hTERT mRNA在非小细胞肺癌的定量表达及意义

目的:探讨端粒酶逆转录酶(hTERT mRNA)定量表达在非小细胞肺癌(NSCLC)发生发展中的意义及其在NSCLC诊断中的价值.方法:用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测45例NSCLC组织和21例正常肺组织hTERT mRNA的定量表达情况.结果:[1]hTERT mRNA在NSCLC组织的表达量为2.854±0.728,正常肺组织为2.042±0.378,两者比较差异有统计学意义(t=-4.807,P<0.01);[2]hTERT mRNA表达与NSCLC的病理类型密切相关(P<0.05),与患者的性别、年龄、肿瘤分化程度、淋巴结转移、临床分期等无关(P>0.05).结论:hTERT mRNA过表达可能在NSCLC组织发生中起关键作用.hTERT mRNA的实时定量检测很可能有助于NSCLC的早期诊断.     

脂质体介导的hTERT PEI/ASODN缩合体对乳癌MCF-7细胞生长及hTERT表达的影响

目的:探讨脂质体介导的人端牲酶逆转录酶(hTERT)聚乙烯亚胺(PEI)/反义寡核苷酸(ASODN)缩合体对乳癌MCF-7细胞生长及hTERT表达的影响.方法:MCF-7细胞分为3组,分别转染ASODN、PEI/ASODN和脂质体PEI/ASODN,采用激光共聚焦扫描观察摄人情况.另取MCF-7细胞分为9组:空白对照组、ASODN组、SODN组、溶媒组、空白脂质体组、PEI/ASODN组、PEI/SODN组、脂质体-PEI/ASODN组和脂质体-PEI/SODN组.转染后不同时间,分别采用MTT法、RT-PCR及免疫细胞化学方法检测MCF-7细胞的生长情况、hTERT蛋白以及mRNA的表达.结果:脂质体介导的hTERT PEI/ASODN缩合体可以进入细胞内.转染后24、48和72 h,9组间光密度值相比,差异均有统计学意义(F=11.187、30.283和33.080,P均<0.001).与空白对照组相比,PEI/ASODN组、PEI/SODN组及脂质体-PEI/ASODN组光密度值降低(P<0.05).与空白对照组相比,转染48 h后hTERT蛋白和hTERT mRNA表达降低.结论:脂质体介导的hTERT PEI/ASODN缩合体能够有效进入细胞内,抑制MCF-7细胞的生长,其作用可能与抑制细胞中hTERT mRNA及蛋白的表达有关.     

白藜芦醇对大肠癌细胞hTERT表达及其启动子的影响

目的：观察白藜芦醇对大肠癌细胞生长增殖的影响,并从人端粒酶逆转录酶（human telomerase reverse transcfiptase,hTERT）表达及其启动子方面探讨可能的抗癌机制。方法：以不同浓度的白藜芦醇处理大肠癌LS-174T细胞后,收集细胞,分别采用荧光实时定量RT—PCR和蛋白质印迹法检测癌细胞hTERTmRNA和蛋白水平。采用脂质体转染法将携带hTERT启动子和报告基因的质粒转染至大肠癌LS-174T细胞中后,加入不同浓度的白藜芦醇,孵育48h后,检测报告基因萤虫素酶活性。结果：白藜芦醇处理大肠癌细胞后,增殖明显受到抑制,且与浓度有关。癌细胞hTERTmRNA和蛋白水平明显下调,且呈浓度和时间依赖性。白藜芦醇处理组萤虫素酶活性下降,且呈浓度依赖性。结论：hTERT启动子活性和hTERT表达下调,可能是白藜芦醇抑制癌细胞增殖的重要机制之一。     

