应用等位基因特异性PCR检测血管紧张素原基因突变

目的:建立检测血管紧张素原(angiotensinogen,AGT)基因2种常见突变的等位基因特异性PCR技术。方法:应用针对AGT基因T174M和M235T这2种常见的突变位点设计的等位基因特异性PCR技术,对海南汉、黎族人群中AGT基因突变类型进行了检测,同时对经上述等位基因特异性PCR检测的样本进行序列测定。结果:在海南汉、黎族人群中,T174M突变位点可检测出TT、TM、MM 3种基因型,M235T突变位点可检测出MM、MT、TT 3种基因型,用等位基因特异性PCR鉴定的AGT基因突变的基因分型结果与序列测定结果完全符合。结论:等位基因特异性PCR技术操作简便,重复性和稳定性好,可作为鉴定AGT基因突变类型的可行方法。     

CETP基因I405V突变位点多态性与冠心病关系的再探讨

目的:以百岁老人为健康对照对CETP基因I405V突变位点多态性与冠心痛关系进行再探讨.方法:利用等位基因特异性PCR技术,对334例海南汉族CHD患者及276名百岁健康老人CETP基因I405V突变位点多态性进行检测,并利用SPSS13.0软件对检测结果进行统计学分析.结果:两组I405V基因型及等位基因频率分布比较...     

STAT6基因G2964A位点多态性与海南黎族支气管哮喘的关联性研究

目的 探讨STAT6基因多态性与海南黎族支气管哮喘之间的关联性.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)等方法,分别对108例海南黎族成人哮喘患者、115例黎族健康成人进行了STAT6基因G2964A位点多态性分析.比较两组基因型和等位基因频率.结果 海南黎族人群基因型以GA型最为常见,其次为AA型和GG型,其等位基因以A型最为常见,其次为G型.两组基因型频率和等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05).哮喘组GA型、AA型、GG型患者血清总IgE水平明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01),但哮喘组及对照组GG、GA 和AA三种基因型之间血清总IgE水平比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 STAT6基因G2964A位点多态性与海南黎族哮喘的易感性和血清总IgE水平无显著相关性,可能不是哮喘独立的危险因素.     

NPPB基因多态性与海南黎族原发性高血压相关性研究

目的：探讨脑钠肽基因(NPPB)的RS3753581突变位点与海南黎族人原发性高血压发病的相关性。方法采用特异性等位基因PCR方法对海南626例黎族高血压病患者(观察组)及616例黎族健康人(对照组)的NPPB基因RS3753581突变位点进行多态性检测。采用SPSS16.0统计学软件分析两组基因型频率以及等位基因频率。结果观察组突变位点RS3753581的CC、CA、AA基因型的频率分布分别为89.7%(562/626)、7.5%(47/626)、2.8%(17/626),对照组分别为98.0%(604/616)、1.0%(6/616)、1.0%(6/616),两组比较差异有统计学意义(χ2=7.206, P=0.027<0.05)。观察组C、A等位基因频率分别为93.5%(1170/1252)、6.5%(82/1252),对照组分别为98.5%(1214/1232)、1.5%(18/1232),两组比较差异有统计学意义(χ2=6.885,P=0.009<0.05)。结论脑钠肽基因突变位点RS3753581多态性与海南黎族人高血压病具有相关性。     

海南省汉、黎族人群中6种β-地中海贫血基因突变的研究

目的:研究海南省汉、黎族人群β-地中海贫血的分子基础.方法:应用等位基因特异性聚合酶链反应(PCR)技术筛查海南省汉、黎族人群中的6种β-地中海贫血突变类型:CD41-42(-CTTT)缺失突变、IVSⅡ654(C→T)突变、CD17(A→T)无义突变、TATA盒nt-28(A→G)突变、CD71-72( A)移码突变和CD26(G→A)突变.结果:在675例海南汉族人中检出17例β-地中海贫血携带者,携带率为2.52%,其中CD41-42(-CTTT)缺失突变杂合子9例(携带率为1.33%);IVSⅡ654(C→T)突变杂合子5例(携带率为0.74%);TATA盒nt-28(A→G)突变杂合子2例(携带率为0.30%)CD71-72( A)移码突变杂合子1例(携带率为0.15%);未检出CD17(A→T)无义突变和CD26(G→A)突变2种突变类型.在321例海南黎族人中检出36例CD41-42(-CTTT)缺失突变杂合子携带者,携带率为11.21%,未发现其他5种突变类型.结论:海南汉、黎族人群均是β-地中海贫血的高发群体,海南汉族人群中β-地中海贫血的基因突变类型主要以CD41-42(-CTTT)缺失突变、IVSⅡ654(C→T)突变、TATA盒nt-28(A→G)突变和CD71-72( A)移码突变4种突变类型常见,而海南黎族人群中8-地中海贫血的基因类型主要是CD41-42(-CTTT)缺失突变.     

