人肺鳞癌细胞系CHLH-1建立

目的:建立人肺鳞癌细胞系,探讨其生物学特性.方法:取人肺鳞癌新鲜手术标本,经组织块体外培养并克隆建系,命名为CHLH-1.采用光镜、电镜、染色体核型分析及异种移植瘤实验对细胞系生物学特性进行观察.结果:原位肿瘤、细胞系及移植瘤标本经光镜、电镜证实该细胞系具有鳞状上皮性恶性细胞特征,并观察了其体外生长曲线、倍增时间和分裂指数;染色体核型分析众数为60～68,为亚三倍体;裸鼠皮下异种移植形成移植瘤.结论:根据细胞系特征显示该细胞系是一新建的肺鳞癌细胞系.     

两株新肝癌LXY-1、XMS-1细胞系的建立及其生物学特性观察

目的建立两株新建的肝癌细胞系并观察其生物学特性。方法采用HE染色技术、细胞计数法、琼脂糖电泳法、ELISA、流式细胞仪、核型分析和异种移植等对两株新的肝癌细胞系进行生物学特性研究。结果两株细胞分别命名为LXY-1、XMS-1,均已获得长期体外生长的能力,无论形态学观察,还是LDH同工酶谱的变化,均符合肝癌细胞的一般特征,细胞培养上清及胞质中均不分泌AFP、HBsAg。XMS-1细胞DNA整合有HBV DNA,染色体平均数分别为:LXY-1105条、XMS-150条。两株细胞S、G2-M期细胞比例增加,细胞倍增时间介于19.5～59.2h之间,异种移植成瘤率:LXY-175%,XMS-1不成瘤。结论两株肝癌细胞均具有人肝癌细胞的一般特征,可用于肝癌的防治研究。     

人肝细胞肝癌细胞系HCC-9903生物学特性的初步观察

目的新建一株人肝癌细胞系,为肝癌研究提供新的实验模型.方法用组织块法培养,并按细胞系建立标准检测细胞的一系列生物学特性.结果细胞维持培养15个月,传代100代,细胞形态及超微结构具有恶性细胞的特征,45代细胞的倍增时间为21.3h,细胞能在软琼脂上生长,形成集落,染色体众数60～67条,主干系为亚三倍体.1q(i)和t(6,11)为其标记染色体,细胞对刀豆球蛋白有凝集反应,5×106细胞接种于裸鼠皮下,肿瘤呈进行性生长.结论该细胞系符合建系标准,是一株新建的肝癌细胞系.     

人肝癌裸小鼠原位移植模型皮肤转移的生物学特性研究

目的：为探讨内脏恶性肿瘤引起皮肤损害机制及抗转移治疗提供实验依据和工具。方法：将本院人肝癌裸鼠原位移植癌第20代传代移植后，观察移植瘤的侵袭和皮肤转移及其生物学特征。结果：肝癌皮肤转移瘤表现为血道转移，癌栓经门静脉、腹壁静脉、胸膜壁静脉至腋静脉，突破脉管进入右前胸外上方及腋前组织，在其皮下形成边界清楚的结节性皮肤转移瘤。皮肤转移成功率为73．7％，表现为皮肤特异性损害，其组织病理学和电镜观察，流式细胞仪DNA含量测定及染色体核型分析，结果与原位移植瘤性质一致。结论：本研究客观地模拟人体内脏肿瘤的侵袭和皮肤转移及损伤过程，为进一步研究内脏恶性肿瘤和皮肤病变的内在联系提供了重要依据和良好的动物模型。     

肝癌细胞系EHBC-512的建立及其生物学特性分析

目的:建立一株新的肝癌细胞系EHBC-512并分析其生物学特性,为后续研究奠定基础.方法:切取肝癌手术标本进行体外原代培养,采用光镜、电镜观察细胞形态,流式细胞检测细胞周期,并进行染色体核型分析,免疫荧光及化学发光法检测细胞上清液AFP的表达;裸鼠体内种植观察异种成瘤情况.结果:光镜下细胞形态具有肝癌细胞特征;电镜下细胞具有较多的线粒体,核异形性明显,染色体众数为110～120条.细胞群体倍增时间为48 h,贴壁率达90%.免疫荧光染色显示:细胞AFP、CK18表达,CEA、CK19未表达;细胞高分泌AFP,上清液AFP含量>1 210 μg/L.裸鼠体内成瘤病理检测与原发灶保持相同的结构和细胞形态.结论:成功建立一株生物学特性稳定并能体外高分泌AFP的人类肝癌细胞系(EHBC-512),为肝癌研究提供新的研究工具.     

