黑色素细胞培养上清液对增生性瘢痕成纤维细胞的生物学 …

目的 观察正常的黑色素细胞（ＭＣ）对增生性瘢痕成纤维细胞（ＨＳＦｉｂ）的生物学效应。方法 收集ＭＣ的上清液按不同的浓度加入培养的ＨＳＦｉｂ中,ＭＴＴ法测定细胞的增殖率,＾３Ｈ－ＴｄＲ参入法测定细胞ＤＮＡ合成率。结果 加入ＭＣ上清液的ＨＳＦｉｂ,培养４８ｈ后,较正常对照组,实验组细胞增殖明显（Ｐ〈０．０５（,ＤＮＡ合成率各实验组（ＭＣ１组外）与对照组相差显著（Ｐ〈０．０１）,但高浓度组（７５％）的合     

多系统脏器衰竭患者血浆胃动素水平的初步研究

应用放射分析免疫分析法测定了３８例多系统脏器衰竭患者和４２例健康正常人血浆胃动素浓度。结果显示：（１）ＭＳＯＦ患者危重期血浆ＭＴＬ２较恢复期和正常对照组明显升高（Ｐ〈０．０１），而ＭＳＯＦ恢复期与正常对照组相比则无显著性差异（Ｐ〉０．０５）；（２）随着衰竭脏器的增多，ＭＴＬ浓度也随之增高（Ｐ〈０．０１）；（３）ＭＳＯＦ组中合并有中枢神经系统功能衰竭、胃肠功能衰竭、肝功能衰竭患者ＭＴＬ水平明显高于无     

胎肝造血基质细胞条件液对WEHI_3细胞增殖分化的影响

采用体外液体培养法，观察不同浓度及不同胎龄人胎肝造血基质细胞条件培养液（ＨＦＬＳＣ－ＣＭ）对ＷＥＨＩ＿３细胞增殖与分化的影响。结果表明：５月龄ＨＦＬＳＣ－ＣＭ能促进ＷＥＨＩ＿３细胞增殖与分化；７月和９月龄ＨＦＬＳＣ－ＣＭ抑制ＷＥＨＩ＿３细胞增殖，促进分化。文中讨论了人胎肝造血基质细胞与造血的关系以及不同时期造血基质细胞的作用。     

颅脑外伤病人血清及脑脊液中cAMP．cGMP浓度测定的临床意义

本文采用［Ｉ１２５］放射免疫方法，测定了５５例格拉斯哥昏迷积分（ＧｌａｓｓｇｏｗＣｏｍａＳｃａｌｅ－ＧＣＳ）３～１５分的急性颅脑外伤病人与２０例对照病人血清及脑脊液中环－磷酸腺苷酸（ｃＡＭＰ）、环－磷酸鸟苷酸（ｃＧＭＰ）的浓度。研究发现，ＧＣＳ介于３～８分病人的ＣＳＦ－ｃＡＭＰ、ＣＳＦ－ｃＧＭＰ含量均低于对照组，而ＧＣＳ介于９～１５分病人的ＣＳＦ－ｃＡＭＰ、ＣＳＦ－ｃＧＭＰ均有不同程度的升高，随ＧＣＳ的下降而升高。在颅脑外伤病人，血清ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ含量均高于对照组，但与外伤程度无明显相关性。动态观察表明，颅脑外伤后ＣＳＦｃＡＭＰ含量升高，预示病情预后良好。外伤后昏迷病人ＣＳＦ－ｃＡＭＰ含量的持续下降以及一度升高后的严重下降，均提示预后欠佳。研究结果表明，ＣＳＦｃＡＭＰ作为一种代谢性生化指标，更能弥补现代影像学设备（如ＣＴ、ＭＲＩ等）在颅脑外伤诊断方面的不足、对颅脑外伤病人的病情诊断及预后评估有着重要的临床意义。     

危重病人并多系统功能衰竭伍用大剂量维生素C治疗的探讨

对３８例危重病人并发多系统器官功能衰竭ＭＯＳＦ进行了回顾分析，并探讨了伍用大剂 维生素Ｃ（ＶＣ）的可能性。本组病人ＭＯＳＦ的发生器官以肾、肝、心和外周循环发生 高，其次为肺及消化、神经和凝血系统。ＶＣ治疗组２０例ＭＯＳＦ死亡９例，对照组１８例死亡１２例。两组比较前者死亡率低于对照组。本文结果表明，在综合治疗ＭＯＳＦ的基础上，应用大剂量ＶＣ具有一定价值。     

