抗人凋亡相关蛋白TFAR19的单克隆抗体制备及鉴定

目的：研制鼠抗人凋亡相关蛋白ＴＦＡＲ１９的单克隆抗体,以进一步探讨ＴＦＡＲ１９蛋白的结构与功能。方法：以纯化的重组人ＴＦＡＲ１９蛋白为抗原,免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,将ＴＦＡＲ１９蛋白免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０进行细胞融合,经克隆筛选获得鼠抗人ＴＦＡＲ１９蛋白单抗的杂交瘤细胞株,以间接ＥＬＩＳＡ、Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹分析等方法进行单克隆抗体的鉴定。结果：获得了３株稳定分泌抗人ＴＦＡＲ１９单克隆抗体的杂交瘤细胞株（Ｃ１,Ｃ１０,２Ｃ１２）,其分泌的单抗效价高,特异性好,亲和力不一,免疫球蛋白亚类均为ＩｇＧ１。Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹分析证明ＴＦＡＲ１９蛋白在调亡细胞中高表达。结论：所获单抗能特异识别原核及真核细胞表达的ＴＦＡＲ１９蛋白,为进一步探讨ＴＦＡＲ１９蛋白的生物学效应提供了条件。     

细胞凋亡相关基因TFAR19研究进展

细胞凋亡 (apoptosis)是指为维持内环境稳定 ,由基因控制的细胞自主有序的死亡 ,故又称细胞程序性死亡 (programmedcelldeath ,PCD) ,其在机体的发育和维持内环境的稳定中起着至关重要的作用[1 ,2 ] 。由于细胞凋亡为多阶段、多系统、多基因参与的复杂过程 ,目前对其参与的基因     

凋亡相关基因TFAR19与肿瘤

细胞凋亡是由基因调控的个别细胞发生的自主有序的死亡，其在机体的发育和维持内环境的稳定中起着至关重要的作用，很多证据表明肿瘤的发生与凋亡有关。TFAR19基因是由北京大学人类疾病基因中心克隆到的凋亡相关新基因之一，经国际人类基因命名委员会命名为PDCD5。它在多种肿瘤中表达下调，具有临床检测价值，并有可能作为肿瘤的凋亡促进剂应用于临床。现将TFAR19基因与肿瘤关系的研究进展综述如下。     

TFAR19(PDCD5)蛋白在正常肾、肾透明细胞癌组织及正常膀胱、膀胱癌组织中的表达

目的 了解凋亡基因PDCD5在正常肾、肾透明细胞癌组织及正常膀胱、膀胱癌组织中的表达,分析PDCD5在。肾透明细胞癌、膀胱癌的发病中所起的作用。方法 采用免疫组织化学的方法,对63例肾组织切片和42例膀胱组织切片进行PDCD5的免疫组化染色。采用人工阅片评分及计算机辅助染色强度判定2种方法判断。肾组织PDCD5的染色阳性率及染色强度,用单因素方差分析法及列联表的卡方检验和关联度测量判断PDCD5的表达与正常肾、肾透明细胞癌组织的相关性;采用人工阅片判断膀胱组织PDCD5的染色阳性率。结果 免疫组织化学的结果显示,在正常。肾组织。肾小管区中,PDCD5表达多呈强阳性,肾透明细胞癌组织表达随着分期的增加呈递减趋势。正常肾组织及各期。肾透明细胞癌组织中PDCD5表达的差异有统计学意义。正常膀胱、膀胱癌组织中PDCD5无显著表达。结论 PDCD5可能在不同程度上参与了。肾透明细胞癌进程中的调控PDCD5在正常膀胱、膀胱癌组织中表达程度极低。     

细胞凋亡相关新基因TFAR19(PDCD5)研究进展

细胞凋亡是在一定的生理或病理条件下。由基因控制的细胞自我毁灭过程。凋亡异常与许多疾病(尤其是肿瘤)的形成及发展进程密切相关。细胞凋亡调控机制研究证明。多种基因(如P53、C-myc、Bcl-2、Bax等)参与了细胞凋亡的调控过程。TFAR19基因是由我国科研人员最近新发现的另一重要的凋亡相关基因，笔者主要就其结构特点、性质功能、临床意义作一概述。     

