β淀粉样蛋白1-42对小胶质细胞产生一氧化氮作用的实验研究

目的：应用β淀粉样蛋白1-42（β-Amyloid，Aβ1-42）作用于小胶质细胞（microglia，MG），探讨其产生一氧化氮（nitric oxide，NO）的作用途径。方法：应用BV-2小胶质细胞作为体外小胶质细胞模型，测定加入Aβ1-42后细胞上清NO含量及细胞iNOS酶活力；流式细胞仪间接免疫荧光标记法观察Aβ1-42对iNOS蛋白表达的作用。结果：Aβ1-42可以刺激BV-2细胞产生NO、提高细胞iNOS酶活性、增加iNOS蛋白质表达，以上作用均具有时间及浓度依赖性。结论：Aβ1-42在体外可通过活化小胶质细胞，增加NO的表达及分泌，为进一步发挥神经元毒性作用创造条件。     

β-淀粉样蛋白对小胶质细胞合成一氧化氮的影响

目的探讨β-淀粉样蛋白（amyloid beta-peptide,Aβ）诱导小胶质细胞活化后κ轻链核因子（nuclear factor-kappa B,NF-κB）的表达及一氧化氮（NO）水平的变化。方法Aβ干预纯化培养的小胶质细胞,观察其形态学变化,采用镉还原法测定NO水平,免疫细胞化学方法研究NF-κB的表达。结果500 nmol/L及1000 nmol/L Aβ干预组细胞形态呈“阿米巴样”,细胞核内NF-κB的表达增加（P〈0.05）,培养基中NO浓度升高（P〈0.05）。结论Aβ激活小胶质细胞NF-κB途径大量合成NO,可能参与阿尔茨海默病（Alzheimer＇s disease,AD）的致病过程。     

β-淀粉样蛋白对小胶质细胞分泌白细胞介素1β的影响

探讨阿尔茨海默病（AD）发病的免疫炎性机制。方法体外培养小胶质细胞，免疫细胞化学方法进行小胶质细胞鉴定；用0.1～20μg／ml聚集状态的β-淀粉样蛋白（Aβ）激活小胶质细胞，观察其形态变化．ELISA法检测培养基中白细胞介素1β（IL-1β）的浓度。结果0.1μg／ml Aβ1-12实验组，小胶质细胞形态无明显改变．培养基中IL-1β浓度无明显升高；1μg／ml和20μg／ml Aβ1-12实验组。小胶质细胞胞体变大，形态由分枝状转变成“阿米巴样”，培养基中IL-1β浓度升高；与对照组比较差异均有显著性意义（均P〈0．05）。结论Aβ可激活小胶质细胞，诱导其释放IL-1β，并呈剂量依赖性，提示小胶质细胞介导的免疫炎性机制在AD发病中起着重要的作用。     

β淀粉样蛋白诱导小胶质细胞的炎性上清对神经元凋亡的影响

目的 研究β淀粉样蛋白诱导小胶质细胞的炎性上清对神经元凋亡的影响.方法 用浓度为125 hmol/L的Aβ1-42诱导的小胶质细胞炎性上清干预神经元,检测Bcl-2、Caspase-3、PARP的表达及神经元凋亡的情况.结果 炎性上清液干预组Caspase-3(14.2±1.8)、Bcl-2阳性细胞数(10.6±0.8)明显高于Aβ1-42干预组(2.2±0.6,5.0±0.3)(P＜0.01),吖啶橙免疫荧光结果显示炎性上清液处理组与Aβ1-42直接干预组48 h和72 h凋亡率比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Aβ1-42诱导小胶质细胞的炎性上清可以通过Caspase-3途径诱导神经元凋亡,小胶质细胞活化引起的慢性炎性过程是Aβ引起神经细胞凋亡的重要条件之一.