多系统脏器衰竭患者血浆胃动素水平的初步研究

应用放射免疫分析法测定了３８例多系统脏器衰竭（ＭＳＯＦ）患者和４２例健康正常人血浆胃动素（ＭＴＬ）浓度。结果显示：①ＭＳＯＦ患者危重期血浆ＭＴＬ浓度较恢复期和正常对照组明显升高（Ｐ＜０．０１），而ＭＳＯＦ恢复期与正常对照组相比则无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；②随着衰竭脏器的增多，ＭＴＬ浓度也随之增高（Ｐ＜０．０１）；③ＭＳＯＦ组中合并有中枢神经系统功能衰竭、胃肠功能衰竭、肝功能衰竭患者ＭＴＬ水平明显高于无合并上述系统脏器衰竭者，死亡组明显高于生存组（Ｐ＜０．０１）；④ＭＳＯＦ患者血浆ＭＴＬ水平与病情危重度评分吴正相关。本文对ＭＳＯＦ患者血浆ＭＴＬ水平增高的机理及临床意义作了初步深讨。     

甘氨双唑钠对大鼠的致畸性评价

研究甘氨双唑钠的致畸性。采用传统的致畸学试验方法，检测了ＣＭＮｑａ对Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ孕鼠在致畸敏感期的潜在毒性。试验设１３９．９，２７９．０和１３９９．０ｍｇ／ｋｇ３个剂量，同时设对照组，采用尾静脉注射给药。孕鼠接受ＣＭＮａ后，母体体重减轻，并随剂量的增大而有剂量－效应关系。     

丙烯氨氧化催化剂物化性能研究：Ⅱ.催化剂失活前后的结构表征

采用ＸＲＤ，ＩＲ，Ｍｏｂａｕｅｒ ＥＳＲ，ＸＰＳ，ＳＥＭ和孔结构分析等分析测试手段，对比研究了新鲜，失活和再生三种丙烯氨氧化催化剂的体相结构和表面性质。结果表明，新鲜催化剂中各元素以Ｆｅ２（ＭｏＯ４），α－ＣｏＭｏＯ４，ＮｉＭｏＯ４，γ－Ｂｉ２Ｏ３．ＭｏＯ３，α－Ｂｉ２Ｏ３．３ＭｏＯ３，η－ＭｏＯ３，α－Ｂｉ２Ｏ３和β－Ｂｉ２Ｏ３形式存在２；失活催化剂中，部分Ｆｅ２（ＭｏＯ４）３转变为α－Ｆｅ－Ｍ     

粒细胞集落刺激因子对卵巢癌细胞株生长的影响及检测方法研究

目的 了解粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）对人卵巢癌细胞株生长的影响,并对用于卵巢癌细胞活性检测的４种方法进行比较。方法 采用ＸＴＴ比色法、ＭＴＴ比色法、集落形成试验、＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验分别检测Ｇ－ＣＳＦ对卵巢癌细胞株３ＡＯ细胞生长的影响。结果 ４种细胞活性检测方法检测不同浓度Ｇ－ＣＳＦ对３ＡＯ细胞生长的影响与对照组（Ｇ－ＣＳＦ浓度为０ｎｇ／ｍｌ）相比,差异均无显著性（Ｐ〉０．０５）。结论：Ｇ     

钙增敏剂MCI-154对内毒素休克大鼠心肌钙稳态的影响

目的：研究钙增敏剂ＭＣＩ－１５４ 对内毒素休克大鼠心肌钙稳态的影响。方法：甲腈吡酮或ＭＣＩ－１５４ 治疗内毒素休克大鼠后１、３、５ ｈ,分别测定心肌组织、线粒体、肌浆网（ＳＲ）的钙含量;离体分离内毒素休克大鼠心肌细胞,分别与１×１０－ ３、１×１０－ ２、１×１０－ １ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ甲腈吡酮或ＭＣＩ－１５４孵育,利用Ｆｕｒａ ２－ＡＭ 测定心肌细胞胞浆钙浓度（［Ｃａ２＋ ］ｉ）。结果：内毒素休克后,心肌组织、线粒体、ＳＲ钙含量明显增加。甲腈吡酮治疗后,上述指标进一步升高;而ＭＣＩ－１５４ 治疗后,心肌组织、线粒体、ＳＲ钙含量无明显增加,治疗后３、５ ｈ 值同单纯生理盐水（ＮＳ）治疗组无明显差别,显著低于甲腈吡酮治疗组值。内毒素休克大鼠心肌细胞［Ｃａ２＋ ］ｉ明显高于对照组,甲腈吡酮与内毒素休克心肌细胞孵育后,［Ｃａ２＋ ］ｉ随药物浓度增大而显著升高;不同浓度的ＭＣＩ－１５４均不明显升高心肌细胞［Ｃａ２＋ ］ｉ。结论：ＭＣＩ－１５４用于内毒素休克治疗时,不进一步加重心肌钙稳态失衡及心肌细胞内钙超载。     

