SIV感染CEM×174细胞后CD28家族免疫调控分子mRNA的动态变化

目的 观察猴免疫缺陷病毒(SIV)感染CEM×174细胞后CD28家族免疫调控分子CD28、BTLA、ICOS、PD-1 mRNA表达水平的动态变化. 方法 以SIVmac251感染接种CEM×174细胞,收集感染后12,24,48,72,96,120,144,168,216 h共8个时间点及正常未感染细胞,提取细胞RNA,以染料法逆转录荧光定量PCR法检测SIV 、CD28 、ICOS 、PD-1 、BTLA mRNA的表达. 结果 SIV mRNA在48 h时表达即显著升高(P<0.05),随着SIV mRNA量的逐渐上升,ICOS 在48 h时开始显著升高(P<0.05),而CD28 、PD-1 mRNA在120 h时才出现表达显著增加(P<0.05);BTLA mRNA则呈现下降趋势,并在168 h开始出现显著下调(P<0.05). 结论 除BTLA以外,所检测SIV感染后细胞中促进免疫激活和抑制免疫的免疫调节因子(ICOS、PD-1、CD28)表达均显著升高,提示AIDS中存在免疫紊乱.     

B7/CD28家族共刺激分子在蒙古族儿童的川崎病发病机制中的作用

目的：阐明B7/CD28家族刺激分子在蒙古族儿童川崎病的发病机制中起到的重要作用。方法：通过荧光定量PCR对蒙古族儿童川崎病患者和用IVIG后ICOS和CTLA-4mRNA表达量变化进行研究。结果：川崎病组CTLA-4mRNA表达水平显著降低,比较有显著性差异（P〈0.05）,而ICOSmRNA表达水平显著增高,差异显著（P〈0.05）。川崎病IVIG治疗组ICOSmRNA的表达显著降低（P〈0.05）,CTLA-4mRNA表达显著升高（P〈0.05）。结论：B7/CD28家族成员中的活化及抑制作用,以及它们之间的相互关系,不仅可以探讨川崎病的发病机制,而且可能为它的免疫治疗提供新的思路。进而更好地为少数民族儿童的身体健康提供基础。     

川崎病患儿外周血中FOXP3 mRNA表达与CD4~＋CD25~＋调节性T细胞的变化

目的探讨CD4＋CD25＋调节性T细胞在川崎病（KD）发病机制中作用。方法 32例KD患儿为研究对象,以年龄匹配的30名儿童作为对照组（其中15例急性呼吸道感染的发热患儿为非KD发热组,15名健康体检儿童为健康组）,KD患儿分别于静注丙种球蛋白（IVIG）治疗前和静注IVIG治疗后热退2～3 d取外周血用流式细胞仪测CD4＋CD25＋调节性T细胞,并用RT-PCR测定外周血单个核细胞（PBMC）叉头/翼状螺旋转录因子（FOXP3）mRNA的表达水平。结果急性期KD患儿外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞比例与对照组相比均显著降低（P〈0.01）,而IVIG治疗后热退2～3 d,其比例显著升高,接近于正常水平,而外周血PBMC FOXP3 mRNA表达水平也出现同样的改变。结论 CD4＋CD25＋调节性T细胞可能参与了KD的发病机制。     

川崎病患者血中CD4~+CD25~+调节性T细胞与血清IL-4、IFN-γ水平关系

目的探讨CD4+CD25+调节性T细胞在川崎病(KD)发病机制中的作用。方法 KD组患儿32例;对照组30例中分为两组:非KD发热组15例为急性呼吸道感染的发热患儿,健康组15例为健康体检患儿。KD患儿分别于静注丙种球蛋白(IVIG)前和IVIG治疗后热退2~3天取外周血,用流式细胞仪测定CD4+CD25+调节性T细胞比例,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平并分析其关系。结果急性期KD患儿外周血CD4+CD25+调节性T细胞比例[(4.40±1.31)%]与非KD发热组[(6.37±1.99)%]和健康对照组[(7.45±3.18)%]相比均明显降低(P<0.01),而IVIG治疗后热退2~3天,CD4+CD25+调节性T细胞比例[(6.88±2.50)%]明显升高,接近于正常水平。同时在KD急性期,血清IFN-γ、IL-4水平均明显升高,在IVIG治疗后热退2~3天无明显下降。且在KD急性期血清IFN-γ、IL-4水平与CD4+CD25+调节性T细胞比例成负相关性(r=-0.838,P<0.01)。在静注IVIG后热退2~3天,血清IFN-γ、IL-4水平与CD4+CD25+调节性T细胞比例无明显相关性(r分别为-0.04和-0.072,P>0.05)。结论 CD4+CD25+调节性T细胞可能通过对体内Th1和Th2细胞的调控参与了KD的发病机制。     