CETP基因多态性及单倍型与蒙古族人群原发性高血压的关系

摘要：目的  分析胆固醇酯转运蛋白（CETP）基因TaqIB、D442G、I405V多态性及其单倍型与中国蒙古族人群原发性高血压（EH）的相关性。方法  从内蒙古自治区随机选取高血压患者883例、健康对照1 044例进行病例对照研究。应用聚合酶链反应（PCR）和PCR产物直接测序法鉴定多态性位点的基因型，采用Haploview进行Hardy-Weinberg平衡和单倍型分析。结果  TaqIB、D442G2、I405V基因型及等位基因的分布在EH组与对照组比较，差异无统计学意义（P >0.05）；但B2-G、B2-G-I单倍型在EH组中的分布频率低于对照组[B2-G：OR=0.359（95%CI：0.188，0.689）P =0.001；B2-G-I：OR=0.329（95%CI：0.157，0.691）P =0.002]。结论  在中国内蒙古自治区蒙古族人群中，CETP基因TaqIB、D442G、I405V 3个位点的突变不能独立影响EH发病风险，但单倍型B2-G、B2-G-I携带者的EH发病风险显著降低，可能是降低该人群EH易感性的保护性因素。

     

CETP基因TaqIB多态性与海南汉族人群原发性高血压的相关性

目的：分析CETP基因TaqIB多态性与海南汉族人群原发性高血压(EH)的相关性。方法收集2013年3月至2014年1月在海南省干部疗养院进行体检及治疗的海南省汉族301名健康对照人群(对照组)和218例EH患者(EH组)的全血DNA,利用多聚酶链式反应/限制性片段长度多态性(PCR/RFLP)检测CETP基因TaqIB多态位点的基因型,利用SPSS21.0对检测结果进行统计学分析。结果 EH组人群的B1B1、B1B2和B2B2频率分别为38.53%、47.25%、14.22%,对照组人群分别为45.18%、39.87%、14.95%。EH组人群的B1和B2等位基因频率分别为62.16%、37.84%,对照组分别为65.12%、34.88%,上述各项指标组间两两比较差异均无统计学意义（P>0.05）;EH组CETP基因TaqIB位点B1B1、B1B2和B2B2基因型和B1/B2等位基因频率分布和对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 CETP基因TaqIB位点多态性与海南汉族人群EH无显著相关性。     

海南省黎族人群中β-地中海贫血CD26(G→A)突变的研究

目的:建立β-地中海贫CD26(G→A)突变的基因诊断快速、有效的直接检测方法;筛查海南省黎族人群中CD26(G→A)突变的携带率。方法:应用等位基因特异性聚合酶链反应(PCR)技术筛查海南省白沙、昌江、陵水、琼中、保亭等县黎族人群中β-地中海贫血CD26(G→A)突变,并对1例β-地中海贫血高危胎儿进行了产前基因诊断。结果:共筛查了788例黎族人DNA标本,未发现β-地中海贫血CD26(G→A)突变;产前基因诊断结果:父亲为CD71-72(+A)/N杂合子,母亲为CD26(G→A)/N杂合子,胎儿正常,胎儿出生后的基因分析验证结果与产前基因诊断完全一致。结论:CD26(G→A)突变不是海南省黎族人群中主要的β-地中海贫血的基因类型;作者建立的检测CD26(G→A)突变的等位基因特异性PCR可作为β-地中海贫血基因诊断和产前基因诊断的一种快速、有效、经济的直接检测方法。     