Persantine improves acute pancreatitis in vitro

Persantine combined with TNF-a enhances antiproliferative activity in human tumor cells. We hypothesized that the vasodilator persantine would ameliorate acute pancreatitis (AP) in vitro. Rat pancreatic ductal cells were cultured using standard techniques. Acute pancreatitis was induced by adding cerulein (10(-9) M) or TNF-a (200 ng/ml). AP was verified by increased amylase production. Persantine was added at concentrations from 0.1 uM to 100 uM post cerulein or TNF-a treatment. Statistical analysis was achieved by ANOVA. Amylase production was significantly increased (p < 0.05) compared with control upon stimulation with either cerulein or TNF-a. When persantine was added in graded concentrations from 0.1 uM to 100 uM to cerulein treated cells, it decreased amylase production significantly (p < 0.05) at 100 uM. However, when persantine was added to TNF-a treated cells, it decreased amylase production (p < 0.05) at the lower concentrations of 0.1 uM and 1 uM. We have shown for the first time that AP, resulting from either mild (cerulein) or severe (TNF-a) stimulation, is significantly improved by treatment with persantine.     

基质细胞衍生因子-1对骨髓源间充质干细胞迁移的影响

目的:利用Boyden chamber体外迁移体系初步探索基质细胞衍生因子-1(SDF-1)在骨髓源间充质干细胞(MSC)迁移中的作用及其信号转导机制。方法:采用经典的全骨髓贴壁法培养MSC,通过成骨、成脂肪等多向诱导分化以及流式细胞分析其表面标记(CD133、CD34、CD90、CD105)等鉴定MSC特征;以P3-MSC为实验材料,利用Boyden chamber体外迁移体系,先观察不同浓度的hSDF-1α对MSC迁移的影响,随后以50 M wortman-nin、10 uM LY294002、50 uM PD98059、10 uM U73122、0.1 mg/ml AMD3100等不同处理P3-MSC,观察最适宜浓度的hSDF-1α对MSC迁移影响的信号转导机制。结果:培养的MSC呈现出CD90、CD105强阳性,具有成骨、成脂肪等多向分化能力;MSC体外迁移能力随着hSDF-1α浓度(1 ng/ml、10 ng/ml、100 ng/ml、500 ng/ml)的递增而逐渐增强,并且hSDF-1α浓度在100 ng/ml时,MSC迁移到滤膜上的细胞数接近于锋值;Wortmannin、LY294002、PD98059、U70312、AMD3100对MSC迁移均有影响,其中U73122、AMD3100对MSC迁移阻断的效应最显著。结论:SDF-1/CXCR4所介导的MSC迁移与丝裂酶原活化蛋白激酶(MAPK)、磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)和蛋白激酶C(PKC)等信号途径有关,且PKC途径可能处于中心环节。     

A novel mutation in proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 gene leads to familial hypercholesterolemia in a Chinese family

Background Familial hypercholesterolemia （FH） is an autosomal disorder associated with elevated plasma low density lipoprotein （LDL） levels leading to premature coronary heart disease （CHD）. As a result of long-term hyperlipemia, FH patients will present endarterium thickening and atherosclerosis. In the present study we scanned the related gene of a clinically diagnosed autosomal genetic hypercholesterolemia family for the possible mutations and established eukaryotic expression vector of mutation of proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 （PCSK9） gene with gene recombination technique to investigate the contributions of the variation on low density lipoprotein receptor （LDL-R） metabolism and function alternation.Methods Mutation detection was conducted for LDL-R, apolipoprotein B100 （apoB100） and PCSK9 gene with nucleotide sequencing in a Chinese FH family. The full-length cDNA of wild type PCSK9 gene （WT-PCSK9） was obtained from Bel-7402. Site mutagenesis was used to establish the recombinant eukaryotic expression vector carrying pathogenic type of PCSK9 gene and the inserted fragment was sequenced. With the blank vector as control, liposome transfection method was used to transfect the Bel-7402 cells with recombinant plasmid. The expression of LDL-R mRNA was examined by RT-PCR. PCSK9 and the expression of LDL-R protein were determined by Western blotting. Results The G→T mutation at the 918 nucleotide of PCSK9 gene resulted in the substitution of the arginine by a serine at the codon 306 of exon 6. After sequencing, it was confirmed that the inserted fragment of established expression vector had correct size and sequence and the mutant was highly expressed in Bel-7402 cells. There was no significant variation in the levels of LDL-R mRNA. LDL-R mature protein was decreased by 57% after the cells were transfected by WT-PCSK9 plasmid. Mature LDL-R was significantly decreased by 12% after the cells were transfected by R306S mutant as evidenced by gray scale scanning, suggesting that the new mutant R306S can significantly decrease the expression of mature LDL-R protein.Conclusions A novel missense mutation of PCSK9 gene, R306S, was found and the eukaryotic expression vectors of mutant and wild-type of PCSK9 gene were established. There was no significant variation in the levels of LDL-R mRNA. The R306S mutation could significantly lead to the decrease of LDL-R mature protein expression, which might be the pathogenic gene of the FH family.     