SIV感染CEM&#215;174细胞后CD28家族免疫调控分子mRNA的动态变化

目的观察猴免疫缺陷病毒（SIV）感染CEM&#215;174细胞后CD28家族免疫调控分子CD28、BTLA、ICOS、PD-1 mRNA表达水平的动态变化。方法以SIVmac251感染接种CEM&#215;174细胞,收集感染后12,24,48,72,96,120,144,168,216h共8个时间点及正常未感染细胞,提取细胞RNA,以染料法逆转录荧光定量PCR法检测SIV、CD28、ICOS、PD-1、BTLA mRNA的表达。结果SIV mRNA在48h时表达即显著升高（P〈0．05）,随着SIV mRNA量的逐渐上升,ICOS在48h时开始显著升高（P〈0．05）,而CD28、PD-1 mRNA在120h时才出现表达显著增加（P〈0．05）;BTLA mRNA则呈现下降趋势,并在168h开始出现显著下调（P〈0．05）。结论除BTLA以外,所检测SIV感染后细胞中促进免疫激活和抑制免疫的免疫调节因子（ICOS、PD-1、CD28）表达均显著升高,提示AIDS中存在免疫紊乱。     

静脉注射丙种球蛋白对川崎病外周血单个核细胞CD40L表达的影响

目的：观察川崎病（kawasaki disease,KD)急性期患儿外周血单个核细胞（PBMC）表面CD40配体（CD40L）表达水平，及静脉注射丙种球蛋白（IVIG）治疗后CD40L的变化，以期探讨IVIG治疗机制及冠状动脉病变（CAL）发生的可能机制。方法：用流式细胞技术法检测11例川崎病急性期患儿及1g/kg IVIG治疗后其PBMC表达CD40L阳性细胞率及平均荧光强度（MFI）。结果：川崎病患者PBMC表面CD40L表面较正常对照持久；对1g/kg IVIG敏感者治疗后患者PBMC上表达CD40L下降，与治疗前比较有显著性差异；对1g/kg IVIG不敏感者治疗后PBMC中高表达CD40L的细胞数增多，与正常对照比较有显著性差异；2例急性期已发生冠状动脉扩张的患儿其PBMC上的CD40L表达的阳性细胞率及平均荧光强度均明显高于无冠状动脉病变者。结论：CD40L升高在川崎病发病及冠状动脉病变中起一定作用，IVIG可能通过下调川崎病PBMC上CD40L表达水平预防川崎病冠状动脉病变的发生。     

小儿川崎病38例外周血糖皮质激素受体检测及其临床意义

目的:探讨川崎病(KD)急性期外周血糖皮质激素受体(GR)α、β水平的变化,为其选择糖皮质激素(GC)治疗提供理论依据。方法:采用ELISA法检测38例急性期KD患儿静脉注射丙种球蛋白(IVIG)前后血中GRα和GRβ水平,并与20例正常对照组进行比较。结果:IVIG静注前KD患儿GRα水平与对照组比较无显著性差异(P>0.05);IVIG后第3天、7天内,GCRα水平较对照组明显下降(P<0.01)。KD患儿GRβ水平在IVIG治疗前后较对照组显著降低(P<0.01)。KD冠状动脉异常组与冠状动脉正常组治疗前后GRα、GRβ水平比较无显著性差异(P>0.05)。结论:KD急性期及早给予外源性GC,则可以发挥更强的抗炎作用。     

猴艾滋病模型CD28家族mRNA动态变化及中药干预作用

目的观察猴艾滋病毒(SIV)感染猴模型外周血CD28家族免疫共刺激分子mRNA动态变化及中药复方艾可清的干预作用。方法 SIVmac251感染12只恒河猴,分别于感染前、感染后8周每周、给药前(SIV感染第10周)、给药后每4周时间点采集外周静脉血,分离PBMC,以定量PCR检测CD28、ICOS、PD-1、CTLA-4及HLA-DRmRNA。结果所观察的4种免疫共刺激分子及免疫活化标志物HLA-DR mRNA量出现了不同程的升高,其中HLA-DRmRNA高峰出现在SIV感染后第2周,而4种免疫共刺激分子mRNA峰值均出现在SIV感染第5周之后。艾可清使ICOS、CD28、PD-1及HLA-DRmRNA量出现不同程度的降低,而对CTLA-4mRNA量无显著影响。结论 SIV感染猴外周血PBMC负性和正性CD28家族免疫共刺激分子mRNA均出现不同程度的升高;艾可清可能通过同时降低正性及负性免疫共刺激分子mRNA表达而减轻艾滋病免疫活化。     

