心钠素基因甲基化状态与表达调控

目的 :研究在大鼠老化过程中心钠素 ( ANF)基因的甲基化状态和该基因表达与调控的关系。方法 :采用限制性核酸内切酶 Hpa 和 Msp 消化大鼠基因组 DNA,用 [α- 3 2 P]d CTP进行ANF- c DNA标记探针 ,Southern blot杂交。结果 :老化过程中大鼠心房和心室 ANF基因内部至少存在一处未甲基化的序列。结论 :在老化过程中 ,大鼠心房和心室组织中的 ANF基因甲基化状态在转录水平上可能未参与该基因的表达调控 ,ANF基因表达调控的机制有待进一步研究     

去势大鼠局灶性脑缺血再灌注后雌二醇的保护作用及其对凋亡抑制基因表达的影响

目的：探讨雌二醇（E2）对去势大鼠局灶性脑缺血再灌注后的保护作用及其对凋亡抑制基因bcl-2的影响．方法：建立雌性Wistar大鼠脑缺血再灌注模型（MACO）,分为4组,WT去势大鼠安慰剂组（A组）、苯甲酸雌二醇组（B组）、ERKO去势大鼠安慰剂组（C组）、苯甲酸雌二醇组（D组）．采用放射免疫分析、激光多普勒血流（LDF）仪、免疫组化和RT—PCRC等检测血浆E2水平、脑血流量的变化、促血管生成素-1（Ang-1）mRNA的表达、调亡指数以及bcl-2表达．结果：经E2处理的雌性野生（WT）和雌激素α受体基因敲除（ERKO）去势大鼠,其脑缺血再灌注后脑血流的变化幅度、脑组织中Ang-1 mRNA表达和bcl-2的表达均高于安慰剂对照组（P〈0．01）．结论：E2介导的Ang-1 mRNA和bcl-2表达的增加及其对微血管结构的稳定作用是脑缺性再灌注损伤修复的重要机制．     

雌激素对大鼠心房肽基因表达的调节作用

作者对正常大鼠、卵巢切除大鼠、卵巢切除术后给与不同剂量雌激素大鼠的心房肽基因表达情况进行了研究。用改良冷酚法提取鼠心房总RNA,用α-~(32)p标记的与ANP mRNA互补的cDNA探针与RNA样品杂交。分子杂交结果显示:OVX组ANP含量相对最低,其对照E-20组、E-200组和假手术组的含量分别是其1.3、1.7和1.1倍。此结果提示,雌激素促进ANP的基因表达;进一步说,这种增强作用与雌激素的使用剂量有关。生理剂量的雌激素具有维持ANP适当转录水平的作用。     

TP、DHT及EE对DMAB诱发去势F344大鼠前列腺癌发病的直接作用

目的探讨乙炔基雌二醇(EE)投药及不投药的情况下，内源性雄性激素对二甲基氨基苯甲醛(DMAB)并用丙酸睾丸酮(TP)或双氢睾酮(DHT)而诱发的大鼠前列腺癌发病过程中的作用机制。方法为排除内源性雄性激素对实验结果的干扰，F344大鼠在投入DMAB诱发前列腺癌后立即予以去势，然后分为TP投药组、DHT投药组、TP／EE并用组及DHT／EE并用组，投药时间为40周。结果DMAB与TP的并用增加了前列前部、侧部及精囊的浸润性癌肿的发生，而双氢睾酮并没有表现出相同的作用。同样在DMAB与丙酸睾丸酮／乙炔基雌二醇(TP／EE)并用组，前列腺、精囊浸润性癌的发生率明显增高，而在DMAB与或双氢睾酮(DHT)／乙炔基雌二醇(TP／雎)并用组则无明显变化。另外，除了在单纯DMAB投药的去势的大鼠组以外，其他各组均产生了癌变，这个结果与此前已报告的在未去势大鼠中的实验结果十分相近。结论内源性的睾酮对TP／EE及DMAB并用而诱发的前列腺癌无明显影响，同时也不参与DHT的作用机制。     

