COL2A1基因突变与Ⅱ型胶原蛋白病表型关系的研究进展

胶原蛋白是人体中占比最大的蛋白类型,其中Ⅱ型胶原蛋白是构成关节软骨和透明软骨的重要蛋白。COL2A1基因可编码Ⅱ型胶原蛋白前体,因此COL2A1基因突变会导致Ⅱ型胶原蛋白的结构发生改变,进而导致Ⅱ型胶原蛋白病。现收集已报道的COL2A1基因突变病例,探讨常见的COL2A1基因突变类型和COL2A1突变导致的临床表型,总结COL2A1基因突变位置信息及突变类型信息,分析患者发病年龄和性别与临床表型的相关性。根据COL2A1基因突变所导致的临床表型亚型的发病特点,将21种亚型分为5类并阐述各类表型患者的临床特征,为Ⅱ型胶原蛋白病的诊断提供新思路。     

健脾补肾方对小鼠肠癌原位移植瘤肺转移及MMP-2蛋白表达的影响

目的:探讨健脾补肾方对肠癌原位移植瘤小鼠肺转移以及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白表达的影响。方法:建立小鼠肠癌原位移植瘤模型,将小鼠随机分为模型组(生理盐水组)及健脾补肾方高、中、低剂量组,每组6只。各组予相应的药物每日灌胃给药1次,连续治疗14 d,于末次给药结束后处死动物,HE染色观察肺转移情况,免疫组化及Western Blot法检测MMP-2的蛋白表达。结果:健脾补肾方各剂量组的肺转移面积明显小于生理盐水组;健脾补肾方各剂量组MMP-2多呈弱或中阳性表达,而生理盐水组呈强阳性表达,MMP-2蛋白在健脾补肾方各剂量组的表达均低于生理盐水组(P<0.05)。结论:健脾补肾方具有抑制小鼠肠癌原位移植瘤模型肺转移的作用,并可能与下调MMP-2蛋白的表达有关。     

补肾活血法对肾小球系膜细胞MMP-2、TIMP-2表达的影响

摘要: 目的 观察补肾活血法组方中药对基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、膜型基质金属蛋白酶-1（MT1-MMP）、基质金属蛋白酶组织抑制剂-2（TIMP-2）在高糖培养的肾小球系膜细胞（GMC）中表达的影响。方法 将体外培养的GMC分为高糖组（30mmol/L）、正常糖组（5.4 mmol/L）和高糖+补肾活血组方中药组。采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定GMC上清液中Ⅳ型胶原的分泌;免疫细胞化学法及流式细胞仪（FCM）检测MMP-2、MT1-MMP、TIMP-2的蛋白表达。结果 与正常糖组比较,随着培养时间的延长,高糖组细胞培养上清液中Ⅳ型胶原分泌明显增加,MMP-2、MT1-MMP表达减少,TIMP-2表达升高（p<0.01）。补肾活血法组方中药可以上调MMP-2的表达,下调TIMP-2的表达。结论 补肾活血法组方中药可以加速细胞外基质降解,减少细胞外基质积聚,从而防治肾小球硬化。     

补肾活血法对肾小球系膜细胞MMP-2及TIMP-2表达的影响

摘要: 目的 观察补肾活血法组方中药对基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、膜型基质金属蛋白酶-1（MT1-MMP）、基质金属蛋白酶组织抑制剂-2（TIMP-2）在高糖培养的肾小球系膜细胞（GMC）中表达的影响。方法 将体外培养的GMC分为高糖组（30mmol/L）、正常糖组（5.4 mmol/L）和高糖+补肾活血组方中药组。采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定GMC上清液中Ⅳ型胶原的分泌;免疫细胞化学法及流式细胞仪（FCM）检测MMP-2、MT1-MMP、TIMP-2的蛋白表达。结果 与正常糖组比较,随着培养时间的延长,高糖组细胞培养上清液中Ⅳ型胶原分泌明显增加,MMP-2、MT1-MMP表达减少,TIMP-2表达升高（p<0.01）。补肾活血法组方中药可以上调MMP-2的表达,下调TIMP-2的表达。结论 补肾活血法组方中药可以加速细胞外基质降解,减少细胞外基质积聚,从而防治肾小球硬化。     