生殖器疱疹患者外周血淋巴细胞B7-CD28/CTLA-4的检测分析

目的研究外周血B7-CD28/CTLA-4（CD152）T淋巴细胞活化协同刺激分子在生殖器疱疹（Genital herpes,GH）患者发病机制中的作用。方法用流式细胞仪检测51例GH患者和15例健康体检者外周血淋巴细胞CD80/86及CD4＋/CD8＋T淋巴细胞中B7-CD28/CTLA-4的表达。结果GH患者恢复组与对照组比较,CD80、CD86的阳性表达较对照组明显升高,差异有统计学意义（P〈0.05）。其余各组间CD80、CD86比较差异无统计学意义。恢复组CD8＋/CD28阳性表达显著高于非复发组（P〈0.05）;非复发组显著高于对照组（P〈0.05）;复发组的CD4＋/CD152、CD8＋/CD152的阳性表达显著高于非复发组（P〈0.05）。其余各组间CD4＋/CD152、CD8＋/CD152及CD4＋/CD28、CD8＋/CD28表达差异无统计学意义。结论单纯疱疹病毒感染可诱导CD80、CD86、CD28和CD152活化增殖,高表达负性共刺激分子和分泌抑制性细胞因子,通过多种机制抑制机体的抗病毒免疫应答。     

丙种球蛋白对川崎病患儿血清TNF-α表达的影响

目的:探讨丙种球蛋白对川崎病(KD)患儿血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达变化的影响.方法:选择我院确诊为KD的患儿46例,按有无冠状动脉损伤分为损伤组20例和无损伤组26例;另外随机选择30例年龄相仿的健康儿童作为对照组.采用酶联免疫吸附法分别检测经丙种球蛋白治疗前后的KD患儿及对照组患儿血清TNF-α表达变化.结果:治疗前,KD患儿急性期血清TNF-α表达水平显著高于对照组(P<0.05);与无损伤组比较,损伤组血清TNF-α表达水平升高更显著(P<0.05);与治疗前相比,治疗后KD患儿血清TNF-α表达水平显著降低 (P<0.05).结论:血清TNF-α表达水平在儿童KD急性期、尤其伴有冠状动脉损伤时显著升高,NF-α水平动态变化可用于评价川崎病患儿病情及其预后.     

川崎病患儿T细胞亚群表达及其临床意义

目的探讨川崎病患儿血CD3,CD4,CD8,CD4/CD8的差异以及在预测冠状动脉病变风险中的临床意义。方法选取2004-01～2007-04在太原市妇幼保健院住院的川崎病患儿42例作为观察组,抽取静脉血,同时以40例正常体检儿童作为正常对照组抽取外周静脉血。用流式细胞仪检测CD3,CD4,CD8,CD4/CD8。用二维超声心动图观察观察组心脏冠状动脉病变。结果观察组患儿CD3,CD8较对照组显著降低(P<0.01),CD4,CD4/CD8显著升高(P<0.01)。冠状动脉病变组CD3,CD8明显低于非冠状动脉病变组(P<0.01),而CD4/CD8显著高于非冠状动脉病变组(P<0.01)。结论T细胞亚群失衡在川崎病的发病中起重要作用,对预测冠状病变发生有一定的意义。     

太子参多糖粗提物对小鼠免疫功能的影响

为研究太子参多糖粗提物对小鼠免疫功能的影响。通过小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能测定、免疫器官重量法、T细胞亚群CD3、CD4、CD,测定等方法，评价太子参多糖对小鼠免疫功能的影响，结果显示太子参能增加免疫器官重量，提高正常小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数，能不同程度地使CD3、CD4、CD4／CD8升高，使CD8下降。说明太子参多糖粗提物对小鼠非特异性免疫功能有促进作用。     

