EP1受体介导PGE2对胆管细胞癌HuCCT1细胞MMP2表达和活性的影响

目的:探讨前列腺素E2(PGE2)对人胆管细胞癌HuCCT1细胞基质金属蛋白酶2(MMP2)的表达与酶活性的影响及与EP1受体的关系。方法:分别用PGE2、EP1受体激动剂或抑制剂、蛋白激酶C(PKC)抑制剂和钙离子螯合剂处理HuCCT1细胞,通过RT-PCR、明胶酶谱法检测MMP2的mRNA水平以及MMP2酶活性。结果:5μmol/L PGE2和5μmol/L EP1受体激动剂17-PT-PGE2处理组MMP2 mRNA的表达水平与对照组相比分别上升了89.14%(P<0.01)和163.89%(P<0.01);MMP2酶活性与对照组相比分别增强了69.11%(P<0.05)和117.65%(P<0.01);10μmol/L EP1受体抑制剂sc-51322处理后,MMP2 mRNA水平以及MMP2酶活性较PGE2处理组分别下降了47.74%(P<0.05)、84.58%(P<0.01);5μmol/L PGE2或5μmol/L 17-PT-PGE2处理稳定转染EP1R-pcDNA3的人胚肾细胞株HEK293细胞,MMP2的酶活性较对照组分别增强了36.07%(P<0.05)、61.59%(P<0.05)。...     

肝癌细胞前列腺素E2受体表达和分布的研究

目的：基于肝癌细胞（肝细胞癌细胞和胆管上皮癌细胞）对PGE2的不同反应性，研究Hep3B、HuH7、SG231和HuCCT1肝癌细胞株前列腺素E2受体的表达类型和分布定位。方法：体外培养肝细胞癌细胞株（Hep3B，HuH7）和胆管上皮癌细胞株（SG231，HuCCT1）。分别给予不同浓度的外源性PGE2处理，以WST-1细胞增殖实验检测肿瘤细胞增殖率：以RT-PCR实验检测上述细胞4种PGE2受体（EP1、EP2、EP3和EP4）的mRNA表达情况；采用上述肝癌细胞的细胞涂片或细胞爬片进行荧光免疫细胞化学实验．于荧光显微镜和共聚焦显微镜下观察上述4种EP受体蛋白的表达和定位分布。结果：WST-1细胞增殖实验结果显示PGE1可以促进Hep3B和HuH7细胞的生长，但对胆管上皮癌细胞（SG231、HuCCT1细胞）则表现为生长抑制作用；RT-PCR和荧光免疫细胞化学实验结果表明Hep3B、HuH7、SG231和HuCCT1细胞株均有4种EP受体的表达；激光共聚焦结果显示4种EP受体不仅有胞浆，胞膜定位。而且部分在胞核也有表达。其中EP4受体的表达主要定位于细胞核。结论：Hep3B、HuH7、SG231和HuCCT1，4种肝癌细胞株均可以表达EP1、EP2、EP3和EP4受体。且受体的细胞内定位不同。肝癌细胞对前列腺素E2的反应性可能与EP受体的定位以及不同的细胞内信号转导通路激活有关。     

前列腺素E2活化EP2受体促进肝癌细胞增殖

目的研究前列腺素E2(PGE2)对肝癌细胞增殖活性的影响,并探讨其作用主要通过何种前列腺素EP受体介导。方法采用RT-PCR检测肝细胞癌Hep3B细胞COX-2和EP1~EP4受体mRNA的表达水平,cell counting kit-8(CCK-8)细胞计数法检测PGE2和EP2受体激动药butaprost及EP3/EP4受体激动药PGE1 alcohol对细胞增殖的影响。结果人肝癌细胞Hep3B高表达COX-2 mRNA,正常肝细胞QSG7701 COX-2 mRNA表达水平远远弱于前者。四种亚型的PGE2受体EP1~EP4的mRNA在人肝细胞癌细胞株Hep3B均有表达,EP2和EP4受体表达水平明显高于EP1和EP3受体。PGE2呈时间和浓度依赖性地促进Hep3B细胞增殖。孵育细胞48h后,10μmol/L的PGE2表现出明显的促细胞增殖的作用,与未加PGE2的阴性对照组相比,细胞的增殖活性上升22.57%(P<0.001)。0.1、1和10μmol/L的PGE2作用Hep3B细胞72 h后,细胞增殖活性分别较对照组上升12.13%(P<0.01)、17.58%(P<0.01)和33.07%(P<0.001)。20μmol/L的butaprost孵育细胞72 h使细胞增殖活性提高了21.96%(P<0.001),而EP3/EP4受体激动剂PGE1alcohol在浓度为2~20μmol/L的范围内对Hep3B细胞增殖活性无显著影响,当浓度达到200μmol/L时则对细胞的增殖产生抑制作用。结论 Hep3B细胞上的EP2受体被选择性激动后可刺激细胞增殖,提示EP2受体介导了PGE2对Hep3B细胞的促增殖作用。     