人脑胶质瘤细胞系CHG-5的建立及其生物学特性的分析

目的：建立一人脑胶质瘤细胞系并探讨其生物学特性。方法：取胶质瘤新鲜手术标本,经组织块法培养并克隆、建株,采用光镜、电镜、免疫组化、流式细胞术、染色体分析及异种移植瘤实验对细胞株生物学特性进行观察。结果：原位肿瘤、细胞株及移植瘤标本经电镜证实为星形细胞源性,免疫组化呈ＧＦＡＰ、Ｖｉｍ ｅｎｔｉｎ及ＶＥＧＦ阳性,异种移植成瘤率高。与ＳＨＧ－４４细胞比较,ＧＦＡＰ表达强,Ｖｉｍ ｅｎｔｉｎ 表达弱。结论：ＣＨＧ－５为一恶性胶质瘤细胞系,且其生物学特性可能与ＳＨＧ－４４细胞有所不同。该细胞高表达血管生成因子     

人甲状腺未分化癌细胞裸鼠皮下移植模型的建立

目的 :建立人甲状腺癌细胞裸鼠皮下移植模型。方法 :用人甲状腺未分化癌细胞系 TA- K细胞悬液裸鼠皮下注射及瘤块皮下植入的方法建立人甲状腺未分化癌裸鼠皮下移植模型 ,观察移植后肿瘤生长特点及组织学特征。结果 :皮下注射法与肿瘤块植入法均可出现皮下肿瘤 ,染色体检查证实裸鼠皮下移植瘤的染色体组型与人体肿瘤一致。皮下注射方法肿瘤注射后经过 1 1～ 1 8d的潜伏期后才进入倍增期 ,瘤块皮下植入方法则跨过潜伏期直接进入倍增期。结论 :利用人甲状腺未分化癌细胞系 TA- K成功建立人甲状腺癌裸鼠皮下移植模型 ,肿瘤块植入法比皮下注射法省时、经济、稳定 ,是对传统皮下注射法的改进     

宫颈癌细胞系HCE1的建立及其生物学特性

从 5例手术切除宫颈癌标本中取材进行体外培养 ,并建成一个新的连续细胞系 ,命名为湖南宫颈癌上皮细胞系 1号 (HCE1)。该细胞已在体外生存 18个多月 ,传 80多代。其生物学特性显示 :①该细胞系接种至裸鼠后可致瘤 ,其移植瘤细胞形态与原实体瘤相似 ;②电镜下可观察到细胞表面有丰富的微绒毛及核糖体 ;③检测第 2 5代细胞生长曲线 ,其倍增时间为 45 8h ;④计数 6个平皿软琼脂集落形成率平均值为 14 8% ;⑤染色体核型分析为非整倍体 ,众数为 85条     

人脑胶质细胞系CHG—5的建立及其生物学特性的分析

目的：建立一人脑胶质瘤细胞系并探讨其生物学特性。方法：取胶质瘤新鲜手术标本,经组织圮法培养并克隆、建株,采用光镜、电镜、免疫组化、流式细胞术、染色体分析及异种移植瘤实验对细胞株生物学特性进行观察。结果：原位肿瘤、细胞株及移植瘤标本经电镜证实为星形细胞源性,免疫组化呈ＧＦＡＰ、Ｖｉｍｅｎｔｉｎ及ＶＥＧＦ阳性,异种移植成瘤率高。与ＳＨＧ－４４细胞比较,ＧＦＡＰ表达强,Ｖｉｍｅｎｔｉｎ表达弱。结论：ＣＨ     

人鼻咽癌上皮细胞株：CNE3的建立和生物学特性

从１例鼻咽癌肝转移尸检者取出肝转移之癌组织，经裸鼠异种移植成功，然后又经离体培养建成细胞株，定名为ＣＮＥ３。对该细胞生物学特性进行观察，结果表明：细胞生长周期最大倍增时间为９６ｈ，最大增长倍数为２５倍；染色体为人类染色体核型，为三倍体和亚三倍体；有ＥＢ病毒基因组存在，以及ＥＢＮＡ－１及晚期末蛋白（Ｌｍｐ）表达；裸鼠体内回复试验仍具成瘤性，其组织结构与原标本相似，体外培养反复冻融细胞生物学特性不变；     