雌/雄激素比例对去势大鼠前列腺体积及其脏器系数的影响

目的探讨雌/雄激素比例对去势大鼠前列腺体积及其脏器系数的影响。方法选用雄性SD大鼠随机分为37组,分别为:35个不同雌/雄激素比例组、正常和去势对照组。给药组分别注射不同配伍剂量的雌/雄激素、对照组均注射生理盐水各一个月。最后一次注药后24h取血、处死、取材,称取前列腺重量,测量体积,并计算脏器系数。结果当丙酸睾丸酮给药剂量分别为每只鼠0.02、0.5、2.5和12.5mg时,均未见器官增生程度与苯甲酸雌二醇注射剂量呈负相关。丙酸睾丸酮给药剂量每只鼠为0.1mg时,随着苯甲酸雌二醇注射量增加,前列腺体积及其系数均增大,而当每只鼠苯甲酸雌二醇注射量达到50μg/kg时,器官增生程度不再随苯甲酸雌二醇注射剂量增加而增加。结论雌激素发挥作用需以雄激素存在为前提,雌激素并非总是呈现对抗雄激素促进前列腺增生的作用,而是在一定范围内协同雄激素促进前列腺增生。     

雌激素受体和过氧化物酶增殖子激活受体γ交叉对话对大豆苷原骨的保护作用

目的 探讨雌激素受体(ERs)和过氧化物酶增殖子激活受体γ(PPARγ)交叉对话对大豆苷原防治去势大鼠骨质疏松的作用.方法 将4个月龄大鼠随机分为6组:假手术组、去势组、去势+戊酸雌二醇组(E2)、去势+高剂量大豆苷原组(H-Dai,200 mg·kg~(-1)·d~(-1))、去势+中剂量大豆苷原组(M-Dai,50 mg·kg~(-1)·d~(-1))和去势+低剂量大豆苷原组(L-Dai,10 mg·kg~(-1)·d~(-1)),造模成功后,灌胃3个月后处死大鼠.以腰椎L_6和右股骨提取总RNA,RT-PCR方法检测ERα、ERβ和PPARγ mRNA表达;免疫组化检测腰椎L_4与左股骨3种蛋白表达.结果 不同剂量大鼠ERα mRNA和蛋白表达水平均显著低于ERβ.除H-Dai组大鼠股骨之外,ERβ mRNA在M-Dai组大鼠腰椎和股骨(0.0177±0.0010,0.0245±0.0013)和L-Dai组大鼠的腰椎及股骨(0.0276±0.0027,0.0278±0.0044)以及H-Dai组大鼠腰椎(0.0163±0.0037)的表达水平均显著高于去势组(0.0016±0.0005,0.0041±0.0014),且与E_2组差异无统计学意义,ERB蛋白的表达情况与之类似.组间比较显示随着大豆苷原剂量降低,ERβ mRNA及蛋白表达水平有增高的趋势,而PPARγ mRNA及蛋白表达水平则降低.结论 ERβ和PPARγ之间存在此消彼涨的交叉对话关系,可能参予介导大豆苷原防治去势大鼠骨质疏松症的量效作用.     

Smad 4在去势大鼠下丘脑、垂体中的表达和意义

目的:研究Smad 4 mRNA在去卵巢大鼠下丘脑、垂体中的表达水平和意义。方法:SD大鼠分为3组(每组10只):对照组(月龄<24周雌性大鼠)、去势组(手术切除双侧卵巢大鼠)、治疗组(去势后雌激素治疗雌性大鼠30天),动物处死后迅速取材,提取各组大鼠下丘脑、垂体组织RNA,反转录成cD NA,下丘脑,采用实时定量PCR方法(Real-time quantitative reverse transcriP tion Polymerase chain reaction;qRT-PCR),检测各组大鼠Smad4 mRNA在下丘脑及垂体中的表达。结果:去势组大鼠下丘脑Smad4 mRNA水平是正常组0.4±0.22倍(P<0.05),雌激素治疗组大鼠下丘脑Smad4 mRNA水平是正常组2.5±0.79倍(P<0.05);去势组大鼠垂体Smad4 mRNA水平是正常组0.2±0.12倍(P<0.05),垂体中Smad4 mRNA水平是正常组8.8±0.16倍(P<0.05)。结论:去卵巢大鼠下丘脑、垂体表达Smad 4基因,并与雌激素水平变化相关。     

人参皂甙对老龄化大鼠心房肽基因表达的影响

给24～26月龄的雄性和雌性大鼠,腹腔注射人参茎叶总甙水溶液,50mg/kg体重,每日1次,连续7次。用冷酚法提取心房总RNA,与α-~(32)P标记的大鼠心房肽前体原cDNA(r—prepro—ANP—cDNA)探针杂交。结果表明,人参皂甙对老龄化大鼠心房肽基因表达的作用是受性别影响的。     

