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相似文献
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1.
目的建立流式细胞术检测大鼠肺泡巨噬细胞(AM)吞噬AlexaFluor 488(AF488)荧光染料标记细菌的方法。方法用不同浓度的AF488标记金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌,流式细胞术检测AF488对上述细菌的标记率和平均荧光强度;AM与不同浓度比例的AF488标记的细菌于37℃共孵育2、4、6和8 h,洗涤后加台盼蓝淬灭未被吞噬的细菌荧光,流式细胞术检测AM平均荧光强度、吞噬率和吞噬指数;激光共聚焦荧光显微镜下观察AM吞噬细菌的情况及分布。结果 AF488的浓度大于50μg/mL时,金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌的标记率均大于92%(P0.05),金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌的标记率在荧光染料浓度大于50μg/mL便已迅速达到上限。随着孵育时间的延长,AM的吞噬率从孵育2 h的20.4%升高到8 h的76.5%。随着细菌比例的增加,AM的吞噬率从1∶10的7.7%升高到1∶300的85.1%。结论流式细胞术检测AM吞噬AF488荧光染料标记的细菌是测定AM吞噬活性的有效方法,但染料浓度、孵育时间和细菌比例均会对结果产生影响。  相似文献   

2.
Th1型相关细胞因子对人中性粒细胞吞噬功能的影响   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的:用流式细胞术观察Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ,以及Th1细胞诱导因子IL-12对人外周血中性粒细胞吞噬功能的影响。方法:用不同浓度异硫氰酸荧光素(FITC)在碳酸盐缓冲液(CB,pH9.5)和磷酸盐缓冲盐水(PBS,pH7.2)中标记大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌(金葡菌),流式细胞术检测细菌标记率。取新鲜健康成人外周血与标记细菌于37℃孵育5-20 min后,洗涤和溶血,用流式细胞术检测中性粒细胞吞噬百分率。或外周血预先分别与IL-2、IFN-γ及IL-12孵育2 h,再加标记细菌孵育5 min,流式细胞术检测中性粒细胞吞噬率,并与对照组比较计算吞噬增加比率。结果:FITC标记大肠埃希菌在碱性的CB中标记率较高,而金葡菌在中性的PBS标记率较高(P〈0.01)。健康人外周血中性粒细胞对大肠埃希菌和金葡菌的吞噬率在5 min时分别为45%和38%,15-20 min达到平台期,分别为86%-88%和83%-89%。外周血预先用IL-2(20u/ml)、IFN-γ(50 u/ml)或IL-12(30 u/ml)作用后,中性粒细胞对大肠埃希菌的吞噬率分别增加19%、19%和26%;对金葡菌的吞噬率分别增加25%、23%和35%。结论:Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ及Th1型诱导细胞因子IL-12均能增强人中性粒细胞吞噬功能,Th1型细胞因子和IL-12均具有增强中性粒细胞功能的作用。  相似文献   

3.
目的:探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染THP-1细胞后对细胞表面白细胞分化抗原14(CD14)表达的影响.方法:Mtb以10:1感染佛波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,建立Mtb感染THP-1细胞的模型.采用流式细胞术检测THP-1细胞、PMA分化的THP-1细胞及Mtb感染THP-1细胞CD14的表达.结果:THP-1细胞和PMA分化的THP-1细胞表面表达CD14的阳性率分别为5.5%和21.6%,对Mtb的吞噬率分别为7.7%和93.0%;Mtb感染的THP-1细胞表面表达CD14的阳性率为27.5%.结论:PMA分化后的THP-1细胞表面CD14的表达增加,Mtb感染后CD14的表达进一步增加,对Mtb的吞噬率增加.  相似文献   

4.
目的:观察结核分枝杆菌19 kDa脂蛋白(Mtb P19)对THP-1细胞凋亡的影响。方法:从培养的结核杆菌H37Ra制备Mtb P19,以5、10、20μg/ml Mtb P19作用于佛波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,37℃、5%CO2孵箱孵育4 h。Wright-Giemsa染色观察细胞形态变化;AnnexinV-FITC染色,用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:终浓度为5μg/ml的Mtb P19即可诱导THP-1细胞凋亡,且凋亡率随Mtb P19作用浓度的升高而增加(P〈0.01);Wright-Giemsa染色镜下可见部分细胞体积变小、圆缩,核固缩,核断裂。结论:结核分枝杆菌P19以剂量依赖方式诱导THP-1细胞凋亡。  相似文献   

