用蛋白质组学技术探讨补肾生精法对老龄大鼠睾丸生精功能影响的机制

目的：应用蛋白质组学技术研究补肾生精法对老龄大鼠睾丸生精功能影响的机制。方法：20只22月龄老龄雄性SD大鼠随机分为2组,每组10只,分别为老龄组（SC）和补’肾生精组（KT）。KT组灌胃给药补肾生精颗粒,连续用药60d。取附睾尾精子应用精子运动CASA分析技术,研究补肾生精法对衰老大鼠精子运动能力的影响。应用流式细胞仪检测技术,观察补肾生精颗粒对老龄大鼠睾丸生殖细胞凋亡率的影响。取大鼠右侧睾丸,应用双向凝胶电泳分析老龄组和补肾生精组大鼠睾丸表达差异蛋白。结果：与老龄组相比,补肾生精组大鼠精子密度明显增加（P〈0．05）;活动率和直线活动率显著上升（P〈0．001）;补肾生精组生殖细胞凋亡率明显下降（P〈0．05）。与老龄组相比,补肾生精组大鼠睾丸中有7种蛋白表达发生了显著变化,其中4种蛋白表达上调,3种下调。对7种差异表达蛋白点胶内酶切后进行质谱分析,其中5种蛋白分别鉴定为磷脂酰乙醇胺结合蛋白（PEBP）,热休克蛋白8（HSP7C）,磷酸丙糖异构酶（Triose-phosphate isomerase,TPIS）,3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）,谷胱苷肽转移酶1（GSTM1-1）。结论：补肾生精法对老龄大鼠睾丸功能具有提高精子运动能力及减少其生殖细胞凋亡的作用。运用蛋白质组学技术,研究补肾生精法对衰老过程睾丸蛋白表达的影响,有助于在蛋白质组水平阐释中医肾主生殖,延缓睾丸衰老,改善睾丸生精功能的机制。     

补肾生精丸对生精细胞损伤模型大鼠精子动态参数的影响

目的研究补肾生精丸对生精细胞损伤大鼠精子运动能力的影响。方法SD雄性大鼠40只,随机分为5组:正常组、模型组、补肾生精丸大剂量组(480mg/kg)、补肾生精丸小剂量组(100mg/kg)、阳性对照组(五子衍宗丸480mg/kg),每组8只。采用腺嘌呤(250mg/kg)灌胃,诱发生精细胞损伤大鼠模型,通过计算机辅助精子分析系统(CASA)观察补肾生精丸对精子运动速度和运动方式的影响。结果各实验组可显著改善精子密度、活力、活率及动态参数曲线运动速度(VCL)、直线运动速度(VSL)、平均路径速度(VAP);大剂量组与阳性对照组疗效相似但优于小剂量组;平均移动角度(MAD)、精子头侧摆幅度(ALH)、摆动性(WOB)、各组均无显著差异。结论补肾生精丸具有改善精子密度、活力、活率及动态参数的作用。     

平肝潜阳法对高血压模型大鼠下丘脑蛋白质表达的影响

[目的]观察平肝潜阳法对高血压肝阳上亢证模型大鼠下丘脑蛋白质表达差异的影响,从蛋白质组学水平探讨其降血压和改善肝阳上亢证症状的分子机制.[方法]选用自发性高血压大鼠(SHR)灌服附子汤法复制高血压肝阳上亢证大鼠模型,以SD大鼠作正常对照,治疗组给予天麻钩藤饮加减方灌胃给药(0.1g/mL);采用二维凝胶电泳(2-DE)分离大鼠下丘脑蛋白质,获得差异表达蛋白质;利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和数据库分析鉴定差异表达蛋白质.[结果]高血压肝阳上亢证大鼠模型复制成功,其易激惹程度、饮水量、收缩压等与正常组比较,差异均有显著性意义(P＜0.01);治疗组给予中药天麻钩藤饮加减方治疗后,易激惹程度好转,饮水量减少,收缩压下降,与模型组比较差异均有显著性意义(P＜0.01).肝阳上亢模型组蛋白质图谱中有5个蛋白质斑点,与正常组比较表达上升2倍及以上,且同一点在平肝潜阳法治疗组中表达下降2倍及以上;有10个蛋白质斑点表达下降2倍及以上,且同一点在平肝潜阳法治疗组中表达上升2倍及以上.[结论]平肝潜阳法治疗高血压肝阳上亢证的作用可能与下丘脑某些蛋白质的改变有关.     

