猪苓多糖长循环脂质体的制备

目的 研究猪苓多糖长循环脂质体的制备方法，并对其质量进行控制。方法 用氯仿注入合并硫酸铵梯度法制备猪苓多糖长循环脂质体，并采用紫外-Sephadex法测定脂质体中猪苓多糖的含量和包封率。结果 猪苓多糖长循环脂质体平均粒径为100nm，药物包封率为55．3％。结论 用氯仿注入合并硫酸铵梯度法可制得包封率高、粒径小的猪苓多糖长循环脂质体。紫外-Sephadex法测定该脂质体的包封率准确性高、重现性好、简便易行。     

兔血清中对氧磷酶的提取和纯化

目的 从免血清中提纯对氧磷酶并纯化.方法 采用液相色谱的方法,从兔血清中提取对氧磷酶并进行部分纯化.比色法检测待测样品中对氧磷酶的活性,垂直板电泳的方法检测纯化的对氧磷酶的纯度.采用体外解毒的方法,以1.5倍的LD50的敌敌畏(75 mg/kg)同对氧磷酶粗酶(10 U/kg)混合后,给予小鼠腹腔注射,初步验证对氧磷酶的解毒活性.结果 纯化后的对氧磷酶比活性为11.54 IU/mg,较纯化前的比活性(0.058 IU/mg)提高了近200倍,产出率约为10%.部分纯化的对氧磷酶对于有机磷类农药有较好的催化水解作用.染毒大鼠的死亡率为0.结论 采用液相色谱的方法,可以从兔血清中部分提取并纯化时氧磷酶.     

连续监测法测定对氧磷酶

对氧磷酶(paraoxonase,PON)主要由肝脏产生,产生后即与肝脏合成的apoAI结合,参与高密度脂蛋白(highdensitylipoprotein,HDL)的形成并释放入血。目前认为PON在血清中以HDL为载体,并与HDL上的血小板激活因子——乙酰水解酶协调,使HDL发挥抑制LDL氧化修饰作用,降低体内OX-LDL水平,     

米托蒽醌长循环脂质体的制备及特性研究

米托蒽醌 (ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ,ＤＨＡＱ)是 70年代末国外合成的蒽环类抗癌药 ,国内 90年代初投产上市。研究证明其抗癌活性优于阿霉素 (ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ ,ＡＤＲ)而心脏毒性较小。ＤＨＡＱ对白血病、乳腺癌、何杰金病和原发性肝癌有较好的疗效。目前市售为ＤＨＡＱ的注射液和冻干粉针剂 ,并已有ＤＨＡＱ毫微粒的研究报道。本文以国外研究较多的长循环脂质体技术 ,用逆相蒸发法制备了米托蒽醌长循环脂质体 ,以求为该药提供更好的新剂型 ,提高抗癌效果和降低全身毒副作用。1　实验部分1.1　仪器与试药　日本岛津ＵＶ - 30 0 0型分…     

广东地区汉族人对氧磷酶2基因C311S多态性观察

目的　调查广东地区汉族人是否存在对氧磷酶 2 (paraoxonase2 ,PON2 )基因C31 1S多态性。方法　应用聚合酶链反应 -限制性长度多态性法 (PCR -RFLP)检测 1 1 7例广东地区汉族人PON2基因C31 1S多态性。结果　检出PON2C31 1S基因多态性 ,SS型为常见基因型 ,C/S等位基因频率为 0 1 4 5/ 0 855。基因频率与印度人差异有显著性 (P <0 0 0 1 ) ,与日本人、白种人相近 (P >0 0 5)。结论　广东地区汉族人存在PON2基因C31 1S多态性 ,该基因多态性存在种族差异。     

