肿瘤细胞表达Ｐ１７０，其阳性率为６２．１％，１１例未检出表达，其阴性率为３７．９％；９９．９％Ｋ５６２细胞表达Ｐ１７０。在１８例Ｐ１７０阳性表达的样本中，有１６例阳性表达百分比低于３０％；只有２例高于３０％。提示大多数肿瘤组织细胞表达Ｐ１７０阳性率高，但表达Ｐ１７０肿瘤细胞表达百分比低。检测肿瘤组织的Ｐ１７０表达能为临床治疗提供一个可靠的参考指标。     

多药耐药P糖蛋白检测与急性白血病预后相关性研究

目的：探讨多药耐药（ＭＤＲ）Ｐ糖蛋白（Ｐ１７０）表达与急性白血病预后有关。方法：采用抗Ｐ１７０单克隆抗体ＪＳＢ－１及碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶免疫细胞化学技术检测８６例（１０４例次）急性白血病骨髓细胞Ｐ１７０表达。结果：Ｐ１７０阳性率难治组为７６．９％（１０／１３），复发组４０．９％（９／２２），初治组２７％（１０／３７），完全缓解组１８．８％（６／３２）。初治组Ｐ１７０阴性病例首次诱导完全缓解（ＣＲ     

反义核酸逆转人白血病多药耐药细胞株的耐药性

目的采用一段人工合成的互补于人ｍｄｒ１基因的反义硫代硫酸脱氧寡核苷酸（简称反义核酸）转染白血病多药耐药细胞株Ｋ５６２／ＡＤＭ，来逆转白血病细胞的多药耐药。方法ＭＴＴ法检测Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞对阿霉素的ＩＣ５０，流式细胞仪分析细胞内的柔红霉素含量，免疫细胞化学染色方法确定Ｐ１７０的表达水平，ＲＴ－ＰＣＲ检测ｍｄｒ１－ｍＲＮＡ的相对水平（ｍｄｒ１／β２－ＭＧ）。结果浓度为２μｍｏｌ的反义核酸使Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞对阿霉素的ＩＣ５０从处理前的２５．７２μｇ／ｍｌ降至处理后的６．９７μｇ／ｍｌ，相对逆转效率为７３．０１％。反义核酸亦使Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞内的柔红霉素含量增加，Ｐ１７０表达阳性率从处理前的９８．６％±１．０％降至处理后的１８．３％±０．７％，ｍｄｒ１／β２－ＭＧ下降了０．５，ｍｄｒ１－ｍＲＮＡ相对水平有所下降。结论反义核酸通过下调ｍｄｒ１基因，阻断Ｐ１７０的表达，从而降低Ｋ５６２／ＡＤＭ的耐药性。     

肺癌P170蛋白的检测及临床意义

应用免疫组化法，检测６４例化疗前的肺癌组织和３０例癌旁正常组织的多药耐药基因（ｍｄｒ１）表达产物Ｐ１７０蛋白。结果为Ｐ１７０的阳性率在腺癌中为８２．６％；在鳞癌中为５１．７％；在小细胞未分化癌中为１６．７％；在癌旁正常肺组织中为１３．３％。高分化的腺癌、鳞癌Ｐ１７０阳性率分别高于中、低分化的腺癌、鳞癌。提示：Ｐ１７０表达与肺癌的细胞类型、分化程度相关。Ｐ１７０阳性率与肺癌临床化疗敏感性相符。     

抗细胞毒药物细胞株P＿170糖蛋白的检测

抗细胞毒药物细胞株Ｐ＿１７０糖蛋白的检测黄晓军，张海帆，王申五北京医科大学血液病研究所王松霞Ｔａｋａｓｈｉ，ＴＳｕｒｕｏ体外实验表明，肿瘤耐药机理之一是由于肿瘤细胞株膜表面存在一分子量为１７０ＫＤ的糖蛋白（Ｐ１７０糖蛋白）高表达，此糖蛋白能将多种无交...     

K_（562）和L_（210）耐高三尖杉酯碱细胞系的建立及其耐药机制的初步研究

通过逐渐递增高三尖杉酯碱（ＨＨＴ）剂量的方法，分别克隆筛选出两株耐ＨＨＴ１６．７和１３．４倍的Ｋ５６２和Ｌ１２１０白血病细胞系。各命名为Ｋ５６２ＨＨＴ和Ｌ１２１０ＨＨＴ。二者对阿霉素、长春新碱、柔红霉索和马法兰等抗肿瘸药物均呈不同程度的交叉耐药。斑点杂交的结果表明二者的多药耐药基因（ＭＤＲ－１）表达明显增强，且用ＭＤＲ－１基因表达产物Ｐ１７０糖蛋白特异性的ＪＳＢ－１单克隆抗体检测Ｋ５６２ＨＨＴ细胞，结果呈强阳件反应，而敏感株为阴性。此外，二者的谷胱甘肽－Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）α和π基因ｍＲＮＡ水平均有提高，而ＧＳＴμ无明显改变。     

