HMGA2 and epithelial - mesenchymal transition of the relationship in pulmonary fibrosis

目的 观察HMGA2在博莱霉素(BLM)致大鼠肺纤维化中的表达变化,探讨其在肺纤维化发生中与上皮-间充质细胞转化(EMT)的关系.方法 48只SD大鼠随机分成生理盐水对照组(CON组),BLM致肺纤维化模型组(BLM组),BLM组给予BLM (Smg/kg)一次性气管内灌注.各组分别于第7、14和28天处死,取肺组织,HE染色观察大鼠肺炎症和纤维化的程度.免疫组织化学检测肺组织HMGA2和Thy-1蛋白的表达,应用Real-time RT-PCR法测定间充质细胞标记物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA) mRNA和上皮细胞标记物钙粘蛋白(E-Cad) mRNA的表达.结果 HE染色结果显示BLM组肺组织按时间顺序呈现由肺泡炎至纤维化的动态变化;免疫组化结果显示HMGA2蛋白表达在第7天明显增加,第28天达高峰,thy-1蛋白表达逐步下降;Real-time RT-PCR结果显示BLM组α-SMA基因mRNA表达升高,E-Cad基因mRNA的表达下降.结论 HMGA2在上皮-间充质细胞转化中起到了重要的调节作用.     

HMGA2在肺纤维化发生中与上皮-间充质细胞转化的关系

目的观察HMGA2在博莱霉素(BLM)致大鼠肺纤维化中的表达变化,探讨其在肺纤维化发生中与上皮-间充质细胞转化(EMT)的关系。方法 48只SD大鼠随机分成生理盐水对照组(CON组),BLM致肺纤维化模型组(BLM组),BLM组给予BLM(5mg/kg)一次性气管内灌注。各组分别于第7、14和28天处死,取肺组织,HE染色观察大鼠肺炎症和纤维化的程度。免疫组织化学检测肺组织HMGA2和Thy-1蛋白的表达,应用Real-time RT-PCR法测定间充质细胞标记物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和上皮细胞标记物钙粘蛋白(E-Cad)mRNA的表达。结果 HE染色结果显示BLM组肺组织按时间顺序呈现由肺泡炎至纤维化的动态变化;免疫组化结果显示HMGA2蛋白表达在第7天明显增加,第28天达高峰,thy-1蛋白表达逐步下降;Real-time RT-PCR结果显示BLM组α-SMA基因mRNA表达升高,E-Cad基因mRNA的表达下降。结论 HMGA2在上皮-间充质细胞转化中起到了重要的调节作用。     

格列卫对肺纤维化小鼠的干预机制

目的 探讨格列卫对小鼠肺纤维化的干预机制.方法 120只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组和格列卫组,每组30只.采用气管内注射博莱霉素构建肺纤维化小鼠模型,分别于7、14、21 d随机处死10只动物.免疫组化检测各组肺组织转化生长因子β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达,RT-PCR检测肺组织TGF-β1mRNA含量.结果 模型组各时间点TGF-β1和α-SMA的表达均较对照组显著增加,地塞米松和格列卫处理组各时间点TGF-β1和α-SMA的表达均较模型组显著降低,而地塞米松组和格列卫组的表达水平无显著差异.TGF-β1,与α-SMA表达水平呈直线正相关(r=0.251,P<0.05).结论 格列卫对博莱霉素诱导肺纤维化的抑制作用与其抑制TGF-β1和α-SMA的表达有关.     

