基质金属蛋白酶-1、金属蛋白酶组织抑制因子-1在老年肌少症大 鼠中的表达及意义

目的 观察肌少症大鼠骨骼肌质量、力量的变化以及基质金属蛋白酶（MMP-1）、金属蛋白酶组织抑制因子（TIMP-1）及Ⅰ型胶原的表达。方法 11 只5 月龄SD大鼠作为成年对照组(YC组）;18只24月龄SD大鼠根据双能X线吸光测定得到的相对瘦质量（瘦质量%）分为两组,其中9只大鼠为老年对照组（OC组）,9只大鼠为老年肌少症组（OS组）,分组标准为YC组相对瘦质量较OS组高2SD;大鼠喂养4周后处死;电子抓力仪测量大鼠前肢抓力;HE染色和天狼星红染色观察大鼠腓肠肌细胞外基质变化;Western blot检测MMP-1、TIMP-1及Ⅰ型胶原的蛋白表达量。结果 老年对照组相对抓力低于成年对照组（P<0.01）,瘦质量%与成年对照组无统计学差异（P>0.05）,HE染色和天狼星红染色示细胞外基质较成年对照组增多,Ⅰ型胶原、TIMP-1的表达高于成年对照组（P<0.05）,MMP-1的表达与成年对照组无统计学差异（P>0.05）;与老年对照组相比,老年肌少症组相对抓 力未见显著性差异（P>0.05）,瘦质量%显著下降（P<0.01）,HE染色及天狼星红染色示细胞外基质增多,Ⅰ型胶原、TIMP-1的表达增多（P<0.05）,MMP-1的表达降低（P<0.05）。结论 增龄过程中骨骼肌MMP-1/TIMP-1失衡,影响细胞外基质代谢,导致细胞外胶原纤维增多,进而影响骨骼肌质量和功能,可能是肌少症发病的重要原因之一。     

白藜芦醇对脑缺血大鼠突触可塑性的影响

目的：探究白藜芦醇对脑缺血大鼠突触可塑性的影响。方法60只雄性Wistar大鼠采用数字随机法随机分为假手术组(Sham,n=15),脑缺血大鼠模型组(CCH,n=15),给予40 mg/kg白藜芦醇预处理四周的脑缺血大鼠模型组(CCH+Resveratrol,n=15)以及白藜芦醇处理组(Resveratrol,n=15)。采用莫里斯水迷宫检测大鼠空间感知能力和记忆能力;透射电子显微镜下测量神经元突触界面结构参数;高尔基体染色法检测齿状回区树突刺的形态学变化;Western blot检测突触相关蛋白的表达情况。结果 CCH组大鼠逃脱时间长于Sham组(P<0.05)。CCH+Resveratrol白藜芦醇预处理缺血组逃脱时间与CCH组相比显著降低(P<0.05),但是与假手术组和白藜芦醇组比较差异无统计学意义(P>0.05)。CCH组大鼠突触界面曲率、突触活性区长度以PSD厚度显著低于Sham组(P<0.05),且突触间隙宽度显著高于Sham组(P<0.05),白藜芦醇处理后大鼠突触界面参数恢复正常。CCH组大鼠树突刺和蘑菇状刺与Sham组相比显著减少(P<0.05),CCH+Resveratrol组减少量明显下降。在CCH组脑缺血大鼠中的PSD95、PSD93、NR2A/B三类蛋白水平显著下降,而通过白藜芦醇预处理可以部分改善这一现象。结论白藜芦醇预处理的脑缺血大鼠在功能以及结构方面有效的恢复了其突触可塑性,而突触相关蛋白的表达在白藜芦醇介导的脑缺血大鼠模型的神经元保护作用中起到关键作用。     