地高辛标记的寡核苷酸探针两步原位杂交检测胸液细胞hTERT mRNA

目的 建立原位杂交法检测胸液细胞中人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的实验方法，初步评价该法识别胸液中肿瘤细胞的效果。方法 取23例胸腔积液病例标本，以地高辛标记的寡核苷酸探针对胸液细胞hTERT mRNA行两步原位杂交，再通过抗原-抗体-酶-显色途径，测出hTERT mRNA信号。实验研究设严格的阴性、阳性对照，且与临床诊疗各自独立进行。结果 本法对9例恶性胸腔积液病例检测的结果均为阳性，即无论细胞形态是否异常，镜下均可见到有细胞质深染及部分细胞核少许点状着色的细胞。此9例中，7例经胸液细胞形态学检查亦示阳性者．可同时观察到形态明显异常的肿瘤细胞，其余2例经反复胸液细胞形态学检查阴性，但胸膜活检确诊为恶性胸腔积液者，虽未见到形态明显异常细胞，但镜下可发现胞质深染、部分细胞核少许着色的细胞。14例良性胸腔积液病例的检测结果均为阴性。结论 原位杂交法检测胸液细胞hTERT mRNA可望作为一种临床细胞病理学的新方法，用以鉴别胸腔积液的良、恶性，同时判定肿瘤细胞的类型。     

hTERT mRNA在食管癌组织中的表达及意义

目的 研究凋亡调控基因hTERT mRNA在食管癌癌组织中的表达及意义.方法 采用RT-PCR检测52例食管癌组织、30例癌旁食管组织（距离肿瘤至少5 cm）和7例非食管癌黏膜组织中hTERT mRNA的表达情况.结果 hTERT mRNA在食管癌组织和癌旁食管组织中表达的阳性率明显高于非食管癌组织（P＜0.05）,食管癌组织中的表达阳性率与癌旁食管组织的表达阳性率差异无统计学意义（P＞0.05）;hTERT mRNA在食管癌组织中的表达与患者年龄、病理类型、分化程度、浸润程度、淋巴转移和临床分期无相关性（P＞0.05）.结论 hTERT mRNA在食管癌组织中的表达可能是早期事件,检测hTERT mRNA的表达可能对食管癌的早期诊断及治疗具有指导意义.     

大肠癌hTERT mRNA表达与端粒酶活性相关性及临床意义

目的 :探讨大肠癌组织中hTERTmRNA表达与端粒酶活性相关性及临床意义。方法 :采用RT -PCR和TRAP -ELISA技术检测大肠癌及癌旁组织hTERTmRNA表达和端粒酶活性情况。结果:大肠癌组织中hTERTmRNA表达和端粒酶活性的阳性率分别为85 % (17/20)和90 % (18/20) ,明显高于癌旁组织5% (1/20) ,经统计学处理有显著性差异 (P<0.0001) ;端粒酶活性与大肠癌淋巴结转移与未转移、低分化与中高分化间的差异显著 (P<0.05) ,而与肿瘤大小、侵袭深度、性别及年龄无关。结论 :端粒酶激活在大肠癌发生发展中可能起重要作用 ,hTERTmRNA表达与端粒酶活性水平高度相关 ,二者均可作为大肠癌诊断的标志物 ,但hTERTmRNA的检测更为快速简便     

电离辐射对EL-4细胞倍增时间的影响

研究电离辐射对EL－4淋巴瘤细胞倍增时间的影响。方法：体外传代培养EL－4细胞并计数。按下式计算细胞倍增时间：TD＝0．693（T2-T1）／ln（N2／N1）。结果：0．1～4．0GyX射线单次照射使EL－4细胞倍增时间明显延长。0．05Gy低剂量预照射可明显缩短2．0Gy大剂量照射所致细胞倍增时间的延长。结论：0．1Gy以上剂量X射线使EL－4细胞倍增时间延长。0．05Gy预照射可诱导适应性反应。     

