辐射对L929细胞生长及CCN1基因表达的影响

目的 通过观察辐射对小鼠皮肤成纤维细胞系L929生长及CCNI基因表达的影响,探讨CCNI基因与辐射损伤的关系. 方法 体外培养L929细胞系,以4 Gy60Coy射线照射为辐射组,并设对照组,MTT法测细胞增殖变化,平板克降形成实验检测克隆形成能力,流式细胞术测细胞周期,RT-PCR及免疫细胞化学法检测L929细胞中CCN1基因的表达情况.结果辐射组细胞辐照2 d增殖抑制明显(P<0.01),克隆形成也明显受到抑制(P<0.05);辐射后24 h,细胞出现G2,期停滞;辐射后6 Hl929细胞CCN1的Mrna表达水平明显降低(P<0.01),至24 h开始回调(P<0.05);辐照后24～48 h,细胞CCN1蛋白的表达水平明显下降(P<0.01). 结论 因辐照生长受到抑制的小鼠成纤维细胞L929,其CCN1基因的表达水平下调,提示CCN1基因的表达水平低下是辐射导致细胞生长抑制的因素之一.     

KLF13上调对骨肉瘤细胞侵袭、迁移及p-AKT表达的影响

  目的  研究Kruppel样因子13(KLF13)对骨肉瘤细胞(MG-63)侵袭、迁移的影响及该过程中p-AKT蛋白表达变化。  方法  将MG-63细胞按照随机数字表法分为对照组、NC组和LV-KLF13-OE组;显微镜观察KLF13慢病毒颗粒转染情况;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测KLF13 mRNA表达情况;蛋白免疫印迹法检测KLF13、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(AKT)及磷酸化水平、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和膜棕榈糖基化蛋白2(MPP-2)的蛋白表达情况;细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞增殖情况;划痕实验检测迁移能力;小室法(Transwell)检测侵袭能力。  结果  MG-63细胞转染效率>75%;与对照组和NC组相比,LV-KLF13-OE组细胞KLF13 mRNA和蛋白、E-cadherin蛋白表达升高(F=1 544.143、588.000、235.391,均P＜0.001),MPP-2蛋白表达水平降低(F=260.053,P＜0.001);LV-KLF13-OE组细胞划痕愈合率[(20.07±8.18)%]、侵袭数量[(89.29±15.04)个]、p-AKT蛋白表达(0.21±0.02)水平低于对照组[(71.61±6.02)%、(221.33±20.09)个、1.12±0.12]和NC组[(74.93±7.21)%、(212.69±25.47)个、1.09±0.08,F=109.781、76.815、226.896, 均P＜0.001]。  结论  KLF13过表达可能通过下调p-AKT水平,抑制人骨肉瘤细胞迁移和侵袭。      

外源性碱性成纤维细胞生长因子对放射后大鼠学习记忆能力的保护作用

目的 探讨外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对放射后大鼠学习记忆能力的影响.方法 利用分割照射建立的迟发性放射性脑损伤(RIB)模型鼠24只,采用尾静脉直接注射给药法给予外源性bFGF,3个月后进行学习记忆能力检测,同时观察脑组织病理变化及FGF受体1(FGFR1)表达情况.结果 bFGF组平均寻台潜伏期[(56.57±4.29)s]和第一象限路径与总路径长度百分比[(21.57±1.47)%]均较模型组[(118.24±10.79)s,(6.95±0.75)%]有显著改善(P<0.01);HE染色海马区域完整细胞计数bFGF组[(115.61±12.82)个]较模型组[(70.86±8.51)个]明显增多(P<0.01);IHC结果显示,bFGF治疗组海马内FGFR1表达水平(31.50±1.59)较模型组(12.03±1.68)明显增高(P<0.01).结论 外源性bFGF可通过诱导FGFR1表达对RIB模型鼠学习记忆能力起到一定的保护作用.     