Abstract：

Objective To study the effects of neuronal apoptosis under the induction of β-amyloid inflammatory supernatant. Methods The neurons were intervened by β-amyloid-induced inflammatory supernatant at the concentration of Aβ1-42 at 125 nmol/L. And the expressions of Bcl-2, caspase-3, PARP and neuronal apoptosis were detected. Results The caspase-3 ( 14. 2 ± 1.8 ), Bcl-2 ( 10. 6 ± 0. 8 ) positive cells of microglia inflammatory supernatant stimulated group were significantly elevated than the control(2. 2 ± 0. 6,5. 0 ± 0. 3, P ＜ 0. 01 ). Nuclear chromatin was uniform yellow-green fluorescent. And there was significant difference of neuronal apoptosis between microglia inflammatory supernatant group and Aβ1-42directly stimulated group. Conclusion Neuronal apoptosis is induced by caspase-3 in β-amyloid inflammatory supernatant. One of the important causes is chronic inflammatory process of activated microglia by Aβ.     

小胶质细胞受体与阿尔茨海默病

阿尔茨海默病(AD)是一种以认知与其它机能进行性减退为主要特征的神经系统退行性病变。越来越多的证据表明,炎症反应在AD的病理进程中起了重要的作用。小胶质细胞为脑内固有吞噬细胞,可表达多种受体;β-淀粉样蛋白(Aβ)通过与上述受体的相互作用促进小胶质细胞的活化,刺激炎症反应产生。本文就近年来关于小胶质细胞受体在AD发生发展中的作用作一综述。     

小胶质细胞在阿尔茨海默病炎性反应中的双重作用

阿尔茨海默病(AD)是一种常见的老年神经变性疾病,目前认为β-淀粉样蛋白沉积引起的炎性反应是AD的病理机制核心。小胶质细胞是AD炎性反应中最主要的炎性细胞,介导并贯穿AD病理发展全程。其可被β-淀粉样蛋白激活,产生大量致炎性细胞因子和神经元毒性介质,从而诱发脑内炎性反应,导致神经元损伤、死亡。另一方面,激活的小胶质细胞可以吞噬β-淀粉样蛋白,从而减轻了β-淀粉样蛋白对脑组织的损害。本文就激活的小胶质细胞在AD脑内炎性反应中的双重作用予以综述。     

β-淀粉样蛋白与阿尔茨海默病

随着人均寿命的延长,阿尔茨海默病（俗称老年痴呆）的发病率逐年上升,已成为现代社会老年人的主要致死疾病之一。本文就β-淀粉样蛋白与阿尔茨海默病的关系进行文献综述,提示：人们的焦虑、紧张和抑郁等不良情绪会引起人体的应激反应,从而激活细胞膜上的β-2-肾上腺素受体,进而引起β-淀粉样蛋白的生成增加,使细胞外产生老年斑和脑血管淀粉样变性,细胞内发生神经元纤维缠结,导致神经元变性乃至形成痴呆。     

β淀粉样蛋白所致的炎症反应在阿尔茨海默病中的作用机制

阿尔茨海默病(AD)是一种慢性神经退行性疾病,β淀粉样蛋白(Aβ)在海马过度沉积形成的老年斑是其主要的病理特点。Aβ激活胶质细胞介导的炎症反应分泌促炎因子包括白细胞介素1、白细胞介素6及肿瘤坏死因子α等可以导致神经细胞变性、损伤和死亡。Aβ也可通过与Tau蛋白相互作用介导的炎症反应加快AD的进展。因此,Aβ沉积激活胶质细胞引起的炎症反应可能是AD的重要致病机制。     

阿尔茨海默病与β-淀粉样蛋白

阿尔茨海默病（Alzheimer disease，AD）是1907年由巴伐利亚一位神经病理学家首先发现，此人名为阿尔茨海默（AloisAlzheimer），所以以其名字命名，是中枢神经系统一种常见的进行性神经退行性疾病，最终带来极高的致死率和致残率^[1]     

阿尔茨海默病中β淀粉样蛋白的神经毒作用

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease, AD)是一种最常见的老年期痴呆综合征,其病因和发病机理未明.目前研究认为β淀粉样蛋白(β amyloid protein, Aβ)在AD发病中起主要作用,文章就Aβ的产生、神经毒作用的表现、作用机制作一综述.     