前列腺素E2受体EP3-Ⅲ对胆管上皮癌细胞生长的影响

目的:探讨前列腺素E2受体EP3-Ⅲ对胆管上皮癌细胞生长的影响.方法:采用常规培养的人胆管上皮癌细胞株HuccT1,分别给予不同浓度的EP3受体激动剂sulprostone(0、1、5、10 μmol/L)作用24 h,用WST-8法检测细胞的活性.用RT-PCR方法检测HuccT1细胞表面EP3-Ⅲ mRNA水平的表达.用细胞瞬时转染方法使HEK293细胞表达EP3-Ⅲ蛋白,并用WST-8法检测PGE2对转染HEK293细胞生长的影响.结果:WST-8检测发现,随着sulprostone作用浓度的升高,HuccT1的细胞活性呈浓度梯度依赖性增加.RT-PCR检测发现,HuccT1细胞有EP3-Ⅲ mRNA表达.HEK293细胞瞬时转染EP3-Ⅲ后,WST-8检测发现转染细胞在PGE2 10 μmol/L作用下细胞活性明显增加.结论:人胆管上皮癌细胞株HuccT1表面有前列腺素E2受体EP3-Ⅲ表达,EP3-Ⅲ对细胞生长有显著的促进作用.     

前列腺素E2对人肝癌细胞β1-integrin表达调控及相关机制的研究

目的:阐明前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)通过EP1受体上调肝癌细胞Huh-7中β1-integrin的表达及其相关的信号转导通路?方法:用PGE2?EP1受体激动剂(17-PT-PGE2)?EP1受体抑制剂SC19220?NF-κB抑制剂PDTC处理Huh-7细胞,通过Western blot?免疫荧光组织化学实验等方法检测β1-integrin蛋白表达水平和NF-κB的活性?结果:5 μmol/L的PGE2处理Huh-7细胞24 h后,β1-integrin的表达水平与对照组相比上升了129.48% (P < 0.01),5 μmol/L EP1受体激动剂17-PT-PGE2处理使细胞β1-integrin的蛋白表达水平升高了216.34%(P < 0.01)?10 μmol/L的EP1受体抑制剂SC19220处理后β1-integrin表达水平与PGE2组相比下降了34.51%(P < 0.05)?免疫荧光组织化学实验显示17-PT-PGE2处理Huh-7细胞120 min后,NF-κB核表达水平明显增加;Western blot实验显示5 μmol/L 17-PT-PGE2处理Huh-7细胞120 min后,磷酸化NF-κB-p65上升了209.27%(P < 0.01)?NF-κB抑制剂PDTC处理Huh-7细胞后β1-integrin蛋白表达水平与EP1受体激动剂组相比降低了63.49%(P < 0.01)?结论:PGE2可通过EP1受体上调Huh-7细胞中β1-integrin的表达,此调节作用可能与NF-κB信号转导通路有关?     

前列腺素E2受体EP3在AngⅡ-AT1信号转导通路中的作用

目的 研究前列腺素E2活性受体EP3在AngⅡ信号转导通路中的作用.方法 通过培养稳定传代的LVIP2.0Zc细胞,分别转染进AT1受体和EP3受体的DNA质粒,以不同浓度的AngⅡ和sulprostone对转染后的细胞进行刺激,用荧光标记法检测细胞内游离钙离子的浓度变化.结果 仅转染了AT1受体DNA质粒的细胞,在AngⅡ的刺激下,钙离子浓度呈剂量依赖性上升.在细胞共同转染了AT1受体和EP3受体DNA质粒后,细胞内游离钙离子浓度随AngⅡ剂量的增加而增加,再加入sulprostone后,随药液浓度的增加,细胞内钙离子浓度在原有已升高基础上继续上升,P＜0.001,有统计学差异.结论 前列腺素E2受体EP3可正向调节血管紧张素Ⅱ与AT1受体结合导致钙离子增加的信号转导路径.     