干扰LncRNA LRRC75A-AS1抑制肺癌细胞发生发展研究

目的探讨LncRNA LRRC75A-AS1/miR-22-3p对肺癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响及其可能作用机制。方法采用qRT-PCR法检测肺癌组织与癌旁组织中LRRC75A-AS1、miR-22-3p的表达水平;体外培养人肺癌细胞A549,si-NC、si-LRRC75A-AS1、si-LRRC75A-AS1与anti-miR-NC、si-LRRC75A-AS1与miR-22-3p inhibitor转染入A549细胞;采用qRT-PCR法检测A549细胞中LRRC75A-AS1、miR-22-3p的表达水平;采用MTT实验与平板克隆形成实验分别检测细胞增殖及克隆形成能力;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用划痕实验检测细胞迁移能力;双荧光素酶报告实验检测LRRC75A-AS1与miR-22-3p的靶向关系;Western blotting法检测Cleaved-caspase3蛋白表达量。结果与癌旁组织比较,肺癌组织中LRRC75A-AS1的表达水平[(1.01±0.13)vs(4.59±0.34)]升高(P < 0.01),miR-22-3p的表达水平[(1.00±0.12)vs(0.28±0.04)]降低(P < 0.01);与si-NC组比较,si-LRRC75A-AS1组细胞存活率[100%vs(54.45±2.21)%]降低(P < 0.01),克隆形成数[(121.00±5.10)个vs(58.67±2.49)个]减少(P < 0.01),凋亡率[(8.42±0.34)%vs(25.59±0.80)%]升高(P < 0.01),Cleaved-caspase3蛋白水平[(0.20±0.01)vs(0.68±0.05)]升高(P < 0.01),划痕愈合率[(66.71±1.43)%vs(32.56±0.95)%]降低(P < 0.01);双荧光素酶报告实验证实LRRC75A-AS1可充当miR-22-3p的竞争性内源RNA;与si-LRRC75A-AS1+anti-miR-NC组比较,si-LRRC75A-AS1+miR-22-3p inhibitor组细胞存活率[(54.61±2.28)%vs(88.75±3.22)%]升高(P < 0.01),克隆形成数[(57.67±2.49)个vs(106.67±3.68)个]增多(P < 0.01),凋亡率[(25.63±0.99)%vs(13.11±0.55)%]降低(P < 0.01),划痕愈合率[(32.52±0.98)%vs(55.30±1.18)%]升高(P < 0.01),Cleaved-caspase3蛋白水平[(0.67±0.06)vs(0.30±0.03)]降低(P < 0.01)。结论干扰LRRC75A-AS1表达可能通过上调miR-22-3p从而减弱肺癌细胞增殖、迁移及克隆形成能力,并能够诱导细胞凋亡。     

C-sis对缺氧导致心肌细胞凋亡的抑制作用

目的 探讨C-sis对缺氧诱导心肌细胞凋亡的作用。方法 制备原代小鼠心肌细胞;将心肌细胞分为空白组、缺氧组、缺氧及空载质粒转染组和缺氧及pcDNA3.1/C-sis转染组;将空载质粒及pcDNA3.1/C-sis分别转染缺氧及空载质粒转染组和缺氧及pcDNA3.1/C-sis转染组心肌细胞;对缺氧组、缺氧及空载质粒转染组和缺氧及pcDNA3.1/C-sis转染组心肌细胞进行缺氧处理;倒置显微镜观察各组心肌细胞的搏动频率、异常搏动次数;全自动生化分析仪测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量,采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白、C-sis蛋白表达水平。结果 与空白组相比,缺氧组心肌细胞搏动频率明显变慢[(99±5)次·min-1比(159±21)次·min-1,P<0.01],异常搏动次数明显增多[(16.9±1.4)次·min-1比(2.4±0.7)次·min-1,P<0.01],细胞培养液中LDH含量明显升高[(88.27±13.14)U·L-1比(23.54±5.81)U·L-1,P<0.01],细胞存活率降低[(57.54±4.84)%比(100.00±0.00)%,P<0.01],凋亡率升高[(39.26±4.05)%比(1.77±0.87)%,P<0.01],Caspase3和Bax蛋白表达明显升高[Caspase3:(2.27±0.94)比(0.22±0.11),P<0.01;Bax:(1.79±0.77)比(0.87±0.27),P<0.05],Bcl-2蛋白表达明显下降[(0.12±0.06)比(0.84±0.24),P<0.01]。而pcDNA3.1/C-sis质粒转染后C-sis表达明显升高,并抑制上述缺氧所致心肌细胞发生的一系列变化(P<0.01或P<0.05)。结论 C-sis能够抑制缺氧所致的心肌细胞凋亡。     

