十八反药对甘草与甘遂配伍前后及其相应经方甘遂半夏汤对大鼠脏器及生化指标影响的研究

目的:通过研究十八反药对甘草与甘遂配伍前后及其相应经方甘遂半夏汤对大鼠脏器及生化指标的影响,考察配伍对十八反药对甘草与甘遂的毒性变化影响。方法:将大鼠分为对照组、甘草组、甘遂组、甘遂+甘草组及甘遂半夏汤组,给予相应药液灌胃给药,连续7d。取血清检测谷氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总蛋白(TP)及白蛋白(ALb),并取心、肝、脾、肾计算脏器指数。结果:各组间脏器指数比较差异无统计学意义;甘草+甘遂组与对照组及甘遂半夏汤组ALT和AST相比显著增高差异有统计学意义。结论:十八反药对甘草配伍甘遂对肝功能有损伤,即配伍之后毒性增加,属于配伍禁忌,与传统中医药理论相吻合;但甘遂半夏汤全方配伍之后可显著降低甘草伍甘遂的毒性,说明十八反药对只要合理配伍也可用于临床,研究结果也为十八反药对自古至今的广泛使用提供了一定的实验依据。     

甘遂配伍甘草对大鼠肝脏CYP3A2影响

目的: 研究中药"十八反"中甘遂与甘草配伍对大鼠肝脏CYP3A2在mRNA 水平、蛋白表达及酶活性方面的调控作用.方法: RT-PCR 检测大鼠肝脏CYP3A2 mRNA水平;Western Blotting 检测大鼠肝脏CYP3A2蛋白表达;通过红霉素N-去甲基反应评价CYP3A2酶活性.结果: 在mRNA水平、蛋白表达、酶活性方面,甘遂单用组均高于其他组.结论: 甘遂、甘草可能存在基于药物代谢酶机制的药物间相互作用.     

甘草甘遂不同配伍比例对大鼠肾功能的影响

目的：：观察长期灌胃甘草甘遂不同配伍比例水煎剂对大鼠肾功能的影响。方法：50只SD大鼠随机分为正常对照组,甘遂组,甘遂配伍甘草1：0.25组、1：0.5组和1：1组,每组10只大鼠,各组大鼠均连续灌胃给药28天。检测大鼠血肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)的含量,HE染色观察肾脏形态结构的变化。结果：各用药组大鼠血Cr和BUN的含量明显高于正常对照组大鼠,以甘遂组最为显著(P＜0.01,P＜0.05);甘遂甘草配伍组,随甘草比例的增加,大鼠血Cr和BUN的含量逐渐降低(P＜0.01,P＜0.05)。各用药组大鼠肾脏形态结构均发生不同程度的病理变化,以甘遂组最为严重;甘遂甘草配伍组,随甘草比例的增加,肾脏的病理变化逐渐减轻。结论：长期使用甘遂对大鼠肾脏具有明显的毒性作用,甘草与甘遂配伍具有减轻甘遂对肾脏毒性作用的功效,且与甘草的比例有关。     

甘草甘遂伍用对大鼠心肝肾功能及形态的影响

目的：观察中药十八反中甘草与甘遂同用时对Wistar大鼠心,肝,肾功能及形态的影响。方法：单味药甘草及单味药甘遂各100s分别加水200ml,煎煮浓缩至50ml药液,配伍组将甘草及甘遂各100g加水400ml,煎煮浓缩至50ml药液,共20只大鼠分成甘草组,甘遂组,甘草＋甘遂组及对照组4组,每组各5只大鼠,采用灌胃法,药物剂量按0．2ml/10g大鼠计算,每日灌胃一次,连续7d,对照组灌服生理盐水,观察大鼠心,肝,肾功能及形态的变化。结果：配伍组对大鼠心,肝,肾功能有明显影响,而对肾功能无影响,对大鼠心,肝,肾组织形态有较轻微影响,但属可逆性改变。结论：甘草,甘遂同用后有一定的副作用,临床尚需谨慎使用。     

