内皮素－1诱导肺动脉平滑肌细胞的趋化反应

本实验发现ＥＴ－１可诱导肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）的趋化反应，１０~（－１２）～１０~（－９）ｍｏｌ／ＬＥＴ－１可剂量依赖地促进ＰＡＳＭＣ的趋化反应，而高浓度的ＥＴ－１（１０~（－８）～１０~（－６）ｍｏｌ／Ｌ）对ＰＡＳＭＣ的趋化作用减弱，内皮素Ａ型受体的特异拮抗剂ＢＱ１２３可抑制ＰＡＳＭＣ对ＥＴ－１的趋化反应，此外还观察到缺氧可促进ＰＡＳＭＣ对ＥＴ－１的趋化反应。提示ＥＴ－１可能对缺氧性肺血管结构重组中平滑肌细胞及其前体的迁移具有重要作用。     

缺氧时培养的肺动脉平滑肌细胞的增殖与内皮素自分泌关系的探讨

目的：缺氧能否中通过影响血管平滑肌细胞血管活性肽的自分泌功能而参与缺氧性肺动脉高压的发生尚不明确,本实验在培养的新生小牛肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭ）上探讨内皮素－１（ＥＴ－１）自分泌在其中的作用。方法：采用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入研究ＰＡＳＭ增殖,放免测定和斑点杂交技术研究ＥＴ－１分泌和表达。结果：无氧培养（０％Ｏ２）２４ｈ使新生小牛肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭ）的＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入与常氧组相比增加４２．     

内皮素对肺动脉平滑肌细胞第二信使系统的影响

在培养的猪肺动脉平滑肌细胞以上观察内皮素－１对第二信使系统的影响，实验发现内皮素－１促进肺动脉平滑肌细胞内钙释放，继之以外钙内流，使三磷酸肌醇骤增后下降，对细胞内环腺苷酸和环鸟苷酸量无明显影响。     

ET—1和NO对肺动脉平滑肌细胞DNA合成的作用及缺氧对其调…

观察内皮素－１（ＥＴ－１）和一氧化氮（ＮＯ）在缺氧性肺血管结构重组中的作用，发现ＥＴ－１可促进肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）ＤＮＡ合成，其促进作用呈剂量依赖性；ＮＯ供应剂ＳＮＰ则起抑制作用，ＮＯ的抑制增殖作用主要由ｃＧＭＰ介导。在此基础上观察到缺氧何促进ＰＡＳＭＣ对ＥＴ－１的增殖反应，同时可抑制ＰＡＳＭＣ胞浆内可溶性鸟苷酸环化酶活性而降低ＰＡＳＭＣ对ＮＯ等舒血管药物的反应性。提示ＥＴ－１和ＮＯ及缺     

NHE-1核酶基因转染对大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响

目的 探讨NHE-1核酶基因转染对大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMC）凋亡的影响。方法 构建NHE-1核酶基因逆转病毒载体,转染体外培养的大鼠PASMC,应用半定量RT-PCR法（sqRT-PCR）测定细胞内NHE-1 mRNA的表达、BCECF法测定pHi、流式细胞仪测细胞周期、电镜及原位细胞凋亡检测（TUNEL法）观察细胞凋亡情况。结果 转染NHE-1核酶基因的细胞,NHE-1 mRNA表达量及pHi较空载体转染细胞及未转染细胞显著降低,细胞凋亡率显著增加,电镜示细胞凋亡,凋亡小体形成。结论 NHE-1核酶基因转染可通过NHE-1抑制、细胞内酸化,显著诱导肺动脉平滑肌细胞凋亡。     

大内皮素-1的生物转化对兔肺动脉收缩反应的影响

内皮素１（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ１，ＥＴ１）是目前发现的血管内皮细胞产生的缩血管作用最强的多肽［１］。大内皮素１（ｂｉｇｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ１，ＢＥＴ１）的生物活性仅为ＥＴ１的１／２００，只有在内皮素转换酶（ＥＣＥ）作用下转化生成ＥＴ１之后，才能充分发挥其生物学作用［２，３］。我们旨在研究ＢＥＴ１在肺动脉的生物转化及其对肺动脉收缩反应的影响，同时对幼年和成年兔肺动脉转化ＢＥＴ１生成ＥＴ１的活性进行比较研究。一、材料与方法１肺动脉血管环制备及给药方法：新西兰大白兔（北京医科大学第…     

