肠道病毒71型分子生物学研究

就有关EV71病毒生物学特征、病毒的复制、诊断技术、EV型别鉴定及分子流行病学等方面作一综述。     

大连市肠道病毒71型基因特征分析

目的 了解大连市手足口病病原体肠道病毒71型(EV71)的VP1区段的基因特征.方法 用RT-PCR方法从手足口病患者临床标本中扩增EV71的VP1基因全序列,利用软件进行同源性分析和构建系统发生树.结果 测序获得的9株病毒基因与C4亚型代表株具有较高的核苷酸和氨基酸序列同源性.在系统进化树上,9株病毒基因与C4基因亚型代表株处于同一分支.结论 大连市EV71病毒株属C4亚型.     

2014-2015年江苏省肠道病毒71型基因特征分析

目的：探讨2014-2015年江苏省肠道病毒71型(EV71)分离株的病毒基因特征。 方法：用RD细胞对EV71核酸检测阳性的标本进行病毒分离。选取35株具有代表性的EV71分离株进行VP1区的序列测定和分析。序列结果用DNA Star和MEGA 6.0软件进行分析,并与各型参考株进行比较。 结果：35株EV71分离株VP1区的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为93.3% ～100%和96.6% ～100%,与 EV71的C4a亚型代表株安徽阜阳株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为95.6%～97.9%和在97.9%～100%;在系统进化树上与C4a亚型代表株相聚在一起,并且存在2个进化分支。 结论：2014-2015年江苏省分离的35株EV71毒株均属于C4a亚型;江苏省EV71流行株可能与国内其他省市流行的病毒有着共同的祖先,再各自进化。     

肠道病毒71型感染治疗方法研究进展

肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）是引起重症手足口病的主要病原体。随着其病毒特征、感染和发病机制逐渐清晰,EV71感染的治疗策略也逐步明确。一方面是直接靶向EV71感染过程,针对具体靶点进行EV71感染或发病过程的干预;另一方面是通过调节宿主免疫清除病毒、缓解炎症、保护未感染细胞。目前已经在临床应用的治疗药物不多,大多尚处于临床前研究阶段。也有干扰素类具有广谱抗病毒和免疫调节双重作用的细胞因子在临床使用,或者通过药物联用的方法增强抗病毒效果,降低毒性和耐药性。本文对近年来报道的不同类型的EV71治疗药物进行综述,以期为深入研究抗EV71感染的治疗策略提供帮助。     

广州地区儿童肠道病毒71型分离与鉴定

目的 调查广州地区2004年度EV71感染的流行病学特征.方法 采集可疑为肠道病毒感染患者粪便、疱疹液、咽拭子和脑脊液标本,进行病毒分离和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)特异性扩增进行鉴定,随机选取其中4株EV71分离毒株,对其VPI区进行核苷酸序列测定,并参考EV71各基因型的参考毒株和以往中国EV71的分离毒株进行同源性分析.结果 全年EV71病毒检出率3.09%(13/421),主要集中在该年度4月份,13株均来自手足口病患者.4株EV71病毒株之间同源性高达97.5%～99.6%;与A、B基凼型代表株比较,同源性在83.2～84.7%,83.4%～84.7%之间,差异大于15.3%;与EV71病毒C基因型代表株比较,同源性在89.3%～95.1%,较为接近,差异小于12%;与国内以往分离到的Il株CA亚型毒株的核苷酸同源性可达91.9%-97.5%.结论 广州地区2004年度EV71感染的检出率较低,以手足口病的方式.未见其它的并发症,基因型属C4亚型,与近年我国大陆地区流行的EV71株在进化上可能属于同一基因.     

肠道病毒71型疫苗候选株和疫苗标准的研究

肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）属小RNA病毒科肠道病毒属,主要引起手足口病（hand-foot-and-mouth disease,HFMD）和中枢神经系统疾病。1969年在美国加里福尼亚分离出首株EV71[1]。近年来EV71在亚太地区持续流行[2-9],特别是1998年在中国台湾地区大流行后,开始引起人们的重视。我国大陆地区2008—2010年报告的HFMD病例数、严重病例和死亡数呈逐年上升趋势,     

2014—2015年江苏省肠道病毒71型VP1基因特征分析

目的：探讨2014—2015年江苏省肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)分离株的病毒基因特征。方法：用RD细胞对RT?鄄PCR初筛EV71阳性的标本进行病毒分离,成功分离到的EV71分离株进行VP1区的序列测定和分析。序列分析结果用DNA Star和MEGA 6.0软件进行分析,并与各型参考株进行比较。结果：共分离到35株EV71型毒株,分离阳性率为29.17%。35株EV71分离株VP1区的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为93.3%～100.0%和96.6%～100.0%,与EV71的C4a亚型代表株安徽阜阳株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为95.6%～97.9%和97.9%～100.0%;在系统进化树上与C4a亚型代表株相聚在一起,并且存在2个进化分支。结论：2014—2015年江苏省分离的35株EV71毒株均属于C4a亚型;江苏省EV71流行株可能与国内其他省市流行的病毒有着共同的祖先,再各自进化。     

人肠道病毒71型动物模型研究进展

人肠道病毒71型是婴幼儿手足口病的致病原之一,其严重的并发症可导致神经系统疾病,甚至死亡,是近期威胁中国儿童健康的因素之一.目前尚无临床疫苗可以预防该病毒感染,而EV71的动物模型是进行致病机理、疫苗评价和药物等研究的基础.本文对EV71的两种常用动物模型:小鼠和猕猴(Macaca mulatta)模型进行了描述,并对其在研究中的应用给与概括,为研究者选择合适的动物模型提供了依据.     