CEM／ADM多耐药细胞株的P170—糖蛋白的表达

本文利用免疫荧光法对肿瘤细胞ＣＥＭ，ＣＥＭ／ＡＤＭＰ１７０－糖蛋白进行了检测，结果显示，敏感细胞全部阴性，而耐药细胞株Ｐ１７０－糖蛋白呈过度表达，其过度表达细胞随肿瘤细胞对抗癌药物耐受性增强而增加，其中ＣＥＭ／ＡＤＭ多耐药细胞株的Ｐ１７０－糖蛋白过度表达细胞为９２％。     

脑胶质瘤组织中P170蛋白的表达及意义

①目的 探讨多药耐药基因在脑胶质瘤组织中的表达及其意义 。②方法 采用免疫组化Ｓ－ Ｐ法，检测了３８例脑胶质瘤组织中多药耐药基因Ｐ１７０蛋白的表达。③结果３８例脑质瘤组织中Ｐ１７０蛋白的阳性表达率为６５．７％，与正常脑组织（表达率为０）比较差异有显著性（Ｐ＝０）。Ｐ１７０在Ⅰ～Ⅳ级脑胶质瘤 的阳性不达率分别为０，５３．３％，７０．６％，１００．０％，其中Ⅰ级与，Ⅲ，Ⅳ级间差异有显著性（Ｐ＝０．０１８，     

CEM／ADM多耐药细胞株的P170－糖蛋白的表达

本文利用免疫荧光法对肿瘤细胞ＣＥＭ，ＣＥＭ／ＡＤＭＰ１７０－糖蛋白进行了检测，结果显示：敏感细胞全部为阴性，而耐药细胞株Ｐ１７０－糖蛋白呈过度表达，其过度表达细胞数随肿瘤细胞对抗癌药物耐受性增强而增加，其中ＣＥＭ／ＡＤＭ多耐药细胞株的Ｐ１７０－糖蛋白过度表达细胞为９２％。     

实体瘤多药耐药性与P-gp和p53表达的关系

目的探讨４种常见实体瘤多药耐药性与Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ｇｐ）及ｐ５３表达的关系。②方法采用ＭＴＴ比色法检测胃癌、大肠癌、乳癌、肺癌对１４种化疗药的耐药性；用免疫组化方法检测同一标本Ｐ－ｇｐ，ｐ５３的表达。③结果１０９例标本中多药耐药者５１例，疏水性药物耐药者５９例。各肿瘤Ｐ－ｇｐ阳性表达者共４０例，ｐ５３阳性表达者共６３例。乳癌疏水性耐药组Ｐ－ｇｐ表达率为５７．１％，对照组表达率为９．０％；大肠癌多药物耐药组ｐ５３表达率为１００％，敏感组表达率为５０％．④结论Ｐ－ｇｐ阳性表达可反映乳癌的疏水性耐药，ｐ５３阳性表达是大肠癌多药耐药的标志之一。     

STAT5-ROS信号通路介导K562细胞伊马替尼耐药的机制研究

目的 探讨信号转导与转录因子5-氧化物(STAT5-ROS)细胞信号转导通路在慢性髓细胞白血病细胞(K562)伊马替尼(IM)耐药中的作用机制.方法 以浓度递增的方法诱导K562对IM产生耐药, CCK-8法检测其耐药性.RT-PCR方法定量测定K562/G细胞中STAT5A和STAT5B mRNA表达.流式细胞术测定ROS和细胞凋亡水平.Western blot法检测细胞中总STAT5和p-STAT5蛋白表达.结果 实验成功诱导K562/G耐药细胞,CCK-8法测定耐药倍数为80倍.细胞生长曲线显示20 μmol/L IM作用于K562/G细胞48 h,活细胞数量减半.0.1 μmol/L IM作用于K562细胞24 h,活细胞数量几乎为零.流式细胞检测K562/G细胞内ROS水平明显高于K562细胞(P=0.000 1),相同浓度IM作用于两株细胞相同时间,K562/G细胞凋亡比例低于K562(P<0.05).RT-PCR结果显示K562/G细胞中STAT5A和STAT5B水平均高于K562(P=0.000 1、0.017 0).Western blot结果表明K562/G细胞中STAT5蛋白水平显著升高(P=0.009 0).结论 STAT5在慢性髓细胞白血病中高表达,STAT5-ROS通路的活化与K562细胞IM耐药密切相关.     