氯美噻唑对乙醇诱导大鼠肝损伤的抑制作用研究

目的 探究氯美噻唑（CMZ）在乙醇诱导大鼠肝损伤模型中的作用。方法 将32 只雄性SD 大 鼠随机分为4 组：葡萄糖对照组、乙醇模型组、乙醇＋ CMZ 组、葡萄糖＋ CMZ 组，每组8 只。乙醇模型 组大鼠连续2 个月灌胃乙醇[0.1 ml/（kg·d）]，乙醇＋ CMZ 组、葡萄糖＋ CMZ 组连续2 个月灌胃CMZ 80 mg/（kg·d）。2 个月后体内采用6- 羟基氯唑沙宗/ 氯唑沙宗比值评估氯唑沙宗（CHZ）代谢的程度，以 检测大鼠体内细胞色素P450 2E1（CYP2E1）的活性；眼眶取血检测血浆乙醇浓度和谷丙转氨酶活性；随后 处死所有大鼠，分离肝脏，比较各组相对肝重，制备肝匀浆，检测大鼠肝脏蛋白酶体的活性，制备肝微粒体， 采用Western blot 检测大鼠肝脏CYP2E1、CYP3A、CYP4A 相对表达量；固定光镜观察肝组织病理学变化。 结果 乙醇+CMZ 组与乙醇模型组相比，能够降低大鼠肝损伤（P <0.05）。乙醇能够诱导CYP2E1 蛋白的表 达，乙醇+CMZ 组同样诱导CYP2E1 的表达。CMZ 抑制乙醇模型组大鼠体内乙醇诱导的CYP2E1 活性，但 未影响CYP2E1 蛋白的表达。同样，CMZ 阻断乙醇诱导的蛋白酶体活性下降。结论 CMZ 通过抑制大鼠体 内CYP2E1 的活性，而降低乙醇诱导的肝损伤。     

黄药子与甘草配伍对大鼠肝脏CYP450基因表达的影响

目的研究甘草减轻黄药子肝损伤及对CYP450基因表达的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应技术检测大鼠肝脏CYP1A2、CYP2C19的mRNA的表达。结果在mRNA水平上,28、35 d黄药子组显著诱导CYP1A2的基因表达,配伍甘草后表达降低,差异具有统计学意义。结论甘草通过抑制CYP1A2的mRNA表达,对黄药子致肝损伤具有一定的保护作用。     

十八反中部分禁忌中药的毒理实验研究

观察十八反中部分禁忌中药 (甘草反甘遂、大戟、海藻、芫花 )同用后的毒副反应。分为单味药组 5组和配伍药组 4组 ,每组又各分为对照组及实验组。实验组灌胃给药 ,对照组灌服生理盐水。用药 7ｄ后检测肝功、肾功及心肌酶谱 ,同时作肝脏、肾脏及心脏组织病理切片 ,并观察实验动物各系统症状指征。结果 :单味药甘草、甘遂、大戟、海藻、芫花同导致ＡＴＬ升高 ,而甘遂和芫花可导致ＣＰＫ(肌酸磷酸激酶 )、ＬＤＨ(乳酸脱氨酶 )、ＨＢＤＨ(γ 羟丁酸脱氢酶 )的升高 ,配伍药物对实验大鼠循环、消化、神经系统有不同程度的损害。甘草配甘遂、甘草配…     

“藻戟遂芫”与甘草合用对肠组织P糖蛋白转运功能的影响

目的 从离体肠组织P糖蛋白（P-gp）活性的角度,探讨中药“十八反”中“藻戟遂芫”与甘草合用产生禁忌的可能机理。方法 以罗丹明123（R123）作为指示剂,采用Ussing-chamber技术观察“藻戟遂芫”与甘草合用对大鼠离体回肠组织P-gp转运活性的影响。结果 甘草能明显促进R123的分泌（P<0.01）,该作用可被P-gp抑制剂维拉帕米抑制;海藻、甘遂与芫花显著促进R123的分泌（P<0.05）;海藻、大戟、芫花与甘草合用后R123分泌量与甘草组相比均明显下降（P<0.01）;而甘遂与甘草合用后差异不显著。结论 甘草能明显诱导P-gp活性,与海藻、大戟、芫花合用后甘草对P-gp活性的诱导作用被拮抗,该作用可能导致药物毒性成分外排减少,肠组织损伤加剧,提示一些有毒中药与甘草合用后,肠组织P-gp活性的改变可能引起减效或增毒的相反效应。      