重症71型肠道病毒感染的临床治疗分析

目的探讨重症71型肠道病毒感染的临床特征、治疗方法及临床效果。方法选取86例EV71感染的重型小儿手足口病患儿,随机分为治疗组56例和对照组30例。在常规治疗的基础上,对照组采用病毒唑10mg／kg＋5％葡萄糖100～250raL静脉滴注;治疗组干扰素肌注＋炎琥宁10mg／kg＋5％葡萄糖100～250mL静脉滴注。比较两组的临床疗效。结果治疗组的总体有效率为92．9％（52／56）,显著高于对照组66．7％（20／30）,P〈0．01。结论EV71重症以中枢神经系统感染为主,该病应早诊断、早治疗,干扰素＋炎琥宁治疗预后良好。     

淮安地区1066例儿童手足口病肠道病毒71型感染流行病学和临床特征分析

目的:了解儿童肠道病毒71型(EV71)在淮安地区小儿手足口病中的感染情况,分析其流行病学特征,探讨EV71感染者的临床特征。方法:选取2008年1月～2010年12月我院儿科收治的1 066例手足口病感染住院患儿,总结其临床特征,用逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测粪便或咽拭子标本中的EV71VP1基因,随机挑选部分阳性PCR扩增产物进行核苷酸测定,并将所测序列在Gen-Bank中进行比较分析。结果:1 066例标本中检测到98例RT-PCR阳性扩增产物,检出率为9.2%,其中2008、2009、2010年度EV71检出率分别为8.4%、7.6%、12.6%。EV71在3年每个月份都有检出,但在2008年5月、2009年6月、2010年7月呈现高峰,分别为24.7%、21.5%、31.8%。98例EV71感染患儿的平均年龄为22个月,临床诊断为疱疹性咽峡炎占3.1%,手足口病合并心肌损害占2.0%,手足口病合并支气管肺炎占20.3%,手足口病占62.2%,手足口病合并脑炎占12.4%。6份EV71VP1基因部分核苷酸片段与GenBank中EV71C4基因序列同源性为93%～99%。结论:淮安地区部分儿童手足口病感染与EV71有关。全年均存在EV71感染,流行季节在春末夏初。EV71感染的临床特征无特异性。     

惠州市2008年肠道病毒71型的监测

目的了解惠州市EV71感染情况,为制定预防和控制EV71感染策略提供依据。方法采用实时荧光定量PCR方法,对惠州市52例疑似肠道病毒感染者的105份肛拭与咽拭标本进行EV71检测,部分标本进行CoxA16检测。结果共检出28例患儿48份标本EV71阳性,病例阳性率为53．8％,未检出CoxA16阳性标本;男女发病率分别为59．4％（19／32）与45％（9／20）,肛拭与咽拭标本的阳性率分别为52．8％（28／53）和40．4％（21／52）。结论EV71发病主要集中在3岁以下的婴幼儿,目前无特效的临床治疗方法,防控措施主要是建立高度敏感的监测系统,加强对托幼机构、重点人群、类似脊髓灰质炎病例的监测,及早发现传染源;具有快速、敏感特点的荧光定量PCR技术仪对病原进行核酸检测成为公共卫生实验室快速诊断EV71流行的重要手段。     

SCARB2蛋白提高人肠道病毒71型对转基因小鼠的感染力

目的 细胞实验证实人清道夫受体B2（hSCARB2）是人类EV71的受体,本研究拟通过建立人SCARB2转基因小鼠,建立感染能力更高的小鼠模型.方法 构建CMV启动子的SCARB2转基因表达载体,通过显微注射法建立C57BL/6J背景的人SCARB2转基因小鼠,PCR筛选阳性首建鼠.通过Western Blot和免疫组化检测目的 蛋白在各组织中的表达.EV71感染转基因小鼠后,通过实时荧光定量PCR和免疫组化检测目的 蛋白表达对病毒感染的促进效果.结果 人SCARB2蛋白主要在转基因小鼠的骨骼肌和脑组织中表达,与野生型小鼠相比,转基因小鼠组织中的病毒载量显著提高4到5倍.结论 人SCARB2的体内表达可促进EV71对转基因小鼠的感染,该蛋白在体内具有EV71受体功能.     