补肾益气生精中药对去卵巢大鼠骨质疏松发生机制的调节作用

目的研究补肾益气生精中药对去卵巢(OVX)大鼠骨组织中信号转导分子Smad2的表达,以及在骨质疏松症发病中的作用机制。方法用去卵巢的方法建立绝经后骨质疏松症模型,给予补肾益气生精中药防治12周,以尼尔雌醇为阳性对照,用双能-X线骨密度仪检测大鼠离体股骨骨密度,用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、W estern blot方法分别检测Smad2的mRNA、蛋白表达。结果卵巢切除大鼠离体股骨骨密度显著下降,骨组织中Smad2的蛋白及mRNA表达水平均下降。补肾益气生精中药能够提高去卵巢大鼠的骨密度,并且可以从蛋白及mRNA水平提高骨组织中Smad2的表达。结论骨组织中信号转导分子Smad2表达水平的下调可能是原发性骨质疏松症发生的重要机制,补肾益气生精中药通过上调Smad2的表达而有效改善骨密度。     

补肾益智方对老年性痴呆大鼠学习记忆能力保护作用的观察

为寻求防治老年性痴呆的有效措施 ,运用Morris水迷宫评价了中药补肾益智方 (由蛇床子、枸杞子、女贞子、人参等组成 )对由D_半乳糖致亚急性衰老加上Meynert核损毁所致阿尔茨海默病模型大鼠的学习记忆能力的保护作用。结果表明 :补肾益智方能够改善模型大鼠的学习记忆成绩 ,包括缩短模型大鼠在Morris水迷宫中寻找到平台的逃避潜伏期 (P <0 .0 1) ,延长其在原平台象限游泳的距离 (P <0 .0 5)。提示补肾益智方对阿尔茨海默病模型大鼠的学习记忆能力有一定的保护作用     

补肾法对肾虚大鼠空间学习记忆能力的影响

【目的】探讨补肾法对房室不节肾虚大鼠空间学习记忆能力及海马DG区细胞超微结构的影响。【方法】将连续配种6个月经鉴定生殖功能下降的SD大鼠随机分为肾虚模型组,六味地黄丸低、高剂量组(剂量分别为4.8、9.6 g·kg-1·d-1)和金匮肾气丸低、高剂量组(剂量分别为5.2、10.4 g·kg-1·d-1),并以2月龄大鼠作为正常对照组。连续给药30 d后,进行Morris水迷宫实验,采用透射电镜观察海马DG区细胞超微结构。【结果】Morris水迷宫定位航行实验结果显示:与正常对照组比较,肾虚模型组逃避潜伏期显著延长(P<0.01);与肾虚模型组比较,各给药组潜伏期显著缩短(P<0.05或P<0.01)。空间探索实验结果显示:与正常对照组比较,肾虚模型组原平台所在象限停留时间和平台周边区域一停留时间均显著减少(P<0.01);与肾虚模型比较,金匮肾气丸高剂量组2项停留时间均显著增加(P<0.05或P<0.01),六味地黄丸低剂量组平台周边区域一停留时间显著增加(P<0.05)。电镜观察结果显示:与肾虚模型组比较,六味地黄丸高剂量组和金匮肾气丸高剂量组可减轻大鼠海马DG区细胞超微结构病变。【结论】(1)长期房室不节可引起海马DG区细胞超微结构病变,导致空间学习记忆障碍。(2)补肾法可减轻房室不节对大鼠空间学习记忆能力的损伤及海马DG区细胞超微结构病变。(3)补肾方药在改善肾虚大鼠空间学习能力及细胞超微结构病变方面无显著性差异,金匮肾气丸改善房室不节肾虚大鼠的空间记忆能力的作用优于六味地黄丸。     

