6B11卵巢癌抗独特型单链抗体表达及序列分析

目的：克隆和表达６Ｂ１１卵巢癌抗独特型抗体单链可变区基因，并进行序列分析。方法：采用逆转录ＰＣＲ和基因重组技术，扩增并构建６Ｂ１１鼠抗独特型抗体单链可变区基因，重组至噬菌体表面表达载体，在大肠杆菌表达，并利用双脱氧末端终止法进行核苷酸序列分析。结果：阳性克隆表达产物与卵巢癌单克隆抗体ＣＯＣ１６６－９特异结合；ＤＮＡ序列分析表明重链和轻链可变区分属小鼠免疫球蛋白重链第Ｉ亚群和轻链第Ⅱ亚群。结论：自６Ｂ１１小鼠杂交瘤细胞成功地克隆表达了该抗独特型单链抗体基因，为进一步人源化改造，推进卵巢癌的免疫治疗奠定了良好基础。     

抗人卵巢癌单链抗体基因的构建

构建抗人卵巢癌单抗ＣＯＣ１８３－Ｂ２单链抗体基因。方法，将通过ＰＣＲ方法体扩增并经测序验证的重链，轻链可变区基因先后重组入原核表达质粒ＰＴＨＡ９０相应的位点上，中间通过一连接肽（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３基因连接构建成单链抗体基因。     

抗血管内皮生长因子165抗体轻重链可变区基因的克隆与序列分析

目的　 获得抗血管内皮生长因子 1 6 5 ( VEGF1 65)抗体的轻重链可变区基因。 方法　 从分泌具有中和抗血管内皮生长因子 1 6 5活性的单抗杂交瘤细胞株Vm D1 1中提取总 RNA,经 RT- PCR扩增并克隆该单抗的轻、重链可变区基因并进行序列分析。结果　 抗体的轻链可变区基因 32 1 bp,属于小鼠第 亚群 ;重链可变区基因 35 4bp,属于小鼠第 ( B)亚群。结论　 所克隆的基因经核苷酸序列分析分别为抗体的轻、重链可变区基因。     

抗人卵巢癌单克隆抗体COC183—B2重链可变区基因的体外扩增,克 …

目的；分离抗人卵巢癌单克隆抗体ＣＯＣ１８３－Ｂ２重链可变区（ＶＨ）基因并测定其序列。方法；用反转录－ＰＣＲ扩增抗人卵巢癌单抗ＣＯＣ１８３－Ｂ２ ＶＨ基因，将其克隆入Ｐ＾ＵＣ１９载体，重组子用Ｓａｎｇｅｒ‘ｓ双脱氧链终止法测定序列，将序列与Ｇｅｎｅ Ｂａｎｋ及已发表的抗体序列比较。     

抗人卵巢癌单克隆抗体COC183-B_2轻链可变区基因的体外扩增、克隆及序列分析

目的分离抗人卵巢癌单克隆抗体ＣＯＣ１８３－Ｂ２轻链可变区（ＶＬ）基因并测定其核苷酸序列。方法用ＰＣＲ方法体外扩增单抗ＣＯＣ１８３－Ｂ２ＶＬ基因，将其克隆入ＰＵＣ１９载体，重组子用Ｓａｎｇｅｒ’ｓ双脱氧链终止法测定其核苷酸序列，将其序列通过Ｉｎｔｅｒｎｅｔ与ＧｅｎｅＢａｎｋ、ＥＭＢＬ、ＤＤＢＪ和ＰＤＢ已发表的抗体序列进行比较分析。结果ＶＬ基因全长３３６ｂｐ，属小鼠免疫球蛋白轻链第Ⅱ亚类（ＳｕｂｇｒｏｕｐⅡ），由种系基因的ＶＫ及Ｊ基因的ＭＵＳＪＫ２重排而成。该ＶＬ基因序列已被ＧｅｎｅＢａｎｋ收录（ａｃｅｓｉｏｎＮｏ．ｇｂＡＦ０４４０７７）。结论该ＶＬ基因为抗人卵巢癌单抗ＣＯＣ１８３－Ｂ２功能性轻链可变区基因。     

