前蛋白转化酶枯草溶菌素9与动脉粥样硬化及斑块破裂的关系

前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)属于目前发现的哺乳动物前蛋白转化酶家族9大成员之一,是脂质代谢调节蛋白。PCSK9基因编码可与自身前体形成复合体后结合低密度脂蛋白受体,使其本身失活,从而升高血中低密度脂蛋白水平。PCSK9过表达或缺乏影响着小鼠动脉粥样硬化发生及进展期病变,而降低血中低密度脂蛋白水平一直是防治动脉粥样硬化及心血管疾病的重点,PCSK9已成为降脂药物开发的重点,为临床防治高胆固醇血症提供了理论依据。     

前蛋白转化酶枯草溶菌素9单克隆抗体的研究进展

前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)可与低密度脂蛋白(LDL)受体结合,将其运送至溶酶体进行降解,从而防止LDL受体再循环至肝细胞膜表面,增加LDL胆固醇(LDL-C)。PCSK9的功能获得型突变可明显增加血LDL-C水平,且与早期动脉粥样硬化相关,而功能丧失型突变可致低血LDL-C水平以及冠心病的发生率。PCSK9单克隆抗体可使LDL-C下降50%~70%,对患者具有良好的耐受性,且无明显的药物相关毒性,但对其是否可以降低心血管事件有待进一步研究。     

2型糖尿病患者血清前蛋白转化酶枯草溶菌素-9水平的变化及其相关性研究

目的：探讨2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus,T2DM）中血清前蛋白转化酶枯草溶菌素-9（plasma proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9）水平变化及其与体质指数（body mass index,BMI）、腰臀比（waist hip ratio,WHR）、空腹血糖（fast－ing blood glucose,FBG）、糖化血红蛋白（glycosylated hemoglobin,HbA1c）水平等的关系。方法：采用酶联免疫法测定了T2DM 54例和正常对照者58例空腹血清PCSK9水平,并分析了血清PCSK9水平与BMI、腰围、臀围、WHR、FBG、HbA1c水平等的关系。结果：①T2DM患者空腹血清PCSK9水平明显高于正常对照组[（260.53±141.70） ng/mL vs.（123.74±73.50） ng/mL,P=0.000]。②相关性研究显示,总人群血清PCSK9水平与BMI、腰围、臀围、WHR、FBG、HbA1c呈正相关（r=0.403,r=0.305,r=0.217,r=0.257,r=0.397,r=0.426,P＜0.05）;女性血清PCSK9水平与BMI、腰围、臀围、WHR、FBG、HbA1c呈正相关（r=0.509,r=0.328,r=0.244,r=0.275,r=0.472,r=0.394,P＜0.05）;男性血清PCSK9水平与腰围、FBG、HbA1c呈正相关（r=0.346,r=0.335,r=0.515,P＜0.05）。③多元逐步回归分析表明总人群中BMI、HbA1c是血清PCSK9水平的独立相关因素;腰围、HbA1c是男性独立相关因素;BMI、FBG是女性独立相关因素。结论：血清PCSK9水平与糖代谢状态有关,可能在T2DM的发生发展中具有一定的作用。     

降胆固醇药物新靶标前蛋白转化酶枯草溶菌素9的研究进展

他汀类药物主要用于降低血低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)以及预防心血管疾病,但其临床疗效和机体的耐受性尚存在不稳定性.人类前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)属于前蛋白转化酶家族,主要由肝脏产生并分泌人血,可促进肝脏中低密度脂蛋白受体(LDLR)的降解,从而参与调控血LDL-C水平.人群中PCSK9的功能获得型或缺失型基因突变与血LDL-C含量、心血管疾病患病率密切相关.可通过负反馈机制上调PCSK9,促进LDLR的降解,从而降低他汀类药物的疗效.因此,抑制PCSK9活性可望成为治疗高胆固醇血症的一种新的有效方法.本文主要综述PCSK9调节胆固醇代谢及其临床应用的研究进展.     