三羟异黄酮对去势雌性大鼠主动脉内皮依赖性超极化的影响

目的　观察三羟异黄酮对去势大鼠主动脉内皮依赖性超极化的影响。方法　 4 0只成年雌性大鼠随机分成 4组 :假手术组、去势组、去势雌二醇组、去势GST组。去势 1周后开始给药 ,6周后处死大鼠。放免法测定血中雌二醇水平 ,常规微电极技术观察主动脉平滑肌细胞的内皮依赖性超极化反应。结果　去势大鼠主动脉内皮依赖性超极化较假手术组减弱 (P <0 .0 5 ) ,补充雌二醇和三羟异黄酮后 ,内皮依赖性超极化作用明显改善。结论　三羟异黄酮可加强去势雌性大鼠主动脉内皮依赖性超极化 ,这可能是雌激素和植物雌激素对绝经后妇女心血管保护作用的机制之一。     

穴位激光照射对去势大鼠子宫雌激素受体mRNA表达的影响

目的 探讨雌激素水平降低对子宫雌激素受体基因表达的影响,以及穴位激光照射肾俞穴对去卵巢大鼠子宫雌激素受体基因表达的调整作用.方法 选用3月龄Sprague-Dawley雌性大鼠,将动物分为正常对照组(Nor),去卵巢组(OVX)和去卵巢穴位激光照射组(OVX+L)3组.采用半定量RT-PCR方法获得大鼠子宫雌激素受体α(ERα)和雌激素受体β(ERβ)mRNA的逆转录表达产物cDNA,用琼脂糖凝胶电泳方法检测,计算机图像分析系统进行统计分析.结果 与正常对照组比较,去卵巢组大鼠子宫内ER αmRNA的RT-PCR表达产物减少(P<0.05),ER βmRNA的RT-PCR表达产物增加(P<0.05);与去卵巢组相比,去卵巢穴位激光照射组大鼠子宫内ER αmRNA的RT-PCR产物升高(P<0.05),ER βmRNA的RT-PCR产物增加(P<0.05).结论 大鼠去卵巢后,子宫ER α的表达水平显著下降,穴位激光照射对去势大鼠子宫ERmRNA的表达有一定的调节作用.可能与穴位激光照射对去势大鼠生殖内分泌系统的调节有关.     

Effects of female sex hormones on atrial natriuretic factor gene expression in rats]

To clarify the effects of female sex hormones on ANF gene expression, emasculated and intact female rats were subcutaneously injected with estradiol (E2), progesterone (P) and olive oil solvent (O) respectively, once a day for 7 days. The relative rANF-mRNA contents of rat atria were measured by molecular hybridization, and rANF-cDNA was labeled with alpha-32P as probe. The groups and hormone doses per 100 g body weight were: (1) sham, 0.2 ml O; (2) rats were bilaterally ovariectomized(OVX), 0.2 ml O; (3) OVX, 80 ng E2; (4) OVX, 80 micrograms E2; (5) OVX, 0.2 mg P; (6) OVX, 2 mg P; (7) OVX, 80 ng E2, 0.2 mg P. The results showed that the rANF-mRNA of group (2) was the lowest, it was 75% of that in group (1), while the rANF-mRNA levels in groups (3)-(7) were 1.1, 2.0, 1.9, 2.3 and 2.1 folds of that in group (2) respectively. The results revealed that E2 and P increased ANF gene expression. Their effects were associated with the dosage. The two may have synergistic actions. Physiological amount of E2 and P may maintain suitable level of rANF-mRNA. This experiment suggested that female sex hormone may have dual effects in body fluid balance.     

肌肉介导心钠素基因转移对肾性高血压大鼠的作用

目的：观察肌肉介导心钠素（ａｔｒｉａｌｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃｆａｃｔｏｒ,ＡＮＦ）基因转移对肾性高血压大鼠的治疗作用。方法：利用基因克隆技术克隆和构建了高表达效率的人ＡＮＦｃＤＮＡ基因真核表达质粒,应用肌肉缝线法将质粒转移到大鼠骨骼肌中。结果：ＡＮＦ基因可以在骨骼肌中表达,并可释放入血,明显降低肾性高血压大鼠的血压,并产生利钠利尿效应,其作用可维持４～６周。结论：应用基因缝线进行肌肉介导的基因转移,可在肌肉内有效表达效应蛋白质,且可释放入血,产生药物治疗效果。     