山羊UBA52基因多态性及其与繁殖性能的关系

根据牛UBA52基因序列,设计3对引物(U1～ U3),分别扩增随机选取的济宁青山羊和辽宁绒山羊样本,PCR产物克隆测序,序列比对结果显示仅在U3的扩增产物中发现G63A和T181C突变.设计引物U4,利用PCR-RFLP技术分别在性早熟、高繁殖力品种(济宁青山羊、南江黄羊、马头山羊)和性晚熟、低繁殖力品种(辽宁绒山羊、内蒙古绒山羊、太行山羊)中检测上述位点的多态性,并分析2个突变位点对山羊性早熟和高繁殖力的影响.对于G63A位点,在济宁青山羊和南江黄羊中检测到GG、GA和AA3种基因型,在马头山羊、辽宁绒山羊、内蒙古绒山羊、太行山羊中只检测到GG和GA基因型;该突变位点不同基因型分布在性早熟品种和性晚熟品种间存在一定的差异;济宁青山羊GG、GA和AA基因型频率分别为0.53、0.44和0.03,AA型和GA型母羊平均产羔数分别比GG型多0.85只(P＜0.05)和0.49只(P＜0.05),AA型与GA型之间差异不显著(P＞0.05).对于T181C位点,在南江黄羊和内蒙古绒山羊中检测到CC、CT和TT3种基因型,在济宁青山羊、马头山羊、辽宁绒山羊、太行山羊中只检测到CC和CT两种基因型;该突变位点不同基因型分布在性早熟品种和性晚熟品种间没有明显差异;济宁青山羊CC和CT基因型频率分别为0.91和0.09,两种基因型个体间产羔数差异不显著(P＞0.05).本研究结果初步表明,UBA52基因63位点与山羊的性早熟可能存在一定关联,A等位基因可能是提高山羊产羔数的一个潜在有效的DNA标记.     

海南黎族、汉族高血压ACE基因多态性相关性研究

目的 研究海南黎族、汉族高血压ACE基因多态性的相关性.方法 采用聚合酶链反应(PCR)检测,对海南黎族111例高血压患者、146例黎族正常人、海南汉族106例高血压患者、97例汉族正常人的ACE基因插入/缺失(I/D)多态性检测,观察DD、DI、II基因型频率及等位基因频率,并对所有普通PCR定为DD型的样本进行插入特异性PCR检测,以减少误分型率.并调查经典危险因素.结果 海南黎族高血压组DD、DI、II基因频率分别为10.8%、37.8%、51.4%;D及I等位基因频率分别为29.7%、70.3%.正常对照组DD、DI、II基因型频率分别为13.0%、43.8%、43.2%;D及I等位基因频率分别为34.9%、65.1%.两组之间DD、DI、II基因型频率及D、I等位基因频率均无显著性差异.汉族高血压DD、DI、II基因频率为16.0%、28.3%、55.7%;D及I等位基因频率分别为30.2%、69.8%.汉族正常人DD、DI、II基因频率15.5%、44.3%、40.2%,D及I等位基因频率分别为37.6%、62.4%.两组之间DD、DI、II基因型频率及D、I等位基因频率有显著性差异(P＜0.05).黎族、汉族高血压组与正常对照组比较,体重指数(BMI)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)有显著性差异(P＜0.05);黎族高血压组收缩压,舒张压与正常对照组有显著性差异(P＜0.05);汉族高血压组收缩压、舒张压与正常对照组有显著性差异(P＜0.05).结论 在海南黎族高血压和黎族正常人的D等位基因频率均比I等位基因频率低;ACE基因I/D多态性与黎族高血压无显著关联;海南汉族高血压和汉族正常人D等位基因频率均比I等位基因频率低;ACE基因I/D多态性与汉族高血压的发病有相关性,是汉族高血压的主要致病基因,早期应用血管紧张素转化酶抑制剂的治疗干预.     

Cholesteryl ester transfer protein levels and gene deficiency in Chinese patie nts with cardio-cerebrovascular diseases

Objective To detect cholesteryl ester transfer protein (CETP) levels, frequencies of CETP D442G and Ⅰ14A mutations and characteristics of abnormal lipids in patients wit h cardio-cerebro vascular diseases. Methods Ninety-four myocardial infarction (MI) patients,110 stroke patients and 335 hea lthy controls were selected.The CETP concentration was determined using ELISA .The CETP activity was measured using a substrate of ［14］C-radiol abeled discoidal bilayer particles.The CETP gene mutations were detected by PC R-RFLP. Results The CETP concentrations in the MI and stroke group, were higher than those in th e controls.The gene mutation frequencies of D442G in the MI, stroke and contro l group were 3.5%, 3.6% and 5%, respectively, and the frequencies of Ⅰ14A wer e 1.05%, 0.91% and 1%, respectively.One case of D442G homozygote was detected in the healthy group.The frequency of two CETP gene mutations showed no signi ficant difference among the patients and controls.The CETP concentration and a ctivity in subjects with CETP mutations were one-third of those in the control group.The level of HDL-C, apo-A1 increased in the mutation subjects, while t he TG level decreased. Conclusions The CETP level increased significantly in patients with cardio-cerebrovascular diseases.The carriers of CETP deficiency had CETP and lipid abnormalities.     