补肾活血方对兔退变椎间盘模型MMP-3表达影响

目的观察补肾活血方对兔退变椎间盘组织形态结构及MMP-3表达的影响。方法选取3月龄健康兔共40只,随机分为5组,每组8只,依次为对照组、模型组、中药低剂量组、中剂量组和高剂量组,除正常对照组外,其余兔均行椎间盘退变造模术。造模后3 d开始给药,对照组及模型组每日以生理盐水灌胃代替中药,中药低、中、高剂量组补肾活血方每日灌胃,连续给药8周。采用HE染色、免疫组化染色等检测方法观察椎间盘组织形态学变化,并运用PCR法检测MMP-3表达水平。结果 HE染色显示:药物干预后,低剂量组髓核细胞数量变化不明显,纤维环及髓核存在裂隙,中、高剂量组细胞数量较低剂量组显著增加;免疫组化染色显示:与模型组相比,中药低剂量组MMP-3表达未见明显变化(P0.05);中剂量组和高剂量组MMP-3的表达均有显著下调(P0.05);PCR法检测法显示:与模型组相比,中药干预后,椎间盘组织内增高的MMP-3表现出降低趋势,其降低程度与药物剂量呈正比,中剂量组及高剂量组的MMP-3表达量有统计学差异(P0.05)。结论造模成功后MMP-3表达量显著上调,经补肾活血方干预后可抑制MMP-3的表达,说明补肾活血方可在一定程度上起到延缓椎间盘退变的作用。     

补肾活血方对多囊卵巢大鼠卵巢MMP-2、9的表达干预研究

目的 观察补肾活血方对多囊卵巢(PCO)大鼠基质金属蛋白晦-2,9(MMP-2、9)表达的影响,探讨补肾活血方治疗PCO排卵障碍的机制.方法选用未成年24日龄SD雌性大鼠60只,随机分为模型对照组、西药对照组、补肾活血方高剂量组、补肾活血方低剂量组、正常对照组共5组.建立大鼠PCO病理模型,采用原位杂交法检潮各组卵巢组织中MMP-2、9基因的表达水平.结果 各组大鼠卵巢中卵泡的颗粒细胞和发育良好的卵泡膜细胞中均可检潮到MMP-2和MMP-9的杂交信号.模型组MMP-2与MMP-9表达强度明显超过正常组、补肾活血方高剂量组、低剂量组及西药对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);补肾活血方高剂量组MMP-2与MMP-9的表达接近正常组,差异无统计学意义(P>0.05);补肾活血方低剂量组、西药对照组与正常组相比,MMP-2与MMP-9的表达均较正常组高,差异具有统计学意义(P<0.05);补肾活血方低剂量组与西药对照组MMP-2与MMP-9的表达强度相似,但均超过补肾活血方高剂量组的表达强度,差异具有统计学意义(P<0.01).结论 MMPs的过度表达可能是卵巢排卵障碍的关键因素,提示MMPs参与了卵巢排卵过程;大鼠PCO动物模型卵巢局部MMP-2、9异常高表达与PCO大鼠卵巢排卵障碍有关,补肾活血方通过抑制MMP-2、-9的异常高表达,从而发挥治疗多囊卵巢排卵障碍的作用,这可能是其促进卵巢排卵的机制之一.     