前蛋白转化酶枯草溶菌素9基因rs529787位点多态性与血脂和缺血性脑卒中的关系研究

目的 探讨前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)基因rs529787位点多态性与脂代谢和缺血性脑卒中（IS）的关系。方法 选取2012年7月-2015年7月到新疆医科大学第一附属医院神经内科就诊的IS患者414例为病例组,另选取同时期在本院进行体检的健康成年人350例为对照组。比较并分析两组的临床资料、基因型和等位基因分布情况。结果 两组性别、年龄、民族、吸烟史、饮酒史、总胆固醇（TC）、载脂蛋白A1（APOA1）及载脂蛋白B（APOB）比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;两组高血压和糖尿病合并情况、收缩压、舒张压、空腹血糖（FPG）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）及脂蛋白（a）〔Lp(a)〕比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。两组基因型分布比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;两组等位基因分布比较,差异亦有统计学意义〔OR（95%CI）=1.763（1.038,2.994）,P＜0.05〕。对照组中,不同基因型受试者的TC、TG、LDL-C、HDL-C、APOA1、APOB及Lp(a)比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。病例组中,不同基因型患者的TG、LDL-C比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;而TC、HDL-C、APOA1、APOB及Lp(a)比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。多因素非条件Logistic回归分析显示,高血压合并情况、收缩压、FPG、TG、LDL-C、HDL-C对IS的影响有统计学意义（P＜0.05）。结论 PCSK9基因rs529787位点为CC基因型的IS患者血清TG和LDL-C水平较低,TG、LDL-C及HDL-C是IS的影响因素,携带等位基因C可能是IS的易患因素。     

急性冠脉综合征患者外周血前蛋白转化酶枯草溶菌素9水平及其对患者预后的预测价值

目的探讨急性冠脉综合征(ACS)患者外周血前蛋白转化酶溶菌素9(PCSK9)水平及其对患者预后的预测价值。方法选择88例ACS患者(ACS组)和76例健康个体(健康组),比较两组治疗前的PCSK9、N端脑钠肽前体(NT-proBNP)与超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平的差异。根据Gensini积分将ACS患者分为预后良好组(n=60)和预后不良组(n=28),比较两组治疗前及治疗后1 d、3 d、5 d的PCSK9、NT-proBNP、hs-CRP水平。采用受试者工作特征曲线评价治疗后5 d的PCSK9、NT-proBNP、hs-CRP水平对ACS患者预后的预测价值。结果 ACS组治疗前的PCSK9、NT-proBNP、hs-CRP水平均高于健康组(均P<0.05)。与预后良好组比较,预后不良组各个时间点的PCSK9、NT-proBNP水平,以及治疗前、治疗后3 d、5 d的hs-CRP水平均更高(均P<0.05)。治疗后5 d PCSK9水平预测ACS预后的曲线下面积为0.941,灵敏度、特异度分别为89.40%、93.30%,均高于同一时点的其他两个指标。结论与健康人...     

冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血清前蛋白转化酶枯草溶菌素9、载脂蛋白M与冠状动脉病变程度的关系

目的 分析冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary atherosclerotic heart disease,CHD)患者血清前蛋白转化酶枯草溶菌素9(preprotein converting subtilisin kexin type 9,PCSK9)、载脂蛋白M(apolipoprotein M,apoM)水...     

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者血清前蛋白转化酶枯草溶菌素-9及低密度脂蛋白胆固醇水平变化及其对脑梗塞的预测作用

目的 :检测阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者血清前蛋白转化酶枯草溶菌素-9(PCSK9)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平变化及其对OSAHS并发脑梗死的预测作用。方法:从本院2010年以来门诊及住院患者中随机抽取OSAHS合并脑梗死患者27例(A组),单纯性OSAHS患者30例(B组)以及健康体检者30例(C组),用ELISA法检测3组患者血清中PCSK9的水平,全自动分析仪检测LDL-C水平。比较3组患者血清PCSK9及LDL-C水平变化,同时比较A、B两组患者睡眠呼吸监测指标,并对其血清PCSK9及LDL-C与睡眠呼吸监测指标进行直线相关分析。结果:1A组患者血清PCSK9、LDL-C水平高于B、C组(P<0.05);2睡眠呼吸监测指标显示,A组患者病情较B组严重(P<0.05);3A、B两组患者血清PCSK9、LDL-C水平分别与其睡眠呼吸暂停低通气指数(AHI)、睡眠呼吸障碍事件占总睡眠时间百分比、血氧饱和度<90%时间占总睡眠时间百分比呈正相关(P<0.05);与最低血氧饱和度及平均最低血氧饱和度呈负相关(P<0.05)。结论:OSAHS患者血清PCSK9及LDL-C升高幅度与其严重程度密切相关,并可作为OSAHS合并脑梗死的预测指标。     