丙酸氟替卡松吸入对肺纤维化大鼠MMP-2、TIMP-1表达的影响

目的 探讨吸入丙酸氟替卡松对博莱霉素(BLM)致肺纤维化大鼠肺组织基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及基质金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)表达的影响.方法 Wistar 大鼠45 只,随机分成博莱霉素模型组(BLM组)、生理盐水空白对照组(NS 组)和丙酸氟替卡松干预组(FP 组),各15 只.BLM组和FP组气管内灌注BLM诱导肺纤维化,NS 组在相同条件下灌注生理盐水,气管内灌注BLM后,第0～6 天FP组给予丙酸氟替卡松雾化吸入,其余组在相同条件下给予生理盐水雾化吸入.各组分别于第7、14、28 天随机处死5只大鼠,收集肺组织作切片,行苏木精-伊红及Masson 染色,判断肺组织肺泡炎及肺纤维化程度;行RT-PCR检测肺组织中MMP-2 mRNA及TIMP-1 mRNA的表达;行免疫组化染色,测MMP-2和TIMP-1在肺组织的表达水平;用比色法分别检测各组羟脯氨酸(HYP)含量.结果 与NS 组相比,BLM 组第7、14、28 天肺组织的肺泡炎和肺纤维化程度明显加重,HYP含量明显升高(P＜0.05);与BLM组相比,FP组第7、14 天肺组织的肺泡炎程度明显减轻(均P＜0.05),第28 天肺纤维化程度明显减轻(P＜0.05);FP组各时间点HYP含量均较BLM组明显降低(均P＜0.05);MMP-2 mRNA及TIMP-1 mRNA、MMP-2及TIMP-1在NS组肺脏中有微弱表达,灌注BLM后它们的表达均增强,FP 组第7、14、28 天MMP-2 mRNA、TIMP-1 mRNA、MMP-2及TIMP-1的表达均较BLM组降低(均P＜0.05);BLM组MMP-2 mRNA/TIMP-1 mRNA及MMP-2/TIMP-1均较NS组减低,而第28天FP组中MMP-2 mRNA/TIMP-1mRNA及MMP-2/TIMP-1均较BLM组升高.结论 丙酸氟替卡松雾化吸入可减轻BLM致肺纤维化大鼠的肺泡炎和肺纤维化程度,其干预机制可能为降低肺组织内MMP-2及TIMP-1的表达,并在一定程度上调整MMP-2/TIMP-1的比值.     

柚皮素对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的改善作用及其作用机制

目的 探讨柚皮素(NAR)对博来霉素诱导小鼠肺纤维化的影响及其可能作用机制.方法 将60只雄性ICR小鼠随机分成正常对照组(Control)、模型组(Model)、阳性对照地塞米松组(DXM,3 mg/kg)、NAR低剂量组(L-NAR,25 mg/kg)和NAR高剂量组(H-NAR,100 mg/kg),每组12只.采用气管内一次性滴注博莱霉素(5 mg/kg)建立小鼠肺纤维化模型,药物干预4周后处死小鼠.取肺组织称重,计算肺指数;碱水解法测定肺组织羟脯氨酸(HYP)含量;HE染色观察肺组织病理改变并评分;Masson染色观察肺纤维化程度并评分;ELISA法检测肺组织中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)和转化生长因子β1(TGF-β1)水平;RT-PCR检测肺组织中NLRP3、ASC和caspase-1 mRNA表达水平;Western blot检测肺组织中NLRP3、ASC、caspase-1、Col-lagen I、α-SMA、E-cadherin和Vimentin蛋白表达水平.结果 与Control组比较,Model组小鼠肺组织损伤明显,纤维化程度较为严重,肺指数和肺组织中HYP、IL-1β、IL-18、TGF-β1含量增加,NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA和蛋白表达水平以及Collagen I、α-SMA和Vimentin蛋白表达水平均上升,而E-cadherin蛋白表达水平下降,差异有统计学意义(P<0.05);与Model组比较,DXM组和H-NAR组小鼠肺损伤与纤维化程度得到明显改善,小鼠肺指数、肺组织中HYP、IL-1β、IL-18、TGF-β1含量,NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA和蛋白表达水平以及Collagen I、α-SMA和Vimentin蛋白表达水平均下降,E-cadherin蛋白表达水平上升,差异有统计学意义(P<0.05).而L-NAR组与Model组比较,相关指标差异无统计学意义.结论 NAR 能有效抑制博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化过程,其机制可能与抑制NLRP3 炎症小体活化有关.     