补肾安胎方及其拆方对控制性超排卵小鼠胚胎着床干预的比较

目的观察补肾安胎方及其补肾、活血组分对控制性超排卵(controlled ovarian hyperstimulation,COH)小鼠胚泡围着床期类肝素结合表皮生长因子(heparin-binding epidermal growth factorlike growthfactor,HB-EGF)及其受体的影响,探讨补肾安胎方及其拆方对着床环节的作用机制。方法将雌性小鼠随机分为正常组(N)、模型组(M)、补肾安胎组(BH)、补肾组(BS)和活血组(HX)。观察妊娠第1天阴栓率、妊娠第6天妊娠率和孕鼠着床位点数;采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定妊娠第5天、第6天子宫内膜HB-EGF mRNA的表达,采用免疫组织化学法测定同期子宫内膜表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)蛋白的表达。结果模型组阴栓率、妊娠率较正常组显著降低(P0.01),着床位点数显著升高(P0.01);中药各组治疗后,阴栓率、妊娠率均较模型组显著升高(P0.05,P0.01),但着床位点数均显著降低(P0.05,P0.01),以补肾安胎组作用最为明显;活血组阴栓率高于补肾组(P0.05),着床位点数较补肾组降低(P0.01),妊娠率两组比较,差异无统计学意义。正常组HB-EGF mRNA表达最高,模型组显著低于正常组(P0.01),各中药组均显著高于模型组(P0.01);各中药组HB-EGF mRNA表达比较,补肾安胎组明显高于活血组和补肾组(P0.05),活血组高于补肾组(P0.05);妊娠第6天,HB-EGF mRNA表达量较妊娠第5天降低。EGFR蛋白在围着床期子宫内膜腺体和基质细胞胞质中表达,各组小鼠EGFR蛋白表达空间分布差异无统计学意义。正常组EGFR蛋白表达丰富;模型组表达较正常组显著减少(P0.01),部分缺失;中药各组EGFR表达量均高于模型组(P0.01);其中补肾活血组高于活血组和补肾组(P0.05,P0.01),活血组高于补肾组(P0.05,P0.01)。结论补肾安胎方及补肾、活血组分均能够改善控制性超排卵小鼠的着床率和妊娠率,促进胚泡生长和HB-EGF及其受体的表达,其中以补肾安胎全方作用最佳,补肾、活血组分在改善胚泡着床过程中具有协同作用。     

COL1A2在头颈部鳞癌中的差异表达及功能分析

目的 采用生物信息学方法探讨COL1A2在头颈部鳞癌(HNSC)中的表达及相关功能。方法 利用TIMER2.0数据库分析COL1A2基因在泛癌中的表达;通过GEPIA数据库、UALCAN数据库分析该基因在HNSC与正常组织中的差异表达情况;并利用STRING数据库构建COL1A2基因蛋白互作网,DAVID数据库分析与该基因互作蛋白基因的相关功能;最后通过GCBI基因雷达数据库预测该基因可能参与的调控网络和转录因子。结果 COL1A2在多种肿瘤中高表达,且在头颈部鳞癌组织与正常组织中有差异表达。COL1A2及相关蛋白基因功能富集分析发现其参与了4个细胞组分、5个分子功能、11个生物学程序、7条信号通路,在基因调控网及转录因子预测发现,COL1A2与多种蛋白、转录因子、lncRNA、micRNA等相互调控。结论 COL1A2与HNSC的发生、发展可能是通过PI3K-Akt信号通路等多种途径、多种蛋白、转录因子共同调控的结果。     