SLE患者外周血中CD23+、CD19+细胞表达状况的研究

目的研究外周血中CD23 、CD19 及CD23 /CD19 细胞的异常表达在SLE发病及病情进展中的意义。方法应用流式细胞术检测活动期与稳定期SLE患者外周血中CD19 、CD23 及CD23 /CD19 细胞的表达率;同时应用流式直方图分析细胞表面CD19,CD23分子的表达密度。结果活动期SLE患者组CD23 、CD19 及CD23 /CD19 细胞表达率均高于稳定期SLE患者组及正常对照组,差异均有显著性意义;稳定期SLE患者组CD23 及CD23 /CD19 与正常对照组比较无显著性差异;稳定期SLE患者组CD19 细胞表达率高于正常对照组,但差异无显著性意义。且CD19 、CD23 及CD23 /CD19 细胞的表达率与病情积分及ANA均成正相关。活动期SLE患者组CD23的平均荧光强度与对照组及稳定期SLE组比较均有显著性差异;活动期SLE患者组CD19的平均荧光强度与对照组、稳定期SLE组比较及稳定期SLE患者组CD19、CD23的平均荧光强度与对照组比较均无显著性差异。结论外周血中CD23 、CD19 及CD23 /CD19 细胞的异常表达在SLE发病机理及病情进展中起重要作用,检测CD23 、CD19 及CD23 /CD19 细胞的表达情况对SLE病情监控具有一定的应用价值。     

GPI锚定蛋白检测诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿症的临床价值

目的：探讨阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）患者不同外周血细胞GPI锚定蛋白的表达情况,为PNH的诊断和鉴别诊断提供依据。方法：采用流式细胞术检测32例PNH患者外周血各类细胞膜上CD55、CD59、 CD16及CD14的表达百分率。结果： PNH患者外周血红细胞、粒细胞膜上CD55、CD59表达均明显减少,与正常对照组比较差异有显著性（P<0.001）,且粒细胞上CD55、CD59表达率低于红细胞（P<0.05）;血小板CD55、CD59表达率也较对照组减少（P<0.05）;有27例PNH患者的淋巴细胞CD55、CD59表达降低,其缺失率达30%,低于粒细胞和红细胞;CD16在粒细胞上表达量差异很大（34%～83%）,与对照组比较差异有显著性（P<0.001）;在单核细胞上可见CD14表达缺失的PNH克隆,CD14表达比例明显低于正常对照组（P<0.001）。结论： 检测外周各系血细胞CD55和CD59可以使典型PNH的诊断更加可靠,使部分缺乏典型临床表现的PNH明确诊断。检测CD16和CD14对排除PNH具有重要意义。     

B7-CD28共刺激通路与系统性红斑狼疮的相关性研究

目的探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血淋巴细胞（PBLC）CD28、B7-1（CD80）及B7-2（CD86）的表达及其意义，探讨SLE患者共刺激通路是否异常。方法采用流式细胞仪检测30例SLE患者外周血淋巴细胞的CD28、B7-4，及B7-2，并以15例正常人作为对照。结果SLE患者外周血淋巴细胞中B7-1的表达水平与正常对照组差异无显著性，而B7-2的表达水平明显低于正常对照组（P〈0.01）；SLE患者外周血淋巴细胞中CD28的表达水平明显低于正常对照组（P〈0.05）。结论SLE患者PBLC上的B7-2及CD28的表达降低，影响B7-CD28共刺激通路，可能与SLE的发病有关。     

LPS刺激对大鼠视网膜小胶质细胞CD80、CD86和CD40表达的影响

目的 研究脂多糖(LPS)刺激对CD80、CD86、CD40在大鼠视网膜小胶质细胞上表达的影响,探讨视网膜小胶质细胞在视网膜和视神经病变中与T细胞活化的关系.方法 分离培养大鼠视网膜小胶质细胞并进行OX42染色鉴定,当细胞培养达80%融合状态时分为正常培养组和LPS刺激组.采用RT-PCR法检测两组细胞CD80、CD86和CD40 mRNA的表达,硝酸还原法和ELISA法检测两组细胞一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌量.结果 RT-PCR检测显示,LPS刺激组的视网膜小胶质细胞CD80、CD86和CD40 mRNA的表达较正常培养组显著增加,两组比较差异有统计学意义(均P<0.01).正常培养组的视网膜小胶质细胞有少量NO和TNF-α分泌,LPS刺激组的小胶质细胞培养上清液中NO和TNF-α的分泌量较正常组显著增加[(18.10±1.57)μmol/L vs (1.55±0.15)μmol/L,(51.07±4.30)pg/mL vs (2.37±0.31)pg/mL],两组比较差异有统计学意义(均P<0.01).结论 培养的大鼠视网膜小胶质细胞有共刺激分子表达,LPS刺激后表达上调,提示视网膜小胶质细胞可能与T细胞活化有关.     