对氧磷酶-1与代谢综合征的关系研究

目的：探讨对氧磷酶-1（PON-1）-q代谢综合征（MS）的关系。方法：本文测定31例Ms患者和33例健康人血清PON-1活性．并应用聚合酶链式反应一限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术研究其PON-1第191位密码子基因变异。结果：（1）MS组血清PON-1活性低于对照组，差别具有统计学意义（t=-3．6，P〈0．05）。（2）MS组与对照组PON-1第191位密码子基因型分布无显著性差异（X^2=0．922，P〉0．05）。结论：MS组血清PON-1活性显著低于对照组．这可能是MS患者心血管疾病高发的原因之一。     

转铁蛋白顺铂长循环脂质体的制备及质量研究

目的研制转铁蛋白（transferrin,Tf）修饰顺铂长循环脂质体（Tf-PEG-CDDP）,考察其物理性状及体外释放特性。方法采用薄膜分散-超声法制备空白脂质体,硫酸铵梯度法包载顺铂,通过膜材DSPE-PEG_（2000）-MAL的末端活性基团连接转铁蛋白制备Tf-PEG-CDDP;用超滤法分离顺铂脂质体和游离顺铂,紫外可见光分光光度计测定Tf-PEG-CDDP的包封率;采用激光散射粒径分析仪测定粒径和透射电镜观察其性状;透析法检测顺铂脂质体体外缓释能力。结果 Tf-PEG-CDDP呈圆形囊泡样结构,大小略不均一,平均粒径为200 nm,包封率平均为（78.222±5.4086）%,稳定性尚可。体外释放实验示Tf-PEG-CDDP有明显优于CDDP的缓释能力。结论 Tf-PEG-CDDP具有缓释能力,是一种有效的顺铂靶向制剂。     

对氧磷酶1与动脉粥样硬化的关系

对氧磷酶(Paraoxonase，PON)基因家族有PONl、PON2和PON3三个成员。PONl是一种与HDL相关的酯酶，它能够水解有机磷；能够阻止脂质过氧化物的生成；抑制LDL及HDL的氧化；PONl的活性与动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)呈负相关；PONl的遗传多态性可能是AS的独立危险因素；PONl可能通过其内酯酶活性及类磷脂酶A2的活性影响AS的发生及发展。     

对氧磷酶1融合蛋白的表达及其生物活性

目的：利用家蚕表达系统表达含蛋白转导肽P11的人血清对氧磷酶1（paraoxonase 1,PON1）融合蛋白,并对其抗敌敌畏（dichlorvos,DDVP）毒性的生物活性进行初步研究。方法 P11-PON1融合基因构建于家蚕表达载体pFastBac 5B多克隆位点,转化家蚕DH10BmBac 感受态细胞,收集病毒粒子并感染家蚕5龄幼虫,感染96 h 后,收获蛋白;SDS-PAGE 电泳分析P11-PON1融合蛋白占家蚕总蛋白比例,计算蛋白含量;利用小鼠和斑马鱼鉴定P11-PON1融合蛋白抗DDVP毒性的生物活性;每只小鼠灌胃或直肠给P11-PON1融合蛋白1mg,给药后立刻和3 h后,腹腔注射DDVP溶液20 mg/kg,观察小鼠中毒状态,计算存活率;P11-PON1融合蛋白溶于斑马鱼养殖水中,浓度分别为1、2.5、5、10和20 mg/L,给药后立刻和3 h 后加入终浓度为50 mg/L的DDVP溶液染毒,观察斑马鱼的行为变化,计算存活率。结果成功表达了P11-PON1融合蛋白,该蛋白占家蚕5龄虫总蛋白的8%;灌胃给予P11-PON1融合蛋白没有提高染毒小鼠的存活率;直肠给药后立刻染毒也没有显著提高小鼠存活率,而直肠给药3 h后再腹腔注射DDVP染毒,小鼠存活率显著提高（P＆lt;0.01）;斑马鱼给予P11-PON1融合蛋白后立即染毒DDVP,斑马鱼存活率并没有显著性提高,而给予P11-PON1融合蛋白3 h后再染毒DDVP,斑马鱼存活率显著提高,其中融合蛋白20和10 mg/L组24 h存活率均为62.5%,5 mg/L组存活率为50%,与对照组相比,差异显著提高（P ＆lt;0.01）;2.5 mg/L组存活率为41.7%,与对照组相比差异有显著提高（P ＆lt;0.05）。结论家蚕能够表达P11-PON1融合蛋白,该融合蛋白提前给药能降低DDVP对小鼠和斑马鱼的毒性作用。     