正电子成像技术活体评价老年痴呆大鼠模型

目的 探讨正电子成像技术应用于阿尔茨海默病(AD)大鼠模型验证的可行性.方法 建立Aβ_(1-40)海马注射模型,进行Morris水迷宫测试、HE染色及刚果红染色,观察大鼠行为学、组织学改变.应用PET及Micro PET活体显像显示大鼠脑内2-(4'-N-~(11)C-甲胺基苯)-6-羟基苯并噻唑(N-~(11)CH_3-6-OH-BTA-1,简称~(11)C-PIB)及~(18)F-氟代脱氧葡萄糖(~(18)F-fluordeoxyghcose,简称~(18)F-FDG)的摄取及分布,与行为学、组织学进行比较.结果 ~(18)F-FDG显像中模型组大鼠海马区域放射性摄取明显低于正常组(P<0.01),与学习记忆能力减退、神经元丢失相符;~(11)C-PIB显像中模型组大鼠脑内注射区域PIB特异性结合β-淀粉样蛋白,放射性摄取明显高于正常组,与病理改变淀粉样蛋白沉积相符.结论 正电子成像技术利用~(11)C-PIB及~(18)F-FDG两种核素联合显像,能够在体显示AD大鼠脑内的斑块沉积及海马区域糖代谢改变,可用于活体验证老年痴呆模型的建立.     

阿尔茨海默病转基因小鼠高场强磁共振影像学与病理学对照研究

目的 观察和分析转基因阿尔茨海默病(AD)小鼠模型早期的脑部影像学特征,确立7.0 T高场强磁共振显微成像(MRMI)对于早期AD的诊断价值.方法 3、6、9个月龄的APP/PS-1转基因小鼠各6只作为实验组,同龄野生型小鼠作为对照组;应用Bruker Phama Scan 7.0 T磁共振仪对小鼠脑部进行扫描;成像后取小鼠脑组织切片经β-淀粉样蛋白(Aβ)免疫组织化学染色,并与脑部的T2WI进行对照.结果 随着月龄的增加,APP/PS-1转基因小鼠脑部的Aβ沉积加剧,在6个月龄的APP/PS-1转基因小鼠脑部切片上已有Aβ斑块的形成,而9个月的APP/PS-1转基因小鼠皮质和海马内Aβ沉积斑块数量增多;9个月龄实验组小鼠海马及皮质可见散在点状低信号区,分布范围与病理改变相符;3、6个月龄APP/PS-1转基因小鼠及3组各月龄对照组小鼠脑组织结构T2WI未见明显低信号区.结论 与Aβ免疫组化病理结果对照,7.0T高场强MR能够显示9个月龄APP/PS-1转基因小鼠脑部的Aβ斑块沉积,有助于早期AD的诊断.

Abstract：

Objective To observe and investigate the neuroimaging characters in early progression of transgenic Alzheimer's disease (AD) mice model, and make sure the diagnosis value of 7.0 T high field magnetic resonance microimaging(MRMI). Methods APP/PS-l transgenic mice aged 3,6, 9 months and the same aged wild type mice were each divided into 6 groups(6 mice in every groups) based on age. The mice brains were scaned with 7.0T high magnetic field MR. Then the mice were killed. The Aβ immunohistochemistry examination was analyzed in the mice brains specimens, and pathological changes were in comparison with the T2 weighted imaging in the mice brains. Results There were a few Aβ plaques in the brains of 6 months APP/PS-1 transgenic mice, while Aβ plaques were increased both in number and volume in the cerbral cortex and hippocampus of 9 months AD mice. The brains of APP/PS-1 double transgenic mice of 3, 6 months and the control group mice were not showed intensity loss on T2 weighted MR images, while the signal intensity loss was visualized in the cerbral cortex and hippocampus of 9 months AD mice. Conclusion 7. 0T high magnetic field MR could display Aβ plaques in the brains of APP/PS-1 double transgenic mice of 9 months and it is helpful to diagnosis early AD.     

