人参多糖对K562细胞增殖抑制及诱导分化的实验研究

目的　研究人参多糖(GPS)对人白血病细胞株(K562)增殖抑制及诱导分化的影响。方法　采用细胞体外培 养技术,MTT法检测细胞增殖抑制,光镜和电镜观察细胞形态变化;联苯胺(Benzidine)、糖原染色(PAS)、过氧化物酶 (POX)、非特异性脂酶(α- NAE)细胞化学染色分别检测K562细胞向红系、粒系、巨核系分化的特征;免疫细胞化学检测细胞 表面分化抗原及因子表达(CD14、CD15、HIR2、EPO、GM CSF);FAS及FAS L等检测细胞凋亡情况。结果　GPS对K562细胞 的增殖有明显抑制作用并能诱导K562细胞向红系或粒系细胞分化,表现为:①K562细胞的增殖受到抑制;②K562细胞形 态学上可见细胞体积缩小,核直径减小,核仁减少或消失,核染色质浓缩,胞浆丰富,核浆比例降低,可见中晚期粒、红系细 胞;③K562细胞血红蛋白(Hb)、糖原、α- NAE的表达明显增加,而过氧化物酶(POX)的表达与对照无显著性差异;④细胞表 面分化抗原CD15、HIR2、EPO、GM CSF的表达明显增强,CD14的表达与对照无显著性差异;⑤细胞凋亡明显增加。结论　人 参多糖(GPS)能明显抑制K562细胞增殖并能诱导其凋亡并使K562细胞向成熟方向分化。     

丙氧鸟苷对K562细胞抑制增殖和诱导分化作用

目的　研究丙氧鸟苷 (GCV)抑制K562 细胞增殖作用和机制。方法　细胞培养、集落培养、联苯胺染色。结果　 0 .6 2 5～ 40 μmol浓度的GCV对K562 细胞有明显的抑制增殖作用 ,作用 4d时的半数抑制量 (IC50 )为 2 .99μmol,作用 7d后克隆形成抑制率达 43% ,联苯胺染色阳性细胞百分率随药物剂量的增加和培养时间的延长而逐渐增加。结论　GCV体外抑制K562 细胞增殖并能诱导其向红系分化     

丙氧鸟苷对K562细胞抑制增殖和诱导分化作用

目的研究丙氧鸟苷(GCV)抑制K562细胞增殖作用和机制。方法细胞培养、集落培养、联苯胺染色。结果0.625～40μmol浓度的GCV对K562细胞有明显的抑制增殖作用,作用4d时的半数抑制量(IC50)为2.99μmol,作用7d后克隆形成抑制率达43%,联苯胺染色阳性细胞百分率随药物剂量的增加和培养时间的延长而逐渐增加。结论GCV体外抑制K562细胞增殖并能诱导其向红系分化。     

苦参碱诱导 K562 细胞合成 γ珠蛋白

目的 体外研究苦参碱对K562细胞γ珠蛋白合成的影响.方法 以K562细胞为体外模型,采用联苯胺染色方法确定苦参碱诱导K562细胞血红蛋白表达增加的剂量效应和时间效应,进一步应用Western blotting技术检测血红蛋白F(αγ2)水平.结果 0.1mg/ml苦参碱作用于K562细胞,在96h联苯胺染色阳性细胞率达到15.67%;Western blotting检测到血红蛋白F表达增加.结论 苦参碱在体外可诱导K562细胞γ珠蛋白合成增加,从而使血红蛋白F增加.苦参碱具有与阳性对照丁酸钠相似的诱导γ珠蛋白合成增加的作用.     