电离辐射对EL—4细胞倍增时间的影响

目的：研究电离辐射对ＥＬ－４淋巴瘤细胞倍增时间的影响。方法：体外传代培养ＥＬ－４细胞并计数。按下式计算细胞倍增时间：ＴＤ＝０．６９３（Ｔ２－Ｔ１）／ｌｎ（Ｎ２／Ｎ１）。结果：０．１￣４．０ＧｙＸ射线单次照射使ＥＬ－４细胞倍增时间明显延长。０．０５Ｇｙ低剂量预照射可明显缩短２．０Ｇｙ大剂量照射所致细胞倍增时间的延长。结论：０．１Ｇｙ以上剂量Ｘ射线使ＥＬ－４细胞倍增时间延长。０．０５Ｇｙ预照射可诱导适     

hTERT在肾癌中的表达及临床意义

目的 检测人端粒酶逆转录酶(hTERT)在肾癌中的表达及其临床意义.方法 采用RT-PCR及Western blot方法检测45例肾癌组织、45例配对的癌旁肾组织及786-0细胞系中hTERT mRNA及蛋白的表达情况,观察其表达与肿瘤大小、临床分期、病理组织分型、分级之间的关系.结果 hTERT mRNA及蛋白在肾癌组织中呈高表达(P=0.000),其表达与肾癌的肿瘤大小、临床分期、病理组织分型、分级之间无关(P＞0.05).结论 肾癌组织中hTERT表达较高,可尝试用于肾癌的诊断和预测,并为基因治疗提供了思路.     

地高辛标记的寡核苷酸探针两步原位杂交检测胸液细胞hTERT mRNA

目的 建立原位杂交法检测胸液细胞中人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的实验方法,初步评价该法识别胸液中肿瘤细胞的效果。方法 取23例胸腔积液病例标本,以地高辛标记的寡核苷酸探针对胸液细胞hTERT mRNA行两步原位杂交,再通过抗原-抗体-酶-显色途径,测出hTERT mRNA信号。实验研究设严格的阴性、阳性对照,且与临床诊疗各自独立进行。结果 本法对9例恶性胸腔积液病例检测的结果均为阳性,即无论细胞形态是否异常,镜下均可见到有细胞质深染及部分细胞核少许点状着色的细胞。此9例中,7例经胸液细胞形态学检查亦示阳性者,可同时观察到形态明显异常的肿瘤细胞,其余2例经反复胸液细胞形态学检查阴性,但胸膜活检确诊为恶性胸腔积液者,虽未见到形态明显异常细胞,但镜下可发现胞质深染、部分细胞核少许着色的细胞。14例良性胸腔积液病例的检测结果均为阴性。结论 原位杂交法检测胸液细胞hTERT mRNA可望作为一种临床细胞病理学的新方法,用以鉴别胸腔积液的良、恶性,同时判定肿瘤细胞的类型。     

电离辐射对人肺腺癌细胞株A549体外表达VEGF的影响

目的探讨电离辐射对人肺腺癌细胞体外表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法人肺腺癌细胞株A549，置RPMI 1640培养液培养，分别接受1、2、4、8Gy电离辐射，继续培养细胞，24、48h后收集细胞上清液，双抗体夹心ELISA法测定VEGF。表达水平。结果与阴性处理细胞比较，人肺腺癌细胞株A549体外接受不同剂量辐照后，VEGF表达明显增高，且具有剂量依赖性和时程依赖性。结论电离辐射能诱导肺腺癌细胞VEGF高表达，这可能是临床肿瘤抗辐射的机制之一。     

