PCR技术在母婴ABO血型不合早期诊断中的临床应用探讨

目的 建立一种利用孕妇血浆中游离DNA直接检测胎儿ABO血型,用于母婴ABO血型不合的无创性产前诊断方法.方法 首先检测孕妇血浆中的抗A (B) IgG抗体,然后利用硅胶膜柱提取的方法从60例13～37 w(IgG≥1∶64)可疑母婴ABO血型不合的孕妇血浆中提取胎儿DNA,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法检测胎儿ABO血型,最后取婴儿脐血进行血清学证实.结果 60例标本中,检出51例,检出率85.0％,出生后血清学证实47例诊断正确,诊断正确率92.16％.结论 PCR技术利用孕妇血浆中游离DNA检测胎儿ABO血型可行,结果可靠,对诊断和预防母婴ABO血型不合所致溶血病的发生具有重要意义.     

利用孕妇血浆中胎儿DNA检测胎儿的ABO血型研究

目的：探讨一种胎儿ABO血型的无创性产前诊断方法。方法：从28例健康孕妇血浆中提取胎儿DNA,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）法检测胎儿ABO血型,通过出生后全血血清学检测证实。结果：28例样本中,产前检查能正确显示胎儿血型的有22例,总准确率为78．6％。结论：利用孕妇血浆中胎儿DNA诊断胎儿ABO血型,是一种简便可行的无创性方法,值得推广应用。     

139例O型孕妇外周血DNA检测胎儿血型准确度分析

目的探讨利用PCR-RFLP技术建立从O型孕妇外周血中提取DNA检测胎儿血型的实验方法的准确性。方法胎儿出生前提取139例丈夫为非O型的O型孕妇外周血DNA,根据ABO基因特点设计PCR引物,扩增目的片段,用KpnⅠ、AluⅠ限制性内切酶对PCR产物进行酶切分析,以确定胎儿的ABO血型。胎儿出生后用脐带血进行血清学血型检测,对比新生儿出生前后血型检测的符合率。结果 139例新生儿出生前后血型检测符合率为94.24%(131/139)。孕中期血型检测符合率为91.95%(80/87),孕晚期的血型检测符合率为98.08%(51/52)。结论利用O型孕妇外周血DNA对胎儿的ABO血型进行产前诊断是一条可行的无创性检测途径,检测结果准确度高,对于母胎血型不合引起的新生儿溶血病的预防可提供有价值的诊断依据。     

孕妇血浆中游离胎儿DNA对检测胎儿ABO血型40例分析

1997年Lo等研究证实,在母体外周血中存在着相对较为丰富的游离胎儿DNA,这一发现为无创性产前诊断开辟了崭新途径[1].孕妇血浆中的游离胎儿DNA可用来检测胎儿ABO血型,对于预防新生儿溶血病、预测与ABO血型基因连锁的遗传性疾病,治疗血型不合妊娠引起的胎儿溶血性贫血等疾病,具有重要的意义．笔者提取血型为0型、丈夫血型为非0型的孕妇血浆中的胎儿DNA,采用复合PCR—RFLP方法检测胎儿ABO血型．     

１０例孕妇血浆中胎儿游离ＤＮＡ-ＳＴＲ位点检测分析

目的:探索短串连重复序列(STR)多位点检测孕妇血浆中胎儿游离DNA的可行性.方法:改进QIAamp离心柱型DNA提取方法提取10例孕中期孕妇血浆中总游离DNA,进行D3S1358、D13S317、CSFlPO、D12S391、D6S477、VWA 6个STR位点扩增,并以孕妇与胎儿羊水细胞基因组DNA为对照,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析胎儿游离DNA提取效果及检测效率.结果:10例孕中期孕妇血浆样本共检测位点60个,检出有结果位点44个,除去母体与胎儿DNA基因型完全一致的14个位点,剩余的30个位点中,18个位点成功检出胎儿DNA基因型,检出率30%.检出率最高的位点是D13S317和D12S391.结论:STR多位点的扩增可以检测得出胎儿特异性DNA序列,有望应用于无创伤性产前遗传性疾病的诊断和法医学亲子鉴定中.     