毫米波联合无环鸟苷对K562细胞抑制增殖和诱导分化的研究

目的 探讨毫米波联合无环鸟苷（ACV）对人白血病细胞的抗增殖和诱导分化作用,用于白血病细胞的体外净化。方法 将毫米波和无环鸟苷分别单独以及联合作用于K562细胞,测定细胞比活力和联苯胺染色情况,组织化学染色及光镜观察形态。结果 在ACV或联合毫米波的作用下,抑制了K562细胞的增殖和诱导其向红系分化,且毫米波对ACV有协同效应。结论 可为自体干细胞移植探索新的途径。     

K562细胞红系分化过程中miR-451表达的变化

目的:观察K562细胞红系分化过程中miR-451表达的变化,探讨miR-451在红细胞(RBC)形成过程中的作用.方法:应用Northern印迹法分析小鼠不同组织细胞(肝、骨髓、红细胞、白细胞)及人RBC、鸡RBC中miR-451的表达情况.采用氯高铁血红素(hemin,50 μmol/L)诱导K562细胞红系分化,诱导36 h后应用联苯胺染色及血红蛋白mRNA RT-PCR鉴定K562细胞红系分化结果,采用Northern印迹法及茎环RT-PCR分析K562细胞经hemin诱导不同时间点(24、48、72、96 h)miR-451表达的变化.结果:除红细胞外,小鼠白细胞、肝脏及骨髓Northern印迹均未检测到miR-451表达;人RBC及具有细胞核的鸡RBC亦检测到miR-451表达.小鼠及人RBC检测到2种miR-451,发现了1条较Sanger中心报道的序列3′端多1个尿嘧啶的miR-451序列.50 μmol/L hemin诱导后K562细胞出现红系分化,与诱导前相比,诱导36 h后联苯胺染色阳性细胞增多(P＜0.05),γ、δ及ε血红蛋白表达增加(P＜0.05).Northern印迹未能检测到K562细胞诱导前后miR-451表达变化,但更敏感的茎环RT-PCR分析显示,诱导前K562细胞本身低丰度表达miR-451,hemin诱导24 h后,miR-451表达丰度开始增加,随着血红蛋白(δ-globin)表达增加,miR-451表达进一步增加,72 h达高峰.结论:miR-451是红系分化终末特异高表达的miRNA,在人及小鼠RBC中均存在相差1个碱基的2种序列,其在K562细胞红系分化过程中表达升高.     

人参皂甙协同EPO和GM-CSF对K562细胞诱导分化的实验研究

目的 研究人参总皂甙(Total saponins of panax ginseng，TSPG)协同细胞因子(EPO、GM-CSF)对人红白血病细胞株(K562)诱导分化的影响。方法 采用细胞体外培养技术，光镜和电镜观察细胞形态变化；联苯胺染色、POX染色、α-NAE细胞化学染色分别检测细胞血红蛋白、过氧化物酶、非特异性脂酶α-NAE；免疫细胞化学检测细胞表面分化抗原CD15、HIR2、EPO-R、GM-CSF-R。结果 TSPG协同细胞因子对K562细胞的诱导作用与TSPG单独作用相比，①K562细胞形态学更趋向于成熟；②K562细胞血红蛋白(Hb)、过氧化物酶(POX)的表达明显增加；③细胞表面分化抗原CD15、HIR2、EPO-R、GM-CSF-R的表达明显增强。结论 TSPG协同细胞因子作用能明显诱导K562细胞向成熟方向分化。     

氨基甾体H42648对K562白血病细胞系的抑制增殖和诱导分化作用

目的：探讨氨基甾体H42648对K562白血病细胞的抑制增殖和诱导分化作用。方法：采用液体培养实验，MTT实验，集落培养实验观察H42648对K562细胞增殖能力的影响，采用Wright-Gi-emsa染色，联苯胺染色和流式细胞术观察H42648对K562细胞的诱导分化作用。结果：H42648作用K562细胞1～5d后，细胞计数和集落计数明显减少，第5d处理组的MTT值显著低于对照组，并呈剂量依赖关系；联苯胺染色OD值升高，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01），形态学观察其趋向成熟分化。流式细胞术检测药物处理4d后K562细胞膜上CD71表面标记表达阳性率为89．19％。结论：氨基甾体H42648可抑制K562细胞增殖并诱导其向红系分化，提示该药可作为一种新型慢粒白血病细胞的诱导分化剂。     