输精管结扎对大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

为探讨输精管结扎对睾丸曲精管生精细胞凋亡程度的影响，应用流式细胞仪和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记技术，检测大鼠输精管结扎和假手术后２－１２周睾丸生精细胞的凋亡情况。     

补肾生精法治疗男性不育少精症146例临床疗效分析

目的:观察补肾生精法治疗男性不育少精症的临床疗效。方法:146例男性不育少精症患者随机分为两组:中药治疗组82例(口服补肾生精法中药复方)和西药组64例(口服克罗米芬片),两组均连续治疗6个月,进行精液常规及血清睾酮(T)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)检测,性激素采用化学发光酶免疫法。观察两组患者的临床疗效及女方妊娠率;比较两组治疗前后各组患者精子数量和质量、T、LH、FSH水平变化。结果:中药治疗组总有效率和女方妊娠率分别为93.9%和45.2%,均明显优于西药组(85.9%和34.6%)(P<0.01);两组治疗前后精子数量和质量、性激素变化有显著差异性(P<0.01),但两组治疗后性激素变化无差异性(P>0.05)。结论:补肾生精法能明显改善男性不育少精症患者的精子质量和提高女方妊娠率,其机制可能与调节体内性激素水平相关。     

补肾益智方对阿尔茨海默病大鼠模型脑内胆碱能神经系统的保护作用

为探讨自制方补肾益智方 (由蛇床子、枸杞子、女贞子、人参、制首乌等组成 )治疗阿尔茨海默病(Alzheimerdisease ,AD)的可能神经生物学机制 ,应用乙酰胆碱酯酶组织化学染色方法 ,研究了该方对D -半乳糖合并鹅膏蕈氨酸损毁大脑Meynert基底核的实验性阿尔茨海默病大鼠模型脑内胆碱能神经系统的保护作用 ,结果显示 :补肾益智方灌胃组大鼠脑内广泛区域的乙酰胆碱酯酶阳性神经纤维密度较模型对照组增加 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ,提示该方对AD模型脑内胆碱能神经元具有一定的保护作用。     

龟龄集胶囊对少精症模型大鼠的生精作用及对性激素的影响

[目的]观察龟龄集胶囊对棉子油所致少精症模型大鼠的生精作用及其对性激素水平的影响.[方法]以灌服棉子油法复制少精症大鼠模型,以五子衍宗丸(剂量为1 g·kg-1·d-1)为对照,观察龟龄集(剂量为54 mg·kg-1·d-1)对少精症模型大鼠的精子数量和密度的影响,采用放射免疫法测定血清性激素睾酮(T)、促黄体生成激素...     

疏肝活血法对下肢缺血模型大鼠血管内皮祖细胞的影响

[目的]观察疏肝活血法时下肢缺血模型大鼠外周血管内皮祖细胞(EPC)的影响.[方法]将50只SD大鼠随机分为3组:中药组20只,模型组20只,假手术组10只.中药组和模型组均采用右下肢股动脉结扎及分支剔除术复制大鼠下肢缺血模型,假手术组仅暴露股动脉但不结扎股动脉及其分支.中药组术后按0.5 g·kg-1·d-1剂量灌服柴胡疏肝散合大黄座虫丸煎剂,连续7 d.检测各组术前1 d、术后第1、3、7天4个时间点大鼠外周血酶学指标肌酸激酶(CK)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)水平变化及双荧光阳性细胞[CD34+、血管内皮生长因子受体(VEGFR2+)]比例.[结果]术后模型组外周血酶学指标AST、CK、LDH、HBDH水平较假手术组均显著上升,术后第3、7天中药组各项酶学指标水平较模型组及术后第1天均显著下降(P<0.05).术后中药组和模型组反映EPC变化的CD34+、VEGFR2+双荧光阳性细胞比例较假手术组均显著升高(P<0.05),且中药组升高较模型组更为显著(P<0.05或P<0.01).[结论]疏肝活血法可有效地改善下肢缺血状态,其作用可能与其能增加外周血EPC数量有关.     

