原发性肾病综合征患者外周血共刺激分子CD28的表达及其临床意义

目的研究原发性肾病综合征(PNS)患者外周血共刺激分子CD28的表达变化特点,以及这种变化与激素敏感性的关系,探讨其在PNS免疫发病机制中的作用。方法采用免疫荧光标记和流式细胞仪分析方法,对32例PNS患者外周血T细胞亚群和共刺激分子CD28的表达进行研究。结果(1)肾病综合征发作组(包括激素有效组和无效组)共刺激分子CD28表达明显低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.001),并且CD4 CD28 T细胞和CD8 CD28 T细胞均明显低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)激素有效组尿蛋白转阴后CD28分子水平明显上升,且CD4 CD28 T细胞和CD8 CD28 T细胞均较治疗前明显上升,差异有统计学意义(P<0.01);而激素无效组上述三个指标在激素治疗前后的变化无统计学意义(P>0.05)。(3)不完全缓解组和持续缓解组CD28 T细胞、CD4 CD28 T细胞和CD8 CD28 T细胞均恢复至正常对照组水平。(4)首发和复发患者之间共刺激分子CD28、CD4 CD28 T细胞和CD8 CD28 T细胞之间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论PNS患者外周血T细胞活化所必需的共刺激分子CD28异常表达可能在PNS发生和病变进展中起着重要作用;糖皮质激素可使PNS患者外周血CD28异常表达被逐渐纠正,可能是其治疗肾病综合征的机制之一。     

梅毒患者外周血淋巴细胞CD28-B7分子的表达及意义

目的探讨CD28-B7 T淋巴细胞活化协同刺激分子在梅毒发病、发展及转归中的作用。方法应用流式细胞仪和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）对60例梅毒患者（早期梅毒患者和血清固定患者各30例）和30例正常人外周血淋巴细胞中B7（CD80/CD86）及CD4＋T淋巴细胞中CD28的表达进行检测。结果①梅毒患者外周血淋巴细胞表面CD28的表达水平低于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;血清固定组和早期梅毒组比较,CD28表达水平的差异无统计学意义（P〉0.05）。②梅毒患者外周血淋巴细胞CD80及CD86的表达水平明显低于正常对照组（P〈0.05）,但CD80和CD86的表达水平在血清固定组和早期梅毒组间无统计学意义（P〉0.05）。结论本研究提示梅毒患者外周血淋巴细胞表面CD80、CD86及其受体CD28的表达下调,通过影响CD28-B7协同刺激通路,抑制T细胞尤其是CD4＋T淋巴细胞活性功能,可能参与了梅毒的发病、发展及转归过程。     

共刺激分子CD28单克隆抗体制备的新策略

目的 发展一种制备抗人CD28单克隆抗体的新方法。方法 构建编码人CD28基因的逆转录病毒表达系统,感染BALB／c小鼠骨髓瘤细胞NS－1,使其细胞膜表达CD28抗原并用于免疫小鼠,制备单克隆抗体。结果 获得分泌抗人CD28单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为E66－3S,IgG亚类鉴定为IgG1。该株单抗能够特异性识别CD28阳性的T细胞,并完全阻断标准CD28抗体与细胞表面CD28抗原结合。在亚剂量分裂原的共刺激下,具有促进T淋巴细胞活化和增殖作用。结论 E66－3S具有高度特异性和共刺激活性,为临床免疫治疗奠定了基础,同时,也为进一步制备其它膜抗原的单克隆抗体提供了一种新途径。     

可诱导共刺激分子及其配体与系统性红斑狼疮的研究进展

可诱导共刺激分子(ICOS)及其配体可诱导共刺激分子配体(ICOSL)是CD28/B7家族第三个成员,在系统性红斑狼疮的发生发展中发挥重要作用。近些年,ICOS/ICOSL在SLE的治疗方面的研究逐年深入,为临床SLE治疗提供了新思路。本文主要就ICOS/ICOSL与SLE关系进行概述。     