局灶性脑缺血海马神经元淀粉样β蛋白及其蛋白前体的表达

目的观察人脑缺血后淀粉样β蛋白140(Aβ140)与其淀粉样β蛋白前体(βAPP)在海马CA1区神经元的表达。方法收集43例因脑缺血而梗死的尸检标本,按缺血时间(发病至死亡时间)分为缺血2～6h、7～24h、25～48h、49～72h、73～96h、97～144h组和145～168h组。选取因其他疾病死亡(非脑缺血)尸检标本2例为对照组。采用HE染色方法观察神经细胞损伤情况;免疫组织化学染色检测Aβ140与βAPP在海马CA1区神经元的表达,在镜下对免疫组织化学染色阳性细胞计数,实验结果应用SPSS11.5统计软件进行分析。结果与对照组(2.88个±0.18个/高倍视野)相比,缺血2～6h组Aβ140表达增加(22.44个±2.79个/高倍视野),在73～96h达高峰(36.30个±2.67个/高倍视野),以后有所回落,但仍高于对照组。缺血7～24h组βAPP阳性细胞数量(28.11个±2.03个/高倍视野)显著低于2～6h组(33.30个±0.42个/高倍视野),缺血24h后阳性细胞数量增多,73～96h组达高峰(32.32个±1.36个/高倍视野),96h以后下降,但仍高于对照组(25.90个±1.55个/高倍视野)。24h后βAPP的增加与Aβ140的增加呈显著正相关。结论人脑缺血后Aβ表达增加,并与βAPP协同加重脑缺血性损伤。     

磷脂酶A_2在阿尔茨海默病发病机制中的作用

磷脂酶A2(PLA2)是一类催化甘油磷脂sn-2酯键水解生成多不饱和脂肪酸和溶血磷脂的超家族酶系。在正常细胞内,PLA2的代谢产物水平很低,作为信号分子来调节许多细胞功能,而当这些代谢产物大量积聚时,会产生神经毒性。近年来大量研究表明,PLA2可以通过以下几个环节参与阿尔茨海默病(AD)的发病机制:Aβ沉积、突触丢失、氧化应激、炎性反应和细胞凋亡,但是AD的确切发病机制目前尚不清楚,现就PLA2在AD发病中的作用予以综述。     

JAK/STAT途径介导Aβ寡聚体诱导小胶质细胞TNF-α的释放

目的 研究β淀粉样蛋白（Aβ）寡聚体对晚期糖基化蛋白相关受体（RAGE）介导小胶质细胞产生炎症反应的影响,分析Janus 激酶/ 信号转导和转录激活子（JAK/STAT）途径与Aβ寡聚体诱导肿瘤坏死因子α（TNF-α）释放的关系。方法 取经过刺激及阻断处理原代培养的小胶质细胞,经酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞上清液TNF-α的水平。结果 经Aβ寡聚体处理24h后TNF-α表达增加,分别经抗RAGE IgG和AG490预处理后再经Aβ寡聚体处理小胶质细胞,TNF-α释放明显被抑制。 结论 RAGE是Aβ寡聚体诱导小胶质细胞炎症反应的受体,JAK/STAT途径可能参与Aβ寡聚体诱导小胶质细胞TNF-α的释放。     

人参皂苷Rg1对β淀粉样蛋白诱导细胞凋亡的影响

目的 探讨人参皂苷Rg1对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导细胞凋亡的影响及其机制.方法 利用中国仓鼠卵巢瘤细胞系(CHO)采用MTY方法筛选人参皂苷Rgl抗Aβ细胞毒性的有效浓度.通过转染突变型(M146L)PS1基因的CHO细胞(PS1M146L),利用免疫荧光染色、蛋白质免疫印迹方法,探讨人参皂苷Rg1对PS1M146L细胞中Aβ42和凋亡效应基因半胱氨酸蛋白水解酶(caspase-3)活性蛋白表达的影响,通过脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法和Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测,观察人参皂苷Rg1对Aβ促细胞凋亡的影响.结果 加用25、50、100 μmol/L人参皂苷Rg1的CHO细胞活性明显高于未加用组(均P＜0.05).在转染突变型PS1M146L的CHO细胞中,加用人参皂苷Rg1作用24 h后早期细胞凋亡数(10.11.11±0.76)较未加用组(15.01±1.46)少,差异有统计学意义(P＜0.05);同时Aβ42和caspase-3活性片段的蛋白质表达量较未加用组细胞亦不同程度降低(均P＜0.05).结论 人参皂苷Rg1可能通过降低Aβ42生成和降低caspase-3蛋白质表达抑制Aβ诱导的细胞凋亡.     