中药脂质体制备的研究进展

脂质体(liposomes)最初是由英国学者Bangham和Standish发现并命名的。磷脂分散在水中可以自然形成多层囊泡，每层均为脂质的双分子层；囊泡中央和各层之间被水相隔开，双分子层厚度约4nm，这种具有类似于生物膜结构的小囊称为脂质体。由于它的结构类似生物膜，又称人工生物膜。六十年代末Rahman等人首先将脂质体作为药物载体应用。随着生物技术的不断发展。对脂质体的研究日渐广泛，已遍及了生命科学及膜工程学领域，并逐渐向临床应用发展。     

长循环长春新碱脂质体抗癌作用的研究

目的：制备长循环长春新碱脂质体,评价其急性毒性和抗癌作用.方法：采用主动装载技术,以聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺（PEG-DSPE）为保护剂,制备长循环长春新碱脂质体;采用昆明种小白鼠的多种肿瘤模型,评价长春新碱脂质体的急性毒性和抗癌作用.结果：长循环长春新碱脂质体的粒度在80～150纳米范围内,脂质体显著提高了长春新碱的抗癌作用同时显著减轻其急性毒性.结论：长循环脂质体是长春新碱的理想载体.     

蛇床子素脂质体的制备及其质量评价

目的: 对蛇床子素脂质体最佳制备工艺及处方进行研究,并评价其质量。方法: 采用薄膜-超声分散法制备蛇床子素脂质体,以包封率为评价指标,采用单因素和正交实验优化蛇床子素脂质体的制备工艺和处方,并测定其粒径和Zeta电位。结果: 蛇床子素脂质体优化后的制备工艺和处方为：胆固醇与大豆卵磷脂质量比为1:3,药脂比为3:20,pH值为7.9,成膜温度为45 ℃。按此处方工艺制备蛇床子素脂质体包封率在80%以上。平均粒径为（466.6 ± 6.4）nm,平均Zeta电位为（-29.0 ± 1.8）mV。结论: 优选的处方和工艺条件可行且稳定,制备的蛇床子素脂质体包封率高,稳定性好。     

坦西莫司脂质体冻干剂的制备及大鼠药代动力学

制备坦西莫司脂质体冻干剂,优化其处方及工艺,并进行大鼠药代动力学研究。用薄膜分散法制备坦西莫司脂质体,采用冷冻干燥法制备脂质体冻干剂,单因素实验考察最佳处方为:磷脂浓度24 mg/mL,药物与磷脂质量比1∶40,磷脂与胆固醇质量比10∶1,冻干保护剂蔗糖与磷脂的质量比2∶1。复溶后粒径(100.8±6.74)nm,包封率(95.24±3.58)%。透析法研究脂质体的体外释放行为,37 ℃下,在pH 7.4的磷酸盐缓冲液中24 h释放不到30 %。用高效液相色谱法研究最佳处方脂质体的大鼠药代动力学,其最高血药浓度为市售制剂Torisel^®的3.06倍,生物利用度为Torisel^®的2.49倍。实验结果显示,经过处方工艺优化后的坦西莫司脂质体冻干剂包封率较高,具有缓释效果,可以显著提高坦西莫司在大鼠体内的生物利用度。     