内皮素对肺动脉平滑肌细胞第二信使系统的影响

在培养的猪肺动脉平滑肌细胞上观察内皮素-1 对第二信使系统的影响。实验发现内皮素-1促进肺动脉平滑肌细胞内钙释放,继之以外钙内流;使三磷酸肌醇骤增后下降;对细胞内环腺苷酸和环鸟苷酸量无明显影响。     

血浆内皮素—1与小儿室间隔缺损伴肺动脉高压的关系

研究血内皮素－１（ＥＴ－１）的浓度与小儿先天性室间隔缺损伴肺动脉高压的关系。４２例小儿室间隔缺损心内直视修术病便，围术期采用免疫法测定血浆ＥＴ－１。结果：血浆ＥＴ－１明显高于正常，而主动脉血样ＥＴ－１略高于肺动脉血样中ＥＴ－１。肺动脉高压组术前ＥＴ－１明显高于肺动脉压力正常组（Ｐ〈０．０１）。逐步回归发现ＥＴ－１与肺循环流量和脉动脉压力呈线性相关。动态观察发现体外循环约束时ＥＴ－１较转流前升高，术     

慢性缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞形态的影响

目的 探讨慢性缺氧引起缺氧性肺血管收缩反应降低的机制。方法 采用计算机成像及图像分析系统，观察慢性缺氧培养的大鼠肺内动脉平滑肌细胞形态学变化的情况。结果 慢性缺氧后肺动脉平滑肌细胞中缺氧敏感型细胞的比例明显减小，中间混合型细胞比例明显增高，而缺氧不敏感型细胞的比例不变(P＜0．05)。结论 慢性缺氧可直接使肺动脉平滑肌细胞表型转化，由缺氧敏感细胞向中间混合型细胞转化。这可能是慢性缺氧时缺氧性肺血管收缩反应降低的机制之一。     

Cmyc反义核酸对内皮素诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖抑制 …

应用不同浓度的Ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸处理体外培养的经１０＾－８ｍｏｌ／Ｌ内皮素－１（ＥＴ－１）诱导的人肺动脉平滑肌细胞,通过细胞计数和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入值观察该反义核酸对细胞增殖及ＮＤＡ合成的抑制作用,应用斑点杂交法检测平滑肌细胞Ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ的表达水平。结果表明,１０、２０、５０μｇ／ｍｌ反义寡核苷酸对细胞计数和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入值与对照组相比抑制率分别为１１．９％和１２．３％     

ET－1和NO对肺动脉平滑肌细胞DNA合成的作用及缺氧对其调制的研究

观察内皮素－１（ＥＴ－１）和一氧化氮（ＮＯ）在缺氧性肺血管结构重组中的作用，发现ＥＴ－１可促进肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）ＤＮＡ合成，其促进作用呈剂量依赖性；ＮＯ供应剂ＳＮＰ则起抑制作用，ＮＯ的抑制增殖作用主要由ｃＧＭＰ介导。在此基础上观察到缺氧可促进ＰＡＳＭＣ对ＥＴ－１的增殖反应，同时可抑制ＰＡＳＭＣ胞浆内可溶性鸟苷酸环化酶活性而降低ＰＡＳＭＣ对ＮＯ等舒血管药物的反应性。提示ＥＴ－１和ＮＯ及缺氧在缺氧性肺血管结构重组中具有重要的作用。     