中枢神经系统感染患者脑脊液中可溶性白介素-2受体和可溶性细胞间黏附分子-1水平及其临床意义

目的观察在不同病因所致中枢神经系统（CNS）感染患者的脑脊液（CSF）中可溶性白介素-2受体（sIL-2R）和可溶性细胞间黏附分子-1（sICAM-1）水平变化并探讨其临床意义。方法采用ELISA法检测25例结核性脑膜炎（结脑）、15例化脓性脑膜炎（化脑）和25例病毒性脑膜炎（病脑）患者急性期脑脊液中sIL-2R和sICAM-1的水平并与对照组（20例头痛患者）比较,同时将重症患者和轻症患者进行比较。结果急性期CNS感染各组脑脊液中sIL-2R、sICAM-1水平均高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）,sIL-2R水平结脑组高于化脑组和病脑组,sICAM-1水平结脑组、化脑组高于病脑组,差异均有统计学意义（P〈0.05）;重症组脑脊液中sIL-2R、sICAM-1水平高于轻症组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论sIL-2R和sICAM-1参与了CNS感染的病理过程,sIL-2R和sICAM-1水平与病情轻重有关,脑脊液中sIL-2R水平有助于结脑与化脑、病脑的鉴别诊断;脑脊液中sICAM-1水平可能在病脑与结脑、化脑的鉴别诊断中有价值。     

PGE2上调AREG表达促进胆管癌细胞生长的机制研究

目的:探讨AREG蛋白在前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)促进人胆管上皮癌细胞CCLP1增殖能力中的作用和机制?方法:用PGE2?4种EP受体激动剂(17-phenyltrinor Prostaglandin E2?Butaprost?Sulprostone和Prostaglandin E1 Alcohol)?EP2受体拮抗剂AH6809?PKA抑制剂H89?AC抑制剂SQ22536处理CCLP1细胞,通过Western blot?WST等实验检测AREG蛋白表达水平以及CCLP1细胞增殖能力的变化?结果:10 μmol/L PGE2处理CCLP1细胞后,AREG蛋白的表达水平与对照组相比升高了44.2%(P < 0.05);20 μmol/L AREG中和抗体Mab262和SAB1402118分别处理1 h后的WST实验结果显示,PGE2诱导的CCLP1细胞增殖可被AREG中和抗体抑制,分别下降了18%?20%(P < 0.01)?10 μmol/L 4种EP受体激动剂处理CCLP1细胞的结果表明,EP2受体激动剂具有明显促进AREG蛋白表达的作用(表达水平上调了20.1%,P < 0.05),而EP1?EP3?EP4无明显促进表达作用;10 μmol/L EP2受体拮抗剂AH6809处理CCLP1细胞后,AREG蛋白的表达水平较EP2受体激动剂处理组下调了20%(P < 0.05)?用PKA抑制剂H89处理后,AREG蛋白的表达水平和CREB蛋白的磷酸化水平较PGE2处理组分别下降了54.4%?45%(P < 0.05);用CMV500-DN-CREB质粒转染CCLP1细胞抑制了CREB的表达和磷酸化后,AREG的表达量较对照组明显下降约65%(P < 0.01)?结论:PGE2可通过EP2受体激活cAMP-PKA-CREB信号转导通路上调CCLP1细胞AREG的表达,从而促进CCLP1细胞的增殖?     

脂微球前列腺素E1对早期糖尿病肾病患者细胞间黏附分子-1和超敏C反应蛋白水平的影响

目的观察脂微球前列腺素E1对早期糖尿病肾病患者血清可溶性细胞间黏附分子-1（sICAM-1）及超敏C反应蛋白（hs-CRP）水平的影响,进一步探讨其治疗糖尿病肾病的机制。方法选取早期糖尿病肾病患者64例,随机分为治疗组（n=32）及对照组（n=32）,对照组常规饮食控制、口服降糖药或胰岛素治疗,治疗组在此基础上加用脂微球前列腺素E1注射液进行治疗,脂微球前列腺素E110μg入壶（生理盐水）静脉点滴1,次/d,连续治疗14d,测定两组患者的sICAM-1和hs-CRP水平。结果治疗组血清sICAM-1和hs-CRP水平较治疗前显著降低,且差异有统计学意义（P〈0.01）。结论早期DN患者接受脂微球前列腺素E1治疗后sICAM-1和hs-CRP表达降低,提示脂微球前列腺素E1扩张血管的同时,亦可能降低sICAM-1、hs-CRP的表达,改善炎症状态而保护肾脏。     