雌激素对偏头痛大鼠三叉神经节内降钙素相关基因肽mRNA表达的影响

目的 :研究雌激素对偏头痛大鼠三叉神经节内降钙素相关基因肽 (CGRP)mRNA表达的影响 .方法 :成年雌性SD大鼠去卵巢后分为 3组 :去卵巢组 (OVX)、低雌激素替代组 (OVX +LDET)及高雌激素替代组 (OVX +HDET) ,随后各组内部分大鼠以皮下注射硝酸甘油 (NTG)复制偏头痛模型 ,采用RT PCR方法观察三叉神经节内CGRPmRNA表达的变化 .结果 :去卵巢组与雌激素替代组比较 ,三叉神经节内CGRPmRNA表达增强 (P <0 .0 5 ) ,去卵巢及低雌激素替代组硝酸甘油造模后大鼠三叉神经节内CGRPmRNA与造模前比较表达增强 (P <0 .0 5 ) ,而高雌激素替代组造模前后无明显变化 (P >0 .0 5 ) .结论 :实验性偏头痛大鼠三叉神经节内CGRPmRNA的过度表达可能是偏头痛发作的分子机制之一 ,雌激素通过调控三叉神经节内CGRPmRNA的表达 ,可能参与女性偏头痛的发生     

人参皂甙对垂体—性腺系统分子内分泌功能调节作用

本实验观察了人参总甙腹腔注射后对垂体—性腺系统分子内分泌功能调节作用。人参总甙对雌雄青年、中老年两组大鼠垂体r—β—LH—mRNA含量有明显提高作用,加快β—LH基因表达中的转录过程。同时测定大鼠血浆LH、雌二醇和睾酮含量,发现这些激素的含量变化与垂体r—β—LH—mRNA含量变化不一致。人参皂甙对青年组雌雄大鼠血浆诸激素含量影响很小,但使中老年雌雄组大鼠血浆中LH含量明显下降,雌鼠血浆中雌二醇含量明显增高。说明,人参总甙的调节作用是多层次的。     

消痤胶囊对兔耳痤疮模型抗角化作用及血清睾酮、雌二醇含量的影响

目的观察消痤胶囊对兔耳痤疮模型毛囊皮脂腺导管的抗角化作用及对血清睾酮（T）、雌二醇（E2）含量的影响。方法将健康新西兰白兔随机分为消痤胶囊大、中、小剂量组、清热暗疮丸组、模型实验组、正常对照组,采用Kligman法建立兔耳痤疮模型,造模成功后分别灌饲消痤胶囊、清热暗疮丸和纯净水2周。通过肉眼和镜下病检观察皮损的角化情况,采用电化学发光法测定血清T、E2含量。结果消痤胶囊各剂量组和清热暗疮丸组均可不同程度的改善兔耳痤疮模型毛囊皮脂腺导管的异常角化,对血清T的含量有降低作用、对血清E2含量有升高作用,并呈量效关系。结论消痤胶囊可改善兔耳痤疮模型毛囊皮脂腺导管的异常角化,调节体内激素水平,对兔耳实验性痤疮有较好的治疗作用。     

长期低剂量性激素替代疗法对绝经后妇女外周苯二氮卓受体的影响

目的本实验研究长期低剂量激素替代疗法(HRT)对绝经后妇女体内激素水平及外周型苯二氮卓受体(PBR)的影响。方法筛选北京协和医院医护人员中符合入组条件并接受HRT治疗持续4年以上志愿者83人,同时以年龄为配比条件筛选出99人作为对照。以酶联免疫反应法测血浆雌二醇、孕酮、睾酮含量;以同位素标记法测外周血PBR结合活性。结果与对照组相比,HRT组受试者血浆中雌二醇维持在较高水平,两组之间在各个年龄段都有显著差异(P<0.05),而血浆中孕酮、睾酮水平未见显著差异。各年龄段HRT组PBR水平均高于对照组,并在50～59年龄段两组之间有显著性差异(P<0.01)。受试者血中PBR结合活性与雌激素水平呈明显相关性。结论长期低剂量HRT使绝经后受试者体内雌激素水平维持在一个较高浓度的同时血小板上PBR亦处于较高的水平。     