中药对细胞色素P450 2E1影响的研究进展

细胞色素P450 2E1(CYP2E1)不仅参与药物代谢，还能催化许多前毒物和前致癌物的活化过程。近年发现许多中药能抑制或诱导CYP2E1活性，从而导致有益的和不利的药物相互作用。以近年国内外文献报道以及相关研究为依据，综述了中药有效成分、提取物和单复方对CYP2E1的影响，以及CYP2E1介导的中药药物相互作用，并对其影响机制进行简要介绍。以期为中药的临床合理使用，提高其有效性和安全性提供参考。     

中药十八反中部分禁忌中药的毒理实验研究

目的：观察十八反中部分禁忌中药（甘草反甘遂、大戟、海藻、芫花）同用后的毒副反应。方法：分为单味药组5组和配伍药组4组,每组又各分为对照组及实验组。实验组灌胃给药,且灌服生理盐水。用药7天后检测肝功、肾功及心肌酶谱,同时作肝脏、肾脏及心脏组织病理切片,并观察实验动物各系统症状指征。结果：单味药甘草、甘遂、大戟、海藻、芫花对实验大鼠均无明显影响,对肾功之尿素氮、肌酐及功之总蛋白等亦无明显影响。但大戟、芫花可导致ATL升高,而甘遂和芫花可导致CPK、LDH、HBDH的升高。配伍药物对实验大鼠循环。消化、神经系统有不同程度的损害,甘草配甘遂、甘草配芫花可导致实验动物心率加快。配伍组药物可导致实验动物ALT升高、心肌酶谱各指标异常变化。各配伍组药物对实验动物脏器组织及血管影响较单味药明显增强,大部分配伍药物组对实验物各系统的损害及对肝功、心肌酶谱等的影响较单味药物组增强。结认：相反药配伍后存在着一定的毒副作用。     

曲马多对大鼠CYP450及其肝功能的影响

目的 考察曲马多依赖性大鼠模型肝脏CYP450酶活力及肝功能指标的变化。 方法 将30只SD大鼠分为空白组、阳性对照组和实验组,每组10只,各组分别以生理盐水、80 mg/(kg·d)苯巴比妥和60 mg/(kg·d)曲马多灌胃给药,建立曲马多依赖性大鼠模型;采用Cocktail体外孵育法结合液质联用(LC-MS)技术测定大鼠肝脏中CYP1A2、CYP2B1、CYP2C11、CYP2D2、CYP2E1、CYP3A1各同工酶酶活性;RT-qPCR技术对上述同工酶的mRNA表达水平进行检测;血生化仪分析肝功指标。 结果 ①与空白组相比,阳性对照组CYP1A2、CYP2B1、CYP2C11、CYP2E1、CYP3A1酶活性分别为(190.15±33.58)、(98.02±36.00)、(1 348.79±40.76)、(3 214.66±133.51)、(292.76±33.32)μg/ml,显著高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05);②与空白组相比,阳性对照组CYP1A2、CYP2B1、CYP2C11、CYP2E1、CYP3A1 mRNA表达显著上调,分别上调(89.88±14.22)%、(95.12±16.00)%、(351.25±32.33)%、(556.85±42.88)%、(52.56±11.12)%,差异有统计学意义,CYP2D2 mRNA无明显变化。实验组CYP1A2、CYP2B1、CYP2E1、CYP2D2 mRNA表达分别上调(75.12±21.45)%、(66.32±18.14)%、(81.35±23.55)%、(382.74±33.25)%,差异有统计学意义,CYP2C11、CYP3A1 mRNA表达无明显变化。③在肝脏生化指标水平上,与空白组相比,阳性对照组和实验组ALT、AST、LDH含量均明显上升,差异有统计学意义。 结论 曲马多滥用会诱导大鼠CYP1A2、CYP2B1、CYP2E1和CYP2D2酶活性升高和肝脏损伤。      