骨髓增生异常综合征患者骨髓CD4~+T细胞共刺激分子CD28/CTLA-4的变化

目的通过检测骨髓增生异常综合征（MDS）患者CD3^＋CD4^＋T细胞表面CD28^＋和CTLA-4^＋分子水平,探讨两者在MDS发病机制中的作用。方法用流式细胞技术检测38例初治MDS患者和11例正常对照组外周血CD3^＋CD4^＋T细胞表面CD28^＋和CTLA-4^＋表达率。结果（1）MDS组CD3^＋CD4^＋CD28^＋表达率为（79.82&#177;8.99）%[难治性贫血（RA）（78.65&#177;10.4）%、伴原始细胞增多性难治性贫血（RAEB）/转变中的原始细胞增多性难治性贫血（RAEB-t）（80.10&#177;7.28%）],低于正常对照组的（89.56&#177;3.06）%,差异有高度统计学意义（P﹤0.01）;（2）MDS组CD3^＋CD4^＋CTLA-4^＋表达率为（2.14&#177;1.25）%[RA（1.51&#177;0.80）%、RAEB/RAEB-t为（2.65&#177;1.33）%],显著高于正常组的（0.11&#177;0.12）%,差异有高度统计学意义（P﹤0.01）;随MDS疾病的进展,RAEB/RAEB-t组CD3^＋CD4^＋CTLA-4^＋的表达率与RA组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;（3）CTLA-4/CD28免疫应答中相互拮抗的共刺激分子对比值在MDS-RA组中为2.14&#177;0.97,RAEB/RAEB-t组为3.58&#177;1.55,高于正常对照组的0.11&#177;0.11,差异有高度统计学意义（P﹤0.01）;并且RA组和RAEB/RAEB-t组之间的差异亦有高度统计学意义（P﹤0.01）。结论（1）MDS患者骨髓的CD3^＋CD4^＋T细胞表面的共刺激分子表达异常,CD28下调,CTLA-4上调,T细胞处于抑制状态;（2）随着MDS骨髓中原始细胞的增多,CD28/CTLA-4比值增高,进一步说明CD28/CTLA-4异常与MDS疾病的发生及进展相关。     

可诱导共刺激分子及其配体在系统性红斑狼疮发病及治疗中的作用

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)是一种复杂的自身免疫性疾病,其特征是免疫耐受性丧失和免疫细胞过度活跃,共同导致多器官多系统中自身抗体的产生和抗体引起的组织损伤,其多器官、多系统损害与T细胞活化、B细胞增殖及炎症因子异常密不可分[1-2].     

共刺激分子CD28和B7在关节炎发病中的作用

目的：探讨Ｂ７;ＣＤ２８共刺激信号在关节炎发病机制中的作用。方法：经牛Ⅱ型的（ＢⅡＣ）诱导ＳＤ大鼠建立关节炎动物模型,分析抗Ｂ７－１和抗Ｂ７－２抗体对关节炎大鼠临床症状和特异性免疫反应的影响。结果：抗Ｂ７－１抗体可阻止ＳＤ大鼠发生胶原诱地性关节炎,降低大鼠对ＢⅡＣ的体液免疫反应。结论：Ｂ７;ＣＤ２８共刺激信号在诱发Ｔ细胞介导的自身免疫疾病中起作用,抗Ｂ７－１抗体具有潜在的治疗作用。     

乙肝患者外周血T淋巴细胞上CD28表达及临床意义

目的:研究乙肝患者外周血CD4 T淋巴细胞亚群、CD8 T淋巴细胞亚群CD28分子表达变化。探讨外周血T淋巴细胞CD28的表达对乙型肝炎患者的免疫学意义及临床意义。方法:应用流式细胞仪检测乙肝患者。结果:急性乙型肝炎患者CD8 、CD28 T淋巴细胞明显高于正常对照组和慢性乙型肝炎患者(P<0.01)。慢性乙型肝炎轻中度和重度患者CD4 、CD28 T淋巴细胞、CD8 、CD28 T淋巴细胞明显低于正常对照组(P<0.01),CD8 、CD28-T淋巴细胞明显高于正常对照组(P<0.01)。乙型肝炎患者CD4 /CD8 T淋巴细胞的比值明显低于正常对照组(P<0.01)。结论:乙型肝炎患者存在免疫功能紊乱。外周血淋巴细胞CD28的表达情况可以作为判断乙型肝炎病情的重要参考依据。     

