人参多糖对K562细胞增殖抑制及诱导分化的实验研究

目的　研究人参多糖(GPS)对人白血病细胞株(K562)增殖抑制及诱导分化的影响。方法　采用细胞体外培 养技术,MTT法检测细胞增殖抑制,光镜和电镜观察细胞形态变化;联苯胺(Benzidine)、糖原染色(PAS)、过氧化物酶 (POX)、非特异性脂酶(α- NAE)细胞化学染色分别检测K562细胞向红系、粒系、巨核系分化的特征;免疫细胞化学检测细胞 表面分化抗原及因子表达(CD14、CD15、HIR2、EPO、GM CSF);FAS及FAS L等检测细胞凋亡情况。结果　GPS对K562细胞 的增殖有明显抑制作用并能诱导K562细胞向红系或粒系细胞分化,表现为:①K562细胞的增殖受到抑制;②K562细胞形 态学上可见细胞体积缩小,核直径减小,核仁减少或消失,核染色质浓缩,胞浆丰富,核浆比例降低,可见中晚期粒、红系细 胞;③K562细胞血红蛋白(Hb)、糖原、α- NAE的表达明显增加,而过氧化物酶(POX)的表达与对照无显著性差异;④细胞表 面分化抗原CD15、HIR2、EPO、GM CSF的表达明显增强,CD14的表达与对照无显著性差异;⑤细胞凋亡明显增加。结论　人 参多糖(GPS)能明显抑制K562细胞增殖并能诱导其凋亡并使K562细胞向成熟方向分化。     

K562细胞红系诱导分化方法的实验研究

目的建立一种高效K562细胞红系诱导分化方法。方法比较不同方法对K562细胞红系诱导分化的效果,优化诱导剂成分组合和剂量组合,建立一种高效的红系诱导,鉴定指标选用细胞形态学、联苯胺染色阳性率计数及RT-PCR测定红系细胞标志物膜带3蛋白(band3)的表达。结果多因素协同诱导K562细胞红系分化120 h后,显微镜下观察细胞形态呈红系中、晚期特征,联苯胺染色阳性率可达(52.7±8.2)%,红系标志物band3在mRNA水平明显高于对照组(P<0.01)。结论多条信号途径协同参与K562细胞红系分化的过程,多因素共同诱导可显著提高K562细胞的红系分化。     

SHP1基因诱导慢性粒细胞白血病K562细胞凋亡及红系分化

目的探讨SHP1基因在诱导K562细胞凋亡及红系分化中的作用。方法应用RT-PCR法克隆SHP1基因全长cDNA序列并克隆于真核表达载体pcDNA3.0,脂质体转染使其基因在K562细胞中过表达。Hoechst33258染色和FACS(AnnexinⅤ-PI双标)分析检测转基因后K562细胞凋亡;联苯胺蓝染色和血型糖蛋白A(GPA)表达检测分析细胞分化情况。结果 pcDNA3-SHP1转染K562细胞,RT-PCR、蛋白免疫印迹分析证实SHP1在K562细胞中表达。转染48h后,K562细胞出现凋亡,AnnexinⅤ-PI双标FACS分析细胞凋亡率为16.84%,与转染空载体pcDNA3.0(6.23%)相比差异有统计学意义(P=0.000)。联苯胺蓝染色细胞阳性率14.67%,GPA表达率19.38%,与转染空载体组比较差异也有统计学意义(P=0.005)。结论 SHP1能有效地诱导K562细胞凋亡与红系分化。     

青蒿酸对人红白血病K562细胞增殖抑制的体外研究

目的：探讨青蒿酸体外作用对K562细胞增殖的影响及其机制.方法：采用MTT法检测青蒿酸对K562细胞增殖的影响,流式细胞术分析细胞周期分布情况,透射电子显微镜进行形态学观察.结果：青蒿酸作用K562细胞24h、48h,能显著抑制细胞增殖,随药物浓度增加,对细胞增殖的抑制强度也显著增高.经青蒿酸作用48h,处于G0/G1期K562细胞增加,且能诱导K562细胞发生凋亡.电镜可观察到细胞凋亡的形态学改变.结论：青蒿酸能抑制K562细胞增殖,这种抗肿瘤作用可能与抑制K562细胞进入细胞增殖周期和诱导细胞凋亡有关.     