2型糖尿病患者血清PCSK9与动脉粥样硬化指标的相关性分析

目的:研究2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者血清前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/kexin 9,PCSK9)与动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)指标的相关性?方法:对351例T2DM患者进行病史采集?颈部及下肢血管彩色多普勒检查,测定其PCSK9水平?结果:T2DM合并AS组患者的血清PCSK9水平高于T2DM无AS组(P < 0.05),血清PCSK9水平与T2DM患者的颈总动脉内中膜厚度(carotid artery intima-media thickness,CIMT)呈正相关(P < 0.01),与右侧颈总动脉(RCCA)内径?RCCA峰值/次峰值(PI)?右侧颈内动脉(RICA)PI?左侧颈总动脉(LCCA)PI?左侧颈内动脉(LICA) PI?RICA 阻力指数(RI)?LCCA RI等颈动脉粥样硬化相关性指标呈正相关(P < 0.05),而与RCCAVmax?RCCA Vmin?RCCA Tamx等指标呈负相关(P < 0.05)?结论:T2DM患者血清PCSK9水平与评估AS程度的指标密切相关,可能成为临床预测及评估T2DM患者AS相关大血管疾病发生风险的指标?     

狼疮早发急性心肌梗死患者PCSK9水平与临床指标的关联性分析

目的:检测育龄女性系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)并急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)患者治疗前后血清PCSK9水平,并分析其与临床指标的相关性.方法:纳入30例育龄女性SLE合并AMI患者(SLE心梗组),30名年龄匹配、未...     

感染性休克患者PCSK9水平及其对预后评估价值的分析

目的 探讨感染性休克患者体内前蛋白转化酶枯草溶菌素9（proprotein convertase subtilisin/kexin 9, PCSK9）水平及其对患者预后的评估价值。方法 回顾性分析2019年1月至2022年3月江苏大学附属宜兴人民医院收治的感染性休克患者135例,根据1周内的转归情况分为预后不良组（n=58）和好转组（n=77）,比较两组治疗前及治疗后1d、3d、5d的PCSK9、超敏C反应蛋白（hypersensitive C-reactive protein, hs-CRP）、降钙素原（procalcitonin, PCT）的水平。采用受试者操作特征（receiver operator characteristic, ROC）曲线评价治疗5d后的PCSK9、hs-CRP、PCT水平对感染性休克患者预后的评估价值。结果 预后不良组各个时间点的PCSK9水平均高于好转组,差异有统计学意义（P<0.05）。治疗后5d的PCSK9水平预测感染性休克预后的曲线下面积为0.843,敏感度72.4%、特异性88.3%,均高于hs-CRP、PCT这两个指标,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 感染性休克患者外周血PCSK9水平明显上调,动态监测PCSK9水平有助于评估患者治疗后的预后情况。     