肠道病毒71型微复制子的构建

目的 构建EV71非结构蛋白及EV71 3C蛋白酶微复制子体系,研究微复制子的复制及表达情况。方法 聚合酶链式反应扩增绿色荧光蛋白(EGFP),利用特定酶切位点及连接酶,将目的基因片段连接至pMD19-T载体,分别构建EV71非结构蛋白及EV71 3C蛋白酶微复制子体系。荧光显微镜下观察微复制子表达情况,实时荧光定量PCR观察微复制子复制情况。结果 EV71非结构蛋白微复制子及EV71 3C蛋白酶微复制子表达后,均可观察到特异性绿色荧光,荧光强度有明显差异;转染后12~72 h取样所测RNA含量几乎不变。结论 非结构蛋白全长及3C蛋白酶启动微复制子转录强度不同,所构建微复制子不具备复制功能,提示结构蛋白编码区对病毒RNA复制有重要意义。     

利血平治疗重型肠道病毒71型感染导致高血压患儿疗效观察

目的：探讨利血平辅助治疗EV71感染重症患儿所致高血压的疗效。方法：选择我院2010年4～6月均为EV71病毒阳性30例儿科住院患儿。将患儿随机分为对照组和治疗组,均应用甲泼尼龙、静脉注射用人免疫球蛋白、利巴韦林、米力农和其他常规性治疗,其中对照组15例未用利血平,治疗组15例加用利血平。利血平每次剂量0.07 mg/kg,每次最大量〈1.00 mg,血压降至正常后渐减量停用。结果：治疗12 h后,治疗组血压降至（100±10）mm Hg,对照组为（140±13）mm Hg,治疗组降压效果较对照组显著（t=3.71,P〈0.05）。结论：利血平可以辅助治疗EV71感染所致危重患儿病程中所出现的高血压,在降血压的同时可以耗竭患儿体内的儿茶酚胺,可以降低死亡率。     

国内外疟疾疫情的研究进展

疟疾是严重危害人类健康的重要全球性虫媒传染病,有关疟疾疫情的研究主要从分布特征、影响因素、预测预警模型三个角度展开,但是存在较大的方法学和结论上的争议。本文对全球疟疾疫情的研究进展和亟需解决的重要问题进行了综述。     

EV71动物模型及其在疫苗研究中的应用

人肠道病毒71型(EV71)是引起手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)的主要病原体之一,主要引起5岁以下婴幼儿手-足-口部疱疹,一般症状轻,但少数患儿出现无菌性脑膜炎、脑干脑炎等多种重症中枢神经症状,病程进展迅速,病死率     

人肠道病毒71型感染致重症手足口病的危险因素分析

目的 探讨肠道病毒71型感染导致重症手足口病的危险因素。方法 选取2015年5月至2017年10月间我院感染科收治的EV71型手足口病患儿140例为研究对象,依据临床分期标准分为普通病例组95例和重症病例组45例,收集并比较两组患儿一般资料、临床表现、实验室指标等,采用多因素Logistics回归分析判断影响手足口病重症化的危险因素。结果 两组患儿的性别、年龄、BMI间比较差异无统计学意义（P>0.05）;两组患儿的ALT、AST、脑脊液葡萄糖浓度比较差异无统计学意义（P>0.05）,但重症病例组的WBC [（12.65±3.51）×10⁹/L vs （9.16±3.44）×10⁹/L]、CRP[（10.67±4.75）mg/L vs（6.58±3.04） mg/L]、热程[（7.46±2.21）d vs（2.93±1.22）d]、热峰[（38.91±0.35） ℃ vs（38.34±0.45） ℃]、血糖[（8.40±0.78） mmol/L vs（5.96±1.14） mmol/L]、CK-MB[（17.84±1.57）U/L vs（15.75±1.64）U/L]、NP[53.47（31.50~70.22）% vs 46.89（29.44~67.01）%]、肢体抖动（37.78% vs 9.47%）、脑脊液蛋白质浓度[319.63（211.40~463.53）mg/L vs 224.82（172.24~396.91）mg/L]、脑脊液细胞数[（18.74±5.62）×10⁶/L vs （4.87±2.03）×10⁶/L]均较普通病例组显著升高,脑脊液氯化物水平[（117.52±2.84）mmol/L vs （119.75±3.09）mmol/L]较普通病例组显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）;多因素Logistics回归分析发现,热程延长（OR=8.812）、热峰升高（OR=682.359）、血清CRP（OR=1.920）、CK-MB水平升高（OR=6.299）以及脑脊液蛋白质浓度升高（OR=1.014）是手足口病重症化的独立危险因素（P<0.05）。结论 EV71感染手足口病重症化与患儿年龄、性别无关,与热程、热峰、CRP、CK-MB、脑脊液蛋白质浓度呈正相关,可作为判断EV71感染手足口病重症化的独立危险因素。     

EV71所致重症手足口病78例临床分析

目的探讨肠道病毒71型（EV71）所致的重症手足口病（HFMD）患儿的临床特点及治疗转归。方法对2010年3月-2012年11月收入院的78例EV71所致的重症手足口痛患儿的临床表现,实验室检查及治疗与转归资料进行分析。结果78例患儿治愈69例（88．46％）,治疗无效6例（7．69％）,3例（3．85％）患儿留有单侧下肢迟缓性麻痹。结论EV71感染可累及多系统多器官,早期发现危重征象,早期治疗多数预后良好。