稳定表达可诱导共刺激分子CHO细胞株的筛选及其生物学活性鉴定

目的:构建携带人可诱导共刺激分子(inducible costimulator molecule,ICOS)基因的重组逆转录病毒载体,筛选稳定表达ICOS蛋白的CHO细胞株,并对其生物学活性进行鉴定.方法:RT-PCR法从人PBMC中获取ICOS cDNA,定向克隆到逆转录病毒载体上,制备逆转录病毒重组体pMSCV-ICOS;经病毒包装细胞包装后抗性筛选出产高滴度病毒的细胞株,用高滴度病毒上清感染CHO细胞,抗性筛选出稳定表达细胞株.将CHO-ICOS细胞和PBMC以不同比例(1:1、1:2、1:5、1:10)共培养,加入亚刺激剂量(200 ng/ml)的抗人CD3抗体,采用3H-TdR掺入法检测PBMC的增殖,流式细胞仪检测T细胞表面活化分子CD25表达情况,并以CHO-pMSCV细胞和PBMC以 1:1比例共培养作为阴性对照以及未处理的PBMC作为空白对照.结果:成功构建逆转录病毒重组体pMSCV-ICOS,筛选出稳定表达ICOS蛋白的CHO细胞株.3H-TdR掺入法和流式细胞仪检测结果表明,与阴性对照及空白对照相比,CHO-ICOS细胞与PBMC共培养能抑制CD3抗体诱导的PBMC增殖及活化(P＜0.05或P＜0.01),细胞比例为1:1时抑制率最大,分别为(68±5.9)%、(44.08±3.26)%.结论:成功建立具有生物学活性的膜稳定表达人ICOS蛋白的CHO细胞株,为今后研究奠定了基础.     

恶性淋巴瘤患者外周血T细胞CD8~+CD28~-表达及意义

目的探讨恶性淋巴瘤患者外周血T细胞CD8^＋CD28^-表达及意义。方法采用流式细胞仪检测35例恶性淋巴瘤患者外周血T细胞CD8^＋CD28^＋及CD8^＋CD28^-。结果恶性淋巴瘤患者外周血T细胞CD8^＋CD28^＋及CD8^＋CD28^-与正常对照有显著性差异（P〈0．05）：治疗有效后两者趋于正常（P〉0．05）；而无效组与正常对照组相比仍有显著性差异（P〈0．05）。结论恶性淋巴瘤患者外周血T细胞CD8^＋CD28^＋及CD8^＋CD28^-表达异常，不同治疗效果表达不同，恶性淋巴瘤患者有免疫功能异常，治疗有效后免疫功能恢复正常。     

颈动脉粥样硬化性脑梗死患者外周血CD4＋CD28null淋巴细胞的表达及意义

目的探讨颈动脉粥样硬化（CA）性脑梗死患者外周血CD4＋CD28null淋巴细胞表达的意义。方法采用流式细胞仪检测66例CA性脑梗死,39例颈动脉正常脑梗死患者,32例健康人外周血CD4＋CD28null淋巴细胞数量。用B超检查以上人群颈动脉血管内壁粥样硬化情况。结果脑梗死患者CD4＋CD28null细胞明显高于对照组：脑梗死组中CA性脑梗死高于颈动脉正常脑梗死组;CA性脑梗死组中,颈动脉不稳定斑块组显著高于颈动脉稳定斑块组和颈动脉IMT增厚组。CA性脑梗死患者的CD4＋CD28null细胞表达CD57和CD158h,其中以颈动脉不稳定斑块组表达最高。CD4＋CD28null细胞随着脑梗死区体积增大表达增强。结论CA性脑梗死患者CD4＋CD28null细胞显著增加,可能与颈动脉粥样硬化斑块的形成及进展有关。     

