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相似文献
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1.
目的 探索K562和K562-n细胞在裸鼠体内致瘤性不同的分子生物学机制。方法 应用基因芯片技术,检测K562细胞和K562-n细胞的差异表达基因。结果 一系列与细胞骨架有关的基因在K562-n细胞中表达上调,包括编码calaizzarin、ADP糖基化蛋白2、巨噬细胞肌动蛋白基因、硫酸乙酰肝素蛋白多糖核心蛋白基因。结论 K562-n细胞的裸鼠高致瘤特性与一些细胞骨架相关基因的表达上调有关。  相似文献   

2.
目的 探讨抑制Src激酶对K562及其衍生的Imatinib耐药K562/G细胞体外和体内抗肿瘤作用及分子机制。方法 先在体外检测ZD6474直接抑制Src激酶对细胞凋亡的影响;其次建立裸鼠皮下移植瘤模型,利用灌胃给药的方式给予ZD6474,剂量为25~100 mg/(kg·d),连续给药18 d,观察移植瘤生长情况,并用免疫组化方法分析肿瘤组织的增殖和Src激酶表达情况。结果 ZD6474在体外呈剂量依赖性直接抑制Src激酶活性;特异性抑制Src可以诱导K562和K562/G细胞凋亡,并上调Bax/Bcl-2的比例,但不影响STAT3的活性。口服给予ZD6474可以显著抑制K562、K562/G裸鼠移植瘤的生长(P<0.05);并抑制肿瘤组织中PCNA和Src激酶的表达。结论 ZD6474直接抑制Src激酶,从而抑制Imatinib耐药的K562/G和亲本K562细胞增殖,诱导凋亡,并以剂量依赖方式显著抑制K562、K562/G裸鼠移植瘤生长,其机制与ZD6474显著抑制Src激酶活性有关。  相似文献   

3.
人红白血病多药耐药细胞裸鼠移植瘤模型建立的初步研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:建立耐药特性稳定的裸鼠移植瘤动物模型,为进行体内肿瘤耐药机制研究和逆转药物的筛选提供实验模型。方法:体外培养白血病细胞系k562/A02及k562细胞,建立裸鼠的皮下肿瘤,K562/A02耐药细胞接种于裸鼠右背侧皮下,而亲本l〈562细胞接种裸鼠左背侧皮下,接种细胞数分别为1×10。、5×10。、1×10。、5×10’细肜只,观察肿瘤成瘤情况及生长特性,并比较体内耐药模型与体外细胞株耐药倍数的变化,同时利用免疫组织化学染色对裸鼠K562/A02移植瘤多药耐药蛋白Pgp进行鉴定。结果:1)K562裸鼠移植瘤的成瘤率为78.13%,K562/A02裸鼠移植瘤的成瘤率为81.25%。大约于第5—10天成瘤,两种肿瘤生长速度无明显差别;2)裸鼠K562/A02移植瘤肿瘤细胞和体外培养原代细胞对阿霉素的IC50分别为169.38ug/ml和181.69ug/ml,而K562移植瘤和体外k562细胞的IC50分别为3.47ug/ml和3.61ug/ml,耐药倍数无明显差异;3)K562/A02裸鼠移植瘤肿瘤细胞Pgp表达稳定。结论:以K562/A02细胞建立的裸鼠移植瘤模型,仍保持近似体外的耐药活性,为耐药机制和逆转研究提供了良好的体内模型。  相似文献   

