细胞质膜及其蛋白质复合物分离与定性方法研究

目的:探讨细胞质膜及其蛋白质复合物分离与定性的方法?方法:结合差速离心法?密度梯度离心法?双水相法分离得到细胞质膜,并利用透射电镜和Western blot等实验手段验证分离所得细胞质膜的纯度?结果:本文采用了蓝绿温和凝胶电泳法对细胞质膜上的蛋白质复合物进行一维分离,得到23种蛋白质复合物;接着对23种蛋白质复合物进行第二相垂直电泳分离,分离出135种蛋白质;最后鉴定78种是质膜相关蛋白,其余57种来源内膜系统?结论:多种提纯方法的联用可以有效提高蛋白分离率与分离纯度,高纯度的质膜对质膜蛋白质组的研究具有重要意义?     

水蛭的抗早孕有效成分研究(Ⅰ)

目的：探索水蛭抗早孕有效成分。方法：通过有机溶剂沉淀方法初步对水蛭水煎剂不同成分进行分离，经蛋白质定性实验、IR和薄层色谱鉴别，并对分离出的各成分进行小鼠抗早孕实验。结果：分离得到的成分（Ⅱ）是一种活性蛋白质，有抗早孕性。结论：水蛭中的抗早孕有效成分是一种蛋白质。     

蛋白质组学研究的分离技术及其进展

蛋白质的分离技术是蛋白质组学研究的核心技术，目前应用于蛋白质分离的方法主要包括二维电泳分离技术、液相色谱．质谱分离技术以及蛋白质芯片。作者通过文献复习，对以上三种技术的基本原理、方法及其进展进行综述。     

大鼠肝脏溶酶体中新的铜结合蛋白的分离和纯化

目的:分离大鼠肝脏溶酶体中铜结合蛋白质,并分析其氨基酸序列.方法:G25液相层析,铜结合层析,高效液相色谱,氨基酸序列测定.结果:G25和铜结合液相层析得到溶酶体中蛋白质成分.SDS-PAGE电泳分析铜结合蛋白质,得到两条主要蚕白带,这些蛋白质的分子量分别为58 kDa,40 kDa.两种主要蛋白质的氨基酸序列测定Band1(分子量58 kDa):A F Q I L Y L T H N L.同源性分析表明蛋白质与哺乳动物蛋白质无同源性.结论:从大鼠肝脏溶酶体中分离纯化得到的蛋白质是一种新的蛋白质.     

甲酸-异丙醇体系中甲酸在分离蛋白质时的作用

甲酸-异丙醇体系在反相高效液相色谱的流动相中为一洗脱能力较强的体系,它已成功地用在蛋白质的分离中。我们在此体系中利用7种蛋白质对甲酸的作用进行了观察。1 甲酸具有离子对试剂的作用可增加蛋白质的溶解度 试验中当甲酸的浓度为5％时,几种蛋白在此体系中不溶解,在进行梯度分离时,观察到又低又     

氨基酸纸上层析实验的改进

纸上层析是一种分离，纯化和鉴定有机化合物的方法之一。它广泛应于氨基酸、蛋白质、染料、色表和中草药等特质和分离和     

尖吻蝮蛇毒素组双向电泳和二维液相色谱研究

目的：初步研究尖吻蝮蛇蛇毒的蛋白质组分及其活性。方法：利用双向电泳和二维色谱（IEX＋HPLC）分析尖吻蝮蛇蛇毒蛋白质组，并制备分离样品研究蛇毒中酶和毒素活性。结果：双向电泳分离检测得到128种蛋白质，其中24种蛋白质丰度较高，73种为酸性蛋白质，加种为碱性蛋白质。二维色谱展现58种蛋白质，其中26种蛋白质丰度较高。初步活性研究表明，尖吻蝮蛇蛇毒蛋白质多数属于丝氨酸蛋白酶、金属蛋白酶和磷脂酶A2家族，部分蛋白质可能属于去整合素家族。结论：双向电泳和二维色谱相互结合．有效分析了尖吻蝮蛇毒的蛋白盾组成和生物活性．     

电泳在蛋白质分离及定量分析中的应用

蛋白质可以视为是自然界中最重要的几种生物大分子之一,在人体中的各个方面,比如支撑、催化、运输、免疫等都发挥着重要的作用,因此对于蛋白质分离与分析的研究在科研领域占据着独特的位置。本文主要介绍几种常用的用以分离分析蛋白质的电泳方法及其相关应用,并对其优缺点做相应的比较。     