结核病患者外周血T淋巴细胞CD28/CTLA-4表达及意义

目的分析结核病患者外周血共刺激分子CD28/CTLA-4(CD152)表达,评价患者的免疫状态。方法采集21例初诊结核病患者及15例健康对照者外周血,采用多参数流式细胞术检测分析共刺激分子CD28、CD152的表达,以及分析其亚群CD4+CD152+细胞、CD4+CD28+细胞、CD8+CD28+细胞、CD8+CD152+水平的变化。结果与健康者比较,结核病患者外周血CD28+细胞、CD152+细胞水平明显增高(P0.01)。对共刺激分子CD28、CD152进行亚群分析,结核病患者外周血CD4+CD152+细胞、CD4+CD28+细胞、CD8+CD152+细胞水平明显高于健康者(P0.05),CD8+CD28+细胞水平无统计学意义(F=2.647,P=0.113)。结论结核病患者外周血共刺激分子CD28/CD152(CT LA-4)表达增加,且CT LA-4在CD4+和CD8+T细胞上表达均增加,提示可能存在T细胞活化或抑制信号调节失衡。     

类风湿关节炎患者外周血和关节液中T淋巴细胞亚型和T细胞共刺激分子CD28的表达和临床意义

目的:探讨T细胞共刺激分子CD28在类风湿关节炎(RA)患者外周血和关节液中的表达和意义,同时比较T淋巴细胞亚群CD4、CD8在类风湿关节炎患者外周血和关节液中的表达和意义。方法:选取RA患者45例,平均年龄(47.57±16.43)岁,平均病程(5.84±7.19)年,男性9例,女性36例。取新鲜抗凝外周血细胞(PBMC)应用流式细胞仪进行检测。其中15例有膝关节液者同时抽取关节液单个核细胞(SFMC)行同样检测。与RA年龄和性别匹配的正常体检者54例作为对照。检测CD4、CD8、CD28、CD19(B淋巴细胞)的百分比以及CD4+和CD8+细胞分别表达CD28+的百分比。结果:类风湿关节炎外周血CD4+百分率较正常对照明显升高(P<0.01),但较关节液均明显降低(P<0.05);外周血CD8+百分率与正常对照无显著差别,而关节液细胞中CD8+百分率较外周血显著升高(P<0.01)。CD28+百分比在关节滑液细胞中较血细胞中有明显增高(P<0.01)。CD4+CD28+/CD4+百分比在类风湿关节炎患者血细胞、关节液细胞与正常对照组均无差别。CD8+CD28+/CD8+百分比在类风湿关节炎关节滑液中较血细胞中有明显增高,二者相差非常显著(P<0.01)。结论:类风湿关节炎患者外周血和关节液中T淋巴细胞亚型和T细胞共刺激分子CD28的表达异常,可能是参与RA发病和病情发展的重要机制之一。     

慢性乙型肝炎患者HBV特异性CTL的CD28表达研究

目的检测慢性乙型肝炎患者HBV特异性CTL的CD28表达情况。方法利用MHC-Ⅰ-肽五聚体（pentamer）技术结合流式多色分析技术,直接离体情况下（direct ex vivo）检测慢性乙型肝炎患者3个HLA-A2限制性的HBV表位特异性CTL表达CD28的情况。结果在22例HLA-A2^＋患者中,检测出HBcAg（18—27）特异性CTL有13例,频率为0．05％-0．16％;CD28^＋的HBcAg（18—27）特异性CTL的百分比为40％（23％-61％）。检测出HBeAg（335—343）有8例,频率为0.05％-0．24％;CD28%＋的HBeAg（335—343）特异性CTL的百分比为43％（36％-60％）。检测出HBp（575—583）特异性CTL有9例,频率为0．05％-0．19％;CD28^＋的HBpAg（575—583）特异性CTL的百分比为61％（45％-70％）。结论不同HBV抗原表位特异性CTL的CD28表达情况不同。     