白藜芦醇通过调节SIRT1/AMPK信号通路对复发大鼠MCAO的神经保护作用机制研究

目的 探讨白藜芦醇(resveratrol, RSV)通过调节SIRT1/AMPK信号通路对复发大鼠缺血性脑卒中的神经保护作用机制研究。方法 成年雄性Wistar大鼠38只,采用微型动脉瘤夹夹闭法制作单次大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO,n=14)和双次MCAO模型(n=16),随机分为RSV治疗组和实验对照组,术后3天测定各组大鼠脑梗死体积并评价行为缺损的变化。另外8只大鼠为假手术组,随机分为RSV治疗组(n=5)和对照组(n=3)。采用Western blot法测定大鼠的SIRT1表达、AMPK、phospho-AMPK表达,去乙酰化荧光检测试剂盒进行SIRT1活性检测,ATP生物发光检测试剂盒测定ATP水平。结果 与对照组比较,RSV显著改善神经行为功能(P<0.05),降低单次及双次MCAO大鼠脑梗死体积(P<0.05),提高缺血脑组织SIRT1及AMPK活性(P<0.05),SIRT1蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,RSV喂养3天后假手术组、单次MCAO组和双次MCAO组大鼠缺血脑组织ATP含量均显著增高(P<0.05),RSV使组织内ATP含量升高1.5~2.0倍。结论 RSV对大鼠单次和双次MCAO模型均具有神经保护作用,RSV的神经保护作用与提高SIRT1及AMPK活性和增加脑缺血时能量需求有关。     

血浆骨保护素、骨钙素与颈动脉粥样斑块的关系

目的:探讨老年男性脑梗死患者骨保护素(osteoprotegerin OPG)、骨钙素(osteocalcin OC)与颈动脉粥样斑块的关系。方法:对234例男性脑梗死患者行颈部血管彩超检查评估有无斑块,分为有斑块组和无斑块组,根据斑块性质分为稳定斑块组和不稳定斑块组,检测血浆OPG、OC水平。结果:Logistic回归分析发现OPG、OC与颈动脉斑块分别成正相关(OR=1.407,P<0.05)和负相关(OR=0.928,P<0.05)。稳定斑块组血浆OPG水平低于不稳定斑块组,而OC水平高于不稳定斑块组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:老年男性OPG值越高,发生颈动脉粥样斑块的危险性越大,可能与不稳定斑块相关;OC可能具有抗动脉粥样斑块作用且与稳定斑块相关。     

雷公藤多甙对异体神经移植后免疫反应及骨骼肌萎缩的影响

目的 探讨雷公藤多甙对异体神经移植后免疫反应和骨骼肌萎缩的影响.方法 用Wistar大鼠坐骨神经桥接SD大鼠10 mm坐骨神经缺损.60只成年雄性SD大鼠(体重200～250 g)随机分为4组(n=15):A、B组为新鲜异体移植,C、D组为供者神经雷公藤多甙预处理后移植.术后第2天予A、C组生理盐水,B、D组分别予雷公藤多甙5 mg/(kg·d)和2.5 mg/(kg·d),时间5周.术后定期观察移植神经和患侧骨骼肌大体及组织学变化,并分析肌纤维直径,透射电镜观察骨骼肌超微结构,免疫组化检测移植神经MHC-Ⅰ、Ⅱ分子表达和CD4+、CD8+T细胞入侵.结果 移植神经炎症细胞浸润和骨骼肌萎缩,B、C、D组均明显轻于A组;骨骼肌湿重和肌纤维直径,A组明显低于B、C、D组(P<0.05),C组低于B、D组(均P<0.05),而B、D组间差异无统计学意义(P>0.05).术后6周,A组肌小节结构消失,肌丝溶解严重和残存"Z"线片段.余组肌原纤维均排列整齐,明带、暗带和肌小节结构清晰.MHC-Ⅰ、Ⅱ表达和CD4+、CD8+T细胞入侵在术后第1周出现高峰;同一时相,B、C、D组显著低于A组(均P<0.01),B、D组低于C组(均P<0.05),而B、D组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 雷公藤多甙能减轻失神经支配骨骼肌萎缩;雷公藤多甙预处理能降低供者神经抗原性,减轻异体神经移植后排斥反应和受者免疫抑制剂用量.     