涤痰化瘀法对高血压左心室肥厚模型大鼠心肌细胞凋亡的影响

[目的]观察涤痰化瘀法对高血压左心室肥厚模型大鼠心肌细胞凋亡的影响.[方法]选用sPF级sD大鼠62只,随机分为5组:正常对照组,假手术组,模型组,中药低、高剂量组(分别按8.5、19.0 g·kg-1·d-1剂量灌服涤痰化瘀方煎液);后3组均采用二肾二夹法复制高血压模型,手术35 d后各组按设计剂量连续给药60 d;观察各组血压、左室质量及全心质量,检测各组大鼠左心室质量指数(wLV),观察各组大鼠心肌病理形态变化,并采用流式细胞术检测各组心肌细胞凋亡率.[结果]中药低、高剂量组虽可降低血压、左室质量及全心质量,但与模型组比较无显著性差异(P＞0.05);两中药组均可显著性降低左心室质量指数和心肌细胞凋亡率(P＜0.05或P＜0.01),改善心肌组织的病理变化,防止心肌坏死和纤维化.[结论]涤痰化瘀法对高血压的治疗作用可能与其能减少心肌细胞凋亡,逆转左心室重构,减少心肌坏死及纤维化有关.     

通络生骨胶囊对激素性股骨头坏死大鼠骨钙素、降钙素与骨密度的影响

【目的】观察中药通络生骨胶囊对实验性激素性股骨头坏死模型大鼠血清骨钙素(BGP)、降钙素(CT)水平及骨密度的影响。【方法】SD大鼠30只,随机分成3组,即空白对照组、模型组和通络生骨胶囊组(中药组);模型组及中药组均肌注醋酸强的松龙24.5 mg/kg复制模型,每周2次;中药组造模同时以6.3 g.kg-1.d-1通络生骨胶囊混悬液灌胃;空白对照组肌注等容积生理盐水,每周2次。8周后取血,采用放射免疫法检测各组大鼠血清中BGP、CT水平,采用双能X线骨密度仪检测股骨的骨密度。【结果】模型组血清BGP、CT水平及骨密度均显著性降低(P<0.01);中药通络生骨胶囊可升高血清BGP、CT水平及骨密度,与模型组比较具有显著性差异(P<0.01)。【结论】通络生骨胶囊对股骨头坏死的治疗作用可能与其促进骨钙素、降钙素合成,改善骨密度有关。     

藻降糖片对链脲霉素性糖尿病大鼠的糖代谢及肾脏病变的影响

[目的]观察藻降糖片对链脲霉素(STZ)性糖尿病大鼠的糖代谢及肾脏病变的影响.[方法]SD大鼠60只,随机分为6组,除正常对照组外,其他大鼠均腹腔注射STZ复制糖尿病模型,检测空腹血糖确认模型成功后,藻降糖片低、中、高剂量组分别给予藻降糖片0.25、0.5、1.0 g·kg-1·d-1;优降糖组给予优降糖0.01 g·k-1·d-1;正常组和模型组均给予等容量生理盐水灌胃,连续60d.末次给药后检测各组大鼠糖耐量、胰岛素释放、肝糖元及肾组织病理学变化.[结果]藻降糖片中、高剂量组均可改善糖尿病大鼠的空腹血糖(与模型组比较P<0.05或P<0.01,与优降糖组比较P>0.05),但在改善糖耐量方面作用不明显(与模型组比较P>0.05);在增加肝糖元合成和促进血清胰岛素释放方面作用与优降糖相仿(与模型组比较均P<0.05或P<0.01);肾组织病理检查显示,藻降糖片组和优降糖组均有抑制肾小球增大和基底膜样物质沉积的作用.[结论]藻降糖片可在一定程度上改善实验性糖尿病大鼠的糖代谢,并减轻糖尿病所致的肾脏损害.     