Cholesteryl ester transfer protein levels and gene deficiency in Chinese patients with cardio-cerebrovascular diseases

Objective To detect cholesteryl ester transfer protein (CETP) levels, frequencies of CETP D442G and Ⅰ14A mutations and characteristics of abnormal lipids in patients with cardio-cerebro vascular diseases. Methods Ninety-four myocardial infarction (MI) patients,110 stroke patients and 335 healthy controls were selected. The CETP concentration was determined using ELISA. The CETP activity was measured using a substrate of 14 C-radiolabeled discoidal bilayer particles. The CETP gene mutations were detected by PCR-RFLP. Results The CETP concentrations in the MI and stroke group, were higher than those in the controls. The gene mutation frequencies of D442G in the MI, stroke and control group were 3.5%, 3.6% and 5%, respectively, and the frequencies of Ⅰ14A were 1.05%, 0.91% and 1%, respectively. One case of D442G homozygote was detected in the healthy group. The frequency of two CETP gene mutations showed no significant difference among the patients and controls. The CETP concentration and activity in subjects with CETP mutations were one-third of those in the control group. The level of HDL-C, apo-A1 increased in the mutation subjects, while the TG level decreased. Conclusions The CETP level increased significantly in patients with cardio-cerebrovascular diseases. The carriers of CETP deficiency had CETP and lipid abnormalities.     

西藏小型猪GH基因部分序列的SNP分析

目的：对西藏小型猪GH基因（部分序列）进行SNP分析,筛选体型较小的基因型。方法采用PCR产物直接测序法对108头西藏小型猪GH基因5′端部分片段进行单核苷酸多态性（ SNP）分析。结果通过比对发现GH基因共有5个变异位点,其中T45 C位点的多态信息含量最高。不同基因型生长性状比较的结果显示：在GH基因中T45C突变位点上TC基因型6～8月龄的西藏小型猪的腹围值较小,G84A突变位点上AA基因型3～5月龄的西藏小型猪的体重、体长值较小,G93A突变位点上GG基因型6～8月龄的西藏小型猪的体长、体高值较小。结论在GH基因中T45C、G84A、G93A位点突变的TC、AA、GG基因型可能与体型较小有关。同时发现西藏小型猪在以上位点遗传变异程度大,具有较高的杂合度和遗传多样性,可以为选育工作提供比较丰富的素材。     

动脉粥样硬化患者CETP基因两种主要突变型的检测

目的 :检测中国人群动脉粥样硬化 ( AS)患者和正常人的胆固醇酯转运蛋白 ( CETP)基因 15外显子 D44 2 G突变和 14内含子 I14A突变。　方法 :应用聚合酶链反应 -限制性内切酶片段长度多态性分析 ( PCR- RFL P)的方法检测 110例脑梗死患者和 87例心肌梗死患者胆固醇酯转运蛋白基因 D44 2 G突变和 I14A突变。首先用 PCR分别扩增包含人 CETP基因 15外显子第 15 0 6位碱基和 14内含子 1位碱基的基因序列 ,扩增产物分别用限制性内切酶 Msp I和 Nde I酶切 ,聚丙烯酰胺凝胶电泳后分析结果。　结果 :110例脑梗死患者中发现 4例 D44 2 G杂合子 ,1例 I14A杂合子 ,突变率分别为 3.6 %、0 .91% ;87例心肌梗死患者中发现 3例 D44 2 G杂合子 ,1例 I14A杂合子 ,突变率分别为 3.45 %、1.0 5 % ;10 0例正常人中发现 4例 D44 2 G杂合子 ,1例 D44 2 G纯合子 ,1例 I14A杂合子 ,突变率分别为 5 %、1% ,两病例组与对照组比较差异不明显 ( P>0 .0 5 )。　结论 :正常个体和动脉粥样硬化患者CETP基因 D44 2 G突变和 I14A突变的发生率无差异     

PPARδ基因（A／G）多态与士兵耐力训练的相关研究

目的研究过氧化物酶体增殖物激活受体δ（peroxisome prdiferator-activated receptor, PPAR δ）基因第1内含子（A76077G）位点变异多态与解放军训练机能指标的相关性。方法对102名中国北方驻地新兵进行18周耐力训练,训练负荷为5000m长跑,每周进行3次。以心率为标准监控负荷强度,与通气无氧阈对应。运用跑台逐级递增负荷运动方法,对新兵最大摄氧量（maximal oxygen uptake,VO2max）相关指标、跑节省化（running economy,RE）相关指标以及心功能相关指标进行测定。采用聚合酶链反应一限制酶片段长度多型性分析（polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphisms, PCR-RFLP）技术方法测定PPARδ基因第1内含子中（A76077G）位点变异多态。结果3种基因型的分布频率分别为AA：10人（0．10）、AG：36人（0．35）和GG：56人（0．55）,符合Hardy-Weinberg平衡。按基因型分组后,AA基因型人群训练前的VO2max相对值、50W下的心脏指数显著性高于AG基因型人群和GG基因型人群（P〈0．05）;AA基因型人群RE时心率变化率、100W下的心动周期的变化率极显著性高于AG基因型人群和GG基因型人群（P〈0．01）;测定的其他相关指标与基因型的差异均无统计学意义。结论①PPARδ基因第1内含子（A76077G）多态与初始VO2max相对值、50W下的心脏指数相关联。②RE时心率变化率、100W下的心动周期可作为军人有氧训练的敏感指标,PPARδ基因第1内含子（A76077G）AA基因型人群具有更高的敏感性。     