人颈椎间盘髓核组织中SOX9与COL2A1基因的表达及其意义

目的 观察不同退变程度的人颈椎间盘髓核(nucleus pulposus,NP)组织中性别决定基因组9(SOX9)、Ⅱ型胶原α1(COL2A1)的表达差异,并探讨此差异在人颈椎间盘退变(cervical intervertebral disc degeneration,CIDD)发生发展中的意义.方法 收集在我院行手术治疗的36例颈椎病或颈椎外伤患者的NP组织及术前颈椎MRI(T2加权像正中矢状位)资料,采用Miyazaki分级系统评估退变程度.用免疫组织化学法观察SOX9、COL2A1在NP组织中的表达定位,用荧光定量(FQ) RT-PCR、蛋白质印迹分析法检测SOX9、COL2A1在mRNA及蛋白水平上的表达量,分析其表达水平与CIDD程度间的关系,初步探究SOX9和COL2A1间的相互作用.结果 SOX9在NP细胞胞核中表达,COL2A1在细胞外基质中表达;随着CIDD退变程度的加重,两者的mRNA和蛋白表达水平均逐渐降低;且以SOX9表达量为自变量(X) 、COL2A1表达量为应变量(Y)的直线回归方程为Y=0.923X-0.059(P＜0.001).结论 随着CIDD程度加重,SOX9与COL 2A1基因表达水平逐渐降低,两者下降趋势相近,SOX9正向调控COL2A1的表达,提示SOX9与COL2A1基因功能改变可能是CIDD的分子机制之一.     

六味骨痹汤对兔骨关节炎滑膜组织的影响及与软骨修复的相关性研究

【目的】通过观察六味骨痹汤对骨关节炎(OA)模型兔关节液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、基质金属蛋白酶13(MMP-13)含量,滑膜、关节软骨形态及软骨Ⅱ型胶原蛋白表达的影响,探讨其对OA滑膜组织的修复作用及与关节软骨修复的相关性。【方法】将32只新西兰兔随机分为正常组、模型组、六味骨痹汤组和硫酸氨基葡萄糖组,每组8只。采用木瓜蛋白酶关节注射法建立兔OA模型。成功造模后,前2组每日给予10 mL生理盐水灌胃,后2组每日分别对应给予六味骨痹汤(剂量为3.8 g·kg-1·d-1)及硫酸氨基葡萄糖胶囊(剂量为77.0 mg·kg-1·d-1)灌胃。给药6周后,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测各组实验兔关节液中TNF-α、IL-1β、MMP-13含量,按照Krenn标准及改良Mankin’s法分别对滑膜炎症程度及软骨损伤程度进行评分,并评价软骨标本中Ⅱ型胶原蛋白表达情况,最后分析关节滑膜炎症程度与软骨修复的相关性。【结果】六味骨痹汤组和硫酸氨基葡萄糖组关节液中TNF-α、IL-1β、MMP-13含量,滑膜炎症Krenn评分,关节软骨Mankin’s评分均较模型组显著降低(P0.01),Ⅱ型胶原蛋白表达评分显著升高(P0.05);2给药组组间比较,差异无统计学意义(P0.05)。各组滑膜炎症的缓解与软骨的修复程度成较强的正相关性。【结论】六味骨痹汤对兔OA模型滑膜炎症有缓解作用,并且这种改变与Ⅱ型胶原蛋白高表达及OA软骨的修复程度相关。本研究明确了补肝肾、强筋骨类方药治疗OA滑膜炎的疗效及与软骨修复的相关性,也为中药治疗滑膜炎及软骨损伤性疾病提供数据支持及新的思路。     

RNAi对人类皮肤成纤维细胞COL1A1及COL3A1表达的影响

目的 研究RNA干扰(RNAi)技术对人类皮肤成纤维细胞(HSF)COL1A1及COL3A1表达的影响.Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原是构成皮肤结缔组织的主要成份,其异常是造成真皮结缔组织以及纤维增生性疾病病理变化的主要因素.RNAi技术可有效抑制特定基因的表达.方法 利用小干扰RNA(siRNA)表达框(SEC)快速筛选有效干扰序列,再将有效SEC的siRNA片段连接入表达载体并转染HSFs,获得稳定抑制效果.结果 经过筛选的有效SEC可特异性抑制HSFs中COL1A1和COL3A1的表达(分别至野生株的5.00%和6.48%),载体介导的有效干扰序列可稳定抑制HSFs中COL1A1和COL3A1的表达,抑制效果达30 d(分别至阴性对照的25.21%和22.12%).结论 SEC和载体介导的RNAi均可有效并且特异性抑制COL1A1和COL3A1在HSFs中的表达.     