阿魏酸钠对NALP3炎性复合体的调节及在肺纤维化中的作用

目的探讨NALP3炎性复合体在肺纤维化过程中的活化情况,并观察阿魏酸钠(sodium ferulate, SF)在肺纤维化过程中对炎性复合体的影响。方法体内实验以博莱霉素(BLM)气管滴注构建小鼠肺纤维化模型(BLM组),治疗组在用BLM建模后第2天以SF（100 mg/kg）每日1次腹腔注射（SF组),对照组(不建模)和BLM组注射等量磷酸盐缓充液,建模后第21天取肺组织行Masson染色,观察肺组织胶原沉积（Ashcroft评分）情况;以碱水解法测定肺组织羟脯氨酸（HYP）含量;体外实验以H ₂ O₂刺激小鼠胚胎成纤维细胞NIH-3T3以构建成纤维细胞氧化应激模型,干预组以SF 400 μg/mL预处理2 h,再用H₂O₂培养细胞,采用Real time-PCR检测小鼠肺组织及体外实验分组处理细胞相关炎性细胞因子NALP3、caspase-1、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、collagen-1、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA）mRNA,Western blot检测小鼠肺组织NALP3蛋白,分组处理细胞NALP3、collagen-1、α-SMA蛋白的表达;ELISA测定肺组织上清及细胞上清中IL-1β质量浓度。结果体内实验 SF处理后,肺纤维化模型小鼠Ashcroft评分及HYP含量较BLM组有所减少（P<0.05）;肺组织NALP3炎性复合体NALP3、ASC、caspase-1mRNA,NALP3蛋白的表达和IL-1β的合成较BLM组均有减少（P<0.05）。体外实验显示H ₂ O₂能有效刺激NALP3炎性复合体NALP3、ASC、caspase-1 mRNA的表达（P<0.05）与IL-1β的分泌（P<0.05）,并且能有效促进成纤维细胞NALP3蛋白、collagen-1和α-SMA的表达（P<0.05）;SF预处理能在基因水平抑制NALP3、ASC、caspase-1、collagen-1和α-SMA的表达（P<0.05）,且在蛋白水平减少NALP3、collagen-1、α-SMA的表达（P<0.05）,降低IL-1β水平（P<0.05）。结论阿魏酸钠可能通过抑制氧化应激诱导的NALP3炎症复合体活化,从而抑制成纤维细胞活化,展现其抗纤维化作用。     

康复新液对博来霉素诱导大鼠肺纤维化模型的治疗作用

目的 探讨康复新液对博来霉素(BLM)诱导的肺纤维化(PF)模型大鼠的治疗作用以及可能的机制。 方法 Wistar大鼠48 只,雌雄各半,随机分为对照组、模型组及模型鼠康复新液治疗组(康复新液组)和地塞米松阳性对照组(DXM组); 用BLM 5 mg/kg气管内一次性滴注复制模型。鉴定模型成功后,使用康复新液和DXM进行灌胃治疗。康复新液组康复新液治疗剂量为5 mL·kg^-1·d^-1,DXM组的DXM治疗剂量为0.25 mL·kg^-1·d^-1,灌注周期为21 d。治疗后取大鼠肺组织,行H-E和马松染色,显微镜下观察; 采用PCR方法检测肺组织中层连结蛋白(LN)、纤维连结蛋白(FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA表达情况,采用WB方法检测肺组织中LN,FN及α-SMA的表达情况。 结果 显微镜下可见模型组肺组织纤维化较对照组明显,LN,FN及α-SMA蛋白的mRNA水平及蛋白表达均有上升; 使用康复新液和DXM治疗后,镜下可见康复新液组和DXM组的肺组织纤维化较模型组明显改善,LN,FN及α-SMA蛋白的mRNA水平及蛋白表达均有下降。 结论 康复新液可减轻BLM诱导的大鼠PF,其作用与其下调肺组织LN,FN及α-SMA蛋白表达有关。     

