小鼠牙胚发生在下颌弓培养模型中的动态观察

目的 :建立研究牙胚发生、早期发育的研究模型 .方法 :取 11dpc胎鼠下颌弓 ,用Trowell培养系统进行培养 .培养 1,3,5 ,7,9,11d后进行常规HE染色 ,观察牙胚的发育过程 .结果 :下颌弓生长良好 ,可动态地观察到牙胚发生以及发育至帽状期的过程 .结论 :小鼠下颌弓体外培养模型是研究牙胚形态发生和早期发育的有效工具 .小鼠牙胚发生在下颌弓培养模型中的动态观察@刘世森 @吴补领 @余敬擎 @董绍忠     

斑马鱼肝脏三维结构虚拟系统的建立

目的 建立斑马鱼肝脏三维结构虚拟系统,为斑马鱼作为模式生物的应用研究奠定形态学基础.方法 通过制作大量的组织切片,采用光镜及电镜方法观察成年斑马鱼肝脏的组织构造,并收集斑马鱼肝脏形态结构图像,然后运用计算机图像处理软件对斑马鱼肝脏的外形进行三维重建.结果 建立了斑马鱼肝脏三维结构虚拟系统软件.结论 初步实现斑马鱼肝脏三维结构的重建.     

大鼠第一腮弓细胞构建组织工程牙本质-牙髓复合体样结构

目的 观察胚胎12.5 d(E12.5 d)大鼠第一腮弓上皮及外胚间充质细胞离散后肾被膜下移植的成牙能力.方法 切取E12.5 d大鼠第一腮弓(下颌突),酶消化离心后与明胶海绵支架复合植入大鼠肾被膜下,4周后收获移植物,对移植物进行组织学观察和免疫组化抗牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP)检测.结果 种植4周,植入细胞在肾被膜下形成牙本质-牙髓复合体样结构.DSP在新生的牙本质组织中呈阳性表达.Masson三色法显示绿色矿化基质形成.结论 E12.5 d大鼠第一腮弓细胞部分保留了牙齿自然发育的遗传信号,在肾被膜下可以构建形成牙本质-牙髓复合体样结构.     

过量氟对体外培养小鼠磨牙牙胚发育的影响

目的:建立小鼠牙胚发育的体外培养模型 ,初步研究过量氟对小鼠牙胚发育的影响。方法 :取胎龄 18dBAL B/ c小鼠牙胚 ,在 96孔培养板 BGJb半固体培养基标准环境下培养 5 d和 10 d,HE染色 ,观察牙胚发育形态 ,并初步研究 5 .0× 10 - 6 g/ L 氟对体外牙胚发育的影响。结果:牙胚在体外继续发育 ,牙尖形成明显 ,内釉上皮细胞和成牙本质细胞极化 ,分泌基质。氟干预组牙胚发育与对照组相似 ,但部分区域成牙本质细胞极化不明显 ,基质分泌明显少于对照组。 结论 :小鼠牙胚在 BGJb半固体培养基生长良好 ,为研究氟对牙胚损伤提供良好模型。     

人牙胚体外器官培养模型的建立

目的 :建立人牙胚体外器官培养模型 .方法 :分泌前期人牙胚采用Trowell型支架培养法 ,RPMI 16 4 0培养基(含 2 0 0 g·L-1FBS ,2 0 0mg·L-1谷氨酰胺 ,2 0 0mg·L-1L 抗坏血酸 ,1× 10 -7mol·L-1维甲酸 ,10 0kU·L-1青霉素 ,10 0kU·L-1链霉素 ) ,在 37℃ ,5 0mL·L-1CO2 +95 0mL·L-1空气条件下进行培养 ,每 4 8h更换一次培养基 .体外培养 .2 ,4 ,6和 8d随机抽取牙胚进行组织学观察 .结果 :培养的牙胚组织结构关系与对照组一致 ,牙尖部形态进一步突出 ,细胞形态典型 .在 8d时 ,牙尖之间部分造釉器细胞和成牙本质细胞开始出现坏死 .结论 :为体外研究人类牙齿正常发育及各种因素对牙齿发育的影响提供了一个实用的模型     

大鼠肾被膜微环境对牙齿发育的诱导作用

目的 为探索一种组织工程化牙齿异位培养的理想环境,检测全牙胚、牙乳头及成釉器在肾被膜环境下的发育能力.方法 利用剖腹产取出胚龄18 d的大鼠胎儿,显微外科分离牙胚,并将之进一步分为牙乳头和成釉器两部分.使用特制玻璃移植管分别将获得的全牙胚、牙乳头及成釉器植入异体大鼠肾被膜下.2周后取出培养物,HE染色观察其发育情况.结果 在肾被膜微环境下,全牙胚在肾被膜下发育良好,形成较为完整的牙齿形态和结构,单独的牙乳头可以形成牙本质,而单独的成釉器无法形成特定形态的牙冠,也无法分化成釉质.结论 证明肾被膜下是牙齿异位生长的适宜环境,ED18后成釉器发育仍然受到牙乳头调控,与此相反,牙乳头发育不再依赖成釉器的信号.     