甲基化转移酶抑制剂zebularine对人子宫内膜癌细胞ECC-1高迁移率族蛋白B1基因表达的影响

目的:研究甲基化转移酶抑制剂zebularine对人子宫内膜癌ECC-1细胞系增殖、迁移及高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1,HMGB1)基因表达的影响。方法:采用MTT法和划痕实验检测zebularine对人子宫内膜癌ECC-1细胞系的增殖抑制率及其细胞迁移率的影响,采用real-time PCR检测作用前后HMGB1 mRNA表达的变化。结果:⑴终浓度为200μmol/L的zebularine作用24 h能显著抑制ECC-1细胞系的增殖率和迁移率。MTT法对照组吸光度为0.64±0.05,实验组为0.46±0.04(P<0.05);对照组划痕愈合率为(87.45±6.05)%,实验组为(45.23±3.45)%(P<0.05);⑵终浓度为200μmol/L的zebularine作用24 h能显著降低HMGB1 mRNA的表达,对照组相对表达量为1.02±0.10,实验组为0.25±0.06(P<0.05)。结论:甲基化转移酶抑制剂zebularine可以有效抑制ECC-1细胞系的增殖和迁移,其效应可能与降低HMGB1 mRNA的表达有关。     

hTERT反义寡核苷酸对宫颈癌Hela细胞体外增殖的影响

目的观察人类端粒酶催化亚基(hTERT)反义寡核苷酸(ASODN)对Hela细胞增殖和细胞周期的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测ASODN对Hela细胞增值能力及细胞生长的影响，用流式细胞仪检测细胞周期和细胞增殖指数。结果不同浓度的ASODN转染细胞后，均不同程度地影响细胞的生长。ASODN作用细胞后，使细胞周期发生变化，表现为G0／G1期细胞增多，S期细胞减少，细胞增殖指数下降。结论以hTERT基因为靶点的反义寡核苷酸能抑制Hela细胞的体外生长，使细胞阻滞于G0／G1期。     

辐射引起人结肠癌细胞系HT-29中STAT6蛋白活化

目的:研究电离辐射能否导致人结肠癌细胞系HT-29中信号转导子与转录活化子6(STAT6)蛋白活化,从而探讨肿瘤出现放射抗拒的可能机制。方法:用流式细胞仪检测HT-29细胞接受2 Gy射线照射后30 min、1h、2 h细胞内STAT6蛋白的活化情况。结果:HT-29细胞接受射线照射后出现STAT6的活化,在照射后1 h达高峰(P<0.01),2 h后稍高于照射前水平(P<0.05)。结论:射线可以引起HT-29细胞中STAT6蛋白的活化,从而导致细胞出现放射后的凋亡抑制,可能部分解释肿瘤细胞的放射抗拒性。     

60Co γ射线照射对AT细胞周期进程的影响

目的 研究AT细胞辐射高敏感性与细胞周期进程间的联系。方法 用细胞流式术检测2Gy^60Coγ射线照射后不同时间及不同剂量照射后GM0639和AT5BIVA两种细胞的细胞周期分布状况。结果 GM0639细胞受2Gy^60Coγ射线照射后，从照射后即刻至第24小时，G2／M细胞比例逐步增大，出现了cn阻滞，O～6Gy^60Coγ射线照射24h后，G2／M细胞比例随剂量增大而增大；AT5BIVA受2Gy^60Coγ射线照射后不同时间及0～6Gy^60Coγ射线照射24h后，G2／M细胞比例减小，不发生G2阻滞。结论 ATM基因突变所导致的细胞周期关卡丧失及DNA修复能力降低是AT细胞辐射高敏感性的重要原因。     