冬凌草甲素逆转多药耐药细胞系K562/A02耐药性的研究

目的：探讨冬凌草甲素对多药耐药细胞系K562／A02耐药性的逆转作用。方法：以柔红霉素（DNR）和高三尖杉酯碱（HHT）联合不同浓度的冬凌草甲素处理K562／A02及敏感细胞系K562／S，以四唑盐比色法（MTT）检测两种化疗药物的半数抑制浓度（IC50），以流式细胞仪检测P170蛋白的表达与细胞内DNR的浓度。结果：冬凌草甲素可明显减小K562／A02细胞对DNR，HHT的IC50，降低耐药倍数，下调P170蛋白的表达，增高细胞内DNR的浓度，而对K562／S细胞无显著影响。结论：冬凌草甲素可逆转药细胞系K562／A02的耐药性，是一种很有希望的抗白血病中药。     

脐血CD3AK细胞诱导肿瘤细胞凋亡的研究

目的 :探讨脐血CD3AK细胞诱导K5 6 2、HL 6 0细胞凋亡的作用。方法 :用细胞形态学观察、DNA琼脂糖电泳、原位末端标记法检测K5 6 2、HL 6 0细胞。结果 :K5 6 2细胞自然凋亡率 (3.5 0± 0 .97) % ,脐血CD3AK诱导的K5 6 2细胞凋亡率 (2 7.40± 4.6 4) % ;HL 6 0细胞自然凋亡率 (4.10± 1.10 ) % ,脐血CD3AK诱导的HL 6 0细胞凋亡率(2 1.10± 3 .82 ) % ,均有显著性差异。结论 :脐血CD3AK细胞能诱导K5 6 2、HL 6 0细胞凋亡 ,而且诱导K5 6 2凋亡的能力更强。     

STI571 combined with vincristine greatly suppressed the tumor formation of multidrug-resistant K562 cells in a human-nude mice xenograft model

Multidrug resistance (MDR), often associated with decreased intracellular drug accumulation in patient's tumor cells resulting from enhanced drug efflux,1 is a major obstacle to successful chemo- therapy in leukemia. It is related to the overexpression of a membrane protein, P- glycoprotein (P-170), thereby reducing drug cytotoxicity. For example, Philadelphia-chromo- some-positive (Ph+) chronic myelogenous leukemia (CML) is often resistant to chemotherapy in advanced phases because of the…     

DCIK细胞特异性抗肿瘤生物学活性研究

目的研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)分别与两种冻融抗原致敏DC细胞共培养后获得的DC细胞诱导的特异性肿瘤杀伤细胞(dendritic cell induced killer.DCIK)的增殖活性及其对K562、Namalwa细胞株的杀伤活性。方法采集健康供者的外周血单个核细胞(PMNC),先诱导培养CIK细胞及两组DC细胞(K562-DC和Namalwa-DC),然后将两组DC细胞分别和CIK细胞按1∶10的比例分别混合培养,并以CIK细胞单独培养组为对照。计数细胞扩增倍数,并于共培养6d MTT法测定各组细胞对K562、Namalwa细胞杀伤活性。结果两组DCIK细胞增殖速度明显快于单纯CIK细胞组(P0.05);共培养6d,相同的效靶比情况下,两组DCIK细胞对两种肿瘤细胞的杀伤活性都比单纯CIK细胞明显增强,而用相应肿瘤抗原致敏得到的DCIK细胞对该种肿瘤细胞的杀伤活性最强。结论 DCIK细胞的增殖能力、抗肿瘤活性均高于CIK细胞,致敏的DCIK细胞对相同肿瘤靶细胞有杀伤特异性。     

慢性粒细胞白血病骨髓细胞的SFRP2基因启动子高甲基化

目的 研究慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)骨髓细胞SFRP2基因启动子甲基化状态,探讨SFRP2基因启动子甲基化在CML发病机制中的作用.方法 分别采用RT-PCR、甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)方法检测CML细胞系K562细胞...     