一例Ⅰ型成骨不全家系的基因定位及突变检测

目的对国内1例成骨不全(OI)家系进行基因突变及突变效应分析,为研究中国人群的成骨不全基因突变特点提供线索。方法对成骨不全Ⅰ型胶原基因COL1A1和COL1A2所在的17号染色体和7号染色体分别进行连锁分析,对致病基因做初步判断,然后用聚合酶链反应扩增致病基因外显子,并测序检出基因突变。结果该家系为COL1A1基因突变,所有患者在该基因的第8个内含子剪切受体位点处为AG→GG(IVS8-2A>G)突变。结论对比COL1A1基因突变数据库,该突变为一新发现突变。     

NOVEL SPLICING MUTATION OF COL1A1 GENE CAUSING OSTEOGENESIS IMPERFECTA TYPE I IN CHINESE PEDIGREE

Osteogenesis imperfecta(OI), commonly knownas“brittle bone disease”, is an autosomal dominantdisorder and involves connective tissues of the wholebody. The major clinical features are osteoporosis,bone fragility, blue sclera, hearing loss, flabby liga-m…     

COL1A1-1997G/T、+1245G/T多态性及其与骨密度的关系

目的研究长春市汉族人群Ⅰ型胶原α1链基因(COL1A1)-1997G/T、+1245G/T多态性及其与骨密度(BMD)的关系。方法(1)应用双能X线骨密度仪测定BMD,将374例受试人群分为BMD正常组、骨质疏松组、骨质疏松性骨折3组。(2)抽取受试人群外周静脉血5ml,提取DNA。(3)应用实时荧光定量PCR仪扩增目的基因的DNA片段。(4)采用TaqMan探针法对-1997G/T及+1245G/T位点进行等位基因鉴别。结果长春市汉族正常人群COL1A1-1997G/T转换中,GG基因型占38.40%,GT基因型占46.38%,TT基因型占15.22%,以GT基因型为主;骨质疏松患者女性GG等位基因型所占比例大于男性,GG基因型占44.39%,GT基因型占43.37%,TT基因型占12.24%;骨质疏松骨折患者GG基因型为主,占47.50%,GT基因型占35.00%,TT基因型占17.50%。正常组、骨质疏松组、骨质疏松性骨折组3组同性别间BMD逐渐减少(P<0.05)。3组中女性BMD均低于男性BMD(P均<0.05)。正常人群同性别间BMD不存在差异(P均>0.05);骨质疏松组女性GG基因型BMD低于...     

COL3A1促进结直肠癌生长及潜在调控机制

 目的  研究COL3A1对结直肠癌发生发展的影响及潜在机制。方法  使用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)瞬时干扰方法下调细胞COL3A1表达,使用瞬时过表达方法上调COL3A1表达;使用Western blot检测干扰或过表达COL3A1后蛋白质表达水平及Akt/mTOR通路蛋白质水平的变化;使用MTT法、细胞计数法及平板克隆形成法检测细胞增殖的变化。结果  COL3A1过表达后,结直肠癌细胞增殖速度显著上升,可激活Akt/mTOR信号通路并上调下游基因的表达,沉默COL3A1后,结直肠癌细胞增殖速度显著下降,并可显著抑制肿瘤细胞克隆的形成。结论  COL3A1在结直肠癌中发挥促肿瘤生长的作用,可能成为结直肠癌临床检测和治疗的潜在靶标。     

表皮松解性角化过度鱼鳞病COL7A1基因突变研究

目的探讨一个表皮松解性角化过度鱼鳞病家系基因的突变。方法提取表皮松解性角化过度鱼鳞病患者及家族成员的基因组DNA，采用PCR扩增COL7A1基因所有的外显子及其邻近的剪切点并进行双向直接测序，用PCR检测突变位点从而进一步确定家系的致病原因。结果发现患者COL7A1基因的一条等位基因第2号外显子上存在S48P的错义突变，而另一条等位基因第27号外显子上存在3625del 11缺失突变，造成编码区阅读框架的移位，最终导致蛋白终止密码（PTC）的生产。结论COL7A1基因的缺失突变和锆义突变引起该患者临床症状的特异突变。     