孕妇血浆中胎儿DNA的SRY基因检测

目的:探索一种孕期、快速、非创伤性的胎儿性别的产前诊断方法.方法:应用DNA-PCR扩增技术,检测妊娠5～40周的正常孕妇游离在血浆内的无细胞胎儿DNA的SRY基因.结果:90例孕妇血浆中游离DNA检则SRY基因阳性结果32例,其中早孕11例,中孕9例,晚孕12例.最后经绒毛、羊水、脐带血和出生胎儿证实均为男性胎儿,符合率为100%.结论:PCR扩增技术,检测游离在孕妇血浆内的无细胞胎儿DNA能在孕期鉴别胎儿性别,尤其是对早期某些选择性遗传性疾病的非创伤性产前诊断意义重大.     

应用巢式PCR扩增孕妇血浆中胎儿SRY基因

目的:利用孕妇血浆中胎儿DNA进行无创产前诊断.方法:对包括10例X连锁隐性遗传病携带者的60例14～22孕周孕妇的血浆DNA进行巢式PCR,扩增胎儿来源的Y染色体特异性SRY基因.结果:38例妊娠男胎的孕妇中32例出现SRY基因扩增带,灵敏度为84.2%.22例妊娠女胎的孕妇中4例出现SRY扩增带,特异性为81.8%,总符合率为83.3%(50/60).10例X连锁隐性遗传病携带者中7例妊娠男胎的孕妇中6例检出SRY基因,3例妊娠女胎的孕妇均未检出SRY基因.结论:采用巢式PCR技术检测母体血浆中的胎儿DNA进行产前性别鉴定具有较高的灵敏度和特异性,在遗传病的产前诊断中具有很大的应用前景.     

75例胎儿遗传病的产前诊断

本文总结分析了75例胎儿遗传病的产前诊断方法及结果,其中69例曾生过异常儿。75例中64例检查母体周围血及羊水中的甲胎蛋白(AFP),诊断出胎儿神经管畸形5例,但出生后发现神经管畸形者8例。利用B型超声波检查7例,均未发现异常,出生胎儿亦正常。对2例曾生过血友病患儿的孕妇做了羊水性染色质检查,判断为女性胎儿,生后证实为女婴。对2例痴呆儿及其父母查了血型,证实为ABO血型不合。     

胎儿肢体畸形产前超声诊断分析

目的:分析产前超声在胎儿畸形诊断中的临床价值,为临床诊断提供依据。方法:对132例经超声产前检查诊断为畸形胎儿的超声检查结果进行分析。结果:132例畸形胎儿中,103例为单系统畸形(78.03%);29例存在两个或两个以上系统畸形(21.97%);88例为单系统单一畸形(66.67%);44例为单系统多发畸形(33.33%)。在<25岁孕妇中,检出55例畸形胎儿(41.67%);在25²9岁孕妇中,检出37例畸形胎儿(28.03%);在3029岁孕妇中,检出37例畸形胎儿(28.03%);在30³4岁孕妇中,检出24例畸形胎儿(18.18%);在≥35岁孕妇中,检出16例畸形胎儿(12.12%)。在孕周<20周的孕妇中,检出23例畸形胎儿(17.42%);在孕周2034岁孕妇中,检出24例畸形胎儿(18.18%);在≥35岁孕妇中,检出16例畸形胎儿(12.12%)。在孕周<20周的孕妇中,检出23例畸形胎儿(17.42%);在孕周20²7周的孕妇中,检出59例畸形胎儿(44.70%);在孕周≥28周的孕妇中,检出24例畸形胎儿(37.88%)。结论:产前超声检查具有诊断准确、操作简便易行、无创伤、可反复进行检查等优点,是我国预防畸形胎儿出生的有效干预措施之一。     

彩超在母儿血型不合引起胎儿水肿中的应用

母儿ABO血型不合可引起死胎、早产、出生缺陷及新生儿溶血病。胎儿因而溶血水肿、肝脾肿大，重度黄疸甚至核黄疸。对ABO母儿血型不合进行产前诊断，可以尽早预防ABO溶血病。我们从2002年至2007年对我院门诊就诊的孕妇应用彩超共检出23例胎儿水肿，经引产及病理证实11例为母儿血型不合引起胎儿水肿，现报告如下。     