小鼠成牙关键调控基因的筛选与功能验证实验研究

  目的  筛选小鼠成牙关键基因,并验证关键基因对羊膜上皮细胞（WISH）成牙诱导分化的能力。  方法  通过免疫组化染色、实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测骨形成蛋白4（BMP4）、成纤维细胞生长因子8（FGF8）、音猬因子（SHH）、淋巴增强因子（LEF1）4种分子蛋白和基因在小鼠早期牙胚发育过程〔小鼠胚胎发育第10.5天(E10.5)、E11.5、E14.5〕中的时空差异化表达,筛选可能的成牙关键基因;非牙源性上皮WISH成骨诱导培养3周,采用茜素红（ALZ）染色与RT-qPCR检测碱性磷酸酶（ALP）观察骨向分化能力;通过胚层重组实验进行组织重组,将BMP4蛋白加入重组组织块,并移植于小鼠肾被膜下,观察验证关键基因的蛋白能否诱导非牙源性上皮成牙分化。  结果  免疫组化染色和RT-qPCR结果证实E10.5胎鼠BMP4蛋白和基因在第一、第二腮弓上皮存在差异性表达,且从E10.5~E14.5其表达与成牙能力从上皮向间充质的转移一致;FGF8蛋白和基因虽在第一、第二腮弓上皮存在差异性表达,但其表达与成牙能力的转移不一致;LEF1、SHH蛋白和基因在第一、二腮弓上皮不存在差异表达,且与成牙能力的转移不一致,因此,筛选出BMP4基因为可能的成牙关键基因。WISH成骨诱导3周,ALZ染色阳性,并形成钙结节,RT-qPCR检测ALP mRNA表达升高;胚层重组实验结果显示,加入外源性的BMP4蛋白可使第二腮弓间充质分别与第二腮弓上皮及WISH均有牙齿样结构形成。  结论  BMP4、FGF8、SHH、LEF1的蛋白和基因在小鼠牙胚早期发育过程中呈时空特异性表达;BMP4的蛋白和基因在第一、二腮弓上皮差异表达,且其蛋白可使与第二腮弓间充质重组的非牙源性上皮获得成牙能力。BMP4为可能的成牙关键基因。     

组织芯片的研制及效果

目的:探讨研制组织芯片的方法以及在免疫组化中的应用.方法:选取乳腺良性增生及乳腺导管癌组织共82例,常规切片,HE染色下确定穿刺部位,每例穿取1.0 mm组织柱1条制备82点阵组织芯片,常规HE染色和免疫组化染色.以P53为观察指标,比较组织芯片与常规石蜡切片免疫组化染色表达情况.结果:研制的82位点组织芯片,组织排列整齐,HE染色及免疫组化染色后组织形态可观察率达100.00%,与常规石蜡切片染色结果具有高度一致性.结论:组织芯片是一种简单、经济、易于推广的技术方法.     

原代培养乳鼠窦房结细胞的形态和kir2.1蛋白表达

目的 研究乳鼠窦房结细胞中kir2.1蛋白表达水平,建立一套可靠的乳鼠窦房结定位、细胞培养与鉴定技术,为进一步心脏生物起搏实验奠定基础.方法 在石蜡切片中用HE染色、嗜银染色、髓鞘染色和Mallory磷钨酸-苏木素染色法(PTAH)进行乳鼠窦房结定位和形态学观察;取SD乳鼠的窦房结组织进行原代细胞培养,观察培养细胞的形态和搏动频率,免疫组织化学检测其kir2.1蛋白表达.结果 综合嗜银染色、髓鞘染色和PTAH染色3种方法可准确定位乳鼠窦房结组织.在培养的窦房结细胞中观察到梭形细胞、三角形细胞和不规则形细胞3种有自发性收缩的细胞,其中梭形细胞最多且形态结构特点和搏动频率符合起搏细胞的特点,三角形和不规则细胞与心房肌细胞特征相似.乳鼠窦房结细胞的kir2.1蛋白表达低于心房和心室肌细胞.结论 综合嗜银染色、髓鞘染色和PTAH染色3种方法可以准确定位SD乳鼠窦房结,乳鼠窦房结细胞中kir2.1蛋白表达水平低于心房和心室肌细胞.     