异甘草酸镁对CCl4致急性肝损伤大鼠肝组织CYP1A2、CYP2E1蛋白及其mRNA表达的影响

目的 观察异甘草酸镁对CCl4致急性肝损伤大鼠肝组织CYP1A2、CYP2E1蛋白及其mRNA表达的影响,从代谢酶方面探讨异甘草酸镁保肝作用的机制。方法 将大鼠分为正常对照组、模型组和给药组,每组6只。尾静脉注射给药,给药组给予20 mg/kg异甘草酸镁,正常组及模型组给予同容积生理盐水,连续14 d。模型组及给药组于给药第13天20：00点灌胃25% CCl4,剂量为1.6 mL/kg,制备大鼠急性肝损伤模型。各组大鼠于末次给药2 h后,从髂动脉放血处死,取肝组织进行苏木精-伊红染色,观察肝组织病理形态变化;采用RT-PCR及Western-blot检测各组大鼠肝组织中CYP1A2、CYP2E1 蛋白及mRNA表达水平。结果 肝组织病理学检查显示异甘草酸镁能改善肝组织损伤;模型组CYP1A2和CYP2E1蛋白及mRNA表达水平显著高于正常对照组（P<0.05）,给药组CYP1A2和CYP2E1蛋白及mRNA表达水平较模型组显著降低（P<0.05）。结论 异甘草酸镁能够治疗肝损伤,其减毒机制可能与抑制CYP1A2、CYP2E1的表达有关。     

疏肝消脂Ⅲ方胶囊对非酒精性脂肪肝大鼠CYP2E1基因表达的影响

目的 探讨疏肝消脂Ⅲ方胶囊对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠的防治作用及对肝组织细胞色素P4502E1mRNA表达的影响.方法 用高脂乳剂灌胃建立NAFLD大鼠模型,于灌胃第6周末形成脂肪肝后,给予疏肝消脂Ⅲ方胶囊和水飞蓟宾胶囊4周,在光镜下观察各组肝脏病理变化,并通过荧光定量(qPCR)法测定大鼠肝组织CYP2E1的mRNA的表达情况.结果 与模型组相比,各药物组肝脏病理变化改善;疏肝消脂Ⅲ方组CYP2E1的mRNA水平较模型组降低(P<0.05).结论 疏肝消脂Ⅲ方胶囊能明显改善高脂饮食大鼠脂肪肝病理学变化,抑制NAFLD氧化应激反应,保护肝脏,作用机制可能与CYP2E1表达有关.     

维生素E对二(口恶)英染毒小鼠肝脏细胞色素P450酶基因转录的影响

目的研究维生素E对2,3,7,8-四氯代二苯并二噁英(TCDD)染毒小鼠肝脏细胞色素P450酶1A1、1A2、1B1基因转录的影响。方法设计了5个实验组,将45只小鼠随机分为5组,5组动物给予TCDD和维生素E的水平依次为:TCDD0 ng/kg和VE0 mg/kg、TCDD100 ng/kg和VE0 mg/kg、TCDD100 ng/kg和VE20 mg/kg、TCDD100 ng/kg和VE100 mg/kg、TCDD100 ng/kg和VE500 mg/kg。喂食4周后取其肝脏,用real-time PCR法测小鼠细胞色素P450酶1A1、1A2、1B1基因mRNA水平。结果TCDD染毒小鼠肝脏细胞色素P450酶1A1、1A2 mRNA水平与对照组相比有升高的趋势,而细胞色素P450酶1B1 mRNA水平明显降低。染毒并给予维生素E20 mg/kg组,其肝脏CYP4501A1的mRNA水平有降低趋势,随着维生素E剂量的增加,YP450 1A1的mRNA水平反而有升高的趋势,当维生素E剂量为500 mg/kg时,其肝脏CYP450 1A1的mRNA明显高于TCDD染毒组。CYP450 1A2的mRNA水平随着维生素E剂量的增加有降低的趋势,在TCDD染毒并给予维生素E500 mg/kg组,其肝脏CYP450 1A2的mRNA水平明显低于TCDD染毒组。而肝脏CYP450 1B1的mRNA水平在染毒并给与维生素E500 mg/kg组,与染毒组相比有上调趋势。结论TCDD能影响或部分影响小鼠细胞色素P450酶1A1、1A2、1B1的基因转录,而维生素E能在一定程度上缓解TCDD的作用。     