苦参碱诱导K562细胞分化与STAT3基因表达水平研究

目的:观察苦参碱对人慢性粒细胞白血病K562细胞的体外增值情况,探索潜在的分子机制。方法:显微镜下查看苦参碱对K562细胞的影响,联苯胺染色测定K562细胞的分化趋向,采用MTT法测定K562细胞在用药后的增殖抑制效应,通过流式细胞术以及双标记法测定K562细胞的周期变化和凋亡作用。结果:相较于阴性对照组,当苦参碱为0.05、0.10和0.20 mg/mL,K562细胞均呈现红系分化趋势,以0.05 mg/mL最为突出。MTT结果表明0.2、0.5和1.0 mg/mL对K562细胞表现出的生长抑制率依次为26.15%、45.90%和63.52%(P0.01),有效浓度0.6 mg/mL。苦参碱能够将K562细胞定格于S期,抑制有丝分裂,诱导K562细胞快速地凋亡,0.2、0.5和1.0 mg/mL,对K562细胞的凋亡率依次为5.30%、62.13%与56.73%,明显高于对照组细胞的1.67%(P0.01)。结论:针对体外增殖的人慢粒K562细胞,苦参碱有明显的抑制效果,可诱导细胞红系分化,促进早期凋亡。     

核苷类似物对K562细胞的抗增殖和诱导分化作用

目的：探讨核苷类似物阿昔洛韦（ACV）,更昔洛韦（GCV）对人白血病细胞的抗增殖和诱导分化作用。方法：将ACV、GCV分别加入K562细胞培养4d,测定其活细胞数目,克隆形成率,联苯胺染色阳性率,观察光镜形态,组织化学染色,并进行流式细胞分析,端粒酶检测。结果：在ACV,GCV的作用下,K562细胞的增受抑,生长分数降低,并且向具有合成血红蛋白能力的细胞分化,结论：核苷类似物ACV,GCV对K562细胞具有抑制增殖和诱导分化作用,该结果为慢性粒细胞白血病的治疗提示了新的途径。     

非小细胞肺癌干细胞研究进展

目前全球范围内新发肺癌患者每年已经超过100万例[1].预计2008年美国新发肺癌患者约215 010例,因肺癌死亡的患者约161 840例,其死亡率在男性和女性患者中均占恶性肿瘤死亡率的第一位[2],目前在中国其死亡率也居恶性肿瘤死亡率之首.     

C-Met基因转染对喉癌细胞生长的影响

目的 初步探讨C-Met基因对喉癌细胞生长的影响.方法设实验组和对照组.实验组以携带C-MetcDNA的重组腺病毒载体Ad-C-Met转染喉癌Hep2细胞,对照组以空腺病毒载体转染喉癌Hep2细胞.转染后,观察两组喉癌Hep2细胞培养12d后的克隆形成率,培养第1、3、5、7天的存活细胞数和培养第7天的细胞周期.结果实验组细胞生长速率高于对照组(P＜0.05);实验组克隆形成率(31±5)%高于对照组的(15±3)%(t=12.321,P＜0.01);实验组G0/G1期细胞比例0.67±0.16,低于对照组的0.79±0.11(t=4.836,P＜0.05);S期细胞比例0.19±0.02,高于对照组的0.06±0.01(t=15.357,P＜0.01).结论 C-Met参与了喉癌细胞内的TGF-β信号通路,可以阻断TGF-β对喉癌细胞的生长抑制作用.     

氰戊菊酯对C6胶质细胞增殖的影响

目的研究氰戊菊酯对C6胶质细胞增殖的影响。方法以3.16、10、31.6和100 mg/L的氰戊菊酯对C6胶质细胞进行染毒,通过四噻氮唑盐(MTT)比色法观察其在不同时间点(24、48、72 h)对细胞增殖的影响;利用B rdU掺入法反映其对细胞DNA合成的影响;使用流式细胞术检测其对细胞周期的作用。结果氰戊菊酯对C6胶质细胞增殖有明显抑制作用,且呈现剂量、时间依赖性;可抑制C6胶质细胞DNA合成;可阻滞C6胶质细胞从G0/G1期进入S期。结论氰戊菊酯能够抑制C6胶质细胞增殖,其抑制作用可能是使细胞周期阻滞于G0/G1期,减少细胞DNA合成。     