盐酸米托蒽醌脂质体制备及其经皮吸收分布规律的研究

目的研究盐酸米托蒽醌脂质体在体经皮给药的透皮规律。方法采用薄膜法制备盐酸米托蒽醌脂质体,测定其粒径、荷电性及包封率;以静脉注射盐酸米托蒽醌水溶液为对照,进行盐酸米托蒽醌脂质体大鼠在体经皮给药实验,用HPLC法测定药物在两组各组织、器官中的浓度,分析经时变化规律。并用3p97程序处理大鼠皮肤药时数据。结果盐酸米托蒽醌脂质体体积平均粒径为50.98nm,荷电性为-16.57mv,包封率可达100%;大鼠在体经皮给药,所得皮肤药-时曲线符合一室模型,2h皮肤中分布达高峰,峰浓度为(2.075±0.098)μg/g,药时曲线下面积为15.01μg·h/g;静脉注射给药,所得皮肤药-时曲线符合二室模型,药时曲线下面积为10.74μg·h/g,与经皮给药组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。而其他组织、器官中的药物浓度均远低于对照。结论盐酸米托蒽酯脂质体皮肤局部给药可实现局部皮肤靶向,有望用于治疗恶性皮肤黑色素瘤。     

蛇床子素脂质体的制备及表征

目的：对蛇床子素脂质体的制备方法、制备处方、制剂性质进行研究,并制备冻干脂质体提高制剂的稳定性。方法：以包封率和粒径分布为指标,筛选脂质体的制备方法;采用单因素方差分析和正交实验优化处方,测定优化后处方包封率、粒径、电位,观察电镜下形态;选择甘露醇为冻干保护剂,探究其加入量对冻干脂质体包封率的影响。结果：通过筛选选择乙醇注入法制备脂质体,制备温度为50℃,蛋黄卵磷脂（egg yolk lecithin,EPC）浓度为4 mg·mL-1,胆固醇（cholesterol,CHOL）加入量为5 mg,蛇床子素（osthole,Ost）加入量为2 mg为最优处方。脂质体包封率为（83.09±0.56）%,粒径为（101.9±2.7） nm,电位（-15.3±2.3） mV。当甘露醇加入量为8% 时,冻干脂质体形态较好、复溶后泄漏较少。结论：使用乙醇注入法制备得到的脂质体包封率高,粒径分布均匀,方法稳定,制备为冻干脂质体后,脂质体稳定性得到提高。     

包裹质粒DNA及线状DNA脂质体的制备

本实验制备组成分别为DOPE/Chol/OA(4:4:3)的酸敏脂质体及DOPC/Chol/OA(4:4:3)脂质体,用于包裹质粒pSV_2-neo、pUC18-ras、pSV-neo-ras及大分子线状DNA,包裹率可达50％.被脂质体包裹的DNA不被DNase降解,提示DNA分子被脂质体包裹在微球体内部.电泳检测表明,被包裹的DNA分子没有断裂.所得到的脂质体较稳定,4℃放置5～6月,脂质体内仍保留部分DNA分子.制备酸敏脂质体时,pH为8.0时脂质体较稳定,pH<6.5～7时则不稳定.     

包被酶和偶联抗体脂质体的制备

用磷脂酰胆碱、神经节苷酯、胆固醇以４５∶１０∶４５的克分比浓度制备出大的单层脂质体，在其水相溶液中分别包被０．５，１，２，４ｍｇ的碱性磷酸酶（ＡＫＰ），经或不经ＴｒｉｔｏｎＸ－１００处理后，与ＡＫＰ的底物作用，于４００ｎｍ处测ＯＤ值。结果显示，当ＡＫＰ为１ｍｇ／ｍｌ时，效果最理想（０．７８４±０．０５６和０．１７５±０．０２７）。该脂质体充入氮气后，于４℃中可保存３个月。用过碘酸钠法分别偶联５，１０，１５ｍｇ／ｍｌ的抗ＡＦＰ于脂质体上，发现随着抗ＡＦＰ浓度的增加，偶联的抗ＡＦＰ的比例升高，而结合抗ＡＦＰ的百分比却有下降趋势。     

硫酸长春新碱脂质体的释放度和药效学研究

目的 考察硫酸长春新碱脂质体的体外释放度及其药效.方法 采用pH梯度法制备硫酸长春新碱脂质体,用透析法测定其体外释放度和血浆释放度,通过抗小鼠S180肿瘤的抑瘤率评价药效.结果 硫酸长春新碱脂质体体外释放度符合零级动力学模型;聚乙二醇单甲醚2000胆固醇琥珀酸酯修饰的硫酸长春新碱脂质体释放度降低,抑瘤率显著提高.结论 长循环硫酸长春新碱脂质体降低药物释放度,提高药效.     