子宫平滑肌前列腺素E2受体分布与复发性自然流产发病机制的相关性研究

目的研究复发性自然流产（RSA）中子宫蜕膜组织前列腺素E2（PGE2）的水平变化及子宫平滑肌细胞前列腺素E受体（EP）的表达分布,探讨PGE2/EP系统在RSA发病中的作用及机制。方法选择37例RSA患者作为RSA组和48例人工流产孕妇作为对照组。采用RT-PCR法检测蜕膜组织中环氧化酶-2（COX-2）、膜相关前列腺素E合成酶（mPGES）和子宫平滑肌细胞中EP表达水平,ELISA法检测蜕膜组织中PGE2和子宫平滑肌细胞中环磷酸腺苷（cAMP）表达水平,利用Fluo-3AM绿色荧光染料检测子宫平滑肌细胞中钙离子浓度。结果RSA组蜕膜组织中COX-2、mPGES和PGE2表达水平均高于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。RSA组子宫平滑肌细胞中EP1和EP3表达水平均高于对照组,而EP2、cAMP表达水平均低于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。RSA组子宫平滑肌细胞中钙离子浓度显著高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论子宫蜕膜组织PGE2的合成增加和平滑肌细胞EP受体分布异常可促使子宫的异常收缩而导致RSA。     

PGE2通过cAMP-PKA信号转导通路促进肝癌细胞VEGF表达

目的:探讨PGE2对人肝癌细胞HuH7VEGF表达的影响及其可能涉及的信号转导通路。方法:用PGE2、EP1-4四种受体激动剂、SQ22536+PGE2、H89+PGE2处理HuH7细胞,Real-time PCR、Western blot、ELISA等检测VEGFmRNA、蛋白表达的变化。结果:10μmol/L PGE2处理HuH7细胞24h后,VEGFmRNA的表达水平上升了264%(P<0.01)、细胞培养上清中VEGF蛋白表达水平上升了24%(P<0.01);10μmol/L PGE2处理HuH7细胞6、12、24h后,胞浆中VEGF蛋白的表达水平分别上升了13.6%、25.7%、39.6%(P<0.01);10μmol/L EP2受体激动剂处理HuH7细胞24h后,胞浆、细胞培养上清中VEGF蛋白表达水平与对照组相比分别上升了32.3%、20.1%(P<0.01),而10μmol/L EP1、EP3、EP4受体激动剂处理HuH7细胞24h后,VEGF的表达水平无明显改变;30μmol/L PKA抑制剂(H89)、500μmol/L腺苷酸环化酶抑制剂(SQ22536)处理HuH7细胞24h后,胞浆VE...     

PGE2通过EP2受体激活cAMP-PKA-CREB信号通路上调SnoN的表达而促进CCLP1细胞的增殖

目的:探讨前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)对人胆管上皮癌细胞CCLP1增殖能力影响的作用机制。方法:用PGE2、EP1～4 4种受体激动剂、AC激动剂Forskolin、PKA抑制剂H89、cAMP拟似物db-cAMP处理CCLP1细胞,通过RT-PCR、Western blot、WST等实验检测SnoN mRNA、SnoN蛋白等表达水平、CREB蛋白磷酸化水平以及CCLP1细胞增殖能力的变化。结果:10μmol/L PGE2处理CCLP1细胞24 h后,SnoN mRNA的表达水平与对照组相比上升了22.5%(P<0.01),SnoN蛋白的表达水平上升了35.6%(P<0.05);10μmol/L EP受体激动剂处理CCLP1细胞24 h后,SnoN蛋白的表达水平与对照组相比明显增高,其中以EP2受体激动剂的作用最明显,上升了64.9%(P<0.05),细胞增殖能力上升了26.5%;10μmol/L AC激动剂Forskolin处理CCLP1细胞24 h后,SnoN蛋白的表达水平及CREB蛋白的磷酸化水平较对照组分别上升了25.1%、71.3%(P<0.05),细胞增殖能力也上升了...     