NK细胞与K562细胞之间相互免疫编辑作用及其对NK细胞杀伤活性的影响

目的：探讨NK细胞与K562细胞混合培养前、后其杀伤活性的变化及分子机制。方法：流式细胞仪检测NK细胞与K562细胞混合培养前、后细胞表面相应分子的变化,LDH释放法测定效靶比20∶1时NK细胞对K562细胞的杀伤活性。结果：相互编辑前,K562细胞表面MICA/MICB的表达率为(79.90±0.87)%,NK细胞表面NKG2D、KIR2DL1和KIR3DL1的表达率分别为(98.27±0.67)%、(45.70±1.22)%和(35.60± 1.35)%。相互编辑后,K562细胞表面MICA/MICB和NK细胞表面NKG2D的表达率分别为（35.56±1.01）和（34.67±3.88）%,均明显低于编辑前（Ｐ=0.000）;NK细胞表面KIR2DL1和KIR3DL1的表达率分别为（47.20±1.08）%和（34.03±1.20）%,与编辑前比较差异均无显著性(Ｐ>0.05)。效靶比20∶1时,NK细胞对编辑后的K562细胞的杀伤活性为(24.07±0.58)%,编辑后的NK细胞对K562细胞的杀伤活性为(16.95±2.00)%,均明显低于编辑前NK细胞对K562细胞的杀伤活性［(54.03±3.46)%］(Ｐ＝0.000)。结论: NK细胞与K562细胞持续性接触后,双方发生了相互免疫编辑作用;NK细胞的杀伤活性下降,其分子机制是细胞表面相应的配受体发生了变化。     

野生型p53基因对白血病K562细胞的增殖抑制作用

目的:建立携野生型p53基因的K562细胞株,研究该细胞内野生型p53基因的表达并观察其生物学特性。方法:构建重组人p53逆转录病毒载体,导入PA317细胞中进行包装,经过病毒滴度测定,筛选高滴度的产病毒细胞克隆。收集培养上清液中的重组人p53逆转录病毒颗粒,感染K562靶细胞,建立携野生型p53基因的K562细胞株。观察该细胞株的生长方式、形态学和生长速度。SP免疫组化染色法检测p53蛋白表达。进一步用流式细胞仪检测p53蛋白表达率和细胞周期变化;双层软琼脂培养实验检测细胞的增殖潜能改变。以pBabe空载体同时实验,作为各阶段的对照。结果:成功地构建了重组逆转录病毒载体pBabe/p53;获得逆转录病毒生产PA317/p53细胞系,最高病毒滴度为4.64×105CFU/m l;获稳定表达p53基因的K562/p53靶细胞,免疫组化结果证实该细胞内有野生型P53蛋白表达,流式细胞仪检测到野生型P53蛋白表达率为1.32%;与对照K562/pBabe细胞比较,K562/p53靶细胞的生长速度下降;软琼脂集落生成的下降率为27.14±4.49%(P<0.05);增殖指数下降,S期比例下降(P均<0.01)。结论:制备了携p53基因的高滴度逆转录病毒,建立携野生型p53基因的K562/p53细胞株,证实表达的野生型p53蛋白对该细胞有抑制作用。     

甲孕酮对K562/AO2细胞及P-gp、Bcl-2耐药蛋白表达的影响

目的：探讨甲孕酮对白血病 K562/ AO2细胞凋亡率及 P - gp、Bcl -2耐药蛋白表达的影响。方法以 MTT法检测肿瘤细胞增殖的抑制率，流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡、P - gp 及 Bcl -2表达。结果甲孕酮能够提高 K562/AO2细胞的凋亡，能够下调 K562/ AO2细胞 P - gp、Bcl -2的表达。结论甲孕酮能提高 K562/ AO2细胞化疗敏感性，促进其凋亡，对 K562/ AO2细胞有一定的逆转耐药作用。     

恶性造血细胞中P-gp 170表达的比较研究

目的:通过研究恶性造血细胞中P-糖蛋白(P-gp)170的表达,为骨髓增生异常综合征(MDS)治疗提供P-gp 170低表达的体外细胞株模型。方法:用含0.1 mmol.L-1阿霉素的RPM I 1640分别培养MDS细胞株MUTZ-1和多药耐药(MDR)红白血病细胞株K562/A02。用MTT法检测细胞的增殖抑制作用,光镜和电镜技术分别观察与阿霉素共同培养后的MUTZ-1细胞和K562/A02细胞形态和超微结构,流式细胞仪分别测定MUTZ-1细胞和K562/A02细胞P-gp 170表达水平。结果:0.1 mmol.L-1阿霉素对MUTZ-1细胞增殖呈时间依赖性抑制作用,而对K562/A02细胞的增殖没有影响;MUTZ-1细胞出现典型的凋亡形态学改变,K562/A02细胞表面呈现出许多长的微绒毛和许多微孔;K562/A02细胞与MUTZ-1细胞相比高表达P-gp 170。结论:P-gp 170在恶性造血细胞中表达有显著性差异,P-gp 170低表达的MUTZ-1细胞株可用于MDS治疗的体外研究模型,P-gp 170高表达的K562/A02细胞株可用于MDR逆转的体外研究模型。