N-乙酰半胱氨酸对哮喘小鼠肺组织HMGB1、RAGE表达的影响

目的 检测高迁移率族蛋白B1(HMGB1)及晚期糖基化终产物受体在小鼠哮喘模型肺组织表达及分布.以及N-乙酰半胱氨酸(NAC)对其影响.方法 SPF级雌性BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组及哮喘 NAC处理组.每组7只.建立哮喘模型.用RT-PCR法检测肺组织HMGB1及晚期糖基化终产物mRNA表达水平,免疫组化法检测两者在肺组织的分布.结果 HMGB1 mRNA表达在3组中分别为0.88±0.02,0.86±0.05,0.98±0.05;晚期糖基化终产物mRNA表达在3组中分别为1.20±0.20,1.21±0.08,1.58±0.21.相对于对照组,哮喘组的HMGB1和晚期糖基化终产物表达未发生显著性改变(P0.05);相对于对照组和哮喘组,两者在NAC组表达均显著增加,具有统计学意义(P<0.05).免疫组化染色可见HMGB1主要分布于支气管及肺泡上皮细胞,在细胞核、胞浆及胞膜均可见.晚期糖基化终产物主要分布于肺泡上皮,表达于胞膜上.结论 HMGB1及其受体晚期糖基化终产物介导的信号转导通路可能参与哮喘气道氧化应激,但其确切的调控机制及在哮喘中的作用尚待深入研究.     

CSD肽对肺成纤维细胞细胞外基质及Smad信号表达的影响

目的研究CSD肽（CSD-p）对转化生长因子β1（TGF-β1）刺激下人胚肺成纤维细胞的细胞外基质及Smad信号表达的影响。方法体外培养人胚肺成纤维细胞,分为4组：对照组（无TGF-β1处理）、TGF-β1处理组、CSD-p处理组、TGF-β1及CSD-p联合处理组。RT-PCR测定各组窖蛋白1mRNA的表达;Western blot检测各组窖蛋白1、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、胶原Ⅰ、p-Smad2、p-Smad3及Smad7蛋白的表达。结果 TGF-β1刺激人胚肺成纤维细胞后,窖蛋白1的mRNA和蛋白表达较对照组明显降低（mRNA：0.404±0.027比1.540±0.262;蛋白：0.278±0.054比1.279±0.085;P〈0.01）。经TGF-β1刺激,人胚肺成纤维细胞的胶原Ⅰ（1.127±0.078比0.234±0.048）、α-SMA（1.028±0.058比0.295±0.024）,p-Smad2（1.162±0.049比0.277±0.014）、p-Smad3（1.135±0.057比0.261±0.046）蛋白表达增加（P〈0.01）;Smad7表达较对照组明显降低（0.379±0.004比1.249±0.046,P〈0.001）。与TGF-β1处理组比较,CSD肽明显抑制TGF-β1诱导的胶原Ⅰ（0.384±0.040）、α-SMA（0.471±0.071）、p-Smad2（0.618±0.096）、p-Smad3（0.461±0.057）蛋白表达;上调Smad7的蛋白表达（0.924±0.065比0.379±0.004）。结论 CSD肽下调TGF-β1刺激下人胚肺成纤维细胞的胶原Ⅰ及α-SMA蛋白的表达,可能通过抑制TGF-β1/Smads信号通路激活,提示使用CSD肽增加窖蛋白1功能可能对肺纤维化具有一定的干预作用。     