银杏内酯对拟AD模型大鼠海马CA1区Aβ1-40表达的影响

目的：研究银杏内酯对拟阿尔茨海默病（AD）模型大鼠海马CA1区Aβ1-40表达的影响。方法：采用冈田酸（OA）海马CA1区微量注射建立拟AD大鼠模型，3周后银杏内酯腹腔注射，水迷宫行为学试验检测学习记忆能力，免疫组织化学方法观察海马CA1区Aβ1-40的表达。结果：与拟AD模型组比较，银杏内酯组平均逃避潜伏期明显缩短（P〈0．01），银杏内酯组海马CA1区Aβ1-40表达明显减少或消失（P〈0．01）。结论：银杏内酯显著改善拟AD模型大鼠学习记忆能力，其机理可能是抑制海马Aβ1-40的表达及tau蛋白磷酸化，减轻OA对大鼠海马神经元的病理损害。     

阿尔茨海默症转基因小鼠模型的建立及其脑新皮质区β淀粉样蛋白的分布

目的：比较两种方法建立阿尔茨海默病转基因小鼠模型对小鼠脑新皮质区Aβ分布的影响。方法：选取16月龄雄性小鼠20只,分别建立APP/PSl双转基因（2×Tg-AD组）模型与APP/PSl/tau三转基因（3×Tg-AD组）模型。取两组小鼠新皮质区脑组织行6E10单克隆抗体免疫组化染色等方法显示Aβ阳性神经元及斑块,观察其分布与形态差异,并利用图像分析系统定量比较。结果：在新皮质区2×Tg-AD组Aβ阳性产物主要位于细胞外即细胞外Aβ（eAβ）,形成大量的老年斑,细胞内阳性产物少;而3×Tg-AD组Aβ阳性产物主要位于神经元细胞内即细胞内Aβ（iAβ）,但老年斑少见。结论：2×TgAD组与3×Tg-AD组Aβ阳性产物在新皮质区分布的差异可能反映了两种AD小鼠模型神经病理等改变的不同。     

腺病毒介导的NEP基因对Aβ25-35诱导的SK-N-SH细胞凋亡的抑制作用

目的    研究脑中性内肽酶(NEP)基因外源表达对神经毒性物质β-淀粉样肽(Aβ25-35)诱导损伤的SK-N-SH细胞凋亡的抑制作用。方法    用脂质体法将含NEP的腺病毒载体转染高代次293细胞,制备高滴度病毒载体,感染Aβ25-35处理的外源损伤的人神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH细胞),采用MTT法检测细胞存活率,采用流式细胞术分析细胞凋亡状态和细胞内活性氧水平,采用RT-PCR和Western blot法检测凋亡相关基因bcl-2及bax的表达情况。结果    细胞存活率及流式细胞术检测结果显示,NEP高表达可明显减轻Aβ25-35诱导的细胞凋亡及减低细胞内活性氧水平,RT-PCR和Western blot结果显示,NEP对Aβ25-35诱导的细胞凋亡的抑制作用可能是通过减少促凋亡基因bax的表达以及降低细胞内活性氧水平来实现的。结论    NEP对Aβ25-35诱导的神经细胞损伤具有一定保护作用,其作用机制可能与凋亡相关基因有关。     

阿尔茨海默病与炎症

阿尔茨海默病(AD)是目前为止最普遍的神经退行性疾病。除了纤维状Aβ多肽和神经纤维缠结等组织病理学特征外,阿尔茨海默病的炎症机制也已得到验证。本文将就哪种类型的细胞参与该炎症,同时就AD发病过程中释放哪些前炎症因子及抗炎因子进行综述。