4.
目的:以人胃癌细胞株 SGC7901原位移植的裸鼠模型为研究对象,探讨抑制锌指蛋白139(ZNF139)对肿瘤生长和凋亡的影响及机制。方法建立 SGC7901原位移植裸鼠胃癌模型。合成针对 ZNF139的小干扰 RNA 质粒,分为实验组、阴性质粒组和空白对照组进行瘤内注射。检测各组肿瘤生长情况;MTT 法检测细胞活性,流式细胞术测定肿瘤细胞的凋亡率,RT -PCR 和 Western blot 方法检测裸鼠胃癌组织中 ZNF139、Bax、Bcl -2基因的表达。结果与空白对照组和阴性对照组相比,实验组肿瘤生长受到明显抑制,肿瘤体积、重量均低于两对照组(P <0.05)。 MTT 结果显示,实验组肿瘤细胞活性明显低于空白对照组和阴性对照组(P <0.05)。流式细胞术显示,实验组裸鼠胃癌细胞的凋亡率明显高于空白对照组和阴性对照组(P <0.05)。 RT -PCR 和 Western blot 结果显示,与阴性对照组和空白对照组比较,实验组肿瘤组织 ZNF139、Bcl -2的表达下调,Bax 的表达升高(P <0.05)。结论抑制 ZNF139基因可以通过降低肿瘤细胞活性、促进凋亡抑制裸鼠原位移植瘤的增长,其机制与 ZNF139基因对 Bax、Bcl -2基因的调控有关。  相似文献   

5.
目的:从K562细胞中克隆新的锌指蛋白cDNA基因片段。方法:提取K562细胞中总RNA,逆转录后,用CX2C和H-C Link引物进行加端PCR,扩增产物经限制性内切酶酶切后,重组至pGEMTZf( )载体,用末端终止法测定插入片段的序列。结果:测出五个插入片段的序列。与GenBank核酸数据库中的已知序列进行同源性比较分析,发现一个序列为新的cDNA基因片段。该基因编码产物至少含有五个C2H2型锌指结构。结论:从K562细胞中克隆出一个新的C2H2型锌指蛋白cDNA基因片段,为测定该基因的全序列和功能研究奠定了基础。  相似文献   

6.
目的 研究下调肝肠钙黏连蛋白(CDH 17)基因对那可丁耐药的结肠癌细胞裸鼠移植瘤模型的 影响。方法 以结肠癌细胞为研究材料,复制结肠癌细胞裸鼠移植瘤模型。同时构建干扰质粒,从基因和 蛋白水平对CDH17 进行干扰,成功构建慢病毒载体。通过转移酶介导的末端标记法(TUNEL)检测下调 CDH 17 基因对结肠癌细胞的影响。结果 实时聚合酶链反应和Western blot 检测证实成功构建CDH17 的干 扰表达载体;TUNEL 检测表明下调CDH 17 基因可以促进对那可丁耐药的结肠癌细胞裸鼠移植瘤模型细胞凋 亡。结论 下调CDH 17 基因可以促进那可丁耐药性结肠癌细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。  相似文献   

7.
目的 探讨抑制Src激酶对K562及其衍生的imatinib耐药K562/G细胞体外和体内抗肿瘤作用及分子机制.方法 先在体外检测ZD6474直接抑制Src激酶对细胞凋亡的影响;然后建立裸鼠皮下移植瘤模型,利用灌胃给药的方式给予ZD6474,剂量为25~100 mg/(kg*d),连续给药18 d,观察移植瘤生长情况,并用免疫组化方法分析肿瘤组织的增殖和Src激酶表达情况.结果 ZD6474在体外呈剂量依赖性直接抑制Src激酶活性;特异性抑制Src可以诱导K562和K562/G细胞凋亡,并上调Bax/Bcl-2的比例,但不影响STAT3的活性.口服给予ZD6474可以显著抑制K562、K562/G裸鼠移植瘤的生长(P<0.05);并抑制肿瘤组织中增殖细胞核抗原和Src激酶的表达.结论 ZD6474直接抑制Src激酶,从而抑制imatinib耐药的K562/G和亲本K562细胞增殖,诱导凋亡,并以剂量依赖方式显著抑制K562、K562/G裸鼠移植瘤生长,其机制与ZD6474显著抑制Src激酶活性有关.  相似文献   