索拉菲尼诱导大鼠肝细胞癌形成过程中巨噬细胞和自然杀伤细胞的聚集

目的 探讨多分子靶点药物索拉菲尼(Sorafenib)对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)形成过程中巨噬细胞标记物CD68和自然杀伤细胞标记物CD57的分布、表达情况的影响.方法 改良法建立HCC模型,设立正常对照组(A组)、单纯模型组(B组)、早期单倍组(C组)、早期双倍组(D组)、晚期单倍组(E组)、晚期双倍组(F组),在HCC形成早期和晚期应用单、双倍剂量的索拉菲尼对C～F组进行干预,用免疫组织化学方法动态观察HCC组织中CD57、CD68和CD34的变化.结果 B组CD57、CD68阳性细胞的数目逐渐增加,各个实验组(C～F组)分别在第12、14周时出现峰值后不同程度的减少,而D、F组在第18周后两者数目减少不明显,其中第20、22周时D、F组分别与B组相比均显著增加(P＜0.05),同时D组比C组,F组比E组以及D组比F组亦显著增加(P＜0.01,P＜0.05),其余各组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).B组CD34阳性细胞数目逐渐增加,各个实验组(B～F组)在第16周后随诱癌时间延长有不同程度的减少,D组与C、E、F组相比亦显著减少(P＜0.05).结论 索拉菲尼不仅可以抑制HCC组织的血管生成,还可以诱导HCC组织中的巨噬细胞和自然杀伤细胞的聚集,以早期双倍剂量组更明显,提示索拉菲尼治疗HCC的分子机制可能存在一种新的免疫调节机制,并呈剂量依赖性.     

多参数流式细胞术分析肺癌幼稚细胞免疫表型CD133、CD34、CD44的表达

目的 研究CD133、CD34、CD44在肺癌组织中的表达及其不同表达组合所构成的细胞亚群.方法 收集术前病理确诊的肺癌新鲜组织40例,外周正常肺组织10例,制备成单细胞悬液,选用CD133、CD34、CD44、CD117、CD43、CD45、LIN(CD2,CD3,CD31,CD64)单克隆抗体荧光染色,采用流式细胞仪分析上述表面抗原在肺癌组织及正常肺组织细胞中的分布,通过流式双参数图分析CD133、CD34、CD44双抗原组合表达形成的细胞亚群.结果 肺癌实质细胞中(LIN系列及CD45阴性),CD133、CD34、CD44表达弱阳性,CD117、CD43阴性;非参数秩和检验示,CD133、CD34、CD44在肺癌及正常肺组织幼稚细胞中表达水平差异无统计学意义;在肺鳞癌与肺腺癌细胞中,CD44 、CD133-CD34-、CD133 CD44 、CD133 CD44-、CD133 CD34 、CD133-CD34 及CD133-CD44 的表达量不同(P<0.05),其余表型的差异均无统计学意义.聚类分析显示,肺癌幼稚细胞可主要归类为4种亚型.结论 CD133、CD34、CD44可能是肺癌幼稚细胞标记,有利于更好研究肺癌细胞发育和演变的过程.     

CD19、CD56、CD2在急性髓性白血病的表达

目的 探讨CD19、CD56、CD2在急性髓性白血病（AML）的表达情况及在微小残留病检测中的意义。方法 选择AML初发患者130例，采用三组四色荧光标记单克隆抗体组合（CD34/CD13/CD45/CD19、CD34/CD56/CD33/CD45和CD34/CD2/CD33/CD45），用多参数流式细胞术对初发AML病人骨髓细胞进行检测。结果 在AML中CD19阳性表达率为2.31%（3/130例），CD56为3.75%（3/80例），而CD2为1.25%（1/80例）；在急性早幼粒细胞白血病（M3）无表达。结论CD19、CD56、CD2在急性髓性白血病的表达率很低；CD56、CD2可作为AML微小残留病（MRD）检测的指标；CD19在AML微小残留病检测中无意义。     

加味青蒿鳖甲汤对急性白血病患者骨髓细胞CD抗原的影响

观察加味青蒿鳖甲汤对急性髓系白血病缓解期患者骨髓细胞CD34、CD13/CD33表达的影响.方法：将25例急性髓系白血病缓解期患者随机分为治疗组和对照组.两组均按常规化疗方案（DA或MA或HA方案）巩固维持治疗,治疗组加服加味青蒿鳖甲汤煎剂.观察治疗前后患者骨髓细胞CD34、CD13/CD33表达率.结果：治疗组骨髓细胞CD34表达率及CD13/CD33表达率有所下降.结论：加味青蒿鳖甲汤对急性髓系白血病缓解期患者骨髓细胞CD34、CD13/CD33表达有抑制作用.