抑癌基因PTEN对乳腺癌细胞生长增殖的影响

目的研究PTEN基因表达对乳腺癌细胞生长增殖的影响。方法将分别携带有野生型、突变型PTEN基因的真核表达载体pBP—wt—PTEN以及pBP—G129R—PTEN,以脂质体介导法转人人PTEN表达缺失的乳腺癌细胞ZR-75—1中,嘌呤霉素筛选获得稳定表达PTEN基因的转染细胞,通过细胞活力实验、流式细胞术观察PTEN基因对ZR-75—1细胞生长增殖的影响。结果稳定转染PTEN基因的ZR-75—1细胞中不仅PTEN蛋白稳定表达,而且其生长速度较对照组明显减慢。流式细胞术显示,细胞周期发生G1期阻滞。结论外源性PTEN基因导入ZR-75—1细胞后,可引起ZR-75—1细胞生长阻滞,抑制肿瘤细胞增殖。     

铁剥夺对K562细胞凋亡及细胞周期的影响

目的:观察铁剥夺诱导K562细胞的凋亡及对细胞周期的影响.方法:实验组以不同浓度(25 μmol/L、50 μmol/L)的去铁胺处理K562细胞,25 μmol/L去铁胺加等浓度的三氯化铁作对抗组,设空白对照组,分别收集不同时间点(16 h、24 h、32 h、48 h、72 h)的细胞,用磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)进行双标记,荧光显微镜观察凋亡细胞的形态变化.用流式细胞仪分析细胞凋亡率和细胞周期特征.结果:K562细胞经25 μmol/L、50 μmol/L的去铁胺处理后发生了不同程度的凋亡,随着时间延长和剂量增加,细胞凋亡率增加(P＜0.05).细胞周期检测发现25 μmol/L、50 μmol/L的去铁胺处理K562细胞48 h和72 h后,G0/G1期细胞数较对照组升高,S期细胞数和细胞增殖指数均较对照组降低(P＜0.05.结论:铁剥夺可抑制K562细胞增殖并诱导细胞凋亡,机制可能是通过剥夺细胞内铁阻止细胞进入S期.     

依鲁替尼对急性T淋巴细胞白血病CCRF-CEM细胞株细胞增殖的作用

目的 研究依鲁替尼对急性T淋巴细胞白血病细胞CCRF-CEM细胞株增殖抑制的作用。方法 使用不同浓度的依鲁替尼作用于CCRF-CEM(人急性T淋巴细胞白血病细胞)细胞株,分别作用24、48、72 h后,采用CCK8检测细胞抑制率,采用Annexin V- FITC/PI荧光双染色测定细胞的凋亡率,观察依鲁替尼对CCRF-CEM的凋亡影响。结果 不同浓度依鲁替尼作用CCRF-CEM细胞后,细胞增殖抑制率明显升高(P<0.01)并且抑制率随药物浓度增高而增高。在同一浓度依鲁替尼作用细胞后,不同的作用时间,抑制率也有明显的变化(P<0.01),呈时间依懒性,但在低浓度下,72h细胞的增殖抑制率比48h低。依鲁替尼作用细胞后,细胞凋亡率明显升高(P<0.01),并且呈药物浓度依赖性。结论 依鲁替尼可以诱导T淋巴细胞CCRF-CEM凋亡,并且依赖药物浓度和作用时间。     

米非司酮对子宫肌瘤细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

目的探讨米非司酮对子宫肌瘤和内膜组织Ki67基因、MMP2基因、Fas基因表达的影响。方法 62例子宫肌瘤患者随机分为对照组24例和治疗组38例,治疗组患者从月经周期第2~3d开始,每日服用25mg米非司酮,连续服用1个月后行子宫手术;对照组病人入院后不服用任何药物,直接手术,术中均取瘤体及内膜组织。用免疫组化SP法检测子宫肌瘤及内膜组织中Ki67、MMP2、Fas基因的表达水平。结果治疗组子宫肌瘤组织Fas阳性率为55.3%,明显高于对照组的29.2%,差异有统计学意义(P0.05);治疗组子宫肌瘤Ki67的阳性表达率为36.8%,明显低于对照组的70.8%,差异有统计学意义(P0.01);治疗组子宫肌瘤MMP2的阳性表达率为36.8%,明显低于对照组的66.7%,差异均有统计学意义(P0.05);但两组子宫内膜组织中Ki67、MMP2和Fas的表达没有显著变化,差异均无统计学意义(P均大于0.05)。结论米非司酮抑制子宫肌瘤细胞的增殖和侵袭转移,促进肌瘤细胞凋亡,这可能是米非司酮治疗子宫肌瘤的作用机理。     