益气活血解毒法对溃疡性结肠炎模型大鼠血浆及结肠组织P-选择素的影响

[目的]观察益气活血解毒法对溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠血浆及结肠组织P-选择素表达的影响.[方法]选用SD大鼠,随机分为4组,即正常组、模型组、中药组(灌胃20 g·kg-1·d-1剂量的溃结复发方)、西药组(灌胃0.266g·kg-1·d-1剂量的畅美混悬液);分别于给药后10、30 d和停药后10 d取材,采用酶联免疫吸附法检测各组血浆P-选择素含量,免疫组化法检测结肠组织P-选择素的表达.[结果]模型组各时间段血浆P-选择素含量显著升高(均P<0.05或P<0.01),中药组各时间段血浆P-选择素含量显著低于模型组(均P<0.05或P<0.01),西药组治疗10 d及治疗30 d时血浆P-选择素含量显著低于模型组(P<0.05或P<0.01);模型组各时间段结肠组织P-选择素表达显著高于正常组(均P<0.01),中药组治疗30 d及停药后10 d结肠组织P.选择素表达显著降低(均P<0.01),且停药后10 d作用优于西药组(P<0.05);西药组治疗10 d及治疗30 d结肠组织P-选择素表达显著降低(均P<0.01),且治疗10 d时作用优于中药组(P<0.01).[结论]益气活血解毒法抗UC复发的作用可能与其能有效降低模型大鼠的血浆及结肠组织P-选择素水平,阻抑血小板活化有关.     

保心康对心力衰竭大鼠心肌细胞Bax、Bcl-2蛋白表达的调节作用

[目的]观察保心康对腹主动脉缩窄致心力衰竭模型大鼠左心室肌细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的调节作用,并进行性别相关性分析。[方法]普通级SD大鼠32只,随机分为保心康组、模型组和假手术组,复制腹主动脉缩窄致心力衰竭模型,采用流式细胞仪进行胞内抗原定量检测Bax和Bcl-2蛋白表达率。[结果]模型组大鼠与假手术组相比,心脏和左心室质量及心脏质量指数均增加(P<0.05或P<0.01),Bax蛋白表达率未改变,Bcl-2表达率降低(P<0.05),故Bax蛋白表达率和Bcl-2蛋白表达率的比值(rBax/rBcl-2)高于假手术组(P<0.01),而保心康组上述指标与假手术组比较无显著性差异(P>0.05),但与模型组比较,则差异具有显著性意义(P<0.05或P<0.01),显示保心康对模型组的病理状况有改善作用,并使之基本恢复正常;其中3个组的雄性大鼠心脏和左心室质量及心脏质量指数均比雌性大鼠升高(P<0.05或P<0.01)。且Bcl-2蛋白表达率均比雌性大鼠低(P<0.05),但rBax/rBcl-2雌雄相仿(P>0.05)。[结论]保心康具有预防压力超负荷大鼠左心室肥厚的作用,可上调左心室心肌细胞Bcl-2的表达,下调Bax的表达,同时降低rBax/rBcl-2,从而抑制心肌细胞的凋亡;雌性大鼠与雄性相比,可能对压力超负荷具有更强的代偿能力;但保心康对雄性大鼠的保护作用可达到对雌性大鼠同样的水平。     