鼠胶质瘤细胞上清液诱导人骨髓间充质干细胞向神经元样细胞的分化

目的：分离培养人骨髓间充质干细胞(MSCs),探讨鼠胶质瘤细胞上清液对其向神经元样细胞的诱导分化。方法：利用Percoll梯度分离法,培养人MSCs。采用鼠胶质瘤细胞上清液对MSCs进行诱导分化。观察人MSCs经诱导后细胞的形态变化,采用免疫细胞化学方法检测神经元烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。 结果：诱导24 h后,细胞胞体收缩呈锥形或球形,有突起长出,细胞间突起相互连接,交错成网,为典型的神经元样形态。免疫细胞化学结果显示,经诱导培养后的神经元样细胞的胞体及部分突起NSE和NF染色呈强阳性表达,而GFAP 染色呈阴性。诱导组出现NSE阳性的细胞率为(79.5±3.2)%,而对照组出现NSE阳性的细胞率为(12.1±2.0)%,两组之间比较差异有显著性 (P<0.01)。诱导组出现NF阳性的细胞率为(41.2±2.4)%,而对照组为阴性。结论：鼠胶质瘤细胞上清液可以诱导MSCs向神经元样细胞分化。     

成人骨髓间充质干细胞的体外培养及生物学性质

目的：建立人骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）分离培养方法,观察细胞形态,探讨BM-MSCs生物学特征。 方法：从人骨髓中利用Percoll分离有核细胞,培养于含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基中,台盼蓝拒染法测定细胞增殖状态。应用流式细胞仪测定细胞周期及细胞表面抗原特征。 结果;BM-MSCs具有纤维样细胞形态特征,独特的表型,即CD29、CD44、CD166和HLA-ABC阳性,CD34、CD45和HLA-DR阴性;细胞周期分析显示：12.8%处于S期,76.4%处于G₀/G₁期;细胞生长倍增时间为2~3 d。 结论：BM-MSC_S是一群均一的单克隆细胞,具有独特的增殖特征及表面标记。     

动员人外周造血祖细胞定向诱导树突状细胞

目的 探讨由动员人外周造血祖细胞体外培养扩增获得的树突状细胞（DC）的生物学特性, 为临床应用肿瘤树突状细胞疫苗建立制备方法。方法 用CS-3000血细胞分离机分离预经干细胞动员的患者外周血单个核细胞（PBMC）,去除淋巴细胞和单核细胞,阴性选择得到外周造血祖细胞,加入rhGM-CSF和rhIL-4培养10~14 d成为树突状细胞,然后进行形态学检测、细胞表型和T细胞刺激能力分析。结果 由外周造血祖细胞来源的树突状细胞可以达到(0.5~1.0)×108数量级;高倍镜和电镜照片显示典型的树突状细胞形态和超微结构;流式细胞仪分析显示细胞高表达HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原和共刺激分子CD80、CD86;同种混合淋巴细胞反应显示细胞具有高效的刺激静止T淋巴细胞活化增殖的能力。结论 用血细胞分离机分离动员外周造血祖细胞体外定向诱导制备树突状细胞可以作为制备肿瘤疫苗的新途径。     

体外诱导细胞转化为胰岛细胞的研究进展

巢素蛋白（nestin）阳性细胞、成体干细胞（包括间充质干细胞和胰腺导管上皮细胞）和胚胎干细胞是常用的体外诱导转化为胰岛细胞的种子细胞,本文就这三类细胞的来源、实验方法及实验结果的研究进展进行综述。     

Expansive effects of aorta-gonad-mesonephros-derived stromal cells on hematopoietic stem cells from embryonic stem cells