凋亡促进分子TFAR19在成人慢性髓性白血病骨髓细胞的异常表达

目的:研究成人慢性髓性白血病(chronic myeloid leukemia ,CML)骨髓细胞凋亡促进分子--TFAR19的表达,以探讨TFAR19在CML发病及疾病进展中的作用.方法:利用15种不同荧光标记的单克隆抗体标记骨髓细胞,通过流式细胞术检测未治CML慢性期病人、CML加速/急变期病人、及正常人骨髓不同细胞群细胞内TFAR19的表达.结果:20例未治CML慢性期及13例加速/急变期病人骨髓总的有核细胞内TFAR19平均荧光强度明显低于10例正常人组骨髓总的有核细胞,分别为5 793±1 536,7 260±781,P＜0.01及4 293±1 082,7 260±781,P＜0.01,其中未治CML慢性期及加速/急变期病人骨髓粒细胞内TFAR19平均荧光强度低于正常人组骨髓粒细胞,分别为6 240±1 734,8 317±726,P＜0.01,及5 759±1 487,8 317±726,P＜0.01;未治CML慢性期及加速/急变期病人骨髓淋巴细胞内TFAR19平均荧光强度低于正常人组骨髓淋巴细胞,分别为1 292±639,2 271±820,P＜0.01,及1 231±281,2 271±820,P＜0.01.CML加速/急变期病人总的有核细胞与未治CML慢性期病人相比,TFAR19表达进一步降低,分别为4 293±1 082,5 793±1 536,P＜0.01.结论:未治CML慢性期病人、CML加速/急变期病人骨髓总的有核细胞与正常人相比TFAR19表达降低,未治CML慢性期病人、加速/急变期病人骨髓粒细胞及淋巴细胞TFAR19表达均低于正常人组骨髓,CML加速/急变期病人总的有核细胞与未治CML慢性期病人相比,TFAR19表达进一步降低.TFAR19的异常表达可能在CML疾病进展中起一定作用.     

细胞因子对细胞凋亡的影响

细胞凋亡(apoptosis)由Kerr[1]于1972年首先提出,是一种依赖于信号的主动死亡过程,是细胞生理性死亡的主要方式.有时在病理情况下也可以发生.     

凋亡相关蛋白TFAR19在TF-1细胞凋亡中出现细胞核转位

目的：探讨凋亡相关分子TFAR19 在TF-1细胞凋亡过程中的表达及定位。方法：以TFAR19的单克隆抗体为工具,采用荧光显微镜、共聚焦激光扫描显微镜、流式细胞仪等研究手段,观察细胞凋亡过程中TFAR19分子的表达水平和细胞内定位,分析其与细胞膜磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine, PS)以及细胞核DNA片段化的关系。结果：TFAR19蛋白在撤除GM-CSF的TF-1细胞中表达水平显著增高,伴有明显的核转位现象,且早于PS外翻和细胞DNA片段化。结论：TFAR19蛋白的核转位是细胞凋亡更早期发生的事件之一, 这一新发现为进一步探讨TFAR19蛋白的生物学效应,以及对细胞凋亡的多方位研究提供了新的线索和思路。     

凋亡相关基因PDCD5与妇科肿瘤研究进展

PDCD5是重要的凋亡正调控因子,其异常表达与肿瘤及自身免疫疾病等相关,可能参与这些疾病的异常凋亡过程。     

小鼠凋亡相关新基因TFAR19 cDNA的克隆化和序列分析

目的;了解一个细胞凋亡相关新基因ＴＦＡＲ１９在不同种属间的序列同源性。方法;利用表达序列标签小鼠ＴＦＡＲ１９ ｃＤＮＡ拼接技术,ＲＴ－ＰＣＲ,ＤＮＡ序列测定技术及计算机分析技术。结果：首次成功进行了小鼠ＴＦＡＲ１９ ｃＤＮＡ编码区的ｃＤＮＡ克隆化和序列分析,发现小鼠和人ＴＦＡＲ１９在核苷酸水平上有８１．４％的同源性,在氨基酸水平上有高达９６％的同源性。功能区分析发现,小鼠ＴＦＡＲ１９ ｃＤＮＡ序列     

肾透明细胞癌PDCD5表达及与预后的关系

目的探讨PDCD5在。肾透明细胞癌发生、发展巾的作用及与预后关系。方法采用免疫组织化学方法．对46例肾透明细胞癌组织中PDCD5表达进行研究，对患者存活率进行回顾性随访：结果癌旁。肾组织中PDCD5阳性表达率显著高于肾癌组织。PDCD5阳性表达率随肾透明细胞癌病理分级和临床分期的上升而下降，染色强度也减弱。PDCD5阳性表达组3年及5年存活率高于阴性表达组：结论PDCD5为肾透明细胞癌的负性调节因子，对抑制肾透明细胞癌的恶性转化和进展可能有重要的意义。     

人程序化死亡分子5(PDCD5)核酸和蛋白质序列的数据发掘

目的：以程序化死亡分子5(PDCD5)为靶分子,对其核酸与蛋白质序列进行生物信息学分析,为PDCD5功能的实验研究提供基础,同时也为人类功能基因的生物信息学分析提供新的技术路线。方法：利用数据库相似性搜索、同源物结构比较、表达谱分析和查询基因“邻居”等技术进行数据发掘和数据综合分析。结果：发现人PDCD5在12号和5号染色体上分别存在返座假基因(retropseudogene),小鼠1号染色体也存在小鼠PDCD5 cDNA的返座假基因。热自养甲烷杆菌的PDCD5同源物、泛素及核糖体蛋白S13具有与人PDCD5相似的折叠方式。线虫的PDCD5同源物、泛素及正IAP(inhibitor of apoptosis proteins)分子等在表达谱拓扑图上属于同一基因簇成员,该基因簇与生物合成和蛋白质合成相关。PDCD5同源物在多个基因组中与多种核糖体蛋白相邻。结论：PDCD5存在2个拷贝的假基因。PDCD5除参与细胞凋亡外,预测还与泛素有功能相关性,并可能参与蛋白质的翻译调控。     

