应用磁共振显像动态观察脑疏宁对大鼠创伤脑水肿的干预作用

目的 通过观察大鼠脑挫裂伤后脑水肿的磁共振显像(MRI)动态变化,分析中药脑疏宁对脑水肿的干预效果.方法 SD雄性大鼠114只,随机分为脑疏宁组、模型组和假手术组.采用自由落体撞击法建立大鼠脑挫裂伤模型,术后连续动态观察T_2加权像(T_2WI)病灶区信号强度(SI)与体积变化,采用干湿重法测定脑组织含水量.结果 外伤后术侧大脑半球见T_2WI高信号改变,1 d时信号强度最高、体积最大,至7 d下降至最低点,与脑组织含水量的变化一致.脑疏宁组各时间点T_2WI信号强度、水肿体积及脑含水量均显著小于模型组(P＜0.05),术后7 d水肿吸收率显著高于模型组(P＜0.005).结论 无创性MRI检查能够对大鼠脑外伤及用药后脑水肿程度作出定量分析,是评价药物疗效的可靠手段;中药脑疏宁能够促进大鼠脑挫裂伤后脑水肿的吸收.     

大鼠脑外伤后早期AQP4的表达及意义

目的 研究大鼠急性颅脑损伤后病理过程中水通道蛋白-4（aquaporin-4,AQP4）的表达与创伤性脑水肿形成之间的关系。方法成年雄性大鼠60只。伤后4h、8h、24h、48h、和72h组。在大鼠中度冲击加速性损伤模型中,以电镜观察超微结构变化情况,用干湿比重法测脑组织含水量,采用免疫组织化学染色法检测AQP4蛋白表达,并进行脑水肿的相关性分析。结果伤后4h即出现内皮细胞肿胀、紧密连接开放、细胞器变形、血管周围水肿等超微结构损伤征象。脑的含水量亦然（P〈0．05）。并随时间的推移逐渐加重。同时AQP4的表达呈下降趋势（P〈0．001）,24h达到最低,48h有所回升,与脑水肿的发生、发展呈负性相关（r=-0．710,P=0．01）。结论大鼠脑外伤后AQP4早期的迅速下调,是机体对脑损伤所作出的一种保护性反应。推测其具有一定阻止血脑屏障破坏、减轻血管源性或细胞毒性脑水肿的作用。     

吡拉西坦氯化钠对大鼠创伤脑组织内AQP9表达的影响

目的 探讨吡拉西坦氯化钠注射液对大鼠外伤性脑水肿脑组织中AQP9基因表达和蛋白合成的影响.方法 健康SD大鼠144只,随机分为:对照组、手术组、吡拉西坦氯化钠注射液组,采用液压颅脑损伤仅,给予2.5～3.0 atm液压冲击力,制成重型液压颅脑损伤模型,分别在6 h、1 d、3 d和5 d 4个时间点将大鼠麻醉后断头取脑,采用干湿比重法测脑组织含水量,行HE染色,并用RT-PCR、WesternBlot检测脑组织中AQP9基因表达和蛋白合成的变化.结果 与对照组相比,手术组、吡拉西坦氯化钠注射液组均从6 h开始出现脑水肿,3 d时达到高峰,且吡拉西坦氯化钠注射液组脑水肿低于手术组;同样AQP9及其mRNA的表达在手术后6h后开始升高,3d后达到高峰,且手术组较对照组相和吡拉西坦氯化钠注射液组明显增高(P<0.05).结论 AQP9与脑水肿形成有关,吡拉西坦氯化钠注射液可以降低脑组织内AQP9的基因表达和蛋白合成从而减轻脑水肿.     