DADS对人骨肉瘤细胞U-20S生物学活性的影响

目的：探讨二烯丙基二硫(DADS)对人骨肉瘤细胞U-20S生物学活性的影响。方法将人骨肉瘤U-20S细胞随机分为DADS处理组与空白组,DADS处理组又分为15 mg/L、30 mg/L、60 mg/L、120 mg/L 4个不同浓度小组,每组分别作用于U-20S细胞24 h、48 h、72 h后进行相关检测,每组实验重复3次。采用MTT比色法测量不同的吸光值以检测DADS对人骨肉瘤细胞U-20S的抑制作用;Annexin V-FITC/PI染色法及流式细胞术检测骨肉瘤细胞凋亡率及细胞周期变化情况;Transwell侵袭实验通过计量同一视野下细胞数量以检测细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果 MTT比色法结果显示,浓度为60 mg/L DADS处理组作用于U-20S细胞24 h后其吸光值比对照组低(P<0.05)。随着浓度的增加,DADS对骨肉瘤细胞抑制作用无明显增强,表明DADS对骨肉瘤细胞有抑制作用,但并不呈剂量-效应依赖关系;染色法及流式细胞术结果显示,60 mg/L DADS作用于U-20S细胞24 h凋亡率为15.89%,高于空白组细胞的8.65%;60 mg/L DADS作用于U-20S细胞24 h,G2/M期的细胞为10.44%,高于空白组G2/M期的细胞8.18%(P<0.05);侵袭试验结果显示,DADS处理组细胞计数为(63±2)个,较空白组细胞计数(104±3)个显著减少(P<0.05),表明DADS处理组能抑制细胞侵袭能力;细胞划痕试验结果显示,60 mg/L DADS处理组细胞划痕之间的距离大于空白组,以作用48 h抑制作用最为显著(P<0.05),表明DADS (浓度为60 mg/L)能抑制U-20S细胞的迁移,并且随着时间的增加,48 h抑制作用更加显著。结论 DADS能抑制骨肉瘤细胞株U-20S增殖,诱导细胞凋亡,抑制细胞的侵袭和转移。     

青蒿琥酯影响L 929和Colon 26肿瘤细胞免疫抑制的体外研究

目的研究青蒿琥酯对L929和Colon26肿瘤细胞培养上清免疫抑制作用的影响。方法制备体外经青蒿琥酯作用后,彻底洗去青蒿琥酯,再以新鲜培养液培养L929及Colon26,收取再培养上清,同时以不经青蒿琥酯作用的L929及Colon26同步处理的相应上清作对照。实验研究这些上清对小鼠脾细胞MTT法测定的NK杀伤和ConA诱导转化,以及流式细胞计数分析的CD4 及CD8 表达的影响。结果与对照组上清相比,青蒿琥酯作用L929和Colon26后,其第一次(AL1、AC1)及第二次48h再培养上清(AL2、AC2)对ConA诱导小鼠脾细胞转化的抑制率均明显降低(分别为37.50%±6.58%,P<0.01;27.83%±5.50%,P<0.05;48.71%±3.52%,P<0.01;5.48%±1.22%,P<0.01);CD4 CD8-细胞表达百分率均明显升高(分别为15.30%±3.51%,P<0.01;27.68%±2.78%,P<0.05;10.69%±3.42%,P<0.01;28.02%±1.08%,P<0.01);AL1、AL2及AC1上清作用后,NK杀伤活性均明显升高(杀伤率分别为67.58%±4.83%,P<0.01;66.14%±4.10%,P<0.01;57.21%±3.38%,P<0.05),AC2对NK杀伤未产生明显改变(杀伤率为45.42%±8.98%,P>0.05)。结论青蒿琥酯可下调L929及Colon26肿瘤细胞培养上清的免疫抑制,下调肿瘤免疫抑制可能是青蒿琥酯的抗肿瘤新机制之一。     