两种分离人血清蛋白质电泳技术的比较研究

目的比较双向电泳和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分离人血清中蛋白质的效果。方法双向电泳直接分离人血清中的蛋白质；采用改进后的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离去除白蛋白的人血清样品。结果双向电泳图谱显示，样品在分子量为10k-20kDa可以分离出较清晰的蛋白质点，但在8000Da以下没有分离出清晰的蛋白质点，且在20kDa以上的蛋白质点，凝胶背景模糊不清。而采用改进后的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱显示，可有效分离10kDa以下的小分子蛋白质。结论两种电泳技术各有所长，需根据目的蛋白的特点选择适合的方法。     

急性淋巴细胞白血病白细胞磷酸化蛋白质分析方法的建立

目的:建立一种对急性淋巴细胞白血病白细胞磷酸化蛋白质分析方法.方法:分离人新鲜外周血白细胞,并随机分为刺激组和对照组.裂解细胞,用Bradford法测定细胞蛋白质含量,利用亲和层析富集白细胞磷酸化蛋白质,SDS-PAGE分离磷酸化蛋白质,采用Scion Image软件分析电泳结果.结果:①电泳图谱显示每条泳道中蛋白质条带清晰,其相对分子量主要介于26～36kDa以及47～65kDa之间.②EGF刺激后出现有磷酸化蛋白质条带的增减或某些磷酸化蛋白质条带灰度的增强或减弱.结论:采用本研究建立的分析磷酸化蛋白质的方法对急性淋巴细胞白血病白细胞GRK相关磷酸化蛋白质进行动态的分析,其方法较简便、结果可信,可为细胞信息传递磷酸化蛋白质组的研究奠定了基础.     

聚丙烯酰胺凝胶电泳中一种快速敏感的蛋白质双染色法

本文报道了我们在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)中改良了一种考马斯亮兰(Coomassic Brillant Blue,CBB)与铬银染色法相结合的新的蛋白质双染色法。这种方法比单一的CBB染色或单一的银染色敏感,比CBB与氨银双染法简便,一般实验室也能采用本法。     

蛋白质组学技术用于功能性胃肠病研究

目的:探讨将蛋白质组学方法用于功能性胃肠病发病机制研究的可行性。方法:选择发病率较高的肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)亚型患者作为研究对象,运用蛋白质组学方法,双向凝胶电泳后应用不同染色方法进行染色,Image Master 2D Elite分析软件对图像进行分析。结果:考马斯亮蓝法染色用于腹泻型IBS患者,平均得到蛋白质点426个;硝酸银染色法用于便秘型IBS患者,平均得到蛋白点581个。结论:双向凝胶电泳法可得到IBS患者结肠黏膜组织的蛋白质组图谱;硝酸银染色法的分辨率明显高于考马斯亮蓝法。     

日本血吸虫成虫31/32KD抗原的纯化及其免疫化学特性

本文采用超凝胶柱层析法分离纯化日本血吸虫成虫31/32KD抗原。分离的抗原经银染色及免疫印迹法分析证明已达免疫纯及生化纯级。该抗原PAS染色呈阴性,经过碘酸钠处理后不失去活性,在琼脂糖凝胶电泳中趋向阳极。鉴于血吸虫成虫31/32KD组分是一种主要血清学抗原,它的分离纯化为改进和标化血吸虫病的诊断提供了条件。     

银染mRNA差异显示方法的建立和吗啡诱导基因的克隆

目的：建立非同位素银染ｍＲＮＡ差异显示方法，分离吗啡相关基因。方法：以吗啡处理的ＳＨＳＹ５Ｙ细胞中提取的总ＲＮＡ为模板，用５’ｄＴ１２ＭＧ锚定引物和两条随机引物组合进行ＤＤＲＴＰＣＲ扩增。经测序凝胶电泳分离后，用银染方法显示差异ＤＮＡ条带，在直视下从凝胶中回收差异条带并进行再扩增，扩增产物克隆入ｐＧＥＭＴ载体。结果：建立了非同位素的银染ｍＲＮＡ差异显示方法，分离和克隆了一些吗啡诱导的差异表达基因。结论：建立的非同位素银染差异显示方法是简单快捷和高效的分离差异表达基因的方法     

人肌红蛋白的微观不均一性

<正> 关于人肌红蛋白(Mb)的微观不均一性,文献上有不少报导;但因提纯与分析的方法各有不同,所以结果颇有出入。提纯后的人Mb究竟表现为几种形式,目前似乎尚无定论。本实验对此做了初步探讨,证明了经盐析、层析和等电聚焦电泳提纯的人Mb可以表现为五种形式,这五种形式并且可以相互转化。     