人参总皂甙对K562细胞增殖抑制与诱导分化的实验研究

采用细胞体外培养,流式细胞术、形态学观察、组化与免疫细胞化学等方法,研究人参总皂甙（ＴＳＰＧ）对Ｋ＿６５２细胞增殖与分化的影响。结果表明：ＴＳＰＧ对Ｋ＿５６２细胞增殖具有明显的抑制作用,并能阻止Ｋ６５２细胞由Ｇ０／Ｇ１期向Ｇ２／Ｍ＋Ｓ期过渡：经２００μｇ／ｍｌ的ＴＳＰＧ诱导后,Ｋ５６２细胞形态趋向成熟分化;联苯胺染色、糖原染色和ＨＩＲ２．ＣＤｗ４１阳性表达细胞数显著提高,且阳性强度增加。推测ＴＳＰＧ是能抑制白血病细胞增殖并诱导其分化的天然诱导剂,但对其机理有待进一步探讨。     

当归多糖对人红系造血祖细胞增殖的影响及其机理研究

采用造血祖细胞体外培养、造血生长因子生物活性检测等实验血液学技术，研究当归多糖（AP）对人红系造血祖细胞（BFU-E，CFU-E）增殖调控的影响及其机理，结果表明，AP能显著促进BFU-E，CFU-E的集落形成/经AP诱导制备的脾细胞，胸腺细胞和骨髓基质细胞培养上清液能提高BFU-E的集落产率；AP能协同IL-3和红细胞生长素（Epo)促进BFU-E生长，研究提示，AP有可能直接刺激BFU-E，CFU-ZE增殖。亦可能通过促进机体产生红系造敌国生长因子和/或协同这些因子的作用等途径。进而促进机体的红系血发生。     

牛蒡多糖对K562细胞增殖的抑制及其机制的探讨

目的研究牛蒡多糖对K562细胞增殖的抑制作用并初步探索其机制。方法 MTT法检测牛蒡多糖对K562细胞增殖的抑制作用,RT-PCR检测BCL-2mRNA、Bax mRNA的表达。结果牛蒡多糖能明显抑制K562细胞的增殖;BCL-2基因表达下调,Bax的基因表达增多。结论牛蒡多糖对K562细胞增殖有抑制作用,其机制可能与BCL-2基因表达下调,Bax的表达上调有关。     

苦参碱对K562细胞增殖抑制与诱导分化的实验研究

目的：观察苦参碱对K562细胞的增殖抑制和诱导分化作用。方法：以K562细胞为实验对象,采用体外培养技术,通过细胞生长曲线、细胞形态、乳酸脱氢酶（LDH）活性测定方法观察苦参碱的作用。结果：浓度为0．2－0．3mg/ml的苦参碱对K562细胞有明显的增殖抑制与诱导分化作用,实验组细胞的数量,形态和生化代谢都发生了变化。结论：这一结果将对白血病的诱导分化治疗提供有力的实验依据。     

红芪总黄酮对慢性粒细胞系K562细胞周期及凋亡影响研究

目的观察中药红芪总黄酮对K562细胞周期及凋亡的影响。方法以不同剂量的药物处理K562细胞，MTT法检测红芪总黄酮对细胞的抑制作用，流式细胞仪检测其周期及凋亡的改变。结果与对照组比较，不同浓度红芪总黄酮作用K562细胞24h、48h和72h，K562细胞增殖表现为明显抑制；有一定的时间剂量依赖关系。IC50分别为263．757μg,／ml、120．502μg／ml、117．075μg／ml。药物作用48小时，各药物组与对照组相比吸光度值（A值）均明显降低，有统计学意义（P〈0．01），但无明显凋亡现象，表现为K562细胞阻滞于G0／G1、G2／M期时相。结论红芪总黄酮对K562细胞生长有抑制作用，但其抑制机制不是通过诱导细胞凋亡，而是通过诱导K562细胞的G0／G1、G2／M期阻滞。     

大蒜素对人红白血病细胞株K562细胞增殖的影响

目的 研究大蒜素对人红白血病K562细胞增殖的影响.方法 用不同浓度的大蒜素处理对数生长期的K562细胞,通过形态学观察、瑞氏染色、MTT比色法,观察大蒜素对K562细胞增殖的影响.结果 562细胞在大蒜素作用后,出现凋亡的形态学改变;MTT比色法测定显示大蒜素能明显抑制K562细胞的增殖,并且抑制率随浓度增加和作用时间延长而升高.结论 大蒜素对K562细胞有明显的增殖抑制作用.     