S100A_4在肺癌中的表达及其与MMP9/TIMP1表达失衡的关系

目的:研究S100A4在人肺癌中的表达及其临床生物学意义,探讨其在肺癌的侵袭和转移中的作用及其与MMP9/TIMP1表达失衡的关系。方法:采用S-P免疫组化法检测50例肺癌及6例正常肺组织中S100A4、MMP9及TIMP1的表达水平。结果:S100A4、MMP9和TIMP1在肺癌中表达显著高于正常肺组织;非小细胞肺癌中表达明显高于小细胞肺癌(P<0.05);腺癌中表达明显高于鳞癌(P<0.05)。S100A4和MMP9表达与非小细胞肺癌临床病理特征关系密切,在有淋巴结转移组与无转移组中两者均有显著性差异(P<0.05)。在肺癌不同临床TNM分期中,S100A4和MMP9阳性表达随临床分期的升高而明显增加,各期间均有显著性差异(P<0.05)。MMP9表达与非小细胞肺癌分化程度密切相关,随分化程度的降低,MMP9阳性率升高(P<0.05);S100A4阳性率随分化程度的降低也有升高趋势,但没显著性差异。S100A4表达与肿瘤大小有密切的正相关关系,随肿瘤体积的增大,S100A4的阳性率升高(P<0.05)。S100A4与MMP9呈正相关(P<0.05);MMP9与TIMP1呈正相关关系(P<0.05)。结论:S100A4和MMP9与肺癌的侵袭和转移有密切的关系,可以作为评估肺癌病人预后的重要指标。TIMP1不是简单对MMP9的局部升高起反应。S100A4参与调节MMP9的表达,则可能为肺癌的治疗开辟一条新的途径。     

白细胞介素1β与地塞米松联合应用对人成骨细胞芳香化酶活性影响

目的探讨白细胞介素1β(IL-1 β)与地塞米松联合应用对人成骨细胞(Human Osteoblast-likecells HOS)芳香化酶活性的影响.方法对人的成骨细胞进行培养,设立实验组,分别加入IL-1β 1ng/mL(实验Ⅰ组)、10 ng/mL(实验Ⅱ组)、50 ng/mL(实验Ⅲ组);分别加地塞米松浓度0.1 uM(实验Ⅳ组)、1.0 uM(实验Ⅴ组)、10.0 uM(实验Ⅵ组);地塞米松浓度0.1 uM和IL-1β 1ng/mL(实验Ⅶ组);IL-1 β10 ng/mL和IL-1ra 500 ng/mL(实验Ⅷ组),对照组加培养液,采用氚水法检测芳香化酶活性.结果实验组Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ组氚水放射强度与对照组比较放射强度明显增加,差异显著(P＜0 05).实验Ⅳ,Ⅴ,Ⅵ组放射强度与对照组比较有非常显著性差异(P＜0.001).实验Ⅶ组与对照组间差异无统计学意义.实验Ⅷ组放射强度高于对照组及实验组Ⅰ和Ⅳ,差异非常显著(P＜0.001).结论人成骨细胞中IL-1 β、地塞米松分别可以增加芳香化酶的活性.IL-1β是通过与成骨细胞的IL-1受体相结合而起作用.地塞米松和IL-1β联合应用使芳香化酶活性增加,它们相互作用影响着骨骼中雌激素合成.     