孕妇血浆胎儿DNA的父源性α地中海贫血产前基因诊断

目的检测孕妇血浆胎儿DNA的父源性东南亚缺失型α地中海贫血1（SEAα地贫1）基因突变,进行无创伤性产前基因诊断。方法应用荧光聚合酶链反应（PCR）和基因扫描方法分析10例孕妇血浆胎儿DNA的父源性SEAα地贫1基因突变及短串联重复序列（STR）;同时以常规的绒毛、羊水或脐血胎儿DNA的基因诊断结果作对照。结果10例孕妇血浆胎儿DNA均检测到父源性STR等位基因。有4例检出父源性SEAα地贫1基因突变;6例未检出父源性SEAα地贫1基因突变,与常规的绒毛、羊水或脐血胎儿DNA的产前基因诊断结果一致。结论应用荧光PCR和基因扫描方法检测孕妇血浆胎儿DNA的父源性SEAα地贫1基因突变,可排除血红蛋白H病胎儿。     

孕妇血浆胎儿DNA检测及其在产前诊断中的应用

目的检测孕妇血浆中游离胎儿DNA的水平，探讨应用孕妇血浆胎儿DNA进行非损伤性产前基因诊断的可行性。方法应用血浆DNA抽提法提取63例孕7～40周妇女血浆中胎儿DNA，运用PCR扩增技术对SRY基因和4个短串联重复序列（STR）多态位点（D21S11、D21S1411、D21S1412、D21S1414）进行检测。结果在33例妊娠男胎的孕妇血浆中，有29例出现SRY基因扩增带，孕早、中、晚期的SRY基因检出率分别是72．7％（8／11）、90．9％（10／11）、100％（11／11）。用4个单一STR多态位点检测出胎儿特异等位基因的比例分别为51／63、49／63、16／63、48／63。联合应用4个多态位点可以确定所有孕妇血浆中的胎儿DNA。结论在不同的妊娠阶段都可检测到孕妇血浆中的胎儿DNA，胎儿DNA检出率随孕周的增加增高。孕妇血浆中游离胎儿DNA可以用于无创伤产前诊断。     

Application of Fetal DNA in Maternal Plasma in Noninvasive Prenatal Diagnosis

To explore the application of fetal DNA in maternal plasma for noninvasive prenatal diagnosis, the DNA template was extracted by hydroxybenzene-chloroform from 44 maternal (7-41 weeks) plasma. The Fetus-derived Y sequence DYZ-1 gene (149bp) was chosen to be amplified by PCR. The fragment was identified in all the plasma of male bearing pregnant women with the diagnostic accordance rate being 100.00 %. Two of the 22 female bearing pregnant women had false positive results. Among the 44 pregnant women, the diagnostic accordance rate was 88. 89 % at early pregnant stage, 100.00% at medium pregnant stage, and 96.55 % at late stage respectively.The final accuracy of 95.45% was obtained in all cases. It was concluded that by means of hydroxybenzene-chloroform extraction the authors of this article promoted the concentration and purity of the DNA template, and diagnosed more accurately. The results showed that free fetal DNA in the maternal plasma could be regarded as the gene resource for noninvasive prenatal diagnosis.     

孕妇血浆胎儿DNA定量分析在产前性别诊断中的应用

目的 探索一种早期、快速、非创伤性的围生期胎儿性别的诊断方法。方法 应用即时定量TagMan探针DNA扩增技术，检测6l例妊娠8～39周的正常孕妇游离在血浆内的无细胞胎儿DNA的SRY基因，并有针对性的对部分孕妇检测妊娠过程中及产后母体血浆中代表母体与胎儿DNA总和的β-珠蛋白基因和代表胎儿DNA的SRY基因的变化关系。结果 妊娠第8周可在母体外周血浆中检测出胎儿游离DNA，其数量随妊娠时间增加而增高；30例孕妇血浆中游离DNA检则SRY基因阳性，经证实均为男性胎儿，31例SRY基因阴性，经证实均为女性胎儿，符合率为100％，分娩6个月后，SRY基因基本从母体血浆中消失。结论即时定量TagMan探针DNA扩增技术，检测游离在孕妇血浆内的无细胞胎儿DNA，能早期鉴别胎儿性别，为早期诊断某些选择性遗传性疾病开拓了一条新的途径。     