高原脑水肿大鼠脑组织水通道蛋白-4表达的变化及意义

目的探讨高原脑水肿大鼠脑组织水通道蛋白-4(AQP4)表达的变化及意义。方法 16只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为缺氧水肿组和对照组,每组8只,制作大鼠高原缺氧损伤模型。检测2组大鼠脑组织水含量,并采用实时定量聚合酶链反应、免疫组织化学法、Western blot测定大鼠脑组织高原缺氧损伤24 h后AQP4 mRNA和蛋白表达变化。结果与对照组比较,缺氧水肿组大鼠脑组织水含量增加,水肿明显,AQP4 mRNA和蛋白表达量上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 AQP4在高原缺氧脑水肿的形成过程中发挥了重要作用,提示对AQP4的干预可减轻高原脑水肿损伤。     

水通道蛋白4在高原脑水肿大鼠脑组织中的表达变化及意义

[目的]探讨水通道蛋白4(aquaporin4,AQP4)与高原脑水肿之间的关系.[方法]制作大鼠高原缺氧损伤模型,测脑组织含水量,采用RT-PCR、免疫组织化学、Western blotting技术测定脑组织缺氧损伤24 h后AQP4 mRNA和蛋白表达变化.[结果]缺氧损伤后,脑组织含水量增加,水肿明显;HE染色显示部分神经元肿胀或浓缩;缺氧24 h后,AQP4 mRNA和蛋白表达量均明显增加(P＜0.05).[结论]AQP4在高原缺氧脑水肿的形成过程中可能发挥了重要作用.     

AQP4在幼年大鼠感染性脑水肿中的作用机制

目的观察内毒素致幼年大鼠感染性脑水肿后水通道蛋白4（AQP4）的表达变化。方法将50只幼鼠随机分为内毒素组（40只）和对照组（10只）。建立内毒素致大鼠感染性脑水肿模型,于术后6h、12h、24h和48h处死动物,分别行脑组织含水量、血脑屏障通透率的测定,以伊文思兰含量判定血脑屏障通透率,并应用免疫组织化和RT--PCR,技术检测脑组织内AQP4蛋白和mRNA的表达水平。结果内毒素组脑组织含水量和伊文思兰含量明显高于对照组。在内毒素注射后6h时,脑组织中AQP4的表达明显增加,12h时达高峰,各时间点与对照组比较均有显著性差异（P〈0．01）。结论感染性脑水肿后脑组织中AQP4的表达增加,且与脑组织含水量和BBB的破坏呈正相关。     

法舒地尔对大鼠缺血性脑水肿脑组织内AQP9表达的影响

目的探讨法舒地尔对大鼠缺血性脑水肿脑组织中AQP9基因表达和蛋白合成的影响。方法健康SD大鼠144只,随机分为:对照组、手术组、法舒地尔组,建立大脑中动脉闭塞(MCAQ)模型,分别在6 h、24 h、72 h和5 d 4个时间点将大鼠麻醉后断头取脑,采用干湿比重法测脑组织含水量,行HE染色,并用R T-PCR、Western Blot检测脑组织中AQP4基因表达和蛋白合成的变化。结果与对照组相比,手术组、法舒地尔组均从6 h开始出现脑水肿,72 h时达到高峰,且法舒地尔组脑水肿低于手术组;同样AQP9及其mRNA的表达在手术后6 h后开始升高,72 h后达到高峰,且手术组较对照组相和法舒地尔组明显增高(P<0.05)。结论 AQP9与脑水肿形成有关,法舒地尔可以降低脑组织内AQP9的基因表达和蛋白合成从而减轻脑水肿。     

小剂量地塞米松对创伤性脑水肿AQP4的影响

目的通过观察地塞米松对脑创伤模型大鼠脑组织中水通道蛋白4(AQP4)的影响,探讨地塞米松减轻脑水肿的机制,旨在为临床脑水肿的治疗提供新思路。方法采用改进Feeney’s自由落体硬膜外撞击方法致颅脑损伤模型。随机分为假手术组(SO),创伤性脑损伤(Traumatic Brain Injury,TBI)组和地塞米松干预组(Dex)。Dex组于TBI后立即腹腔注射地塞米松(1mg·kg-1),2次/d。TBI组和Dex组再按时间顺序分为6h、12h、24h,3d和5d共五个时相组,观察各时间点大鼠脑组织含水量及AQP4mRNA和蛋白的表达。结果 TBI脑组织含水量从术后6h开始上升(79.49±0.45)%,依次增高,到24h达到最大值(81.61±0.68)%;3d时为(80.88±0.93)%仍维持在较高水平,于伤后5d(80.08±0.85)%有所下降。TBI组AQP4mRNA表达变化与脑含水量和AQP4蛋白表达趋势一致;TBI组AQP4表达从伤后6h时(0.18±0.01)开始升高,到24 h达到最大值(0.18±0.01),并持续至3d时为(0.20±0.01),5d时为(0.19±0.01),仍较高;虽然TBI组脑组织含水量及AQP4蛋白和mRNA水平表达变化情况与DEX组趋势一致,但在同一时间点上,DEX组脑组织肿胀及AQP4蛋白和mRNA水平表达程度明显低于TBI组。两组在各个时间点比较差异有统计学意义。结论小剂量地塞米松可能通过下调脑组织AQP4mRNA和蛋白的表达减轻脑水肿。     