结直肠癌患者血清S100A8和S100A9表达水平检测及其临床意义

目的：探讨血清S100A8和S100A9表达水平和结直肠癌患者临床特征的关系。方法：用ELISA法检测82例结肠癌或直肠癌患者和14例健康对照者血清中S100A8和S100A9的含量,利用t检验、方差分析等方法分析两种分子与结直肠癌病理分期及临床特征的关系;利用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析S100A8和S100A9对结肠癌和直肠癌的诊断效能;构建logistic回归模型分析S100A8和S100A9血清水平升高的可能相关因素。结果：结肠癌组患者血清中S100A8浓度[(1 403.3±593.7) pg/mL]和S100A9的含量[(2 890.3±994.9) pg/mL]均显著高于健康对照组[分别为(712.8±265.3)和(1 492.7±564.6) pg/mL,P<0.01];直肠癌患者血清S100A8和S100A9的含量分别是(1 417.7±666.5)和 (3 026.7±887.6) pg/mL,也高于对照组(P<0.05);血清S100A8和S100A9诊断结肠癌或直肠癌均具有较高的敏感性和特异性,两者联合应用时,曲线下面积(AUC)在结肠癌和直肠癌分别达到0.972和0.964;随着结直肠癌临床恶性度增高和远处转移的发生,血清S100A9表达水平升高,差异具有统计学意义(P<0.05),S100A9在III期[(3 111.9±178.5) pg/mL]和IV期[(3 831.4±278.5) pg/mL]患者血清中的含量均显著高于I期患者[(2 276.1±167.4) pg/mL,P<0.01];而S100A8血清浓度与临床分期之间未发现明显关联;logistic回归分析发现血清S100A9升高与肿瘤浸润深度(OR=6.135,P=0.024)、淋巴结转移(OR=4.735,P=0.05)及分化程度(OR=2.573,P=0.043)等密切相关。结论：结直肠癌患者的S100A8和S100A9血清水平显著升高,且S100A9水平与结直肠癌恶性度呈正相关。     

串珠镰刀菌的致突变效应

从食管癌高发地区林县和辉县粮食中心分离的31株串珠镰刀菌培养物的乙醚提取物,用Ames试验和大肠杆菌变异株检测其致突变性,31株提取物不加S9活化、对TA100、TA98、大肠杆菌CM891和ND—160菌株均未显示致突变作用。而加S9活化的28株提取物,有13株对TA100菌株显示致突变效应,其中3株提以物同时也对TA98菌株出现致突变作用。根据以上结果,提示对TA100菌株诱发置换突变型的诱变物可能是亚硝胺类化合物,但还可能有另一种对TA98菌株诱发移码突变型的诱变物存在。     

S100A9真核表达载体pEGFP-N3-S100A9的构建及其对U251细胞生长的影响

目的构建S100A9真核表达载体pEGFP-N3-S100A9,观察其对胶质瘤细胞系U251内S100A9基因表达及细胞生长的影响。方法应用RT-PCR和DNA重组技术构建pEGFP-N3-S100A9融合蛋白表达载体,并用双酶切、测序进行鉴定,用脂质体转染胶质瘤细胞系U251细胞。荧光显微镜下动态观察U251细胞绿色荧光的变化;培养24 h后提取转染细胞的总RNA及总蛋白。通过荧光定量PCR（qRT-PCR）观察其mRNA表达情况,Western blot检测其蛋白表达情况,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期分布。结果酶切鉴定与S100A9全长基因长度一致（345 bp）;测序证实重组质粒中含有一与GenBank上登录的S100A9基因（NM₀02965）序列完全一致的片段,表明成功构建真核表达载体;荧光显微镜下转染U251细胞可见绿色荧光蛋白表达,12 h后逐渐增多,24～48 h达高峰,且稳定表达较长时间;24 h后通过qRT-PCR检测到mRNA表达,Western blot检测到14×103目的蛋白表达（P<0.05）,其增殖能力明显增强（P<0.01）,且引起细胞G1期减少,S期增加（P<0.05）。结论成功构建真核表达载体pEGFP-N3-S100A9,转染到U251细胞后能有效上调S100A9基因的mRNA及蛋白的表达、促进细胞增殖。     

尼美舒利致突变的Ames试验研究

以鼠伤寒沙门氏菌ＴＡ９８和ＴＡ１００两种菌株对尼美舒利作遗传毒理学检测。尼美舒利浓度在９．３７５～４８００μｇ／皿范围内，在有或无Ｓ９条件下，其诱变菌落回变均数与自发回变菌落均数的比值均小于２，故尼美舒利的Ａｍｅｓ试验结果为阴性。实验结果表明，这种新药无明显致突变性。