5.
流式细胞术检测小鼠中性粒细胞吞噬功能的方法学探讨   总被引:8,自引:3,他引:5  
目的:建立用流式细胞术检测小鼠中性粒细胞(PMN)吞噬功能的方法.方法:用不同缓冲液制备荧光素(FITC)标记葡萄球菌或大肠埃希菌,流式细胞术检测细菌FITC标记率.小鼠全血与FITC标记细菌37℃共育10~20 min,溶解红细胞后用流式细胞术检测小鼠PMN荧光强度的变化,计算PMN吞噬率.结果:用PBS(pH 7.2)标记金黄色葡萄球菌效果好,用碳酸盐缓冲液(pH 9)标记大肠埃希菌效果好.小鼠PMN对金黄色葡萄球菌的吞噬率低,对大肠埃希菌的吞噬率高.结论:用流式细胞术检测小鼠PMN吞噬FITC标记大肠埃希菌是测定小鼠PMN吞噬功能的简便、快速和重复性好的方法.  相似文献   

6.
PMA促进人单核细胞分化及ACAT1基因表达   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的研究人单核细胞系在佛波酯(PMA)作用下分化为巨噬细胞的过程中酰基CoA:胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)活性的改变及其机制。方法体外培养人THP-1单核细胞系,PMA作用使其分化为巨噬细胞。以放射性同位素标记底物法检测ACAT1活性.用Western blot法和RT—PCR法分别检测ACAT1蛋白和mRNA。结果PMA使THP-1单核细胞的形态和生长状态巨噬细胞化.在此过程中ACAT1 mRNA和蛋白明显增加(P〈0.01),酶活性升高(P〈0.05)。结论PMA可促进单核细胞分化为巨噬细胞,上调ACAT1基因的表达,促进酶活性提高。  相似文献   

7.
目的 获得稳定转染靶向人类表皮生长因子2(HER2)的嵌合抗原受体巨噬细胞(CAR-M)。方法 构建靶向HER2的CAR慢病毒载体并感染人单核细胞白血病细胞系(THP-1)。通过分选流式细胞仪分选出含有绿色荧光标记的CAR THP-1细胞并在体外继续培养。将此靶向HER2的CAR THP-1细胞与HER2表达阴性(-)及阳性(+)的子宫内膜癌细胞系Ishikawa分别共培养,通过成像流式细胞仪检测其对HER2表达阳性肿瘤细胞的靶向吞噬,通过流式细胞仪检测其对HER2表达阳性肿瘤细胞的靶向吞噬比例。结果 CAR慢病毒感染THP-1细胞效率较低;与癌细胞共培养后,流式细胞术及成像流式细胞术结果显示,CAR THP-1组与空载体组相比,CAR THP-1细胞对HER2阳性的Ishikawa细胞吞噬能力增强(P<0.01)。结论 通过构建CAR慢病毒载体并转染THP-1细胞,成功建立了靶向HER2的CAR THP-1细胞系,且其能通过特异性靶向吞噬HER2阳性Ishikawa细胞。  相似文献   

8.
【目的】观察3种化痰方剂(黄连温胆汤、瓜蒌薤白半夏汤、二陈汤)含药血清超滤组分对人白血病单核细胞(THP-1)源性巨噬细胞活性及其泡沫化的影响。【方法】以佛波酯(PMA)诱导THP-1为巨噬细胞,经氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)处理建立动脉粥样硬化泡沫细胞模型;制备3种化痰方剂含药血清及空白血清经10 KD超滤器超滤后,作用于泡沫细胞模型。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法及油红染色观察各组对巨噬细胞存活率和泡沫化的影响;通过流式细胞术检测各组对巨噬细胞凋亡率的影响。【结果】 THP-1经100 nmol/L PMA诱导24 h后,与50μg/mL ox-LDL共孵育24 h,获得泡沫细胞模型。黄连温胆汤含药血清超滤成分作用于巨噬细胞,可明显提高存活率,抑制泡沫化,降低细胞凋亡率。二陈汤和瓜蒌薤白半夏汤含药血清超滤成分可增加泡沫化,未见显著抗凋亡作用。【结论】黄连温胆汤具有抗动脉粥样硬化作用,可能与其能抗巨噬细胞凋亡,降低巨噬细胞脂质吞噬作用相关;二陈汤和瓜蒌薤白半夏汤可能具有提高巨噬细胞脂质吞噬功能的作用。  相似文献   

9.
目的在L929条件培养基的作用下体外分离、培养小鼠外周血单核巨噬细胞,并进行鉴定。方法密度梯度离心法分离小鼠外周血单核巨噬细胞,用L929条件培养基培养7 d。采用免疫荧光的方法检测F4/80的表达以及细胞的吞噬作用,用流式细胞术进一步检测细胞吞噬率。结果用L929条件培养基诱导培养7 d后小鼠外周血单核细胞表达F4/80,加入细胞吞噬珠之后,在不同时间点用荧光显微镜可以看到红色荧光颗粒聚集在小鼠外周血单核巨噬细胞核周围,用流式细胞仪检测细胞的吞噬率为24.8%±0.79%。结论该方法是一种简单、易操作的体外分离培养和鉴定小鼠外周血单核巨噬细胞的方法。  相似文献   