七氟醚与大鼠缺血性脑水肿脑组织内水通道蛋白4表达的影响

目的探讨七氟醚对大鼠缺血性脑水肿脑组织中水通道蛋白4（AQP4）表达的影响。方法选择健康SD大鼠90只,随机分为三组：假手术组、大脑中动脉栓塞（MACO）组、七氟醚预处理组,每组各30只;各组分别按术后6、24、48 h 3个时间点分为3个亚组,每个亚组各10只。分别在术后6、24、48 h检测脑组织含水量,采用RT-PCR检测脑组织中AQP4 mRNA基因表达。结果①MACO组及七氟醚预处理组术后6、24、48 h的AQP4mRNA光密度积分均高于假手术组,差异有统计学意义（P〈0.05）;七氟醚预处理组术后6、24、48 h的AQP4mRNA光密度积分[（1.2743±0.0460）、（1.3454±0.0450）、（1.4443±0.0740）分]均高于MACO组[（1.4385±0.0540）、（1.5370±0.0580）、（1.6489±0.0940）分],差异有统计学意义（P〈0.05）。②MACO组及七氟醚预处理组术后6、24、48 h的脑组织含水量均高于假手术组,差异有统计学意义（P〈0.05）;七氟醚预处理组术后6、24、48 h的脑组织含水量[（75.8±6.8）%、（77.6±8.9）%、（76.3±6.4）%]均低于MACO组[（78.4±6.5）%、（80.1±7.6）%、（83.4±7.2）%],差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论脑水肿形成与AQP4的表达有密切关系,七氟醚对脑组织内AQP4的基因表达有抑制作用,进而抑制脑水肿的发展。     

利开灵对脑出血后大鼠脑水肿水通道蛋白-4表达的影响

目的 研究利开灵对脑出血后脑水肿的保护作用及可能的作用机制,进而探讨开通玄府、利水解毒法在脑出血后脑水肿中的作用.方法 采用Rosenberg法改良后建立胶原酶诱导大鼠脑出血模型(n=9),造模后每隔12 h给予利开灵浓煎剂灌胃,于12、24、48、72 h每组3只灌注固定后取大鼠脑组织做常规HE染色,观察各组大鼠病理...     

局灶低温治疗大鼠创伤性脑水肿及对乳酸的影响

目的：观察局灶低温治疗对大鼠脑创伤后脑水肿的作用和对乳酸含量的影响。方法：SD大鼠168只,随机分成6组,每组28只：A组,假手术对照组;B组,脑外伤模型对照组;C组,0℃水局灶低温治疗组;D组,10℃水局灶低温治疗组;E组,20℃水局灶低温治疗组;F组,25℃水局灶低温治疗组。除A组外各组动物均按Feeney方法制作重度脑创伤模型,B组伤后不予治疗,C,D,E,F 4组伤后30 min开始给予局灶低温治疗,20～30 min局灶脑温降至3l℃并维持3 h。所有动物分别于伤后l,3,5,7 d处死,取伤区脑组织测水含量及乳酸含量。结果：B组各时间点脑组织水含量和乳酸含量比A组升高(1,3,5,7 d组均P<0.05)。C,D,E,F组与B组相比,C组水含量和乳酸含量无统计学意义(P>0.05),其余3组均降低(P<0.05)。局灶低温各组间相比,C组水含量、乳酸含量最高(P<0.05)。结论：对大鼠脑外伤后脑水肿,0℃水局灶低温治疗无效果,10℃,20℃,25℃水局灶低温治疗有效,以20℃和25℃水局灶低温的效果更好。减少乳酸堆积、缓解酸中毒可能是其作用机制之一。     