孕期和哺乳期暴露壬基酚对仔鼠肝脏细胞色素P450 2E1 mRNA及蛋白表达的影响

目的 探讨孕期和哺乳期暴露壬基酚(NP)对仔鼠肝脏细胞色素P450 2E1 (CYP2E1) mRNA和蛋白表达的影响.方法 将孕鼠分为低、中、高剂量染毒组(分别给予50、100、200 mg·kg-1·d-1 NP染毒)和对照组,孕鼠受孕第6天到仔鼠出生21 d灌胃染毒NP.仔鼠出生90 d后处死,检测血清肝功能指标及血脂水平,观察肝脏病理学变化,测定肝组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)水平,检测CYP2E1 mRNA和蛋白表达水平.结果 与时照组比较,各染毒组仔鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平及AST/ALT比值均升高(P＜0.05),且随染毒剂量的增加呈上升趋势;血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平均较对照组升高(P＜0.05).对照组仔鼠肝组织结构正常,低剂量染毒组仔鼠肝脏肝窦轻度扩张,中剂量染毒组仔鼠肝脏有轻度炎性细胞灶性浸润,高剂量染毒组仔鼠肝脏有大量脂滴存在.各染毒组仔鼠肝组织SOD、GSH-PX活性明显低于对照组(P＜0.05),MDA水平明显高于对照组(P＜0.05).中、高剂量染毒组与对照组比较CYP2E1 mRNA和蛋白表达水平均升高(P＜0.05).结论 孕期和哺乳期暴露NP,可致仔鼠肝脏脂质代谢紊乱及炎性损伤,可能与肝脏CYP2E1表达上调有关.     

夏枯草总三萜对四氯化碳致急性肝损伤大鼠的保护作用

目的研究夏枯草总三萜(TTP)对大鼠急性肝损伤的保护作用。方法 60只SD大鼠随机均分为对照组、模型组、TTP(62.5、125、250 mg/kg)3个剂量组和联苯双酯(200mg/kg)组。各给药组及联苯双酯组预防给药6 d,第6天给药结束后腹腔注射50%CCl4(2 ml/kg)诱导大鼠急性肝损伤模型,观察TTP对大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平的影响以及对肝匀浆中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平的影响;肝组织HE染色;RT-PCR法、West-ern blot法检测肝组织细胞色素P4502E1(CYP2E1)表达。结果 TTP各剂量组可降低急性肝损伤大鼠血清中ALT、AST活性,降低肝匀浆MDA的水平,升高SOD、GSH-Px的水平,抑制肝组织中CYP2E1的表达;同时,病理组织学检查结果显示TTP各剂量组大鼠肝组织病变程度明显减轻。结论TTP对CCl4致大鼠急性肝损伤具有一定的保护作用,其机制可能与抗机体脂质过氧化、抑制CYP2E1表达有关。     

大鼠肝脏D-双功能蛋白活性增加与胆汁酸合成的关系

目的研究D-双功能蛋白(DBP)活性增加对胆汁酸合成的影响,从整体水平上探讨DBP在胆汁酸合成中的作用.方法将20只雄性Wistar大鼠随机分为邻苯二甲酸二异辛酯(DEHP)组(n=10)和对照组(n=10).分别测定两组大鼠血清甘油三酯和总胆固醇的变化,肝脏过氧化物酶体增殖剂激活受体α(PPARα)、DBP和胆固醇7αt-羟化酶(CYP7A1)mRNA的变化,以及DBP活性和粪中胆汁酸含量.结果与对照组相比,DEHP组大鼠血清甘油三酯明显降低(P＜0.01),肝脏PPARα mRNA表达明显增加(P＜0.01).在DBP mRNA表达及活性升高(P＜0.01)的同时,CYP7A1 mRNA表达加强,是对照组的1.6倍(P＜0.01);粪中胆汁酸排出增加,是对照组的1.9倍(P＜0.01).DBP mRNA水平及其活性与CYP7A1 mRNA水平均呈明显的正相关(r=0.89,P＜0.01;r=0.95,P＜0.01).结论DBP mRNA表达及活性的升高,可引起CYP7A1表达及胆汁酸合成增加,DBP协同CYP7A1参与胆汁酸的生物合成.     