8.
丁酸钠诱导K562细胞肺耐药相关蛋白表达的初步研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的;研究丁酸钠(NaB)对K562细胞肺耐药相关蛋白(LRP)表达的诱导作用,方法:以K562细胞为体外模型,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测NaB诱导前后K562细胞LRP mRNA的水平,采用流式细胞仪检测比较NaB诱导前后K562细胞LRP蛋白表达的变化。结果:2mmol/L诱导后LRP mRNA水平,蛋白表达均明显增加,结论:NaB诱导可使K562细胞LRP mRNA水平和蛋白质表达的增加。  相似文献   

9.
目的:研究转染野生型p53(wtp53)基因对胆囊癌细胞裸鼠体内生长的影响。方法:在脂质体介导下将含有wtp53的真核表达质粒pCMV—p53,导入GBC—SD细胞中。用G418筛选,建立转染克隆细胞系。以PCR、RT—PCR和蛋白质印迹法证实外源p53基因的整合与表达。用裸鼠移植瘤试验检测体内致瘤性的影响。结果:野生型p53基因成功的导入胆囊癌细胞系,转染细胞中存在外源p53基因及蛋白的稳定表达。表达外源wtp53的GBC—SD—wtp53细胞,裸鼠体内致瘤性受到显著抑制。结论:野生型p53基因可有效抑制胆囊癌细胞在裸鼠体内的生长。  相似文献   

10.
在建立不同克隆化肝癌裸鼠移植瘤株模型的基础上,用ABC免疫酶标记法研究了癌基因H-ras、P53、C-erbB-2蛋白在不同克隆化肝癌裸鼠移植模型瘤组织中的表达,同时也检测了AFP、CEA、HBsAg等的表达。结果表明:具有较强侵袭力和转移力的CS克隆株肝癌裸鼠移植瘤组织对H-ras,C-erbB-2癌基因蛋白产物呈阳性反应,对AFP、P53呈弱阳性反应;而侵袭力弱的CB克隆株肝癌裸鼠移植瘤组织仅对C-erbB-2呈弱阳性反应;其母系肝癌细胞株对上述癌基因蛋白产物呈弱阳性表达。提示H-ras和突变型P53基因的异常表达确实与肿瘤转移有一定相关性。  相似文献   

11.
目的 探讨miR-181a对白血病K562细胞生长的抑制作用及其机制。方法 利用Oligofectamine脂质体法将化学合成的miR-181a转染K562细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和台盼蓝拒染法检测其对K562生长抑制的作用,结合基因芯片技术检测miR-181a对K562细胞基因表达谱的影响,筛选肿瘤相关差异基因。结果 MTT法和台盼蓝拒染法结果显示,转染后各时间点转染组K562细胞的生长均受到了明显地抑制。瑞氏一吉姆萨染色显示,转染组细胞表现出典型的生长抑制的变化。基因芯片筛出肿瘤相关差异基因30个,其中20个表达下调,10个表达上调。结论 miR-181a可能通过增强抑癌基因的表达,削弱癌基因的表达,从而抑制白血病细胞的增殖和生长。因此。其抗癌效应可应用于肿瘤的治疗。  相似文献   

12.
目的:建立裸鼠高成瘤性多药耐药白血病细胞系并研究其生物学特性.方法:采用逐步递增长春新碱(VCR)剂量的方法培养高成瘤性人白血病细胞系K562-n,采用细胞培养技术、透射电镜观察、流式细胞术、RT-PCR、免疫组化、染色体核型分析及体内接种等方法研究其生物学特性.结果:建立1株裸鼠高成瘤性人白血病多药耐药细胞系K562-n/VCR.与K562-n细胞比较,K562-n/VCR细胞对VCR耐药为其297.38倍,对蒽环类、鬼臼类等多种化疗药物具有交叉耐药性,bcr-abl融合基因仍为阳性,裸鼠体内成瘤性不变,但成瘤潜伏期缩短,成瘤体积明显增大.结论:裸鼠高成瘤性多药耐药白血病细胞系K562-n/VCR具有其独特的生物学特性.  相似文献   

