微波对白血病耐药细胞株K562/MDR的影响

目的 研究微波对白血病耐药细胞株K562／MDR耐药性的影响。方法 使用流式细胞仪测量K562／MDR细胞内罗丹明（Rh123)含量及多药耐药基因产物P－糖蛋白（P－gp)的表达，使用DPH标记的荧光分光光度计法测量K562／MDR细胞膜流动性。结果 微波处理后，K562／MDR细胞内罗丹明含量增加，P－gp糖蛋白表达下降，细胞膜流动性增加。结论 微波能对白血病耐药细胞株K562／MDR的耐药性起一定的逆转作用。     

靶向mdr1b/mdr1a基因siRNA逆转T24/ADM多药耐药性研究

目的:研究mdr1b/a基因siRNA(small interfering RNA)逆转膀胱癌的多药耐药性。方法:设计mdr1b/a基因的siRNA,转染膀胱癌T24/ADM细胞,用RT-PCR分析mRNA的表达,Rh123分析P-gp活性,流式细胞仪检测细胞内阿霉素积累量。结果:siRNA能明显地逆转T24/ADM细胞的多药耐药,使mdr1b/a基因的mRNA表达水平下调,细胞内阿霉素积累量显著增加(P<0.05)。结论:mdr1b/a基因siRNA能够逆转膀胱癌的多药耐药性。     

mdr1单因素耐药白血病细胞株的构建

目的 构建mdrl单因素耐药白血病细胞株，为研究RNA干扰逆转mdr1所致耐药提供细胞模型。方法 将含mdr1 cDNA全长的真核表达载体通过脂质体转染人对化疗药物敏感的K562细胞内，G418筛选获得转基因单克隆细胞．用RT-PCR检测有无mdr1表达、流式细胞技术检测细胞表面P-gp蛋白含量、Rh123泵出实验检测P-gp功能、MTT检测细胞对药物的敏感性。结果 转mdr1基因细胞K562／mdr1能较高水平表达mdr1，明显表现出对化疗药物的耐药性。结论 通过转基因方法构建mdr1单因素耐药细胞株可为RNA干扰逆转mdr1提供更精确的细胞研究模型。     

32例肝癌组织中多药耐药基因及其产物P-糖蛋白的实验研究

探讨肝癌组织中mdr－1（多药耐药基因）mRNA及P－170（P－糖蛋白）的表达水平，采用RT－PCR及免疫组织化学SP法检测32例肝癌组织中mdr－1mRNA和P－糖蛋白的表达．发现不仅肝癌组织中mdr－1和P－糖蛋白的表达显著高于对照组，而且转移组中P－糖蛋白的表达高于非转移组．提示检测mdr－1／P－gp对肝癌制订治疗方案，判断疗效及MDR逆转剂的应用具有重要的临床意义；mdr－1mRNA／P－gp的过表达可能与肝肿瘤的转移预后有关．     

索拉非尼逆转肝癌细胞多药耐药的实验研究

目的 探讨索拉非尼体外对人肝癌细胞(BEL-7402/FU)多药耐药性的逆转作用及可能机制.方法 以MTT比色法测定索拉非尼对肝癌细胞的剂量效应曲线,并以流式细胞仪检测索拉非尼对肝癌细胞内罗丹明123 (Rho123)浓度的影响,根据上述实验结果选取合适的索拉非尼实验剂量.以MTT法测定索拉非尼对抗癌药物细胞毒性的影响,用流式细胞仪检测细胞膜转运蛋白(P-gp)的表达,RT-PCR法检测mdr1基因的表达.结果 索拉非尼浓度在4μmol/L时逆转效率较高且毒副作用较小,4 μmol/L的索拉非尼能部分逆转BEL-7402/FU细胞的耐药性,对ADM、5-FU、GEM、DDP的逆转倍数分别为2.98、7.16、1.99、10.08倍,并可部分下调BEL-7402/FU细胞P-gp的表达,使mdrl基因表达与对照组相比下降了27.3%.结论 索拉非尼具有体外逆转人肝癌细胞多药耐药性的作用,可能与下调mdr1基因表达、增加细胞内化疗药物的蓄积有关.     

RNA干扰逆转白血病细胞耐药性的研究

目的 用RNA干扰技术下调白血病耐药细胞系K562/A02多药耐药基因mdr1的表达以逆转白血病对化学药物的耐药性.方法 针对mdr1基因已知mRNA序列不同位点,选择两条靶序列,构建靶向mdr1 shRNA真核表达载体,脂质体介导转染白血病耐药细胞株K562/A02.实时荧光定量RT-PCR检测mRNA表达,Western blot检测细胞膜P-gp表达,柔红霉素泵出试验检测P-gp外排泵功能,MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性.结果 构建了二条针对mdr1基因的shRNA真核表达载体,分别下调mdr1 mRNA的表达89.74%和87.18%,降低细胞膜P-gp表达,使膜外泵功能明显下降,柔红霉素在细胞内贮留明显增多,60min 时柔红泵出率为13.16%、22.02%,对照组为40.44%、45.31%,对阿霉素药物敏感性的相对逆转率为84.36%和76.69%.结论 RNA干扰技术可有效逆转mdr1所致耐药.     