COL7A1基因在营养不良性大疱性表皮松解症的突变研究

目的 探讨COL7A1基因在营养不良性大疱性表皮松解症中突变的基因型与临床表型的关系。方法 收集14例营养不良性大疱性表皮松解症家系,皮肤活检进行常规组织病理、免疫荧光及电镜检查,采集外周血,提取基因组DNA进行COL7A1基因突变筛查。结果 显性遗传型中的3个家系为COL7A1基因错义突变所致,泛发性隐性遗传型中4个家系结合了两个提前终止密码子突变,另外3个结合一个提前终止密码子和剪切位点或甘氨酸错义突变,3个局限性隐性遗传型家系则由提前终止密码子和错义突变引起。结论 显性遗传型由甘氨酸错义突变所致,隐性遗传型则包括无义突变、剪切位点突变、插入或缺失突变等。     

Ⅱ型胶原纤维α1基因（COL2A1）在视网膜脱离中的作用的研究进展

COL2A1基因编码Ⅱ型胶原蛋白的α1链、Ⅱ型胶原蛋白是正常玻璃体结构的重要组成部分。COL2A1基因突变可导致包括视网膜脱离在内的多系统异常。本文对COL2A1基因突变与视网膜脱离之间的关系进行简要综述,回顾以往COL2A1基因突变与视网膜脱离的分子遗传学研究结果,探讨视网膜脱离的分子遗传学途径。     

Hsa_circ_0008957靶MiRNA预测及其表达载体构建

目的构建Ⅰ型胶原蛋白结构基因COL1A2的靶向circRNA hsa_circ_0008957其靶向miRNA的功能。方法采用circbase软件,获取hsa_circ_0008957序列,采用PCR进行circRNA克隆,通过同源重组接入circRNA表达载体pCD2.1。重组载体pCD2.1-hCOL1A2_circ_0008957通过PCR、双酶切、Sanger测序进行验证。利用circBANK,circinteractome网站进行hsa_circ_0008957靶miRNA及其功能预测。结果pCD2.1-hCOL1A2-circ-0008957重组载体构建成功。Hsa_circ_0008957预测出该circRNA不具有蛋白编码功能,其靶miRNA hsa_miR_1305,hsa_miR_140-3p,hsa_miR_421,hsa_miR_548c_3p和hsa_miR_628-3p与成骨相关,预测hsa_circ_0008957可能通过这些miRNA参与成骨分化。结论Hsa_circ_0008957通过miR-1305、miR-140-3p、miR_421、miR_548c_3p和miR_628_3p参与成骨分化,且预测COL1A2靶向miRNA与17种miRNA取交集,得出hsa_miR_618,该miRNA与肿瘤疾病相关,为后续在细胞水平上进一步验证hsa_circ_0008957的调节功能奠定了基础。     

COLIA1基因-1997G／T多态性与中国女性骨密度关系分析

目的：研究COLIA1基因启动子区-1997G／T单核苷酸多态性与中国女性骨密度关系。方法：采用双能X线吸收仪对291名女性研究对象进行腰椎及股骨扫描，应用PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测COLIA1基因-1997G／T多态位点基因型，用广义线性模型分析与腰椎2～4及股骨骨密度关系。结果：在调整环境危险因素前后，均未发现COLIA1基因的-1997G／T位点的多态性与女性股骨颈、股骨柄和股骨三角区及腰椎2～4的骨密度呈显著相关。结论：在中国女性人群中COLIA1基因-1997G／T多态性与股骨及腰椎骨密度无显著性相关，与欧洲人群研究结果不同。