脑疏宁对颅脑创伤后大鼠血脑屏障通透性及MMP-9表达的影响

目的观察中药脑疏宁对创伤性脑损伤(TBI)大鼠血脑屏障(BBB)通透性及脑组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达的影响,探讨中药保护血脑屏障的作用机理.方法按Feeney自由落体撞击法造成TBI模型,采用免疫组织化学技术观察大鼠脑组织MMP-9表达.结果模型组创伤后24h BBB破坏,脑组织含水量增加,病灶区MMP-9蛋白表达增高,脑疏宁组BBB通透性、脑组织含水量及MMP-9表达较模型组降低(P＜0.01).结论颅脑损伤后MMP-9表达增高,促使BBB破坏,导致血管源性脑水肿.中药脑疏宁可以保护BBB,降低脑组织含水量,其作用可能与抑制MMP-9在损伤脑组织中的表达有关.     

Effects of shenmai injection on pulmonary aquaporin 1 in rats following traumatic brain injury

Background  Aquaporin-1 (AQP1) has involved in fluid transport in diverse pulmonary edema diseases. Our study aimed to explore the dynamic changes of AQP1 in pulmonary water metabolism in rats following traumatic brain injury (TBI) and the protective effect provided by shenmai injection.

Methods  Sixty male Sprague Dawley rats weighting 280–300 g were randomly divided into three groups: the normal control group, the model group and the shenmai injection (SMI) group. One piece skull was taken away without injuring cerebral tissue in normal control group, while rats in model group and SMI group were subject to free fall injury in the cerebral hemisphere. Rats in model group received intraperitoneal normal sodium (15 ml/kg) at one hour post-injury and the same dose of shenmai injection instead in SMI group, respectively. The expression of AQP1 was detected by immunohistochemical analysis and semi-quantitative RT-PCR at 0 hour, 10 hours, 72 hours and 120 hours after TBI. Arterial blood gas analysis and lung wet to dry were also measured.

Results  AQP1 was mainly presented in the capillary endothelium and slightly alveolar epithelial cells in three groups, but the expression of AQP1 in the normal control group was positive and tenuous, weakly positive in the model and SMI groups, respectively. Compared with normal control group, AQP1 mRNA levels were down regulated in the model and SMI groups at 10 hours, 72 hours and 120 hours (P <0.05). While AQP1 mRNA levels in the SMI group was up-regulated than that in the model group (P <0.05). Lung wet to dry weight ratio (W/D) in the model and SMI groups at 10 hours were higher than that in normal control group (P <0.05). Compared with normal control group, PaO₂ was markedly lower in the model and SMI groups (P <0.05), but there were no statistically significant differences between model and SMI groups (P >0.05).

Conclusions  The decreased AQP1 expression may be involved in the increased lung water content and dysfunction of pulmonary water metabolism following TBI. The treatment with SMI could improve water metabolism by promoting AQP1 expression.

     

电针影响大鼠脑缺血再灌注后水通道蛋白4 (AQP4)的表达及其在血管周边的分布

 目的 研究电针干预大鼠脑缺血再灌注损伤时脑内水通道蛋白4 (aquaporin 4,AQP4)的表达与分布改变。 方法 选用SD雄性大鼠406只,分为正常对照组(n=40),脑缺血组(n=138),脑缺血+电针组(电针处理组,n=138)和脑缺血+假电针组(n=90)。利用线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,缺血1 h后实施脑血流再灌注。电针处理组在脑缺血开始后立即给予电针刺激,穴位选择“水沟”(GV 26)与“百会”(GV 20)。利用Western blot检测AQP4的蛋白表达水平,胶体金免疫电镜观察AQP4免疫阳性颗粒在血管周边的分布,常规焦油紫染色计算脑缺血后的脑梗死体积以及脑肿胀程度。神经行为学评估通过Garcia量表进行评分。结果 (1)再灌注24 h内,电针可下调因脑缺血而诱导的AQP4表达升高,再灌注后6 h和12 h分别是缺血组的0.63倍和0.72倍(P < 0.05);(2)与正常对照组相比,血管周边AQP4的免疫阳性颗粒在再灌注后6 h增多,在再灌注后24 h减少,电针干预组中血管周边AQP4的免疫阳性颗粒密度发生改变,其变化与缺血组相反,差异有统计学意义(P < 0.05);(3)电针减轻脑缺血后的脑梗死及脑肿胀,促进神经行为功能的恢复。结论 电针下调因缺血而导致的AQP4蛋白的表达升高,并动态改变其在血管周边的分布。电针对AQP4的调控作用可能与电针的神经保护作用机制相关。     