急性白血病外周血T细胞CD28和CD137的表达

目的 :研究共刺激分子CD2 8和CD137(4 1BB)在人急性白血病 (AL)治疗前后外周血T细胞上的表达特点 ,探讨其与临床疗效的关系 .方法 :应用免疫荧光标记及流式细胞术 (FACS)检测了 38例AL患者治疗前后外周血T细胞表面共刺激分子CD2 8和CD137的表达 ,并分析了T淋巴细胞亚群变化情况 .结果 :①治疗前AL患者CD2 8,CD3,CD4 ,CD4 /CD8较对照组显著降低 ,而CD137显著增高 (P <0 .0 5 ) ;②治疗后完全缓解 (CR)和部分缓解 (PR)患者CD2 8,CD3,CD4 ,CD4 /CD8均较其治疗前显著增高 ,而CD137显著降低 (P <0 .0 5 ) ,CR患者接近对照者 ,而未缓解 (NR)患者以上指标无显著变化 (P >0 .0 5 ) .结论 :CD2 8和CD137是参与急性白血病发病和抗白血病免疫反应的重要共刺激分子 ,其表达异常可能是急性白血病发病机制之一且与临床疗效密切相关 ;调节T细胞上CD2 8和CD137的表达 ,纠正白血病患者细胞免疫功能缺陷 ,可能是免疫基因治疗人类急性白血病的重要手段之一 ,具有一定的临床应用价值     

Expression of Inducible Co-stimulator in Peripheral Blood T Lymphocytes in the Patients with Systemic Lupus Erythematosus

Systemic lupus erythematosus (SLE) is a pro-totypic systemic autoi mmune disease[1], whichcharacterized by B cell hyperactivity in associationwith the generation of autoantibodies .In both hu-man SLEand the murine model of lupus nephritis ,it has been shown that activation of autoantibody-producing B cells is dependent on T cell helpthrough cytokines and costi mulatory molecules .Recent report demonstrated that the anergic stateof autoreactive B cells is reversed by T helper cellsand regul…     

共刺激分子CD28/CTLA-4:B7在强直性脊柱炎患者外周血淋巴细胞中的表达

目的 探讨CD28、CTLA-4（CD152）、B7—1（CD80）及B7—2（CD86）共刺激分子在强直性脊柱炎（AS）患者的外周血淋巴细胞上的表达异常与免疫功能紊乱的关系。方法 采用流式细胞仪检测69例AS患者和50例健康对照者CD28和CTLA-4在外周血CD3^＋、CD4^＋T和CD3^＋、CD8^＋T细胞上的表达及CD80和CD86在CD19^＋B细胞上的表达。用ELISA法测定血清中免疫球蛋白IgG、IgA和IgM的水平。结果 AS患者CD3^＋、CD4^＋T和CD3^＋、CD8^＋T细胞上的CD28和CTLA-4，CD19^＋B细胞上CD80和CD86的表达较正常对照组显著增高（P〈0．05）；AS患者血清中2种免疫球蛋白IgG、IgA的水平较正常对照组显著增高（P〈0．01）。结论 AS患者T细胞上表达过量的CD28，与B细胞的B7结合，激活T、B细胞，产生大量免疫球蛋白，同时刺激激活的T细胞表达CTLA-4，使T细胞不能充分表现效应功能。     

门静脉高压症患者外周血CD80/CD28的表达

目的检测门静脉高压症(portal hypertension,PHT)患者外周血淋巴细胞中CD80/CD28的表达情况,分析其与患者淋巴细胞亚群以及免疫功能的关系。方法采用流式细胞分析技术对30例门静脉高压症患者和30例正常人进行研究,对两组人群外周血CD80/CD28和淋巴细胞进行检测。结果流式细胞仪检测显示门静脉高压症患者外周血T细胞的CD80、CD28表达明显下降,PHT患者CD4+、CD4+/CD8+以及CD19+细胞均低于正常对照,与正常人对照组相比差异均有显著性。结论 PHT患者外周血T细胞低表达CD80、CD28,不能有效激活其通路,导致免疫功能低下。