PTENcDNA抑制子宫内膜癌细胞增殖作用的研究

【目的】研究外源性PTENcDNA对子宫内膜癌细胞生长增殖的影响,探讨子宫内膜癌治疗的新途径。【方法】经携带野生型VIENcDNA的重组腺病毒（Ad—PTEN）介导将PTENcDNA转入人子宫内膜癌细胞RL95—2,用反向聚合酶链反应（RT—PCR）检测出PTENeDNA在R195—2细胞中持续表达,X-gal染色方法测定腺病毒转染效率,台盼蓝染色活细胞计数绘制生长曲线,流式细胞分析仪（FCM）测定细胞周期。受试细胞随机分成（1）Ad—PTEN组：转染复制缺陷型腺病毒Ad—PTEN。（2）Ad—CMV组：转染空载体腺病毒Ad—CMV。（3）对照组：仅用培养基而不加腺病毒。【结果】Ad—PTEN感染RL95—2细胞后,RT—PCR方法检测PTENcDNA在RL95—2细胞中持续表达;X—gal染色方法测得Ad—PTEN最佳感染复数为100。经台盼蓝染色活细胞计数后绘制细胞生长曲线,见经Ad—PTEN感染的细胞生长速度明显低于空载体病毒Ad—CMV感染及未经病毒感染的RL95—2细胞（P〈0．01）,而空载体Ad—CMV感染后的细胞与未经感染的RL95—2细胞比较,生长速度无差异（P〉0．05）;细胞周期分析表明,感染Ad—tWEN后的R195—2细胞G1期细胞比例明显增多,而S期G2-M期的细胞减少（P〈0．05）。【结论】Ad—PTEN介导的PTENcDNA在子宫内膜癌细胞RL95—2中有表达。PTENcDNA在RL95—2的中表达能够抑制细胞的增殖,将细胞周期阻断在G1期。     

姜黄素对鼻咽癌CNE—1细胞增殖和周期的影响

目的讨论姜黄素对鼻咽癌CNE-1细胞增殖和周期的影响。方法 MTT法检测增值抑制率,流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡。结果不同浓度的姜黄素作用细胞48h时,抑制率随浓度的增加而增加,流式细胞仪分析证实姜黄素能使CNE-1细胞阻滞在G2/M期,并出现亚二倍体凋亡峰。结论 姜黄素对CNE-1细胞具有增殖抑制作用,并阻滞细胞于G2/M期和诱导细胞凋亡。     

Smad7基因转染对肺癌细胞生长的影响

目的:初步探讨Smad7基因对肺癌细胞生长的影响.方法:设实验组和对照组.实验组以携带Smad7cDNA的重组腺病毒载体Ad-Smad7转染A549细胞,对照组以空腺病毒载体转染A549细胞.转染后,2组培养基中分别加入TGFβ1继续培养.观察2组A549细胞培养12 d后的克隆形成率,培养第1 d、3 d、5 d、7 d的存活细胞数和培养第7 d的细胞周期.结果:实验组细胞生长速率高于对照组(P＜0.05);实验组克隆形成率(34±7)%高于对照组的(13±3)%(t=10.674,P＜0.01);实验组G0/G1期细胞比例0.67±0.16,低于对照组的0.79±0.11(t=4.836,P＜0.05);S期细胞比例0.19±0.02,高于对照组的0.06±0.01(t=15.357,P＜0.01).结论:Smad7参与了肺癌细胞内的TGFβ信号通路,它可以阻断TGFβ对肺癌细胞的生长抑制作用.