单核细胞趋化蛋白-1在动脉粥样硬化大鼠动脉平滑肌细胞中的表达

目的探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)在动脉粥样硬化(AS)大鼠动脉平滑肌细胞(SMC)中的表达及其与AS发生的关系。方法SD雄性大鼠20只随机分为对照组和高脂饮食组,每组10只。对照组用普通饲料喂养,高脂饮食组用高脂饲料喂养,喂养2个月后心脏采血处死大鼠,取胸主动脉,常规固定,包埋,切片。采用免疫组织化学检测各组动脉SMC中MCP-1蛋白的表达情况。结果对照组动脉SMC中MCP-1呈弱阳性表达,高脂饮食组动脉SMC中MCP-1呈强阳性表达。高脂饮食组动脉SMC中MCP-1表达的平均灰度值显著低于对照组(P<0.01)。结论高脂血症可能通过诱导血管壁SMC中MCP-1的表达引起AS的发生。     

白花前胡提取物对缺氧性肺动脉高压病人血浆内皮素—1的影响

目的：探讨内皮素－1（endothelin-1,ET-1)在慢性缺氧必肺动脉高压发生中的作用及白花前胡提取物（QF－8）降低肺动脉高压作用机制。方法：分别用右心漂浮导管法和放射免疫法同步检测11例慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease,COPD)继发性肺动脉高压患者口服QF－8前、后血流动力学指标和体静脉、肺动脉及体动脉血浆ET－1水平。结果：COPD患者体静脉ET－1水平显著高于正常对照组体静脉（P＜0．01）、自身肺动脉（P＜0．05）及自身体动脉（P＜0．01）血浆ET－1水平,且血浆（包括体静脉、肺动脉及体动脉）ET－1水平均与PaO2呈显著负相关,与肺血管阻力指数（pulmonary vascular resistance index,PVRI)呈显著正相关。口服QF－8后,肺动脉压力和PVRI明显下降,同时血浆ET－1水平亦呈不同程度下降,其下降幅度依次为体静脉（25％）＞肺动脉（21％）＞体动脉（10％）,与血浆ET－1水平升高顺序一致。结论：ET－1的合成或分泌功能异常可能参与了慢性缺氧性肺动脉高压的形成,QF－8降低肺动脉高压作用与抑制ET-1成或分泌的某些环节有关。     

缺氧性肺动脉高压发病中肺动脉平滑肌细胞增殖与凋亡变化

目的：研究缺氧性肺动脉高压发病中肺动脉平滑肌细胞增殖与凋亡变化。方法：用压缺氧法复制大鼠缺氧性肺动脉高压模型,用右心导管法测量平均肺动脉压,称量法计算右心室肥大指数,HE染色结合形态计量分析进行缺氧性肺血管重塑观察,Tunel法行肺动脉平滑肌细胞凋亡检测。结果：缺氧7d大鼠平均肺动脉压开始升高,肺动脉出现缺氧性肺血管重塑;缺氧14d及21d平均肺动脉压进一步升高,缺氧性肺血管重塑更明显,右心室肥大指数增加。对照组及缺氧3d、7d、14d、21d组肺动脉平滑肌细胞凋亡指数差异无显著意义。平均肺动脉压与WA％（血管壁横断面积与血管横断面积比值）及右心室肥大指数呈正相关,WA％与肺动脉平滑肌细胞凋亡指数之间无直线相关关系。结论：缺氧性肺动脉高压发病中肺动脉平滑肌细胞增殖同时不伴有凋亡水平的显著变化。     

心脉隆对肺动脉平滑肌细胞缺氧损伤的保护作用

目的:研究心脉隆(XML)注射液对人源性肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)缺氧损伤的保护作用,探讨XML降低肺动脉高压(PAH)的可能机制?方法:利用Na2S2O4建立缺氧模拟肺动脉高压细胞缺氧模型,流式细胞术观察缺氧刺激下细胞凋亡率,实时定量PCR检测凋亡相关基因表达,采用激光共聚焦法检测细胞膜电位?胞浆钙离子的表达变化?结果:在缺氧情况下,与对照组比较,PASMCs 增殖显著,Bcl-2基因表达增高,Bax表达下调,具有显著性差异(P < 0.05)?而XML能显著抑制缺氧过程中Bcl-2基因表达上调及Bax基因表达的下调,差异具有统计学意义(P < 0.05)?此外,XML能稳定细胞膜电位和降低胞浆钙浓度,抑制缺氧诱导的PASMCs增殖?结论:XML可减轻因缺氧引发的PASMCs凋亡减少而导致的平滑肌增殖重塑,为XML用于临床肺动脉高压的治疗提供实验依据?     