RNA干扰逆转肝细胞癌多药耐药

目的 筛选高效dsRNA/mdr1,以备研究RNA干扰逆转肝细胞癌多药耐药之用.方法 首先根据siRNA设计原则,以多药耐药基因(mdr1)为靶基因,设计并选择4～5条siRNA/mdr1,经BLAST后体外转录法合成dsRNA/mdr1,用Oligofectamine试剂分别转染HepG2/mdr1,然后从mRNA、蛋白(P-gp)表达水平和细胞功能变化评价HepG2/mdr1耐药性被逆转的程度,比较各个dsRNA/mdr1的逆转效率,筛选出有效的siRNA/mdr1.结果 成功合成5条dsRNA/mdr1(其中1条为阴性对照),dsRNA/mdr1-4 mRNA表达(18.73±1.33)%、蛋白表达变化(79.1±1.6)%～(16.8±0.4)%与其他各组细胞比较,有显著性差异;细胞内柔红霉素(DNR)累积量也较其他组明显增加(平均荧光强度79.58,阳性率84.25%,P＜0.05).结论 体外转录法结合脂质体转染适用于筛选高效siRNA,肯定了siRNA干扰序列能够有效阻抑mdr1基因编码蛋白p170的功能.     

洛贝林逆转人乳腺癌细胞MCF-7/ADM耐药作用及其机制

目的：探讨哌啶生物碱洛贝林对人乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7/ADM耐药的逆转作用及其分子机制。方法：利用MTT比色法测定不同浓度洛贝林对人乳腺癌细胞株MCF-7/ADM的阿霉素（ADM）和氟尿嘧啶（Fu）的耐药逆转指数。多功能酶标仪测定洛贝林干预对细胞内罗丹明123荧光强度以反映其对细胞多药耐药蛋白P-gp活性的影响。同时用流式细胞术检测洛贝林对MCF-7/ADM细胞内罗丹明123积聚浓度的影响,从功能学的角度观察洛贝林的耐药逆转作用及其机制。结果：洛贝林(10 μmol/L)干预下,多药耐药细胞株MCF-7/ADM对化疗药的敏感性增加,ADM对耐药细胞株的IC50由（44.81±0.43)mg/L降至（16.72±0.75）mg/L,逆转指数为2.68;Fu对耐药细胞株的IC50由（53.12±1.60）mg/L降至（38.90±1.43）mg/L,逆转指数为1.37。洛贝林对细胞的罗丹明123外排有显著的浓度依赖性抑制作用。洛贝林（20 μmol/L）的多药耐药逆转有效率为经典耐药逆转剂维拉帕米（20 μmol/L）的71.6%,但毒副作用显著降低。结论：洛贝林对乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7/ADM的耐药性具有逆转作用,其机制主要为抑制细胞多药耐药蛋白P-gp的活性     

逆转mdr1引起的多药耐药性的策略

多药耐药基因1（mdr1）编码的P-糖蛋白表达的增加是肿瘤细胞多药耐药性最常见的发生机制之一。近年来以mdr1/P-糖蛋白为靶点,在蛋白质水平和基因水平上采用多种策略逆转MDR,这些研究均有较大进展,本文就目前逆转多药耐药性的研究状况进行综述。     

葡萄糖神经酰胺合酶基因在多药耐药肿瘤细胞株KBV200的表达及其与肿瘤多药耐药性的关系

目的 观察葡萄糖神经酰胺合酶(glucosylceramide synthase，GCS)基因在人口腔表皮样癌多药耐药细胞株KBV200的表达及其与肿瘤多药耐药性(MDR)的关系。方法 采用RT-PCR分析KBV200及其亲本KB细胞株GCS基因表达的差异，运用MTT法分析KBV200经糖脂合成酶抑制剂苯基棕榈酰胺吗啡丙醇(DL-PPMP)及钙离子通道阻滞剂异搏定处理前后细胞MDR的变化，应用RT-PCR技术检测KBV200细胞耐药逆转后GCS及mdr1基因的表达。结果 KBV200细胞GCS和mdr1基因的表达明显强于KB细胞，而KB细胞mdr1基因表达为阴性。5～25umol／L DL-PPMP均可抑制KBV200 GCS mRNA表达，25umol／L时抑制强度最大；10umol／L异搏定即可抑制KBV200 GCS mRNA表达，15umol／L时抑制作用明显。DL-PPMP和异搏定均可抑制mdr1基因的表达，KBV200经25umol／L DL-PIMP作用48h后细胞内mdr1表达为阴性。结论 异搏定和DL-PPMP对GCS和mdr1基因表达的抑制调节呈浓度依赖性，它们可通过抑制GCS和mdr1基因表达，逆转KBV200对长春新碱的耐药。KBV200 GCS基因的表达与MDR存在正相关，GCS基因可能在肿瘤的多药耐药过程中起着重要作用。