血清SOD活性和胱抑素浓度在类风湿关节炎并发早期肾损伤中的意义

目的:探讨血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和胱抑素C(Cys C)浓度在类风湿关节炎(RA)患者并发早期肾损伤中的临床意义。方法:108例RA患者根据尿白蛋白排泄率(UAER)分为肾损害组、无肾损害组,同期50例健康体检者作为对照组,在全自动生化分析仪上测定血清SOD活性、Cys C、尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)浓度,并比较3组患者上述各项指标的差异。结果:1RA肾损害组SOD活性为(85.74±20.19)U/m L,与RA无肾损害组[(96.51±21.98)U/m L]、健康对照组[(114.58±18.90)U/m L]相比均明显降低(P值分别<0.05,<0.01);RA无肾损害组SOD活性为(96.51±21.98)U/m L,与健康对照组[(114.58±18.90)U/m L]相比明显降低(P<0.01);SOD阳性率在RA肾损害组(98%)和无肾损害组(95%)均高于健康对照组(75%,χ2分别为13.54,10.30,P值均<0.01);RA肾损害组Cys C浓度为(1.20±0.26)mg/L,与健康对照组[(1.07±0.22)mg/L]相比明显升高(P<0.01),RA肾损害组Cys C浓度[(1.20±0.26)mg/L]与RA无肾损害组[(1.16±0.27)mg/L]相比,差异无统计学意义;RA无肾损害组Cys C浓度[(1.16±0.27)mg/L]与健康对照组相比[(1.07±0.22)mg/L],差异无统计学意义;2RA肾损害组患者UAER水平与血清Cys C浓度变化呈正相关(r=0.396,P<0.01),与SOD血清活性呈负相关(r=-0.667,P<0.01)。结论:检测血清SOD活性及Cys C浓度有助于发现RA早期肾功能损伤。     

内毒素耐受对小鼠腹腔巨噬细胞分泌MMP⁃1、MMP⁃7及细胞迁移能力的影响

目的：观察牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis）脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的耐受对小鼠腹腔巨噬细胞分泌基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）?1和MMP?7的影响,以及耐受巨噬细胞对小鼠成纤维细胞L929迁移能力的影响。方法：采用1 μg/mL P.gingivalis LPS重复刺激小鼠腹腔巨噬细胞,构建内毒素耐受模型,并以1 μg/mL大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）LPS作为阳性对照。收集细胞条件培养液上清,采用ELISA技术检测MMP?1和MMP?7表达水平。观察耐受巨噬细胞条件培养液对L929细胞划痕创伤构建后细胞迁移能力的影响。结果：P. gingivalis LPS重复刺激后,巨噬细胞MMP?1分泌水平较单次刺激组降低（P < 0.05）,MMP?7分泌水平无明显变化（P > 0.05）。P. gingivalis LPS诱导的耐受巨噬细胞培养液上清刺激12、24 h后,L929细胞划痕修复面积大于单次刺激组培养液上清刺激后（P < 0.05）。结论：P. gingivalis LPS诱导的耐受能抑制小鼠腹腔巨噬细胞分泌MMP?1,促进L929细胞迁移。     

miR-133在鼻咽癌细胞的迁移和侵袭过程中的作用

目的:探究miR-133对鼻咽癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:实验细胞分为转染miR-133模拟物(miR-133 mimics)组及其阴性对照物(miR-NC)组、转染miR-133抑制剂(miR-133 inhibitors)组及其阴性对照(Inhibitors-NC)组。qPCR检测miR-133在鼻咽癌组织和正常组织中的表达差异;划痕愈合实验检测miR-133对鼻咽癌细胞SUNE1迁移能力的影响;Transwell实验检测miR-133对鼻咽癌细胞SUNE1侵袭能力的影响;双荧光素酶实验验证miR-133和FOXC1的关系;Western Blot验证miR-133对FOXC1蛋白表达的影响。结果:miR-133在鼻咽癌组织中的表达显著低于正常组织,而且在高级别的癌组织中的表达也低于低级别者;miR-133组和miR-NC组相比,SUNE1细胞在12 h和24 h的迁移速度[(245. 8±19. 3) vs (131. 7±8. 4)μm,P<0. 05;(362. 5±23. 0) vs(189. 2±20. 6)μm,P<0. 05]显著减缓;miR-133组较miR-NC组穿过Matrigel胶的细胞数量显著减少[(198. 0±18. 6) vs (142. 6±15. 1),P<0. 05],而miR-133 inhibitor组较Inhibitor-NC组穿过Matrigel胶的细胞数量显著增多[(202. 9±25. 7) vs (367. 1±35. 2),P<0. 05];转染miR-133 mimics后可以明显抑制野生型FOXC1的荧光素酶活性,同时miR-133能使FOXC1的蛋白表达显著降低。结论:miR-133能靶向FOXC1调控鼻咽癌细胞的迁移和侵袭。