miR-21负向调控宫颈癌HeLa细胞株中hTERT的表达

  目的  通过观察在miR-21作用下hTERT的表达情况，探讨在宫颈癌HeLa细胞中miR-21对hTERT的调控作用。  方法  利用RT-PCR 法及West Blot 法分别检测HeLa中miR-21 的表达，以及hTERT蛋白的表达情况；通过实验设计，生成miR-21模拟物和 miR-21抑制剂，并分别设立两组的空白对照序列；将空转liposome2000 （lipo2000）设为对照组，利用脂质体 liposome2000包裹宫颈癌细胞株 HeLa并予以转染。在转染后24 h及时检测hTERT及蛋白的表达量。  结果  HeLa细胞株中miR-21及hTERT表达阳性；转染后24 h模拟物组、模拟物对照组、抑制剂组、抑制剂对照组、脂质体组 hTERT mRNA相对表达水平分别为（0.51±0.33）、（0.69±0.19）、（1.33±0.39）、（0.83±0.26）和（0.58±0.16）；蛋白相对表达水平分别为（0.41±0.18）、（0.62±0.18）、（1.45±0.60）、（0.83±0.15）和（0.82±0.30）；模拟物组与其对照组及脂质体组相比较，hTERT mRNA及蛋白表达情况均较低且差异有统计学意义（P < 0.05）；相反，在抑制剂组与其对照组及脂质体组相比较中，hTERT mRNA及蛋白表达情况明显升高，差异有统计学意义（P < 0.05）。  结论  通过检测发现miR-21及hTERT基因在HeLa细胞株中均呈现高表达状态；miR- 21可以调节hTERT mRNA 和蛋白表达水平，从而发挥负向调控hTERT的作用。     

口腔颌面肉瘤组织中端粒酶逆转录酶的表达

目的：探讨口腔颌面部肉瘤组织中端粒酶逆转录酶（hTERT）的表达.方法：应用原位杂交技术检测37例口腔颌面部肉瘤和14例良性间叶肿瘤组织中hTERT mRNA的表达,并探讨了肉瘤组织中hTERT表达与瘤细胞分化、临床复发或转移的关系.结果：肉瘤组织中hTERT mRNA的阳性表达率明显高于良性肿瘤（62.2% vs 14.3%,P＜0.05）.在高、中、低分化肉瘤组织中,hTERT mRNA阳性表达率分别为41.7%、50.0%和86.7%,其中高、低分化组差异有统计学意义（P＜0.05）;hTERT mRNA表达与肉瘤复发密切相关（P＜0.05）;发生淋巴结转移和（或）远处转移肉瘤组织中hTERT mRNA的阳性表达有升高的趋势,但差异无统计学意义（P＞0.05）.结论：在口腔颌面部肉瘤发生发展过程中hTERT基因可能起作用.检测hTERT mRNA表达对于评估口腔颌面部肉瘤的临床侵袭潜能及预后可能有参考价值.     

角质细胞生长因子对人卵巢癌细胞系CAOV3酪氨酸蛋白激酶活性及表达的影响

目的观察角质细胞生长因子(KGF)对人卵巢上皮性癌细胞系CAOV3增殖及酪氨酸蛋白激酶(TPK)活性及表达的影响。方法培养人卵巢上皮性癌细胞系CAOV3,用四甲基偶氮蓝(MTT)比色法测定不同浓度KGF对细胞增殖的影响;通过免疫沉淀法纯化蛋白并用TPK试剂盒测定TPK活性;免疫印迹法(Western-blot)测定TPK表达。结果实验组CAOV3细胞增殖率、TPK活性及表达均大于对照组(P<0·05)。结论KGF可以促使人卵巢上皮性癌细胞系CAOV3增殖,机制与其增强TPK活性及表达有关。     

端粒酶hTERT mRNA在乳腺癌中的表达及与c-myc相关性分析

目的 探讨人乳腺癌中原癌基因c-myc与hTERT mRNA表达的关系.方法 收集癌旁正常乳腺组织、导管原位癌、浸润性导管癌各12、18和25例,用原位杂交法检测hTERT mRNA表达,并用免疫组织化学法检测乳腺导管癌c-myc表达.结果 ①hTERT mRNA在癌旁正常乳腺组织中未见表达,在导管原位癌、浸润癌中的阳性率分别为83.33%和88.00%,后两组hTERT mRNA表达明显高于正常组;②hTERT mRNA表达与浸润性导管癌肿块大小及淋巴结转移与否无相关性（P＞0.05）;③43例乳腺导管癌中hTERT mRNA与c-myc表达呈正相关（γ=0.388 4,P＜0.05）.结论 端粒酶hTERT的表达可能在乳腺导管癌的组织发生中起关键作用,c-myc的过度表达可能与乳腺导管癌hTERT基因转录激活有关.