长期酒精灌胃对大鼠肝GSK-3β及AMPK水平的影响

目的 探索长期饮酒对大鼠肝内糖原合成酶激酶-3(GSK-3)、磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的影响.方法 用AMPK激动剂(AICAR)注射大鼠,观察其对糖原、GSK-3β、AMPK的影响.取Wistar大鼠48只,随机分为A、B、C、D组,给予酒精灌胃,对应酒精剂量分别为5g/kg·d、2.5g/kg·d、0.5 g/kg·d及0(生理盐水),20周后取其肝组织测GSK-3β、AMPK(AMPKα,P-AMPKα)、GLUT4蛋白和AMPK、GLUT4 mRNA的表达以及切片组织GSK-3β的荧光表达.结果 注射AICAR大鼠的肝糖原含量增高,GSK-3β、AMPK也较原水平有所变化.服酒精各组GSK-3β荧光信号强,A组更明显,蛋白表达增强;而酒精各组P-AMPKα蛋白表达均明显降低(P均＜0.01);GLUT4mRNA和蛋白也降低(P均＜0.05).结论 大鼠长期酒精灌胃可能影响GSK-3β、AMPK水平,继而降低肝糖原水平.     

高脂饮食对大鼠肝脏组织AMPK表达及其活性的影响

目的 研究不同饮食模式对大鼠肝脏组织腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)表达及其活性的影响.方法 28只雄性sD大鼠适应性喂养1周后随机分为2组:普通对照组(NC组,n=15),高脂饮食组(HF组,n=13).NC组给予普通饲料,HF组给予高脂饲料.16周后分别测定体重(BW)、血清游离脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TCH)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)等指标.采用Westernblot方法检测两组大鼠肝脏组织中AMPKa和磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶α亚基(p-AMPKa)蛋白的水平.结果与NC组相比.HF组大鼠的体重、FFA、TG、FPG、FINS增高(均P<0.05).两组肝脏组织中AMPKα的蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05),但HF组肝脏组织中P-AMPKα的蛋白表达水平及AMPK活性降低(均P<0.05).结论 长期高脂饮食减少肝脏组织AMPKα蛋白的磷酸化和AMPK的活性.     

四君子汤与四君子丸干预脾气虚大鼠宏观表征的比较研究

目的 从体质量、进食水量、肌力和神志方面比较四君子汤和四君子丸的药效学差异.方法 32只SPF级雄性SD大鼠,随机分为对照组、脾气虚组(模型组),四君子丸组(丸剂组)和四君子汤组(汤剂组),每组8只;电子天平检测大鼠体质量;代谢笼计量24 h进食水量;大小鼠抓力测定仪测量前肢抓力;旷场实验评价大鼠的神志状态.结果 与对照组相比,模型组的体质量、进食水量、前肢抓力、运动距离、站立次数和角落停留时间等均显著减少(P<0.05),但中心和周边停留时间明显延长,而后两组的体质量和进水量均显著下降,但进食量显著上升(P<0.05).与模型组比较,后两组的体质量、进食量、前肢抓力、运动距离、站立次数和角落停留时间均显著上升(P<0.05),中心和周边活动时间显著缩短,但丸剂组饮水量明显减少(P<0.05);与丸剂组比较,汤剂组的饮水量和运动距离均显著增加(P<0.05).结论 四君子汤与四君子丸均有较好的健脾益气作用,但汤剂在促进饮水和安神益志方面的疗效优于丸剂.     

桦褐孔菌水提取物对STZ诱导的糖尿病大鼠肝脏磷酸化腺苷酸蛋白激酶表达的影响

[目的]探讨桦褐孔菌水提取物对STZ诱导的糖尿病大鼠肝脏磷酸化腺苷酸蛋白激酶(P-AMPK)表达的影响.[方法]制作STZ诱导的糖尿病大鼠模型,随机分为糖尿病模型组、阳性对照组、桦褐孔菌水提取物高、中、低剂量组.阳性对照组给予200mg/kg盐酸二甲双胍,桦褐孔菌水提取物各剂量组分别灌胃给予900,600,300mg/kg桦褐孔菌水提取物,正常对照组和糖尿病模型组灌胃给予等体积纯净水,每日1次,连续8周.测定实验前后空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白、糖耐量等指标,检测肝组织中磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶(PEPCK)和P-AMPK表达水平.[结果]与糖尿病模型组比较,桦褐孔菌各剂量组FBG值显著降低(P<0.05),肝脏PEPCK表达明显降低(P<0.05),P-AMPK表达显著升高(P<0.05),且均表现出剂量依赖性.[结论]桦褐孔菌水提取物对STZ诱导的糖尿病大鼠具有较好的降低血糖作用,机制认为可能与上调腺苷酸蛋白激酶(AMPK)信号通路中P-AMPK表达,减少PEPCK表达,继而降低糖异生过程有关系.     