α肌动蛋白基因转录激活因子HMGB34367的克隆和调控功能研究

目的:探讨从博来霉素致肺纤维化小鼠肺组织中筛选出的高迁移率族蛋白B1(HMGB1)亚家族成员HMGB34367,作为转录因子对α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)基因表达的影响。方法:①克隆与构建HMGB34367真核表达载体及α-SMA启动子红色荧光报告质粒。②构建质粒共转染气道上皮细胞系16HBE,荧光显微镜观察重组转化生长因子-β1(rhTGF-β1)刺激下红色荧光的表达。③电泳迁移率(EMSA)及超迁移实验分析HMGB34367和α-SMA启动子CArGB基序的特异性结合活性。④RT-PCR检测细胞转染HMGB34367真核表达载体HMGB34367-pcDNA3.0对内源性α-SMA基因表达的影响。结果:细胞过表达HMGB34367能活化α-SMA启动子,转染HMGB34367-pcDNA3.0质粒的16HBE细胞核蛋白,显著增强了与α-SMA启动子CArGB序列特异结合,过表达HMGB34367诱导了α-SMA基因表达。结论:HMGB34367基因编码蛋白能作为转录因子特异性地诱导α-SMA启动子的转录激活,上调αS-MA基因表达。提示致纤维化环境因子通过诱导HMGB34367表达使αS-MA基因转录激活,可能在气道重塑和肺纤维化的病理过程中发挥重要作用。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

87株幽门螺旋杆菌VacA等位基因的分析

目的以研究方法LiPA（Line Probe Assay）分析VacA等位基因的表达,了解幽门螺旋杆菌致病机理的理解。方法从三个不同城市87位进行胃镜检查患者的胃粘膜中培养出幽门螺旋杆菌,提取DNA,用LiPA方法分析VacA等位基因。结果（1）87位患者以sic（88．5％）和m2a（63．2％）分布为主,未发现s1b和s2;（2）混合菌株感染率为41．4％,远远高于西方国家,其中上海的混合感染率最高（62．5％）,与北京（41．0％）和南宁（20．8％）相比具有显著性差异,P〈0．01;（3）北京、海、南京三个不同城市s1、m等位基因亚型分布率存在差异;（4）溃疡病和非溃疡病患者m1和m2的分布率没有显著性差异。结论我国幽门螺旋杆菌多重菌株感染率较高,不同的m基因型与消化性溃疡的发生无显著性相关。     

喉癌主癌灶手术切缘的临床特点分析

目的探讨研究喉癌主癌灶手术的安全切缘在临床上的特点。方法回顾性分析2007年6月—2011年3月已经确诊喉癌的患者100例,随机分成A、B两组,A组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取镜下观察分析;B组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取肉眼观察分析,将结果进行临床特点分析比较。结果早期的喉癌患者和晚期的喉癌患者的阳性切缘例数,差异无统计学意义（P〉0.05）;晚期的阳性切缘发生次数高于早期的阳性切缘发生次数,差异有统计学意义（P〈0.05）。声门上区[SG]2、3和5、10mm;跨声门型[TG]2、3mm和5、10mm的切缘对比,差异有统计学意义（P〈0.05）。SG、G、TG、IG的2mm和3mm,5mm和10mm对,差异无统计学意义（P〉0.05）。肉眼阳性切缘观察39个,镜下阳性切缘观察43,两者差异无统计学意义（P〉0.05）。结论依据原发不同部位、不同分期和不同范围选取适合的切线,就可以有效地减少阳性切缘的发生。     

儿童腹痛328例病因诊断及分析

目的：根据儿童急性腹痛的特点，诊断儿童腹痛应综合临床及相关检查提供的依据，做出准确诊断，给予适当治疗。方法：对临床328例腹痛患儿进行选择性辅助检查和分析。结果：小儿腹痛病因复杂，腹腔内疾病占64．63％，共17种病因；腹腔外疾病占35．37％，共6种病因。结论：仔细询问病史、认真体格检查、密切观察病情、针对性地选择辅助检查，在儿童腹痛的诊断上具有重要的意义。     

十二指肠损伤的治疗体会

目的：提高十二指肠损伤的诊治水平，方法：回顾总结该院1999年－2001年间收治的十二指肠损伤7例临床经验。结果：合并其他腹部脏器损伤86％（6／7），单纯十二指肠损伤14％（1／7）。损伤部位以十二指肠降部为多占71％（5／7），水平部和球部各占14％（1／7），术后并发症发生率28％（2／7）、病死率14％（1／7）。结论：掌握十二指肠损伤的特点，早诊断、早手术、术中认真探查，掌握好检查指征，选择合理恰当术式，加强术后管理，可提高治愈率。