结肠癌组织蛋白质组成分的双向凝胶电泳分析

目的 分析结肠癌病人癌组织、癌旁组织及正常结肠黏膜组织双向凝胶电泳的蛋白质表达图谱,寻找差异表达的蛋白质.方法 采用固相pH梯度双向凝胶电泳分离结肠癌病人配对癌组织、癌旁组织及正常结肠黏膜组织的总蛋白,银染显色,PDQuest 2DE软件分析差异表达的蛋白质点.结果 获得了重复性较好的双向凝胶电泳银染图谱.图像分析显示,3组胶的平均匹配率分别为:癌组织87.3%、癌旁组织80.3%、正常结肠黏膜组织84.0%.等电聚焦方向上的平均偏差为(1.16±0.29)mm,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方向上的平均偏差为(1.00±0.38)mm.差异分析共获得164个差异表达的蛋白质点.结论 双向凝胶电泳分离结肠癌组织的总蛋白可获得重复性较好的结果.获得的差异蛋白质点为寻找结肠癌早期诊断的分子标记物提供了理论依据.     

细胞型DNA特异结合蛋白的快速分离

本文建立了一个改良的凝胶洗脱法,用以分离细胞型DNA特异结合蛋白质。采用小型平板SDS凝胶电泳分离和银染鉴定,用硝酸纤维素滤膜结合法和迁移率改变法检测DNA活性。此法具有快速、经济和保留DNA活性等优点,适用于分离纯化象细胞型DNA特异结合这样含量极微的蛋白质。     

肺癌组织蛋白质组双向凝胶电泳方法的建立和优化

目的建立和优化肺癌组织蛋白质组双向凝胶电泳(2-DE)技术,获取高分辨率、重复性好的蛋白质2-DE图谱。方法提取肺癌组织蛋白,以固相pH梯度胶条做第一向等电聚焦电泳,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)为第二向,在上述过程中分别对蛋白提取、等电聚焦电泳和凝胶染色进行控制和优化,利用ImageMaster 2Dplatinum 6.0分析软件获得二维凝胶图像。结果实验重复3次,共获15幅二维凝胶图像,平均蛋白质点数为1 137±57;随机选取1例标本的2幅图像,利用软件对2幅图像中蛋白点进行匹配,匹配率为90.4%。结论优化肺癌组织蛋白质组2-DE技术可获得高分辨率、重复性好的蛋白质2-DE图谱,为开展肺癌组织蛋白质组学研究打下基础。     

p53抑癌基因蛋白过表达在肉瘤发生中作用的研究

目的 探讨不同类型人肉瘤中p53抑癌基因蛋白的表达。方法 对44例不同类型肉瘤石蜡组织中p53蛋白的表达进行研究,同时以免疫组化染色作对照。结果 44例不同类型肉瘤中21例显示p53蛋白表达阳性,表达率为48％,其中平滑肌肉瘤（67％）、骨肉瘤（50％）和滑膜肉瘤（47％）中表达率较高,而良性肿瘤（除1例局部细胞生长活跃区呈现阳性外）常呈阴性染色。原位免疫PCR染色阳性率高于免疫组化染色结果,染色强度前者也明显高与后者。结论：p53在人自发性肉瘤中有较高的突变率,提示可能参与人肉瘤的发生。原位免疫PCR显示了较好的定位性、敏感性和重复性。     

重症肌无力胸腺组织蛋白质组双向电泳方法的建立

目的:建立和优化重症肌无力(MG)胸腺组织蛋白质组双向电泳技术方法.方法:提取MG患者(n=3)增生型胸腺组织蛋白,以固相pH梯度胶条做第一向等电聚焦电泳,SDS聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳为第二向.在以上过程中分别对蛋白提取、等电聚焦程序(A、B、C、D)和凝胶染色方法等各个实验环节进行控制和优化,利用PDQuest 7.1.1软件分析获得的二维凝胶图像.结果:①采用一步法提取胸腺组织蛋白质,第一向等电聚焦采用7cm IPG胶条,聚焦程序选择B,硝酸银染色.3例标本重复4次,共获12幅二维凝胶图像.随机选取1例标本的2幅图像,利用软件对2幅中的蛋白点进行匹配,匹配率为82.1%;3份样品共12幅凝胶图像的对比,获得3个共同存在的标志蛋白点,相对分子质量和等电点分别为:A点(82 700,7.0)、B点(50 700,5.76)和C点(33 300,5.02).②进一步优化上述实验条件,选择1例标本,采用两步法提取胸腺组织蛋白质,选用17 cm IPG胶条,聚焦采用程序D,考马斯亮蓝染色,获得的二维凝胶图像与一步法(其他条件相同)比较.一步法可检测到蛋白质点326个,两步法可检测到562个蛋白点.结论:①建立了MG胸腺组织蛋白质组提取的方法.采用两步法可以更有效地提取胸腺组织蛋白质组.②利用优化后的实验方法,获得了MG胸腺组织蛋白二维凝胶图像,为开展MG胸腺组织蛋白质组学研究打下了基础.