黄连解毒汤对炎症损伤内皮细胞腺苷酸活化蛋白激酶及细胞间黏附分子-1的影响

目的研究黄连解毒汤对脂多糖(LPS)所致炎症损伤内皮细胞腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的影响。方法培养人脐带静脉内皮细胞,鉴定后加入LPS诱发炎症损伤,将损伤后的内皮细胞分为空白组、对照组(5-氨基-4-咪唑甲酰胺核糖核苷酸干预组)和观察组(黄连解毒汤干预组),用Western blot法检测各组AMPK水平及磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(P-AMPK)的表达,流式细胞仪检测各组ICAM-1表达,噻唑蓝法检测各组细胞的存活情况。结果各实验组间内皮细胞AMPK水平比较差异无统计学意义(P>0.05);与空白组比较,观察组和对照组P-AMPK的表达量显著增高(P<0.05);ICAM-1表达量显著降低(P<0.05),且内皮细胞存活量显著增加(P<0.05)。结论黄连解毒汤可能通过影响AMPK、ICAM-1对炎症损伤内皮细胞起保护作用。     

Rosiglitazone reduces fatty acid translocase and increases AMPK in skeletal muscle in aged rats: a possible mechanism to prevent high-fat-induced insulin resistance

Background As an agonist of peroxisome proliferator-activated receptor-gamma （PPARy）, rosiglitazone can prevent acute fatty acid-induced insulin resistance in rats, however, the precise mechanisms by which rosiglitazone alleviates insulin resistance induced by high-fat diet need to be further investigated.Methods Wistar rats aged 23-24 weeks were divided into three groups： （1） aged control group （OC）, （2） high-fat diet （HF） group and （3） high-fat diet plus rosiglitazone maleate tablets （HF＋Rosi） treatment group （n=20 in each group）. Insulin sensitivity was evaluated by conscious hyperinsulinemic-euglycemic clamp technique. mRNA levels of fatty acid translocase （FAT/CD36）, AMP-activated protein kinase α1 （AMPKα1）, AMPKα2 and acetyl CoA carboxylase （ACC） of rat skeletal muscle were determined using real-time PCR, while muscle camitine palmitoyltransferase-1 （CPT-1β） was determined using semi-quantitative PCR. Protein expression levels of FAT/CD36, AMPK phosphorylation （reflecting AMPK activity）, P-ACC （inversely related with ACC activity） and muscle CPT-1M in rat skeletal muscles were measured using Western blotting.Results Aged rats fed by diet rich in fat for more than 8 weeks led to significant increases of plasma lipids, skeletal muscle intramuscular triglyceride and long-chain fatty acyl-CoA （LCACoA） compared to aged rats fed by normal chow diet （OC） （P 〈0.05）, which might correlate with the lower （reduced by 42.4%） whole body insulin sensitivity in HF rats. FAT/CD36 protein concentrations and mRNA levels increased in untreated HF aged rats （P 〈0.01） and high-fat diet induced a significant decrease in P-AMPK, P-ACC, CPT-1M protein concentrations and AMPKα2 and CPT-1β mRNA levels in rat skeletal muscles （P 〈0.05）. No change in AMPKα1 mRNA levels was observed in the HF group.Conclusion High-fat diet in aged rats results in a lipid accumulation and subsequent insulin resistance, while rosiglitazone can alleviate the insulin resistance by reducing fatty acid uptake as well as enhancing lipometabolism.     

