IRE1α 影响非洲爪蟾胰腺发育

目的:探讨肌醇依赖性激酶1α(inositol requiring enzyme 1α,IRE1α)对非洲爪蟾胰腺发育的影响?方法:通过显微注射基因特异性反义寡核苷酸实现基因敲降;利用整体胚胎原位杂交方法检测基因表达? 结果:IRE1α表达于爪蟾发育中的胰腺;利用基因特异性反义寡核苷酸敲降IRE1α后,非洲爪蟾肠道明显异常,胰腺内外分泌标志性基因胰岛素?淀粉酶表达显著减少;胰腺前体细胞的标志基因pdx1和p48表达明显减少;敲降IRE1α下游基因X-盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)后,非洲爪蟾的胰岛素?淀粉酶表达也明显减少?结论:IRE1α影响非洲爪蟾胰腺发育,可能通过XBP1发挥作用?     

XBP1在非洲爪蟾胚胎发育中的作用

目的：探讨X盒结合蛋白1(X-box binding protein 1)对非洲爪蟾胰腺发育的影响。方法：利用western blot,原位杂交和免疫染色方法检测XBP1在胚胎发育各个阶段的表达;通过显微注射基因特异性反义寡核苷酸实现基因敲降,利用RT-PCR和整体胚胎原位杂交方法检测基因表达变化。结果：XBP1主要表达于非洲爪蟾胚胎发育中的神经、前肾、胰腺等器官中;敲降XBP1s在胚胎发育早期影响非洲爪蟾胚层形成相关基因,在胚胎发育后期影响胰腺发育相关基因。结论：XBP1s在胚胎发育早期影响胚层形成,在晚期影响胰腺的发育。     

MIA影响非洲爪蟾胚胎中胚层的形成

目的:探讨黑色素瘤抑制蛋白(melanoma inhibitory activity,MIA)在非洲爪蟾早期胚胎发育中的作用?方法:根据热带爪蟾MIA序列在非洲爪蟾EST数据库中找到MIA序列,利用RT-PCR扩增全长序列并克隆至pCS2+,用于测序?利用RT-PCR检测胚胎发育各阶段MIA mRNA的表达?通过显微注射特异的反义寡核苷酸morpholino(MO)敲降MIA;利用整胚原位杂交检测胚层标志性基因的表达?结果:克隆出非洲爪蟾MIA全长序列?在胚胎发育过程中MIA从受精卵开始持续表达?敲降MIA导致胚胎胚孔闭合延缓,中胚层标志基因xbra表达明显受抑,而内胚层标志性基因sox17α表达无明显改变?结论:MIA表达于非洲爪蟾胚胎发育各阶段,敲降MIA抑制中胚层的形成?     

XBPl在非洲爪蟾胚胎发育中的作用

目的：探讨Ｘ盒结合蛋白１（Ｘ-ｂｏｘ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ １,ＸＢＰ１）对非洲爪蟾胚胎发育的影响。方法：利用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ、原位杂交和免疫染色法检测ＸＢＰ１在胚胎发育各个阶段的表达;通过显微注射基因特异性反义寡核苷酸实现基因敲降,利用ＲＴ-ＰＣＲ和整体胚胎原位杂交法检测基因表达变化。结果：ＸＢＰ１主要表达于非洲爪蟾胚胎发育期的神经、前肾、胰腺等器官中;敲降ＸＢＰ１ｓ在胚胎发育早期影响非洲爪蟾胚层形成相关基因,在胚胎发育后期影响胰腺发育相关基因。结论：ＸＢＰ１ｓ在胚胎发育早期可能影响胚层形成,在晚期可能影响胰腺的发育。     

ETS1对非洲爪蛙早期胚胎发育的影响

目的:通过在非洲爪蛙胚胎中过表达ETS1探讨该基因对爪蛙胚胎早期发育的影响?方法:将克隆PCR获得的ETS1全长片段连接到质粒上,获得pCS2+-ETS1质粒;利用RT-PCR和Western blot检测ETS1 mRNA和蛋白在胚胎发育不同时期的表达情况;显微注射ETS1 mRNA入爪蛙胚胎,利用整胚原位杂交?定量PCR检测胚层标志性基因的表达;通过Western blot检测过表达ETS1对细胞凋亡和增殖的影响?结果:ETS1从受精卵时期即已开始表达,在器官形成期表达增强,过表达ETS1抑制了细胞分化以及神经胚期中胚层和外胚层标志基因表达,凋亡相关蛋白表达增加,增殖相关蛋白无明显变化?结论:ETS1表达于非洲爪蛙胚胎发育各阶段,过表达ETS1抑制了中胚层和外胚层发育,促进细胞凋亡但不影响细胞增殖?     