糖肾灵及贝那普利对糖尿病大鼠肾脏病变的影响及机制研究

目的:研究糖肾灵合剂(Tang shen ling Mixture,TSLM)及贝那普利(benazepril)对糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠肾脏病变的影响及其作用机制。方法:采用链脲霉素(strep to zotocin,STZ)诱导DM大鼠肾脏病变模型,进行6周的药物干预,观察大鼠血和尿的生化指标、血浆心钠素(atrial natriuretic factor,ANF)、肾脏病理变化、肾组织转化生长因子β1(transforming growth factorbeta1,TGF-β1)及葡萄糖转运因子1(glucose transporter1,GLUT1)mRNA的表达。结果:TSLM和贝那普利均能降低DM大鼠尿白蛋白排泄率、肌酐清除率及肾重/体重比,减轻肾脏病理损害。TSLM能降低血浆ANF水平和肾组织GLUT1mRNA的表达,对肾组织TGF-β1mRNA表达的影响则不显著。贝那普利能降低肾组织TGF-β1mRNA的表达,对血浆ANF和肾组织GLUT1mRNA表达的影响则不显著。结论:TSLM能改善DM大鼠早期肾脏病变,其作用机制与贝那普利不同,可能与降低血浆ANF和肾组织GLUT1mRNA的表达等有关。TSLM与贝那普利合用具有一定的协同作用。     

染料木黄酮对青春期前雄性大鼠生殖系统影响的机制研究

  目的  研究染料木黄酮（genistein,GEN）对青春期前雄性大鼠生殖系统影响的机制。  方法  选用30只初断乳（21日龄）SPF级雄性SD大鼠,随机分为对照组（Con组）、GEN低剂量组（G1组）、GEN高剂量组（G2组）,每组10只。根据大鼠体质量,分别以5 mL/kg玉米油、150 mg/kg和300 mg/kg用玉米油溶解的GEN灌胃6周,隔天称取体质量1次。6周后处死大鼠,解剖睾丸、附睾、前列腺组织,计算脏器系数;观察睾丸组织病理结构变化;计数精子数量并计算精子畸形率;放射免疫法检测血清中睾酮和雌二醇的质量浓度;免疫荧光技术检测睾丸组织中蛋白磷酸酶2调节亚基2C（PPP2R2C）蛋白的表达定位;分别采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测大鼠睾丸组织中PPP2R2C和细胞周期依赖性蛋白激酶（CDK2）的mRNA和蛋白表达水平;免疫共沉淀法检测睾丸组织中蛋白磷酸酶2A（PP2A）活性。  结果  各组大鼠体质量、精子数量、血清雌二醇、PP2A酶活性差异均无统计学意义（P>0.05）;G2组睾丸组织的病理结构紊乱;G1和G2组的精子畸形率高于Con组（P<0.05）;G2组的血清睾酮质量浓度低于Con组（P<0.05）;G2组PPP2R2C和CDK2的mRNA水平高于Con组（P<0.05）,但蛋白水平低于Con组（P<0.05）;PPP2R2C蛋白在各组睾丸组织中均有表达。  结论  青春期前长期暴露高剂量（300 mg/kg）GEN会对雄性大鼠成年后的生殖功能造成不良影响。由于在PP2A酶活性没有改变的情况下,磷酸化CDK2（p-CDK2）蛋白的表达量出现下降,PPP2R2C-PP2A-CDK2磷酸化路径可否影响大鼠的生殖系统仍需进一步研究。     

大鼠鼻粘膜与脑组织中心钠素的基因表达

本工作以３２Ｐ标记的大鼠心钠素ｃＤＮＡ为探针，应用斑点杂交和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交的方法，检测了大鼠鼻粘膜与脑组织中心钠素基因转录水平。结果表明鼻粘膜也是心外心钠素基因表达组织之一，其表达水平与脑组织相似。     

睾酮对血管平滑肌细胞中雄激素受体蛋白表达调控的研究

目的观察睾酮对雄性大鼠血管平滑肌细胞中雄激素受体(AR)蛋白表达的调控作用,并对其调控水平作初步探讨。方法贴块法培养雄性SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,分别用细胞裂解和高盐提取法制备细胞质和细胞核抽提物,Western印迹法检测提取物中AR水平。结果不同浓度(0～4μmol／L)睾酮与静止的血管平滑肌细胞作用24h呈剂量依赖性地增加胞质和胞核内AR蛋白含量,生理水平(40nmol／L)睾酮与细胞作用10min引起胞质内AR蛋白水平的快速下调,继而呈时间依赖性(1～48h)地增加胞质和胞核内AR蛋白表达;预先给以转录抑制剂更生霉素和翻译抑制剂cycloheximide则能使上调的胞质内AR蛋白分别降至单纯睾酮刺激组水平的46％和12％;雄激素拮抗剂氟他胺也能够部分抑制(50％)睾酮对细胞内AR蛋白水平的上调作用。结论血管平滑肌细胞中存在睾酮对AR蛋白表达的自身上调作用,其中伴随着受体的核转位;调控过程既有转录机制、也有转录后机制的参与,并且需要功能性AR的介导。