附子中的新乌头碱对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的研究附子中的成分新乌头碱作用于白血病K562细胞株对其生物学特性的影响。方法采用高效液相色谱法(HPLC)检测附子中是否含有新乌头碱和苯甲酰新乌头原碱。用新乌头碱标准品作用白血病K562细胞,电子显微镜下观察白血病细胞形态变化。流式细胞仪检测白血病细胞的细胞周期状态、凋亡的情况。结果高效液相色谱法检测出附子中含有新乌头碱。25~50 mg/L的新乌头碱对K562细胞增殖有明显的抑制作用,并呈剂量和时间依赖性(P0.05)。K562细胞在形态学上有明显的凋亡变化。流式细胞仪检测白血病细胞的细胞周期和凋亡状态,S期比例上升,G1期比例降低(P0.05)。25~50 mg/L的新乌头碱能不同程度地诱导K562细胞发生凋亡(P0.05)。结论附子中的新乌头碱具有抑制白血病K562细胞增殖、诱导其细胞凋亡的作用。     

人参皂甙单体Rg3对人红白血病细胞株K562细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨人参皂甙单体Rg3对人红白血病细胞株K562细胞增殖及凋亡的影响.方法 将人红白血病细胞株K562细胞传代培养至对数生长期,分组加入不同浓度的人参皂甙单体Rg3,并设置空白对照组.用MTT比色法观察Rg3对体外培养的K562细胞生长的抑制作用;在光学显微镜下观察不同浓度人参皂甙单体Rg3对K562细胞的凋亡作用及计数凋亡率(AR);硝基四氮唑(nitroblue tetrazolium,NBT)还原能力测定试验检测分化指标;DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型的DNA梯形条带图谱.结果 MTT比色法测定显示,人参皂甙单体Rg3作用于K562细胞后可以抑制其增殖并诱导其凋亡,且呈剂量依赖性.结论 人参皂甙单体Rg3能抑制体外培养的K562细胞增殖并诱导其凋亡.     

manumycin对人髓系白血病细胞株K562细胞的增殖抑制作用

探讨manumycin对人髓系白血病细胞株K562细胞的增殖抑制作用,为其治疗白血病提供理论依据。方法：实验设阴性对照组（K562加含10%胎牛血清的IMDM培养液）和manumycin组（终浓度分别为2、4、8及16 μmol/L）,分别作用24、48和72 h,镜下观察manumycin作用后K562细胞的生长情况;MTT法检测K562细胞的生长抑制率;24 h 后,用Western blotting方法检测对照组及4、 16 μmol/Lmanumycin组K562细胞中survivin蛋白的表达。结果：镜下观察显示,对照组细胞生长状态良好,密度均一,大小一致,轮廓清晰,折光性强。与对照组比较,8 μmol/L manumycin组细胞明显变小,密度稀疏,大小不均一,细胞轮廓欠清晰,折光性差;16 μmol/L  manumycin组细胞密度明显减少,大小不等,轮廓不清,有细胞碎片。MTT结果显示,随着manumycin浓度增加和作用时间延长,生长抑制率逐渐增加,与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）,且存在时间-剂量-效应关系。Western blotting结果显示,与对照组比较,16 μmol/L manumycin作用K562细胞24 h以后细胞内survivin蛋白含量下降。结论：manumycin通过下调K562细胞survivin蛋白的表达,促进细胞凋亡,抑制肿瘤细胞的生长,从而达到治疗白血病的目的。     

土贝母诱导K562细胞凋亡

目的:探讨土贝母诱导分化K562细胞的作用机制.方法:将土贝母制剂加入到在体外培养的K562细胞中,观察K562细胞增殖水平,并检测土贝母制剂作用前后细胞对噻唑蓝还原能力,同时应用流式细胞仪测定K562细胞增殖周期.结果:土贝母制剂对K562细胞增殖有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性;K562细胞增殖G0/G1期细胞比率明显增加,S期细胞比率明显减少.结论:土贝母制剂能阻止K562细从G0、G1期向S期转化,抑制K562细胞增殖,促进K562细胞凋亡.     