大鼠肝细胞GSH转运体系在非洲爪蟾卵中的表达

探讨大鼠肝细胞ＧＳＨ转运体系在非洲爪蟾卵中表达的可能性。用大鼠肝细胞ｍＲＮＡ注射蛙卵，检测蛙卵转运ＧＳＨ的活性。结果：注射大鼠肝细胞ｍＲＮＡ的蛙卵，３ｄ后能表达摄聚和释放ＧＳＨ的转运活性，而注射水的蛙卵则不显著学种转运活性。     

异戊酸对非洲爪蟾蝌蚪的制动作用及其相关机制

目的观察异戊酸对非洲爪蟾蝌蚪运动的影响,探讨异戊酸对非洲爪蟾卵母细胞膜上甘氨酸耦联的抑制性氯离子通道的影响及其与异戊酸麻醉样作用的关系。方法对非洲爪蟾的蝌蚪在体观察异戊酸的制动效应;采用微注射法使非洲爪蟾卵母细胞上过度表达α1甘氨酸受体,并通过双电极电压钳技术测量异戊酸对甘氨酸耦联的抑制性氯离子通道功能的影响。结果异戊酸在非洲爪蟾蝌蚪中可产生类麻醉效应,其EC50为（44.8±3.7）mmol/L;Hill系数为4.1±1.2;浓度为5.0、7.5、10、20mmol/L的异戊酸可明显增强甘氨酸诱发的氯离子通道电流强度,增强程度为（19.4±4.9）%、（78.6±5.6）%、（107±27）%、（187±39）%,有显著性差异（P＆lt;0.01）。异戊酸可呈浓度依赖性地增加通过非洲爪蟾卵母细胞上甘氨酸耦联抑制性氯离子通道的电流。结论异戊酸对非洲爪蟾蝌蚪具有制动作用,其机制可能与增强对甘氨酸耦联抑制性氯离子通道的电流有关。     

Miox基因在爪蟾胚胎发育过程中的时间和空间表达谱分析

目的 研究肌醇加氧酶（myo-inositol oxygenase,Miox）基因在物种进化及爪蟾胚胎发育过程中的时间和空间表达的分布特点。方法 利用半定量RT-PCR观察Miox在爪蟾胚胎发育过程中的时间表达模式,利用整体原位杂交方法观察Miox在爪蟾胚胎发育过程中的空间表达模式。结果 RT-PCR结果显示Miox基因在胚胎发育第26期以前都没有表达,至胚胎发育第28期开始有微量表达,随着胚胎的发育其表达量逐渐增高;胚胎发育第40期表达明显升高,第41期时达到最高,第45期时表达有所下降。与胚胎发育第28、34期相比,第40、41、45期表达上调（P<0.05）;与胚胎发育第40期相比,第41期表达上调（P<0.05）;然而,同胚胎发育第41期相比,第45期表达下调（P<0.05）。整体原位杂交方法发现在胚胎发育30期以前均没能检测到Miox在爪蟾任何器官中的表达,从33期开始,Miox在爪蟾前肾有很微弱的表达,且Miox的表达随着发育的进展逐渐升高。整体原位杂交方法结果同RT-PCR结果相类似,直至第39～40期,Miox的表达才明显升高,并且在随后的时期都以同样高的水平表达。另外,Miox基因在爪蟾胚胎发育过程中均仅仅在原肾小管表达。结论 Miox是一个肾脏特异性基因,对于研究肾脏发育可能提供一个特异性标记。     

大鼠脑N-甲基-D-门冬氨酸受体在非洲爪蟾卵母细胞的表达

从成年和14d龄大鼠脑中提取mRNA,并分别注入到非洲爪蟾卵母细胞内,以全细胞电压钳位法测N-甲基-D-门冬氨酸（NMDA）引起内向膜电流,成年组为（5.2± 1.3）nA,14d龄组为（13.3±0.8）nA,组间比较差异显著（P<0.01）;以最小反应模型分析14d龄组的NMDA量效反应曲线呈S形,K值为86μmol/L。结果表明14d龄鼠脑NMDA受体在非洲爪蟾卵母细胞表达较成年鼠好。