冠心病患者PCSK9基因D320N位点多态性及其临床意义

目的 探讨冠心病患者外周血人枯草溶菌素转化酶9(PCSK9)基因D320N多态性与冠心病的关系。方法 选取2014年1月至2016年1月在河北省人民医院就诊的不同类型（心绞痛、心肌梗死、无症状性心肌缺血、缺血性心肌病、猝死）冠心病患者3 450例为病例组;以同期健康体检人群1 100例为对照组。检测各组研究对象的血清血脂水平及PCSK9浓度。应用PCR结合DNA直接测序技术对各组PCSK9基因D320N（A/G）多态位点进行分型。采用多因素logistic回归分析PCSK9基因D320N多态位点与不同类型冠心病的关系。结果 病例组患者血清PCSK9浓度,TC、TG、LDL-C水平和、冠心病家族史和吸烟比例均高于对照组（t=108.267、52.8264、5.482、101.952,χ2=188.950、70.742;P<0.0015）,HDL-C水平低于对照组（t=-42.454,P<0.0015）;。病例组中猝死组各指标变化最大,无症状心肌缺血组变化最小 。病例组中AA、GA的基因型频率分别为3.6%、13.9%,高于对照组的1.1%、7.0%（χ2=36.60,17.74;P<0.001）;病例组中A等位基因的频率为0.105,高于对照组的0.046（χ2=70.4851,P<0.001）。病例组中猝死组AA、GA的基因型频率和A等位基因频率最高,无症状心肌缺血组最低（χ2=20.502、39.646,P<0.0501）。Logisticlogistic回归分析发现PCSK9基因D320N（A/G）多态位点AA基因型与冠心病的严重程度有关(OR值为7.964,95%CI为3.219~16.286,P<0.001=0.000) 。结论 PCSK9基因D320N（A/G）位点基因突变与冠心病有关,其中AA基因型可能是冠心病发生的独立危险因素。     

有氧运动对高脂血症大鼠血脂的影响及其机制

目的 探讨有氧运动对高脂血症大鼠血脂的影响及其作用机制。方法 将120只8周龄健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组、高脂饮食组、SBC-115076组和有氧运动组,每组30只。正常对照组饲喂标准饲料,其余3组饲喂高脂饲料构建大鼠高脂血症模型;SBC-115076组每周注射前蛋白转化酶枯草溶菌素9（PCSK9）抑制剂SBC-115076（8 mg/kg）1次,连续8周;有氧运动组进行无负重游泳,每周6 d,共持续8周。8周后处死大鼠,采集血液标本,测定血清三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）水平。取胸主动脉标本,经H-E染色观察主动脉病理学改变。取肝组织标本,采用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹分析和免疫荧光法检测肝组织中PCSK9、低密度脂蛋白受体（LDLR）和胆固醇调节元件结合蛋白（SREBP）在mRNA和蛋白水平的表达。结果 高脂饮食组大鼠血清TG、TC和LDL水平高于对照组,HDL水平低于对照组（P<0.01）;SBC-115076组和有氧运动组大鼠血清TG、TC、LDL水平低于高脂饮食组,HDL水平高于高脂饮食组（P<0.01）。高脂饮食组大鼠主动脉壁内膜增厚,内皮细胞损伤脱落;与高脂饮食组相比,有氧运动组大鼠主动脉内膜增厚明显减轻,内皮损伤较少。与对照组相比,高脂饮食组大鼠肝组织中PCSK9、SREBP1和SREBP2的mRNA及蛋白表达水平升高,LDLR的mRNA及蛋白表达水平降低（P<0.01）;与高脂饮食组相比,SBC-115076组和有氧运动组大鼠肝组织中PCSK9、SREBP1和SREBP2的mRNA及蛋白表达水平降低,LDLR的mRNA及蛋白表达水平升高（P<0.01）。结论 有氧运动能降低高脂血症大鼠血清TG、TC和LDL水平,升高HDL水平,并减轻主动脉内膜增厚。其机制可能与降低PCSK9和SREBP蛋白的表达,从而解除对LDLR的抑制有关。     

A novel mutation in proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 gene leads to familial hypercholesterolemia in a Chinese family