母体血浆中游离胎儿DNA在无创性产前诊断中的应用研究

目的 建立一种从孕妇血浆中检测胎儿DNA的无创性产前诊断新方法。方法 对30例孕7～41周妇女血浆游离DNA进行聚合酶链反应,特异性扩增的胎儿基因为Y染色体上的DYZ1位点,扩增片段的大小为149bp。30例孕妇血浆均经过酚氯仿法提取DNA作为模板,进行聚合酶链反应。结果 20例妊娠男性胎儿孕妇中有17例出现DYZ1基因扩增条带,检出率为85.0％。10例妊娠女性胎儿孕妇中未出现阳性扩增条带,无假阳性结果。本研究中早、中、晚孕期性别符合率分别为80％,80％,90％,总符合率为85.0％。结论 用酚氯仿法提取血浆中的DNA,可以提高模板的浓度和纯度,可改善PCR条件,提高结果的准确性。     

Fragment size analysis of free fetal DNA in maternal plasma using Y-STR loci and SRY gene amplification

Free fetal DNA (ffDNA) in maternal plasma has now become a valuable source for noninvasive prenatal diagnosis. Being able to accurately identify the size of ffDNA in maternal plasma is essential for a noninvasive prenatal diagnosis. Furthermore, it is important to investigate the molecular characteristics related to apoptosis which gives rise to ffDNA. We investigated the fragment size of ffDNA in each sample more precisely, using both Y-STR and SRY primers, in 20 maternal plasma samples from the 17th to 39th weeks of gestation. PCR was conducted with Y-STR and SRY primers which can be used to amplify 100-524 bp fragments. In samples from 10 pregnant women carrying male fetuses, the maximum fragment size detected by Y-STR and SRY primers ranged from 219 to 313 bp. As a result, the mean average maximum fragment size of free fetal DNA detected by Y-STR and SRY primers was 286 +/- 28 bp. The Y-STR alleles detected in each maternal plasma DNA sample were all in agreement with the results of their cord blood samples. We concluded that the fragment size of ffDNA comprises 2 nucleosomal complexes or less, but not exceeding 3.     

孕妇外周血血浆胎儿DNA的检测

目的：建立可靠有效的检测孕妇血浆胎儿DNA的方法,探讨其在非创伤性产前诊断中的价值。方法：采用引物引伸预扩增（PEP）法及巢式PCR技术对65例孕妇外周血血浆DNA进行正常男性SRY基因检测。结果：单用巢式PCR技术和联合应用PEP,PCR技术对怀男胎的孕妇血中SRY基因检出率分别为65．2％（30／46）和89．1％（41／46）,两组差异有极显著性,对怀女胎孕妇血中SRY基因的未检出率为78．9％（15／19）和94．7％（18／19）,两组差异无显著性。结论：应用PEP法可对胎儿DNA进行全基因组扩增使DNA模板量增加,并使继后的PCR技术检测SRY基因的敏感性明显提高,PEP法是解决母血中胎儿细胞数量太少的途径之一,孕妇血浆中胎儿DNA可成为非创伤性产前诊断的胎儿物质来源。     

实时PCR和cycling probe技术检测母血浆游离胎儿DNA筛选重型β地中海贫血胎儿

OBJECTIVE: To analyze cell-free fetal DNA in maternal plasma for prenatal screening of beta-thalassaemia major. METHODS: Six couples undergoing prenatal diagnosis of beta-thalassaemia (gestational age range 23-26 weeks) were enrolled in this study. The husbands were all carriers of the CD17(A-->T) mutation, and the wives carreid another beta-thalassaemia mutation. The allele-specific primers and two fluorescent cycling probes were synthesized for the detection of the CD17(A-->T) mutation, using FAM and HEX fluorescence labeling, respectively. The cell-free fetal DNA in the maternal plasma was detected using real-time PCR, and the fetal genotype was confirmed by cord blood conventional prenatal diagnosis. RESULTS: In the 6 pregnancies, FAM and HEX fluorescent signals were detected in 3 maternal plasma samples; in the other 3 samples, only FAM fluorescent signals were detected, suggesting the absence of paternally derived CD17(A-->T) mutation. CONCLUSION: Examination of cell-free fetal DNA in maternal plasma using real-time PCR and cycling probe technology can be effective means for prenatal screening of beta-thalassaemia major.