人TFAR19的定点突变及其重组蛋白的表达、纯化和功能分析

目的:了解凋亡相关新基因TFAR19编码蛋白分子中潜在的Ser100磷酸化位点与其促凋亡效应的关系.方法:利用重叠延伸PCR定点突变技术构建TFAR19 Ser100→Ala100突变体,用DNA测序技术验证,大肠杆菌表达,离子交换技术纯化重组突变蛋白,将其加入培养的白血病细胞株HL-60,通过PI染色,流式细胞仪分析,观察突变重组蛋白的促凋亡效应.结果:构建成TFAR19 Ala100突变体,并经DNA测序所证实,在大肠杆菌中获得了高水平表达,Western blot表明突变型重组蛋白与野生型具有相同的免疫学活性,流式细胞仪分析发现突变蛋白对撤除血清的HL-60细胞具有与野生蛋白相似的剂量依赖性促凋亡效应. 结论:TFAR19 分子中潜在的Ser100磷酸化位点对其促凋亡效应无影响,提示TFAR19发挥其生物学活性时无需cAMP和cGMP依赖的蛋白激酶活化.     

程序化细胞死亡分子5及其他凋亡调控蛋白在线粒体病患者骨骼肌中的表达

目的 检测程序化细胞死亡分子5(PDCD5)、半胱氨酸蛋白水解酶(Caspase-3)、Bax和Bcl-2蛋白在线粒体脑肌病伴随乳酸血症和卒中样发作(MELAS)、肢带型线粒体肌病(LGMM)及慢性进行性眼外肌瘫痪(CPEO)患者骨骼肌中的表达情况,探讨细胞凋亡与线粒体病发病机制之间的关系.方法 选择经临床、病理及基因检查诊断的3例MELAS、2例LGMM和6例CPEO患者,对骨骼肌进行PDCD5、Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白免疫组织化学染色,以11例非骨骼肌疾病患者的肌肉标本进行对照.结果 PDCD5和Caspase-3在个别破碎红纤维(RRF)膜下和少数毛细血管高表达,在对照无表达;Bcl-2在病例组和对照组的许多小血管中表达,在病例组的许多RRF和毛细血管表达增强;Bax在正常对照和患者组的肌纤维和毛细血管未见表达.结论 线粒体病患者的骨骼肌内存在细胞凋亡过程的异常调节,PDCD5、Caspase-3、Bcl-2和Bax参与其中.     

凋亡相关基因PDCD5启动子区甲基化在新疆汉族和维吾尔族食管鳞癌中的作用研究

目的：探讨凋亡相关基因程序化细胞死亡分子5（PDCD5）启动子区 CpG岛在新疆维吾尔族和汉族食管鳞状细胞癌（鳞癌）中的甲基化情况及其与临床病理特征的相关性。方法采用甲基特异性PCR（MSP）法检测40例食管鳞癌患者（维吾尔族20例,汉族20例）癌组织、癌旁组织中 PDCD5基因甲基化情况。结果癌组织中PDCD5甲基化阳性率为80．0％（32/40）,癌旁组织中甲基化阳性率为35．0％（14/40）,差异有统计学意义（P ＜0．05）;PDCD5甲基化阳性率与食管鳞癌临床分期相关（P ＜0．05）;不同民族、性别、年龄食管鳞癌中 PDCD5甲基化阳性率差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论在食管鳞癌癌组织中甲基化水平高于癌旁组织;PDCD5甲基化率与食管癌的临床分期有相关性,PDCD5在食管鳞癌中的甲基化率与民族、性别、年龄无相关性。     

全脑缺血再灌注后大鼠神经元中bcl-2和baX的表达

目的 研究全脑缺血再灌注后大鼠脑神经细胞中bcl-2和bax的表达。方法 选择Sprague Daw-ley大鼠28只，雌雄各半，随机分为5组；对照组即假手术组4只，复苏后3，6，12，24h组各6只，采用窒息合并冰氯化钾停跳液制备大鼠心跳骤停-心肺复苏模型。停跳5min后开始心肺复苏，采用免疫组织细胞化学法观察复苏后神经细胞中bcl-2和bax的表达情况。结果 复苏后bcl-2在海马区的表达不断上升，但明显弱于bax的表达，bcl-2/bax比例失衡。结论 bcl-2/bax比例失衡可能是大鼠全脑缺血再灌注后神经细胞损伤的主要机制之一。