SLC12A3基因Arg913Gln多态与上海地区汉族人群T2DM肾病的关系

目的 探讨溶质载体家族12成员3（SLC12A3）基因Arg913Gln（G→A）多态与上海地区汉族人群2型糖尿病（T2DM）及糖尿病肾病（DN）的相关性。方法 上海地区258例汉族T2DM患者（T2DM组）根据24 h尿白蛋白排泄率（AER）分为未合并肾病组（DN0组,n=95）和合并肾病组（DN组,n=163）,后者又分为微量蛋白尿肾病亚组（DN1组,n=95）和显性蛋白尿肾病亚组（DN2组,n=68）;以无糖尿病和肾病且口服葡萄糖耐量试验（OGTT）正常者作为对照组（n=82）。应用PCR直接测序法检测各组多态基因型;比较各组间基因型、等位基因频率及临床变量间的差异。结果 检出多态基因型GG、GA和AA。T2DM组的多态基因型和等位基因频率高于对照组,但差异无统计学意义（P>0.05）;T2DM组各亚组间多态基因型和等位基因频率比较差异亦无统计学意义（P>0.05）。T2DM组GA+AA基因型患者的三酰甘油（TG）、AER、空腹血胰岛素（FINS）和HOMA IR值均显著高于GG基因型患者（均P<0.05）。结论 上海地区汉族人群SLC12A3基因Arg913Gln（G→A）多态与T2DM和DN无显著相关性;GA+AA基因型携带者的AER显著高于GG基因型携带者。提示Arg913Gln多态（G→A）可能是中国上海地区汉族T2DM患者蛋白尿显著增加的一个标志。     

Polymorphism of the DNA repair gene XPA and susceptibility to lung cancer

Objective： To study the relationship between one polymorphism in the promoter of the DNA repair gene XPA and the susceptibility to lung cancer. Methods： Genotypes were determined by the PCR-restriction fragment length polymorphism （PCR-RFLP） method in 310 histologically-confirmed lung cancer cases and 341 age and sex frequency-matched cancer-free controls. Results： The XPA A23G genotype frequencies were 27.1% （AA）, 42.9% （AG）, and 30.0% （GG） in case patients and21.1% （AA）, 5218% （AG）, and 26.1% （C-G） in control subjects. Multivariate logistic regression analysis revealed that individuals carrying at least one 23G variant allele （AG ＋ GG genotypes） had a significantly decreased risk for lung cancer （adjusted OR = 0.66; 95 % CI = 0.44- 0.98） compared with the wild-type genotype （23AA）. Stratified analysis showed that the protective effect was more evident in subjects with a family history of cancer. Conclusion： These results suggest that the XPA A23G polymorphism may have a role in lung cancer susceptibility in this study population.     

内皮细胞蛋白C受体基因多态性与湖北地区汉族人群深静脉血栓形成的相关性研究

目的 了解湖北地区汉族人群内皮细胞蛋白 C 受体(EPCR)A6936G 变异的分布频率,探讨其与深静脉血栓形成的关系.方法 在湖北地区汉族人群中应用 PCR-RFLP 方法检测了 110 名深静脉血栓形成患者和 110 名健康体检者的 EPCR A6936G 变异.结果 深静脉血栓形成患者 AA、AG 和 GG 基因型的频率分别为 64.6%、33.6%和1.8%,而健康体检者 AA 和 AG 基因型的频率分别为 76.4%和23.6%,未发现 GG 基因型.深静脉血栓形成患者突变基因型(AG GG)频率为 35.4%(OR为1.775,95%CI为1.072～2.934),突变等位基因(G)频率为 18.6%(OR为1.709,95%CI为1.008～2.897),均显著高于对照组(分别为23.6%和11.8%,均P<0.05).结论 湖北地区汉族人群中存在EPCR A6936G 变异,它与深静脉血栓患者血栓形成风险增高有关.