腺苷酸活化蛋白激酶与LKB1在肥胖大鼠脂肪组织中的表达及其对糖脂代谢的影响

目的：探讨腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）与LKB1在肥胖大鼠脂肪组织的表达及其对糖脂代谢的影响。方法：将30只6周龄雄性S-D大鼠随机分为普通饮食组（NC组）和高脂饮食组（HF组）,各15只,分别予普通饲料喂养和高脂饲料喂养。喂养16周后,HF组大鼠体重高于NC组20%者为成功建立模型。所有大鼠过夜禁食后,麻醉状态下测量体重（BW）,取静脉血测定血清游离脂肪酸（FFA）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TCH）、空腹血糖（FPG）、空腹胰岛素（FINS）。处死大鼠后,采用Western blot法测定各组大鼠骨骼肌组织中AMPKα、磷酸化AMPK（P-AMPKα）和磷酸化LKB1蛋白（P-LKB1）的表达。计算AMPK活性。结果：与NC组比较,HF组大鼠BW、FFA、TG、FPG、FINS均升高（P〈0.05～P〈0.01）,脂联素水平降低（P〈0.05）,骨骼肌组织中P-AMPKα和P-LKB1蛋白表达降低,AMPK活性降低（P〈0.05）。结论：高脂饮食诱导大鼠营养性肥胖,降低LKB1和AMPK的活性,从而导致TG和TCH的合成增加,血糖升高,形成胰岛素抵抗。     

跑台运动对高龄大鼠运动机能的改善作用

目的 探讨大鼠运动机能随增龄的变化规律,以及运动对高龄大鼠运动机能的改善作用。方法 对26月龄、8月龄和2月龄SD大鼠进行为期2周的中等强度跑台运动干预,测定大鼠运动前后前肢拉力、耐力、躯体向上活动能力及极限速度4个机能指标,进行对比分析。结果 ①26月龄大鼠组的前肢拉力、耐力、躯体向上活动能力、极限速度均显著低于8月龄组和2月龄组,且后3个指标呈现增龄性下降;②26月龄和8月龄组的前肢拉力运动后高于运动前,8月龄组和2月龄组的躯体向上活动能力运动后高于运动前;③运动干预前后4项指标的运动机能总评分进行比较,26月龄组运动后显著高于运动前。结论 大鼠的前肢拉力、耐力、躯体向上活动能力及极限速度等4项运动机能指标呈增龄性下降,可作为大鼠运动机能的衰老指标。中等强度的跑台运动能显著改善高龄大鼠总运动机能的下降。     

白藜芦醇对兔动脉粥样硬化肢体缺血再灌注损伤的影响

目的:探讨白藜芦醇对兔动脉粥样硬化肢体缺血再灌注损伤的影响,评价其对兔肢体缺血再灌注损伤的保护作用。方法:新西兰白兔12只,高脂饮食后随机分为假手术组,缺血再灌注损伤组,白藜芦醇治疗组。缺血再灌注损伤组微血管夹夹闭股动脉5 h后恢复血流,白藜芦醇治疗组予10 mg/(kg.d)剂量治疗。观察不同组间血清磷酸肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH),血清和后肢肌肉中丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD)的差别。结果:与缺血再灌注损伤组相比,白藜芦醇治疗组术后第7天、第14天CK、LDH降低,SOD升高(P<0.05)。术后第7天MDA较缺血再灌注损伤组降低(P<0.05)。结论:白藜芦醇能改善兔后肢缺血再灌注损伤后的部分血清学指标,减轻缺血再灌注时肌细胞损伤的程度。     