出血热病毒抗原与其抗独特型抗体基因的研究

为了解抗独特型抗体与抗原的基因特征和相互关系。方法采用基因工程方法，从分泌肾病综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）内影像型抗独特型人单克隆抗体杂交瘤细胞系（Ｃ８），克隆获得的抗ＨＦＲＳＶＩｄ人单克隆抗体重链和轻链可变区基因，并与出血热病毒基因进行了比较。结果抗Ｉｄ人单克隆抗体重链可变区第４５～５５位氨基酸序列和轻链可变区第５８～６８位氨基酸序列，均与出血热病毒Ｇ２膜蛋白的第４４７～４５７位氨基酸序列高度同源，而且同源区域具有相似的蛋白质二级结构。结论抗Ｉｄ人单克隆抗体模拟抗原具有一定的分子基础。     

二甲基亚砜,别嘌呤醇对大鼠应激性损伤的保护作用

从牙周病厌氧菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株出发，通过基因工程方法－ＰＣＲ技术，调出其抗体的重链和轻链基因可变区序列，体外重组后得到单链抗体ＳｃＦｖ片段，克隆到了ｐＣＡＮＴＡＢ５载体上，在Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＴＧ１中得到成功表达     

抗人精浆蛋白单克隆抗体轻,重链可变区基因的克隆及序列分析

获得鼠抗人精浆蛋白单抗可变区基因，为单链抗体的构建及表达奠定基础。方法；从分泌抗人精浆蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系Ｅ４Ｂ７中提取总ＲＮＡ，经反转录，ＰＣＸＲ分离获得了γ－Ｓｍ－ＭｃＡｂ轻链可变区基因和重链可变区基因，分别克隆入ｐＵＣ１９质粒中，用全自动荧光ＤＮＡ序列分析仪对ＶＨ，ＶＬ基因序列进行了分析。     

重症肌无力抗乙酰胆碱受体单链抗体基因的构建

[目的 ]构建重症肌无力抗乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体A 7基因 .[方法 ]应用PCR技术及基因克隆技术分两步完成重链和轻链可变区基因的克隆 ,再对构建的单链抗体A 7基因进行序列测定检测其核苷酸序列 .[结果 ]构建的重组质粒经序列分析 ,重链可变区基因长度为 36 9bp ,轻链可变区基因长度为 32 1bp ,单链抗体基因长度为 735bp ;单链抗体A 7基因正确地插入在载体质粒pHEN 2开放读码框架内 .[结论 ]成功地构建重症肌无力抗乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体A 7基因 ,为进一步制备基因工程抗体奠定了基础 .     

抗人卵巢癌单克隆抗体COC183-B2重链可变区基因的体外扩增、克隆及序列分析

目的：分离抗人卵巢癌单克隆抗体ＣＯＣ１８３Ｂ２重链可变区（ＶＨ）基因并测定其序列。方法：用反转录ＰＣＲ扩增抗人卵巢癌单抗ＣＯＣ１８３Ｂ２ＶＨ基因，将其克隆入ＰＵＣ１９载体，重组子用Ｓａｎｇｅｒ’ｓ双脱氧链终止法测定序列，将序列与ＧｅｎｅＢａｎｋ及已发表的抗体序列比较。结果：ＶＨ基因全长３５４ｂｐ，属鼠免疫球蛋白重链混杂亚类（ｓｕｂｇｒｏｕｐｍｉｓｃｅｌａｎｅｏｕｓ），由种系基因的ＶＨ，Ｄｓｐ２．５及ＭＵＳＪＨ４重排而来。该ＶＨ基因序列已被ＧｅｎｅＢａｎｋ收录（ａｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏＡＦ０４５０２３）。结论：该ＶＨ基因为抗人卵巢癌单抗ＣＯＣ１８３Ｂ２功能性重链可变区基因。