苦参提取液诱导K562细胞分化的研究

利用体外培养技术,以Ｋ５６２细胞为实验模型,通过Ｋ５６２细胞的生长曲线、细胞形态、乳酸脱氢酶活性、血红蛋白测定等,观察了苦参提取液对Ｋ５６２细胞的诱导分化作用。以ＭＴＴ法结合细胞形态探讨苦参提取液作用Ｋ５６２细胞的有效分化浓度及有效作用时间,研究结果表明：１２ｍｇ／ｍｌ浓度的苦参提取液作用Ｋ５６２细胞二天,从形态到代谢都发生了变化。ＬＤＨ活性明显降低;血红蛋白生成;细胞增殖明显受到抑制。电镜形态提示,细胞向似红细胞系、粒细胞系及单核细胞系分化。     

川楝素提取物诱导 K562 细胞凋亡的实验研究

目的 探讨川楝素提取物对人白血病 K562 细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及其机制。方法 采用 MTT 法检测川楝素提取物对 K562 细胞增殖的影响;Wright′s染色观察细胞的形态学改变;流式细胞技术检测细胞周期与凋亡率的变化;Annexin V/PI 双标记法检测细胞的早期凋亡变化;DNA 琼脂糖凝胶电泳观察 DNA 片段化;比色法检测 Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9 相对活性的改变;RT-PCR 检测凋亡相关基因 p21、bcr/abl、H-ras mRNA 表达水平的改变。结果 川楝素提取物显著抑制 K562 细胞的增殖,并呈剂量-时间依赖性,作用 72 h 的 IC50值为 20 nmol/L;处理组细胞可见典型的凋亡形态学改变;细胞周期和 Annexin V/PI 双标记检测表明川楝素提取物可诱导 K562 细胞凋亡,并呈剂量-时间依赖性;处理组细胞 DNA 琼脂糖凝胶电泳出现明显的 DNA ladder;处理组细胞 Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9 的活性均显著增加;p21、H-ras mRNA 表达上调,bcr/abl mRNA 表达下调。结论 川楝素提取物对 K562 细胞具有增殖抑制和诱导凋亡的作用,其机制与 Caspase 信号途径的活化有关。     

丹参酚酸对人K562细胞株增殖抑制的体外研究

【目的】研究丹参酚酸B对人(K562)细胞系生长的抑制效应,并探讨其作用机制。【方法】用不同浓度的丹参酚酸B加入体外培养K562细胞中,观察加药后细胞生长数量及其形态的变化;用MTT法检测丹参酚酸B的细胞毒作用;用Hoechest33342和PI双荧光染色法检测细胞凋亡。【结果】丹参酚酸B明显抑制K562细胞生长;IC50值为2.5×10-5mol/L;其抑制率与药物浓度呈剂量依赖关系;凋亡细胞的比例与药物浓度及作用时间呈正相关。【结论】丹参酚酸B能有效抑制K562细胞的增殖。     

青蒿琥酯诱导人白血病细胞K562胀亡和凋亡作用的研究

目的:探讨青蒿琥酯(Artesunate,ART)对人慢性粒细胞性白血病细胞株K562增殖抑制的影响.方法:采用MTT比色法检测青蒿琥酯对体外培养的K562细胞的生长抑制作用,光、电镜下观察青蒿琥酯作用后的K562细胞形态学变化特征,流式细胞仪检测在不同浓度、不同时间作用下青蒿琥酯诱导K562细胞的细胞胀亡率和凋亡率.结果:青蒿琥酯对K562细胞有明显的增殖抑制作用,24h、48h、72h的半数抑瘤浓度IC50(μg/ml)分别为65.17、31.63、10.51.青蒿琥酯主要引起K562细胞的胀亡和凋亡变化,但胀亡率与凋亡率尤明显差别.结论:青蒿琥酯主要通过胀亡和凋亡2种方式抑制K562细胞增殖,并呈明显量效时效关系.