13.
目的 应用基因芯片技术,研究微RNA(miR-18la)对人白血病K562细胞基因表达谱的影响。方法 针对miR-18la成熟序列设计并合成miR-181a RNA duplexes,采用OligofectamineTM脂质体法转染K562细胞。应用Agilent HumanlA寡核苷酸基因芯片,检测和分析对照组与微RNA转染组间的基因表达谱差异。结果 从20173个候选基因中,筛选出228个差异表达基因。与对照组K562细胞比较,表达上调的基因有59个,主要有代谢相关基因、抑癌基因、信号转导相关基因、免疫防御相关基因等;表达下调的有169个,主要有原癌基因、DNA结合与转录因子、代谢相关基因、信号转导相关基因、细胞周期及发育相关基因等。RT-PCR技术验证了CTCF、ZAP70、SEMA4C和RALA4个基因表达的变化。结论 微RNA转染K562细胞48h后,影响了细胞内一系列基因的表达。这些基因可能与微RNA的功能相关,同时也是转录后水平上抑制基因表达的调控方式实现的基础。这为进一步深入研究微RNA的功能及其具体的作用机制提供了重要的线索和依据。  相似文献   

14.
DNA芯片技术筛选K562肿瘤细胞特异性基因   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的 应用DNA芯片技术筛选人白血病K562细胞中的肿瘤特异性基因。方法 提取正常人白细胞和K562细胞基因组DNA,并用限制性内切酶Sau3AI酶切。其中K562细胞基因组酶切产物经DNA聚合酶Ⅰ补平加A后克隆到T-载体,挑选阳性克隆,用PCR扩增.以纯化的PCR产物做探针,制备K562细胞基因组DNA芯片。正常人白细胞基因组酶切产物加上人工通用接头,用限制性标记技术标记上荧光标记物Cy3,与制备的K562细胞基因组DNA芯片杂交。结果 芯片杂交结果经扫描分析,发现42个K562细胞肿瘤特异性基因,进一步用序列分析证实.其中有1个为BCR(breakpoint cluster gene)基因。结论 我们自制的K562细胞基因组DNA芯片可以成功地用于筛选肿瘤特异性基因.为更好地从基因组水平研究肿瘤发生的分子机制提供了新的技术途径。  相似文献   

15.
目的:利用基因表达谱芯片检测K562细胞在硫化砷作用前后基因表达的差异性进行比较研究。方法:研究对象为人慢性粒细胞白血病细胞株K562,用cy3和cy5两种不同的荧光染料通过逆转录反应将K562经硫化砷作用前后的mRNA分别标记成两种探针,并与载有一组靶的基因表达谱芯片进行杂交,通过计算机扫描分析得到这些基因在经硫化处理前后的表达差异,结果:筛选出包括与DNA结合,转录和转录因子,蛋白翻译,细胞周期等相关表达差异的基因共11条,其中7条表达上调,4条表达下调,结论:周期素E2,周期素G2可能参与硫化砷诱导K562细胞凋亡发生机制。  相似文献   

16.
目的 运用基因芯片技术研究人参总皂甙(TSPG)作用后K562细胞基因表达谱的变化.方法 200 μg/ml TSPG作用于K562细胞3 d后,提取总RNA,合成cRNA并分别用cy3和cy5标记,与AgilentHuman 1B寡核苷酸基因芯片杂交,研究基因表达谱的变化.结果 TSPG刺激K562细胞后共有362个基因表达发生变化,与对照组K562细胞比较,表达上调的基因有20个,主要有代谢相关基因,信号转导相关基因,细胞受体相关基因等;表达下调的有342个,包括免疫防御相关基因,DNA结合与转录因子,代谢相关基因,细胞周期相关基因等.RT-PCR技术验证了FOSL1、E2F2、CCNE2和ODZ1四个基因表达的变化.结论 TSPG刺激K562细胞后,影响了细胞内一系列基因的表达.这些基因可能与TSPG的抗肿瘤机制有关.  相似文献   