Hsa-miR-660负调控人类肝脏组织中药物代谢酶CYP3A4的表达

 【摘要】目的 探讨Hsa-miR-660 (简称miRNA-660)是否参与调控人类重要I相药物代谢酶CYP3A4的表达,是否影响人类肝脏组织中的CYP3A4酶活性。方法 生物信息学预测出miRNA-660可以作用于CYP3A4基因mRNA 3′端非编码区(3′untranslated region,3′UTR);细胞转染和双萤光素酶报告实验进一步验证miRNA-660能直接作用于CYP3A4 mRNA 3′UTR;收集28例人肝脏组织,检测其成熟miRNA-660表达量、CYP3A4的mRNA和蛋白质表达量及酶活性;将miRNA-660表达水平与CYP3A4 3种表达水平进行Pearson两两回归分析,探索miRNA 660与CYP3A4表达之间的相关性,从而推测miRNA-660在调控CYP3A4表达中的作用。结果miRNA-660能直接作用CYP3A4 mRNA 3′UTR(t检验,P=0.017),miRNA-660表达量与CYP3A4 mRNA表达量无显著相关性(P=0.20),但与CYP3A4蛋白表达量、酶活性负相关(P<0.05)。结论 在肝脏组织中,miRNA 660虽然不影响CYP3A4基因的mRNA表达,但可能在翻译水平抑制其蛋白质表达及酶活性,负调控CYP3A4基因的翻译过程。miRNA 660可能直接参与调控人肝脏组织中CYP3A4的表达,miRNA可能是引起人群中CYP3A4酶活多态性的重要原因之一。     

甜菜碱对非酒精性脂肪性肝炎大鼠氧化应激及炎症因子的影响

目的:研究甜菜碱对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝脏组织氧化应激、炎症因子的影响,探讨其作用机制。方法:将32只Wistar大鼠随机分成4组:正常组、模型组、低剂量甜菜碱干预组和高剂量甜菜碱干预组。除正常组外,其余3组给予高脂肪饲料加入诱导脂肪肝药物丙基硫氧嘧啶饲养,构建NASH大鼠模型,同时对低剂量(200 mg/kg)、高剂量(400 mg/kg)甜菜碱干预组大鼠以甜菜碱溶液灌胃。第12周末处死全部大鼠。应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测大鼠肝组织中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-10(IL-10)、细胞色素相关因子(CYP3A2、CYP2E1)的mRNA水平,常规生化方法检测肝组织一氧化氮(NO)、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)水平,并进行肝脏病理组织学检查。结果:与正常组比较,模型组大鼠肝组织损伤严重,该组织中的TNF-α、IFN-γ、CYP2E1 mRNA表达明显增强,IL-10 mRNA的表达明显减弱(P<0.01),MDA、NO水平显著升高(P<0.05或P<0.01),CYP3A2升高无统计学差异(P>0.05);与模型组相比,低、高剂量甜菜碱组肝组织损伤减轻,该组织中的TNF-α、IFN-γ、CYP2E1 mRNA表达明显减弱,IL-10 mRNA的表达显著增强(P<0.05或P<0.01),MDA、NO水平显著降低(P<0.05或P<0.01);且低、高剂量甜菜碱组之间有统计学差异(P<0.05或P<0.01)。结论:甜菜碱可减轻非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝脏的炎症和坏死,其机制可能为改善丙基硫氧嘧啶对大鼠肝组织的氧化应激状态、抑制肝细胞炎症因子与iNOS mRNA的表达等。