应用氯化三苯基四氮唑染色快速判定超声引导下微波凝固范围

目的:探讨应用氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色快速判定微波凝固范围的可行性.方法:纯种新西兰长耳大白兔18只,随机分成即时、1d、3d、7d、10d、21d6组.超声引导下,45 W微波辐射肝组织3 min.取凝固标本,肉眼观察,并行TTC染色、HE染色、电镜观察.结果:活体兔肝凝固灶,电镜、HE染色证明凝固坏死区TTC不染色;非凝固坏死区TTC染色成玫瑰红色.活检标本TTC染色后,染色区域行HE染色,仍然可以观察细胞形态和组织结构.结论:TTC大体染色判定微波凝固范围,即时、准确、经济且操作简单.TTC不染色区域为凝固区,染成玫瑰红色区域为非凝固区.     

4637名青年人恒牙发育异常调查

目的调查青年人恒牙牙齿形态和数目发育异常状况。方法2004至2006年对榆林市4所中学的4637名17-21岁学生进行恒牙数目和形态异常的调查。对不同性别和不同牙位发育异常的患病率进行卡方检验。结果牙齿数目和形态异常的总患病率为16.35%。女性过小牙、过大牙或锥形牙、畸形中央尖和先天性缺牙的患病率高于男性,差异有统计学意义(P<0.05)。牙内陷、过小牙、过大牙或锥形牙好发于上颌侧切牙,畸形中央尖好发于下颌第二前磨牙,融合牙和先天缺牙好发于下颌切牙,差异均有统计学意义(P<0.01)。过小牙、过大牙或锥形牙与先天性缺牙伴发比率高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论各种牙齿数目和形态异常的患病率、性别差异和好发牙位与以往的研究相符。但过小牙、过大牙或锥形牙、畸形中央尖的女性患病率均高于男性。     

下咽癌连续大切片的病理学观察

目的:探讨下咽癌不同类型与其浸润部位。方法:对7例下咽癌进行连续大切片,常规石蜡切片,HE、 Mallory三色染色法,光镜观察。结果:不同类型下咽癌浸润部位有一定差别。结论:对下咽癌浸润范围的 研究对于手术范围确定和保留喉功能非常重要。     

固定矫治中影响前牙转矩控制的因素

摘要：正确的牙齿转矩是牙合平面、整个牙弓形态及面部美学表达的关键。上前牙的转矩可进一步影响鼻唇角、笑线、笑弧，而下前牙的转矩关系到颏唇沟深度等重要的面部美学指标，故而在矫治中建立正确的前牙转矩，有助于在三维方向上完成矫治目标。影响唇侧固定矫治中前牙转矩控制的因素包括牙齿本身的解剖形态、不同的矫治体系及托槽、弓丝及控制转矩的不同方法等，本文将对上述影响因素作一综述。     

西藏小型猪乳牙牙体的组织结构特性

目的探索西藏小型猪乳牙牙体及牙胚的组织病理结构特性,为牙齿相关疾病及牙再生研究奠定基础。方法通过X线拍 摄西藏小型猪乳牙牙牙合系统结构,扫描电镜观察其乳牙牙釉质及牙本质超微结构,采用Micro-CT对乳牙进行扫描,Mimics软 件对颌骨及牙齿进行三维重建,进一步应用Image J 软件计算灰度值及计算乳牙矿化密度值,通过HE染色了解西藏小型猪牙 胚及牙髓组织结构特点。结果西藏小型猪乳牙牙冠由牙釉质、牙本质及牙髓组织构成。乳牙牙釉质和牙本质超微结构与人类 乳牙较一致,牙釉质和牙本质矿化密度值分别为2.47±0.09 g/cm3和1.72±0.07 g/cm3,牙胚和牙髓组织病理结构与人类牙齿结构 也较一致,乳牙牙髓组织处于未分化状态。结论西藏小型猪的乳牙解剖、超微结构、组织病理结构均与人类相似,是研究人类 牙体组织疾病发病及牙再生机制理想的动物模型。     

117例畸形中央尖临床治疗效果观察

目的：探讨畸形中央尖牙齿的保存治疗的有效方法。方法：在门诊随访病例117例中，对于非感染型畸形中央尖病例采取多次的调磨或一次性去除中央尖盖髓疗法，对于感染型的畸形中央尖病例采取活髓切断术保护根髓或采取根尖诱导成形术以封闭根法孔促进根发育完成，结果：经两年追踪疗效观察。117例中，得以治愈保留的患牙共109例，总有效率达93.2%，取得满意疗效。结论：畸形中央尖患者应早期治疗，有希望保存活髓，使牙齿根尖发育完成，若待出现炎症反应时就诊，保护活髓治疗是十分困难的，只能采取摘除牙髓促进根尖形成的方法。     