17.
Multidrug resistance (MDR), often associated with decreased intracellular drug accumulation in patient's tumor cells resulting from enhanced drug efflux,1 is a major obstacle to successful chemo- therapy in leukemia. It is related to the overexpression of a membrane protein, P- glycoprotein (P-170), thereby reducing drug cytotoxicity. For example, Philadelphia-chromo- some-positive (Ph+) chronic myelogenous leukemia (CML) is often resistant to chemotherapy in advanced phases because of the…  相似文献   

18.
目的:构建多药耐药基因(MDR1)启动子调控的CD-TK双自杀基因真核表达载体用于耐药白血病的靶向性基因治疗。方法:采用PCR方法从K562/A02细胞基因组DNA中扩增MDR1启动子,将其连接到双自杀基因CD TK的上游,构建pcDNA3 MDR1 Promoter CD-TK真核表达载体,用脂质体介导法将构建好的载体转染入K562、K562/A02细胞,PCR鉴定CD、TK基因的整合,RT-PCR鉴定CD、TK基因的表达。结果:PCR克隆出MDR1启动子经DNA测序证实序列正确,通过连接成功构建含正确目的基因的表达载体pcDNA3-MDR1-Promoter-CD-TK。转染入细胞后PCR结果显示,CD、TK基因均整合入K562、K562/A02细胞中,RT-PCR结果显示,562/A02/CD TK细胞CD、TK基因有特异性条带表达,而K562/CD TK细胞无特异性条带。结论: MDR1启动子调控的CD TK双自杀基因真核表达载体的成功构建及其在K562/A02细胞中的特异性表达为耐药白血病的靶向性基因治疗提供了实验基础。  相似文献   

19.
[目的]结合cDNA微阵列和RNA与冰冻组织微阵列原位杂交的方法以寻找新的特异性卵巢癌候选癌基因,为卵巢癌的早期诊断和治疗提供理论依据.[方法]利用cDNA微阵列筛选在所有3种上皮性卵巢肿瘤中(卵巢浆液性交界性肿瘤、卵巢浆液性腺癌和卵巢子宫内膜样腺癌)显示有意义表达的基因,由RNA与冰冻组织微阵列原位杂交证实其结果.[结果]28个基因在>70%卵巢肿瘤中显示出高表达,18个基因在>70%卵巢肿瘤中低表达;干扰素诱导的转膜蛋白1(ⅡTP1)被进一步用于RNA与冰冻组织微阵列原位杂交研究,其结果与cDNA微阵列研究结果相符合.[结论]将cDNA微阵列和RNA与冰冻组织微阵列原位杂交相结合是寻找卵巢癌候选癌基因的可行方法,研究中显示有意义表达的基因有可能作为新的上皮性卵巢癌候选癌基因.  相似文献   

20.
TRAIL诱导的白血病细胞凋亡过程中的基因差异表达   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的分离鉴定重组可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(rsTRAIL)在诱导JurkatT淋巴细胞白血病细胞凋亡过程中差异表达的基因。方法采用抑制性差减杂交(suppressionsubtractivehybridization,SSH)及PCR技术筛选差异表达的基因。采用狭缝杂交和Northern印迹技术鉴定差异基因片段;以DNA自动序列分析仪测定所获cDNA核苷酸顺序。结果获得了6个差异表达的基因片段,4个在TRAIL诱导的白血病细胞凋亡过程中被抑制,2个被激活;其中,A14、X1、D1、A23和C5等5个基因片段为新基因,其GeneBank登记号分别为AW731601、AW731602、AW731603、AW731604和BE239235。Northern印迹显示,基因D1在Jurkat和MCF-7中的表达明显高于其它肿瘤细胞,提示该基因可能具有肿瘤特异性。结论TRAIL诱导的细胞凋亡过程,涉及多种基因表达的改变。  相似文献   

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