10.
目的 研究豚鼠腹腔巨噬细胞吞噬钩端螺旋体毒力株的机制,探讨天然免疫在钩端螺旋体病发病机制中的作用。方法 提取豚鼠腹腔巨噬细胞,感染1 h前分别加入细胞微丝阻断剂cytochalasin D、微管阻断剂colchicine和PI3K信号通路阻断剂LY294002,同时设立不含阻断剂的对照组,1 h后检测细胞活性。与致病性问号钩体赖型Lai株共同孵育3 h后,激光共聚焦显微镜观察巨噬细胞吞噬钩体的形态学特征,流式细胞术检测各组吞噬率。结果 对照组巨噬细胞对钩体的吞噬率为(38.98±0.91)%;cytochalasin D组、colchicine组和LY294002组的吞噬率分别为(23.99±1.40)%、(40.81±0.91)%和(39.64±3.56)%;cytochalasin D组吞噬率明显低于对照组(P<0.05);colchicine组和LY294002组与对照组比较差异无统计学意义(均P>0.05)。结论 微丝参与了豚鼠腹腔巨噬细胞吞噬毒力钩体的过程,微管在吞噬过程中不起关键作用,微丝的变化不依赖PI3K信号通路。  相似文献   

11.
目的:探讨白细胞介素-10(IL-10)对中性粒细胞(PMN)吞噬和杀菌活性的影响,以了解IL-10对非特异性免疫的作用机制。方法:小鼠麻醉后从眼球取血,与不同浓度IL-10在37℃水浴中作用2 h,然后加FITC标记大肠埃希菌,置37℃水浴中15 min,溶血剂去除红细胞,流式细胞仪检测各IL-10浓度组PMN的吞噬率。小鼠麻醉后局部消毒,摘眼球,无菌方法取血。与不同浓度IL-10在37℃下作用2 h,然后加大肠埃希菌置37℃水浴1 h,同时设PMN杀菌0 min组、无IL-10的PMN杀菌对照组,各组样品作适当稀释后接种琼脂平板,最后观察各组菌落数,与对照组比较,计算IL-10对杀菌力影响。结果:PMN的吞噬功能在IL-10浓度为1 ng/ml组减低(15.87±14.25)%,但差异无统计学意义(P〉0.05)。而PMN的杀菌功能在IL-10浓度为0.1 ng/ml组降低(39.59±37.36)%,在IL-10浓度为1 ng/ml组则降低(42.28±22.24)%,差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论:IL-10对PMN的吞噬功能有轻度的抑制作用,对PMN的杀菌功能有明显的抑制作用,对非特异性免疫亦有抑制作用。  相似文献   

12.
目的研究异甘草酸镁对自身免疫性肝炎(AIH)患者单核细胞吞噬能力和抗原递呈功能的影响。方法体外培养经密度梯度离心法获得的AIH患者(AIH组)及健康对照者(对照组)的外周血单个核细胞(PBMCs),添加不同浓度异甘草酸镁处理24 h,流式细胞仪测定HLA-DR+和CD80+细胞百分比。将经CD14单克隆磁珠抗体分选提纯后的PBMCs与FITC标记的大肠杆菌共培养,荧光显微镜观察并计算吞噬率和吞噬指数,流式细胞术检测加以验证。结果与对照组比较,AIH组(未加药)PBMCs的HLA-DR+和CD80+细胞百分比、细胞吞噬率及吞噬指数明显降低,差异均有有统计学意义(P〈0.01)。在对照组中,与空白组比较,异甘草酸镁组PBMCs的HLA-DR+和CD80+细胞百分比、吞噬率及吞噬指数升高,但差异无统计学意义(P〉0.05);在AIH组,与空白组比较,异甘草酸镁组(1、10 mg/mL)PBMCs的HLA-DR+和CD80+细胞百分比、吞噬率及吞噬指数显著升高,差异有统计学意义(P〈0.01)。结论异甘草酸镁能够提高AIH患者减弱的单核细胞抗原递呈功能和吞噬能力,提示异甘草酸镁具有调节AIH患者单核细胞免疫功能的作用。  相似文献   