C-myc反义核酸对内皮素诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖抑制作用的研究

应用不同浓度的Ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸处理体外培养的经１０－８ｍｏｌ／Ｌ内皮素－１（ＥＴ－１）诱导的人肺动脉平滑肌细胞,通过细胞计数和３Ｈ－ＴｄＲ掺入值观察该反义核酸对细胞增殖及ＤＮＡ合成的抑制作用,应用斑点杂交法检测平滑肌细胞Ｃ－ｆｏｓ和Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ的表达水平。结果表明,１０、２０、５０μｇ／ｍｌ反义寡核苷酸对细胞计数和３Ｈ－ＴｄＲ掺入值与对照组相比抑制率分别为１１．９％和１２．３％（Ｐ＜０．０５）,２１．６％和１４．７％（Ｐ＜０．０１）,３６．３％和２７．２％（Ｐ＜０．０１）;对Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达抑制率分别为７１．３％（Ｐ＜０．０５）,８０．７％（Ｐ＜０．０５）,９２．５％（Ｐ＜０．０１）;５０μｇ／ｍｌ反义核酸对Ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ表达抑制率是７９．７％,１０、２０μｇ／ｍｌ组无抑制作用。Ｃ－ｍｙｃ反义核酸能显著抑制内皮素诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖,其作用系依赖反义核酸的序列特异性和剂量依赖。     

Rho激酶在缺氧性肺动脉平滑肌细胞中的表达

目的：探讨缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖及其中Rho激酶表达的影响。方法：分别在常氧和缺氧12、24和48h条件下体外培养大鼠PASMC，应用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖情况，流式细胞术测定细胞周期，同时用蛋白印迹杂交（Western blot）检测Rho激酶的表达情况。结果：PASMC比色吸光度A值缺氧12h增大，24h最高，48h下降但仍高于常氧对照组；流式细胞术分析细胞周期，G2／M期细胞缺氧组均显著高于常氧组；Western blot结果分析各缺氧组Rho激酶表达明显高于常氧组。结论：缺氧诱导PASMC增殖，促使细胞进入有丝分裂期，同时，Rho激酶表达的增强可能是缺氧诱导PASMC增殖的重要机制之一。     

不同低氧时间诱导的肺动脉平滑肌细胞m iR-214表达的动态变化

目的：观察不同低氧时间诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）微小RNAs（miRNA）‐214表达的变化。方法将原代培养的大鼠PASMCs分别于低氧下培养0、6、12、24和48 h ,采用实时荧光定量PCR（RT‐PCR）检测各组细胞miR‐214的表达情况。结果大鼠PASMCs的miR‐214表达随低氧时间的延长呈持续升高趋势,除低氧6 h组与低氧0 h组相比较,miR‐214的表达差异无统计学意义（P＞0．05）外,其余各组之间miR‐214的表达差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论低氧诱导后,miR‐214在PASMCs中的表达上调,且随着低氧时间的延长,miR‐214的表达有逐渐增加的趋势。     

内皮素诱导人肺动脉平滑肌细胞增殖及c-fos、c-myc癌基因表达的研究

<正>肺小血管构型重建和肺动脉收缩反应增强是肺动脉高压的血管变化特点,其主要表现形式是平滑肌细胞过度增殖及其表型的改变。内皮素(Endothelin,ET)是由血管内皮细胞合成释放的强效缩血管肽和血管平滑肌细胞有丝分裂原。内皮素是否可以促进人肺动脉平滑肌细胞增殖及促增殖效应的信号传递途径目前还未见报道。我们以人肺动脉平滑肌细胞为研究对象,观察不同浓度的内皮素-1(ET-1)对细胞增殖和c-fos、c-myc癌基因表达的影响,从分子生物学水平探讨先天性心脏病肺动脉高压的发病机制并为其防治提供理论依据。