Background Hematopoietic stem cells (HSCs) give rise to all blood and immune cells and are used in clinical transplantation protocols to treat a wide variety of refractory diseases, but the amplification of HSCs has been difficult to achieve in vitro. In the present study, the expansive effects of aorta-gonad-mesonephros (AGM) region derived stromal cells on HSCs were explored, attempting to improve the efficiency of HSC transplantation in clinical practice.Methods The murine stromal cells were isolated from the AGM region of 12 days postcoitum (dpc) murine embryos and bone marrow（BM）of 6 weeks old mice, respectively. After identification with flow cytometry and immunocytochemistry, the stromal cells were co-cultured with ESCs-derived, cytokines-induced HSCs. The maintenance and expansion of ESCs-derived HSCs were evaluated by detecting the population of CD34+ and CD34+Sca-1+cells with flow cytometry and the blast colony-forming cells (BL-CFCs), high proliferative potential colony-forming cells (HPP-CFCs) by using semi-solid medium colonial culture. Finally, the homing and hematopoietic reconstruction abilities of HSCs were evaluated using a murine model of HSC transplantation in vivo.Results AGM and BM-derived stromal cells were morphologically and phenotypically similar, and had the features of stromal cells. When co-cultured with AGM or BM stromal cells, more primitive progenitor cells (HPP-CFCs ) could be detected in ESCs derived hematopoietic precursor cells, but BL-CFC’s expansion could be detected only when co-cultured with AGM-derived stromal cells. The population of CD34+ hematopoietic stem/progenitor cells were expanded 3 times,but no significant expansion in the population of CD34+Sca-1+ cells was noted when co-cultured with BM stromal cells. While both CD34+ hematopoietic stem/progenitor cells and CD34+Sca-1+ cells were expanded 4 to 5 times respectively when co-cultured with AGM stromal cells. AGM region-derived stromal cells, like BM-derived stromal cells, could promote hematopoietic reconstruction and HSCs’ homing to BM in vivo.Conclusions AGM-derived stromal cells in comparison with the BM-derived stromal cells could not only support the expansion of HSCs but also maintain the self-renewal and multi-lineage differentiation more effectively. They are promising in HSC transplantation. Chin Med J 2005; 118(23):1979-1986     

外源性褪黑激素对小鼠生精细胞凋亡的影响

目的 观察褪黑激素对生精细胞凋亡的影响。方法 HE染色、TUNEL测定(核快红复染)。结果 HE染色下睾丸间质细胞的面积随褪黑激素的增多而减小，与睾酮的浓度变化相一致。TUNEL阳性细胞随褪黑激素的增加有增多的趋势，但超过一定量后(100ug)，不再增多。20～30d的处理组呈现与30～40d的处理组不同的结果。结论 外源性褪黑激素具有促进生精细胞凋亡的作用。这种作用与其对睾酮的抑制作用不相一致。     

大鼠肝星状细胞的分离培养鉴定

目的改良分离培养大鼠肝星状细胞的简便方法。方法经过门静脉插管、推注肝素稀释液、肝脏灌流、胶原酶离体循环消化、过滤、离心分离等步骤,分离肝星状细胞,省去了链霉蛋白酶E消化过程,采用台盼蓝染色排斥法鉴定细胞活率,desmin免疫细胞化学染色法鉴定HSCs纯度。结果每只鼠肝HSCs的得率为0.5~1.0×107,纯度为(92.2±2.0)%,活率为(97.8±0.3)%,数量及活率均符合实验要求。结论该方法简便、廉价、实用,值得进一步探索。     

Mechanism of in Vitro Differentiation of Bone Marrow Stromal Cells into Neuron-like Cells

Marrowstromalcells (MSCs)arethenon hematopoieticprecursorsinthebonemarrowstromaofadultmammal.Underspecificexperimentalcondi tions,itcandifferentiateintoneuron[1] .Thephe nomenonhasgivenresearchersagreatsurprise .Andnow ,thehotspotistofinditstrueevidence ,…     

肝癌干细胞的研究进展

肿瘤干细胞(CSC)假说是近年来提出的关于肿瘤发生的新理论,该学说认为不是所有的细胞都能突变发育成肿瘤,只有一部分特殊的细胞能够发育成肿瘤,并维持肿瘤的生物学特性。过去几年内研究者已经证明包括肝癌在内的许多CSCs的存在,并分别针对肝癌干细胞与肝癌的关系、肝癌干细胞的生物学特性和鉴定标志等问题展开讨论,总结了一些治疗措施。现对CSCs及肝癌干细胞的研究进展予以综述。     

体外培养人骨髓间充质干细胞的生物学特性

目的体外分离培养人骨髓间充质干细胞(MSCs)并研究其一般的生物学特性.方法通过密度梯度离心法分离MSCs、体外培养传代细胞计数、流式细胞仪检测细胞增殖周期、表面分子测定以及细胞化学染色了解人MSCs一般的特点.结果人MSCs经过体外培养均一地表达CD29、CD44、CD166,而CD34、CD45阴性.细胞化学结果显示,细胞糖原(PAS)强阳性,脂肪(SB)为阴性,5%～10%细胞碱性磷酸酶(ALP)阳性.细胞周期分析表明:G0/G1、S和G2/M所占比例分别为83.11%、5.17%和11.72%.分离细胞在成骨诱导体系下进一步向成骨细胞分化.结论密度梯度离心法能够分离纯化MSCs有其特殊的生物学特点,能够向成骨细胞分化.