13.
目的观察阿托伐他汀对THP-1巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达的影响。方法THP-1细胞经160 nmol/L佛波酯(PMA)孵育24 h,诱导分化成巨噬细胞,分别与不同浓度的阿托伐他汀(0、1、10、100μmol/L)作用不同时间(0 h、6 h、12 h、24 h)。提取各组细胞总RNA和蛋白质,分别采用RT-PCR和W esternB lot检测ABCA1的mRNA和蛋白的表达。结果与对照组比较,不同浓度的阿托伐他汀与巨噬细胞孵育不同时间组的细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达无统计学差异(P〉0.05)。结论阿托伐他汀对巨噬细胞ABCA1的表达无影响。  相似文献   

14.
目的:建立用流式细胞术检测人外周血中性粒细胞(polymorphonuclear cells,PMN)产生活性氧(reactive oxygen species,ROS)的方法。方法:健康人外周全血或用Percoll分离的PMN,加探荧光针双氢罗丹明123(DHR123)或2′,7′-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)作用15 min,再加佛波醇酯(phorbo 12-myristate 13-acetate,PMA)于37℃作用5-90 min后,用流式细胞仪检测PMN内的罗丹明123(rhodamine 123,RHO)或氧化型二氯荧光素(dichlorofluorecin,DCF)的荧光强度,以反映PMN内ROS产生的水平。结果:以DHR123为荧光探针时,PMA刺激全血或分离PMN产生ROS的时间动力学相似,在37℃作用5-60 min ROS量呈递增趋势,且在60 min左右达到峰值,60-90 min时渐下降。以DCFH-DA为荧光探针时,PMA刺激全血PMN产生ROS,在37℃作用5 min时反应生成ROS量达到峰值,随后出现明显递减趋势,而PMA刺激分离PMN产生ROS在5-30 min逐渐增高并在60-90 min达平台期。实验中还发现甲醛试剂可以降低RHO的荧光强度。结论:采用流式细胞术检测PMN产生ROS是一种简便、可靠、稳定的方法。  相似文献   

15.
目的:探讨骨髓间质干细胞(MSC)体外对1型糖尿病(T1DM)患者外周血CD4+Foxp3+T细胞水平的影响方法:T1DM患者外周血单个核细胞(PBMC)分别与T1DM患者和正常人骨髓MSC按不同比例体外共培养72 h,检测共培养后PBMC中CD4+Foxp3+T细胞百分率。结果:正常骨髓MSC与T1DM患者PBMC共培养后CD4+Foxp3+T细胞百分率显著升高(P〈0.05),且存在剂量依赖性,T1DM MSC也可上调T1DM患者CD4+Foxp3+T细胞水平,但作用较正常MSC弱(P〈0.05);正常MSC培养上清也可上调T1DM患者PBMC中CD4+Foxp3+T细胞水平,但作用弱于MSC∶PBMC=1∶1组(P〈0.05)。结论:T1DM患者MSC上调CD4+Foxp3+T细胞百分率低于正常人MSC可能是T1DM患者发病的因素之一。  相似文献   

16.
目的探讨不对称二甲基精氨酸(ADMA)对单核细胞株(THP-1)的活性及细胞周期的影响.方法体外培养THP-1并且给予不同剂量的ADMA(3.75μmol/L、7.5μmol/L、15μmol/L、30μmol/L)相互作用(24h、48h、72h)后,用改良MTT法测定THP-1的活性状态及作用(24h、48h)后流式细胞仪测定细胞生长周期.实验分为空白组、阴性对照组、不同剂量ADMA组.结果在MTT测定中与阴性对照组比较发现THP-1与ADMA共同培养下能够促进细胞的生长活性,流式细胞仪在细胞周期中检测显示ADMA能提高其细胞的S期和G2/M期峰值百分比,提示细胞处于增殖状态.结论 ADMA能够促进THP-1的生长活性及增殖状态.  相似文献   

17.
目的:观察不同菌相白念珠菌诱导巨噬细胞凋亡情况,为疾病的预防和治疗提供思路.方法:用佛波醇酯刺激THP-1细胞分化为巨噬细胞,用酵母相、菌丝相及用胃蛋白酶抑制剂(pepstatin,PEP)预处理的白念珠菌分别作用巨噬细胞1、2、4、8 h;另设空白对照组,AnnexinV-FITC染色后流式细胞仪检测细胞的凋亡率.结果:酵母相、菌丝相、PEP作用组的白念珠菌分别感染巨噬细胞1、2、4、8 h的细胞凋亡率均较空白对照组升高(P〈0.05~P〈0.01);各作用组均随时间的延长凋亡率不断升高(P〈0.01);酵母相组和菌丝相白念珠菌组不同时间细胞凋亡率均较PEP作用组明显增加(P〈0.01),并且菌丝相组细胞凋亡率明显高于酵母相组(P〈0.01).结论:白念珠菌可诱导巨噬细胞凋亡,其作用与其菌相及其分泌型天冬氨酸蛋白酶有关.  相似文献   

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