宁痫冲剂对戊四唑致痫大鼠脑源性神经营养因子蛋白表达的影响

[目的]探讨以升清降浊法组成的中药复方宁痫冲剂的抗痫作用机理。[方法]SD大鼠40只,随机分为5组:即正常组,模型组,宁痫冲剂高、低剂量组(10g/kg和5g/kg)及苯巴比妥组(60 mg/kg);除正常组外,其他4组均以戊四唑(PTZ)亚惊厥剂量35mg/kg诱导慢性癫痫模型,造模同时各组按设定剂量分别给药,1次/d,连续4周;动物处死后以免疫组织化学方法,观察宁痫冲剂对大脑额叶皮质、海马CA3区脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达的影响。[结果]模型组大鼠脑内海马、皮质区免疫标记阳性神经元数目均增多(P<0.05或P<0.01),标记强度增强;宁痫冲剂低剂量组能减少免疫阳性神经元数目(P<0.05或P<0.01),减弱免疫反应性。[结论]PTZ慢性诱导癫痫反复发作可导致脑内BDNF表达增强;宁痫冲剂的抗痫作用机制可能与降低BDNF蛋白表达有关。     

益气补肾活血中药改善糖尿病大鼠牙种植骨整合的组织学研究

【目的】观察益气补肾活血中药芪鹿丹对糖尿病大鼠牙种植骨整合的组织学影响。【方法】选用SD大鼠,随机分为正常组与造模组,造模组大鼠给予链脲佐菌素(剂量45 mg/kg)一次性腹腔注射复制糖尿病大鼠模型;造模成功大鼠行胫骨内种植体植入手术,术后第8天随机分为模型组、西药组(盐酸二甲双胍,剂量为0.2 g.kg-1.d-1)、中药组(芪鹿丹,剂量为4 g.kg-1.d-1);分别于第2、8、12周检测各组大鼠的空腹血糖(FBG),并于12周末处死大鼠,观察种植体周围骨组织形态变化。【结果】给药第2、8、12周中药组与西药组均可显著降低FBG水平,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05),且中、西药2组间比较差异无统计学意义(P>0.05);中药组与西药组结合骨板的宽度,种植区成骨细胞个数、种植区骨细胞个数及非种植区骨细胞个数均显著高于模型组(P<0.05),且中药组作用优于西药组(P<0.05),可改善种植体周围骨组织形态学变化。【结论】芪鹿丹对糖尿病大鼠牙种植骨整合的组织形态学变化具有一定改善作用。     

川芎嗪对多动症大鼠神经递质的影响

【目的】观察川芎嗪对自发性高血压模型大鼠(SHR)脑组织及血清中单胺类神经递质含量的影响。【方法】将24只SHR大鼠随机分为模型对照组、川芎嗪高剂量组(剂量为40 mg.kg-1.d-1)、川芎嗪低剂量组(剂量为20 mg.kg-1.d-1)、利他林组(剂量为4 mg.kg-1.d-1);各组按设计剂量灌胃给药14 d后,分别取血清及大脑海马组织,采用高效液相法检测多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)的含量。【结果】除低剂量组对血清中NE无显著性影响外,川芎嗪高、低剂量组可显著性降低脑组织及血清中NE的含量,升高DA与5-HT的含量(P<0.05或P<0.01),且两组作用均优于利他林。【结论】川芎嗪对多动症大鼠神经递质具有一定的调节作用。     

黄芩苷对局灶性脑缺血大鼠的保护作用

【目的】观察黄芩苷对局灶性脑缺血模型大鼠的保护作用及可能的机制。【方法】将大鼠随机分为假手术组、模型组及黄芩苷组;采用线栓法复制大鼠大脑中动脉栓塞模型(MCAO),造模前、后及造模后8 h黄芩苷组分别腹腔注射给药1次(剂量为100 mg.kg-1.d-1);造模后24 h记录大鼠神经功能行为得分,并采用分光光度法测定缺血侧脑组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)和过氧化氢酶(CAT)的含量。【结果】黄芩苷能降低MCAO模型大鼠的神经功能缺损评分,升高缺血侧脑组织中SOD、GSH-Px、CAT的含量,降低MDA的含量,与模型组比较具有显著性差异(均P<0.05或P<0.01)。【结论】黄芩苷对局灶性脑缺血大鼠的神经功能具有保护作用,其机制可能与其减少氧化损伤从而保护脑组织有关。