蟾蜍抗菌肽脂质体的制备及抗菌研究

目的?筛选制备蟾蜍抗菌肽脂质体最佳处方,延长其抑菌疗效,提高其安全稳定性。方法?采用水提法提取蟾蜍多肽,薄膜分散法制备蟾蜍抗菌肽脂质体,以包封率为考察指标,Box-Behnken Design-响应面优化法（BBD-RSM）分析筛选处方,Design Export 8.0.6 Trial软件进行回归分析得出最优处方,透皮吸收实验验证蟾蜍抗菌肽脂质体吸收情况,溶出性抗菌产品抑菌性能试验测定抗菌效果。结果?通过响应面法优化的蟾蜍抗菌肽脂质体最佳处方为:磷脂含量为40?mg,磷脂与胆固醇比例为4∶1,脂药比为4∶1,最佳条件下制备的蟾蜍抗菌肽脂质体的药物包封率为（79.14±0.5）%;透皮吸收实验结果显示,在12?h时,表面存留率为94%,提高了蟾蜍抗菌肽的安全稳定性;抗菌结果表明,蟾蜍抗菌肽脂质体有效地延长了蟾蜍抗菌肽的药效时间。结论?改良后的蟾蜍抗菌肽剂型有效地提高了药效时间及安全稳定性。      

载三氧化二砷pH敏感型脂质体的制备及体内外评价

目的  将三氧化二砷制备为pH敏感型脂质体,并进行体外抗胶质瘤活性与体内安全性评价。方法  采用反相微乳法制备疏水性修饰的锰砷共沉淀,后采用乳化蒸发法进行负载制备脂质体(Liposome/MnAs)。测定Liposome/MnAs的粒径、PDI以及Zeta电位;透射电镜观察Liposome/MnAs的形态;ICP-MS测定包封率;透析袋法考察其体外不同pH条件下的释药特性;考察酸性条件下体外MRI成像能力。共聚焦显微镜观察鼠源性脑胶质瘤GL261细胞对Liposome/C6的摄取情况和胞内分布情况;MTT法考察游离三氧化二砷及Liposome/MnAs对GL261的毒性;流式细胞仪检测游离三氧化二砷及Liposome/MnAs对GL261细胞的凋亡作用。结果  制备的锰砷共沉淀具有疏水性,可较好地被氯仿溶解;Liposome/MnAs呈规整的类球型,粒径约为(286.43±6.41)nm,As包封率为(48.32±5.95)%;可在pH5.4条件下迅速响应释放As3+及Mn2+,具有良好的体外MRI成像能力。GL261细胞对C6标记的脂质体的摄取情况较好,且主要分布在细胞质。Liposome/MnAs抑制GL261细胞生长的作用(IC₅₀=2.99μmol/L)较游离三氧化二砷(IC₅₀=4.74μmol/L)有所上升;细胞凋亡实验也表明Liposome/MnAs较游离三氧化二砷有更好地促进GL261细胞凋亡的作用,促凋亡率由13.73%提高至21.42%。给药周期内,Liposome/MnAs对小鼠体内主要脏器无明显毒性。结论  以反相微乳法制备的锰砷共沉淀具有良好的疏水性,被脂质体包载制备为Liposome/MnAs,具有pH响应释药的特性,能有效增强GL261细胞对脂质体摄取。可增强三氧化二砷对胶质瘤细胞GL261的毒性,且具有一定的体内安全性。