Background Familial hypercholesterolemia （FH） is an autosomal disorder associated with elevated plasma low density lipoprotein （LDL） levels leading to premature coronary heart disease （CHD）. As a result of long-term hyperlipemia, FH patients will present endarterium thickening and atherosclerosis. In the present study we scanned the related gene of a clinically diagnosed autosomal genetic hypercholesterolemia family for the possible mutations and established eukaryotic expression vector of mutation of proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 （PCSK9） gene with gene recombination technique to investigate the contributions of the variation on low density lipoprotein receptor （LDL-R） metabolism and function alternation.Methods Mutation detection was conducted for LDL-R, apolipoprotein B100 （apoB100） and PCSK9 gene with nucleotide sequencing in a Chinese FH family. The full-length cDNA of wild type PCSK9 gene （WT-PCSK9） was obtained from Bel-7402. Site mutagenesis was used to establish the recombinant eukaryotic expression vector carrying pathogenic type of PCSK9 gene and the inserted fragment was sequenced. With the blank vector as control, liposome transfection method was used to transfect the Bel-7402 cells with recombinant plasmid. The expression of LDL-R mRNA was examined by RT-PCR. PCSK9 and the expression of LDL-R protein were determined by Western blotting. Results The G→T mutation at the 918 nucleotide of PCSK9 gene resulted in the substitution of the arginine by a serine at the codon 306 of exon 6. After sequencing, it was confirmed that the inserted fragment of established expression vector had correct size and sequence and the mutant was highly expressed in Bel-7402 cells. There was no significant variation in the levels of LDL-R mRNA. LDL-R mature protein was decreased by 57% after the cells were transfected by WT-PCSK9 plasmid. Mature LDL-R was significantly decreased by 12% after the cells were transfected by R306S mutant as evidenced by gray scale scanning, suggesting that the new mutant R306S can significantly decrease the expression of mature LDL-R protein.Conclusions A novel missense mutation of PCSK9 gene, R306S, was found and the eukaryotic expression vectors of mutant and wild-type of PCSK9 gene were established. There was no significant variation in the levels of LDL-R mRNA. The R306S mutation could significantly lead to the decrease of LDL-R mature protein expression, which might be the pathogenic gene of the FH family.     

运用 CRISPR/Cas9技术构建 PCSK9 点突变家兔模型

目的：运用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建前蛋白转化酶枯草溶菌素9（ PCSK9）点突变家兔模型。 方法：根据PubMed基因蛋白数据对人和兔的PCSK9蛋白功能区进行Blast分析，发现人 PCSK9基因的386S（丝氨酸）氨基酸功能区与兔 PCSK9基因的485S同源。根据家兔 PCSK9基因的485S对应的碱基替换位置及序列分析结果设计3条单链向导RNA和1条单链寡核苷酸供体模板。将合成的单链向导RNA、Cas9 mRNA和单链寡核苷酸供体共同注射入家兔受精卵细胞质内并将胚胎移植入待孕母兔体内。对获得的F0代兔进行PCR、TA克隆、脱靶检测以鉴定PCSK9 ^S386A是否突变成功。利用获得的PCSK9 ^S386A基因点突变家兔进行繁殖，扩大群体。 结果：共获得15只F0代兔，其中1只为PCSK9 ^S386A点突变纯合子，2只为PCSK9 ^S386A点突变杂合子，且该突变可以稳定遗传。 结论：利用CRISPR/Cas9技术成功构建了PCSK9 ^S386A点突变家兔模型，为探究PCSK9功能减弱的分子机制，开发可靠、有效的诊断和治疗措施提供了良好的动物模型。     

运用CRISPR/Cas9技术构建PCSK9点突变家兔模型

目的：运用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建前蛋白转化酶枯草溶菌素9（PCSK9）点突变家兔模型。方法：根据PubMed基因蛋白数据对人和兔的PCSK9蛋白功能区进行Blast分析,发现人PCSK9基因的386S（丝氨酸）氨基酸功能区与兔PCSK9基因的485S同源。根据家兔PCSK9基因的485S对应的碱基替换位置及序列分析结果设计3条单链向导RNA和1条单链寡核苷酸供体模板。将合成的单链向导RNA、Cas9 mRNA和单链寡核苷酸供体共同注射入家兔受精卵细胞质内并将胚胎移植入待孕母兔体内。对获得的F0代兔进行PCR、TA克隆、脱靶检测以鉴定PCSK9^S386A是否突变成功。利用获得的PCSK9^S386A基因点突变家兔进行繁殖,扩大群体。结果：共获得15只F0代兔,其中1只为PCSK9^S386A点突变纯合子,2只为PCSK9^S386A点突变杂合子,且该突变可以稳定遗传。结论：利用CRISPR/Cas9技术成功构建了PCSK9^S386A点突变家兔模型,为探究PCSK9功能减弱的分子机制,开发可靠、有效的诊断和治疗措施提供了良好的动物模型。