120例成人前牙拥挤拔牙正畸的初步分析

１９８７年～１９９４年笔者为１２０例成人的前牙拥挤进行拔牙减数，开辟间隙，以活动矫正器正畸矫治，使拥挤的前牙达到正常位置，恢复美观及功能，获得了满意效果。临床所见的前牙拥挤情况各有不同，错综复杂，决定拔牙的部位及数目亦因人而异，今将各种类型的前牙拥挤及拔牙情况进行初步分析。     

Effect of Tbx1 knock-down on cardiac performance in zebrafish

Background Tbxl is the major candidate gene for DiGeorge syndrome （DGS）. Similar to defects observed in DGS patients, the structures disrupted in Tbxl-/- animal models are derived from the neural crest cells during development. Although the morphological phenotypes of some Tbxl knock-down animal models have been well described, analysis of the cardiac performance is limited. Therefore, myocardial performance was explored in Tbxl morpholino injected zebrafish embryos. Methods To elucidate these issues, Tbxl specific morpholino was used to reduce the function of Tbxl in zebrafish. The differentiation of the myocardial cells was observed using whole mount in situ hybridization. Heart rates were observed and recorded under the microscope from 24 to 72 hours post fertilization （hpf）. The cardiac performance was analyzed by measuring ventricular shortening fraction and atrial shortening fraction.Results Tbxl morpholino injected embryos were characterized by defects in the pharyngeal arches, otic vesicle, aortic arches and thymus. In addition, Tbxl knock down reduced the amount of pharyngeal neural crest cells in zebrafish. Abnormal cardiac morphology was visible in nearly 20% of the Tbxl morpholino injected embryos. The hearts in these embryos did not loop or loop incompletely. Importantly, cardiac performance and heart rate were reduced in Tbxl morpholino injected embryos.Conclusions Tbxl might play an essential role in the development of pharyngeal neural crest cells in zebrafish. Cardiac performance is impaired by Tbxl knock down in zebrafish.     

受拉螺纹联接的切齿力学分析及效果

切齿是改善受拉螺纹联接载荷分布的有效措施,但目前对螺纹牙进行切齿主要依靠实际操作中的经验,对于切齿的理论研究并不深入,还没有明确的计算公式能描述切齿对螺纹受拉联接的影响。以切齿后的螺纹联接为研究对象,根据螺纹牙的几何结构,通过对每圈螺纹牙进行受力分析,研究螺纹牙齿面上的变形,推导出新的变形协调方程,建立了能够对每圈完整螺纹和切齿螺纹进行受力计算的新型力学模型。以P-110S管螺纹为计算研究实例,计算了不同的切齿参数对螺纹牙受力分布的影响,发现切齿降低了两端螺纹牙的受力,提高了中间螺纹牙的受力,使整体受力更     

过量氟对大鼠切牙成釉细胞和成牙本质细胞中Bag-1表达的影响

目的研究过量氟对凋亡抑制基因Bag-1(Bcl-2相互作用蛋白1)蛋白表达的影响。方法选取20只健康Wistar大鼠,随机分为对照组和实验组。对照组正常饮水,实验组饲以含F-浓度100mg/L的氟化水。8周后处死动物,利用HE染色和免疫组化技术观察过量氟对大鼠切牙形态及Bag-1表达的影响。结果实验组大鼠切牙釉基质形成紊乱,成釉细胞和成牙本质细胞Bag-1蛋白表达明显低于对照组,差异有显著性(P<0.01)。结论过量氟可抑制成釉细胞和成牙本质细胞中Bag-1的表达,影响釉质发育的调控机制,最终导致牙齿发育异常。     

两种钙黏蛋白在小鼠牙齿发育期的时间和空间表达

目的：观察E-钙黏蛋白及P-钙黏蛋白在牙齿胚胎发育早期的时间和空间分布。方法：取胚胎第12．5天至出生后第3．5天的CD1型小鼠下颌骨标本,免疫荧光二步法及共聚焦荧光显微镜检测E-钙黏蛋白及P-钙黏蛋白在下颌第一磨牙牙胚发育不同时期的表达情况,通过HE染色显示组织形态。结果：两种钙黏蛋白在牙胚发育过程中广泛表达于上皮组织中,前成釉细胞在极化过程中E-钙黏蛋白表达增强、P-钙黏蛋白表达减弱,P-钙黏蛋白在牙胚发育初期即出现于牙胚上皮表层,并在分泌期成釉细胞中表达。结论：钙黏蛋白在牙胚早期发育过程中存在空间、时间上的表达差异,提示两种钙黏蛋白在牙冠形成期间行使不同的功能,推测P-钙黏蛋白参与了釉质的分泌与矿化过程。