黄芪多糖对慢性疲劳小鼠骨骼肌线粒体功能的影响及作用机制

目的 观察黄芪多糖(APS)对慢性疲劳小鼠骨骼肌线粒体功能的影响及作用机制.方法 采用力竭性游泳方法构建慢性疲劳模型,将40只BALB/c小鼠随机分为空白对照组(SED组)、模型组(EXE组)、黄芪多糖对照组(SED+APS组)、黄芪多糖干预组(EXE+APS组).SED组:给予生理盐水灌胃,予以静坐;EXE组:给予生理盐水灌胃,予以力竭性运动;SED+APS组:给予APS灌胃,予以静坐处理;EXE+APS组:给予APS灌胃,予以力竭性运动.测试小鼠运动耐力,检测血清及骨骼肌内丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酯(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)水平,Western blot法检测PGC-1α、MnSOD、p53、Atg7、LC3、p62水平,qRT-PCR法检测骨骼肌内Mfn-1、Mfn-2、Opa-1、Drp-1、Fis-1蛋白mRNA水平.结果 与EXE组相比,EXE+APS组的运动耐力及前肢握力均明显提高(P<0.05,P<0.01),且小鼠运动耐力与血清LDH、MDA及骨骼肌MDA呈负相关(P<0.05),与血清GPx呈正相关(P<0.05);与EXE组相比,EXE+APS组骨骼肌中的氧化应激相关蛋白MnSOD和p53水平下降(P<0.05),线粒体起源相关蛋白PGC-1α表达升高(P<0.01),自噬相关蛋白Atg7和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达水平下降(P<0.05,P<0.01)、p62表达水平升高(P<0.05);与EXE组相比,EXE+APS组Mnf-1和Mnf-2 mRNA的表达水平升高(P<0.05),而Drp-1 mRNA的表达水平则下降(P<0.05).结论 黄芪多糖可提高慢性疲劳小鼠的运动耐力,其分子机制与降低组织内氧化应激水平,改善骨骼肌线粒体自噬、起源及线粒体融合-分裂有关.     

白藜芦醇对博来霉素诱导小鼠肺损伤的保护作用

目的 研究白藜芦醇对博来霉素所致小鼠肺损伤的保护作用及其机制。方法 将雄性ICR小鼠随机分为对照组、博来霉素组、白藜芦醇组、博来霉素+白藜芦醇组,每组10只。小鼠气管内滴注博来霉素(3 mg/kg)制作肺损伤模型,白藜芦醇(0.3 mg/kg)在滴注博来霉素前注射于小鼠腹腔内。24 h后取肺组织行H-E染色进行组织病理学观察,用试剂盒检测氧化应激指标丙二醛(MDA)含量,炎症因子髓过氧化物酶(MPO)活性,炎症因子IL-6、IL-8、IL-10水平。结果 白藜芦醇治疗可以改善小鼠肺组织因博来霉素所致的损伤性病理变化。经白藜芦醇治疗后,博来霉素诱导的氧化应激反应得到抑制,脂质过氧化生物标记物MDA含量减少(P<0.01); 博来霉素导致的肺部炎症反应减轻,MPO活性降低(P<0.01),IL-6、IL-8水平下降(IL-6: P<0.01; IL-8: P<0.05),IL-10水平增加(P<0.01)。结论 白藜芦醇对博来霉素所致的小鼠肺损伤有一定的保护作用,作用机制可能与其抑制氧化应激及炎症反应有关。     

白藜芦醇对大鼠脊髓损伤早期凋亡的影响

目的:探讨脊髓损伤后使用白藜芦醇(RES)对脊髓损伤早期神经细胞凋亡的影响。方法:将62只Spra-gue-Dawley健康成年雄性大鼠随机分成5组,即空白对照组、模型对照组、损伤组、RES组、甲基强的松龙(MPSS)组。根据Allen氏法制成中度脊髓损伤模型,术后立即腹腔注射RES 100 mg/kg或100 mg/kg;TUNEL法观察脊髓损伤后8,24,72 h使用RES前后脊髓神经细胞凋亡情况,并且与MPSS组进行疗效对比。结果:脊髓损伤后8,24,72 h,RES组脊髓凋亡神经细胞数与损伤组比较差异具有高度显著性(P<0.01),表明RES明显干预了损伤后脊髓神经细胞凋亡。RES组比MPSS组间的凋亡神经细胞数差异无统计学意义(P>0.05),这意味着RES可以起到与MPSS近似的效果。结论:RES能够明显抑制脊髓损伤后脊髓神经细胞的凋亡,对损伤后的脊髓有保护作用。