肝癌细胞中EP3受体亚型表达及其调控肝癌细胞生长的研究

目的:研究肝癌细胞中EP3受体剪接体亚型的表达类型及其调控肝癌细胞生长的功能。方法:EP3受体激动剂Sulprostone处理肝癌细胞株观察其生长情况;二维电泳和质谱分析研究EP3受体激动与下游信号蛋白之间的关系;Real-TimePCR实验鉴定肝癌细胞株中EP3受体剪接体亚型的表达类型。结果:10μmol/L Sulprostone处理CCLP1细胞24 h后,细胞生长率上调了31.46%(P<0.01);给予CCLP1细胞10μmol/L Sulprostone处理24 h后,二维电泳和质谱实验的结果显示促进细胞增殖侵袭、与细胞代谢正相关的蛋白水平升高,降低细胞代谢速度、减慢细胞生长、抑制细胞侵袭转移的相关蛋白水平下降;Real-Time PCR实验检测肝癌细胞,结果表明肝细胞癌HUH-7、Hep3B、HepG2细胞及胆管细胞癌HuCCT1、CCLP1细胞表达EP3-4、EP3-5、EP3-6和EP3-7 4种剪接体亚型。结论:EP3受体通过上调促细胞生长代谢蛋白,下调抑制细胞生长代谢蛋白而发挥促进肝癌细胞增殖的作用。肝细胞癌HUH-7、Hep3B、HepG2细胞及胆管细胞癌HuCCT1、CCLP1细胞表达EP3-4、EP3-5、EP3-6和EP3-7 4种EP3受体剪接体亚型。     

同型半胱氨酸在大鼠血管平滑肌细胞上通过激活ERK1/2信号通路促进血管紧张素Ⅱ受体1表达

目的：在原代大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)上观察同型半胱氨酸(Hcy)对血管紧张素II受体1(AT1R)的蛋白表达的影响。     

PGE2对LPS诱导小鼠骨髓源性树突细胞成熟及EP4受体表达影响

目的：观察不同浓度前列腺素E2(PGE2)刺激对脂多糖( LPS)诱导小鼠骨髓源性树突细胞( DCs)成熟及EP4受体表达的影响。方法采用重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子( rmGM-CSF)、重组小鼠白细胞介素4( rmIL-4)刺激小鼠骨髓源细胞,诱导生成DCs;经LPS(100 ng/ml)诱导成熟后,用不同浓度 PGE2(0．625、1．25、2．5、5、10、20 nmol/L)刺激 DCs 24 h,流式细胞术检测 DCs 表型 CD40、CD83、MHC-Ⅱ的表达和抗原摄取功能,荧光间标法检测小鼠骨髓源DCs细胞膜上EP4的表达,以平均荧光强度表示表达的高低;MTT法检测经PGE2及LPS诱导成熟的DCs对T细胞增殖的作用。结果流式细胞术结果显示 PGE2(2．5、5、10 nmol/L)能明显上调 CD40、CD83、MHC-Ⅱ的表达;PGE2(1．25、2．5、5、10、20 nmol/L)能明显抑制DCs的抗原摄取功能;MTT法检测结果显示PGE2(2．5、5、10 nmol/L)刺激DCs能促进T细胞增殖的作用;荧光间标法检测结果显示PGE2(2．5、5、10 nmol/L)明显升高DCs细胞膜上EP4表达。结论 PGE2可以调节DCs功能,该作用可能与其调节EP4受体表达相关。     

槲皮素对人肺泡上皮细胞（A549）中ICAM-1表达的影响

目的 研究槲皮素对人肺泡上皮细胞(A549)中的细胞间粘附因子-1(ICAM-1)的表达影响.方法 用IL-1β构建人肺泡上皮细胞炎症模型,用RT-PCR和Western Blot技术检测ICAM-1的mBNA水平和蛋白水平的表达变化.结果 槲皮素对ICAM-1具有下调作用,且具有一定的浓度依赖性.结论 槲皮素通过抑制IL-1β而抑制ICAM-1,具有抗感染作用.     

小干扰RNA抑制肝癌细胞株BEL7402 ICAM-1基因表达的研究

目的研究小干扰RNA（siRNA）抑制肝癌细胞系BEL7402基因ICAM-1表达的可行性。方法根据ICAM-1基因设计shRNA片断，构建pGenesil-1／ICAM-1表达载体，转染BEL7402细胞，实时定量PCR和免疫组织化学方法检测肝癌细胞中ICAM-1基因表达抑制情况。结果该实验已成功构建了针对ICAM-1基因的pGenesil-1／ICAM-1质粒。实时定量PCR检测结果显示，BEL7402细胞经特异性siRNA作用后ICAM-1基因的表达受抑制，其Ct值由28．8降低到21．6，免疫组织化学结果显示：RNA干扰（RNAi）能特异而有效地抑制BEL7402细胞中ICAM-1基因的表达。结论构建的pGenesil-1／ICAM-1重组质粒能有效抑制ICAM-1基因在肝癌细胞株BEL7402中的表达，为肿瘤的生物学治疗提供了新的方法和材料。