重组人促红细胞生成素对大鼠急性创伤性脑损伤脑组织中基质金属蛋白酶-9及水通道蛋白-4表达的影响

目的 探讨重组人促红细胞生成素（rhEPO）对大鼠急性创伤性脑损伤的神经保护作用及其机制。方法健康雄性SD大鼠55只随机分为假手术组（n=5）、对照组（n=25）和EPO治疗组（n=25）;对照组和治疗组采帽改进的Feeney等的方法制作脑创伤模型,EPO治疗组在模型建立后立即腹腔注射rhEPO5000U／kg,对照组和似手术组往等时间点给予等量生理盐水。根据伤后处死时间点不同每组再分为5个亚组,即6h、24h、48h、3d、7d组．每个亚组5只动物。断头、取脑,行HE染色和免疫组织化学方法检测大脑皮层组织中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及水通道蛋白-4（AQP-4）的表达。结果脑创伤大鼠6h创伤灶脑组织出现MMP-9和AQP-4的表达。与假手术组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。EPO治疗组和对照组槲比较MMP-9及AQP-4的表达明显降低（P〈0．05）。结论 rhEPO对大鼠急性创伤性脑损伤有一定的神经保护作用,其机制可能是通过降低MMP-9及AQP-4的表达来实现的。     

p38信号通路对大鼠脑创伤后MMP-9的表达及脑水肿形成的影响

目的观察并探讨阻断p38通路激活对大鼠脑创伤后基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达变化及脑水肿形成的影响及意义。方法健康成年雄性SD大鼠130只,随机分为正常组10只,对照组40只:假手术处理;脑创伤组40只:制作改进式Feeney’s脑创伤模型;p38抑制组40只:脑创伤前15 min股静脉注射p38抑制剂(SB203580,400μg/kg)。分别在脑创伤后2 h、2 d时断头取脑,采用RT-PCR法和Western blotting法检测脑组织P38磷酸化水平及MMP-9 mRNA及蛋白表达水平,Evans Blue法测定血脑屏障通透性变化;干湿比重法测定脑组织含水量。结果(1)与对照组相比,脑创伤组磷酸化p38的水平在伤后2 h明显上升;MMP-9 mRNA和蛋白在脑创伤后2 h未见明显差异(P>0.05),但2 d时表达均显著增高(P<0.01)。与脑创伤组相比,p38抑制组伤后2 h时p38磷酸化水平明显降低(P<0.01),MMP-9 mRNA和蛋白在创伤后2 d时的高表达也均有明显下降(P<0.05);(2)与对照组比较,脑创伤组血脑屏障通透性在创伤后2 h明显增加(P<0.05),2 d时出现继续升高(P<0.01);脑含水量在创伤后2 h无明显变化(P>0.05),在2 d时显著增加(P<0.01)。与脑创伤组相比,p38抑制组血脑屏障通透性及脑含水量在创伤后均有明显降低(P<0.05)。结论阻断p38通路激活可下调大鼠脑创伤后MMP-9高表达,减轻血脑屏障破坏及创伤性脑水肿,提示p38信号通路可通过调节MMP-9的表达变化在创伤性脑水肿中发挥重要作用。     

大鼠创伤性脑损伤后血脑屏障通透性变化的研究

目的研究大鼠创伤性脑损伤后血脑屏障（BBB）通透性的变化。方法参照Feeney’s自由落体致伤法,制作大鼠顶叶局灶皮质挫裂伤模型。应用伊文氏兰（Evans Blue,EB）示踪,测定伤后不同时点皮层和海马脑组织中EB含量;应用荧光显微镜观察皮层和海马是否存在EB的渗出。结果损伤灶皮层和同侧海马中EB含量在伤后1～6h与伤后1～7d明显增多,高峰期在3h和3d。荧光显微镜下发现血脑屏障中间期损伤灶同侧海马仍然存在EB的渗出。结论大鼠顶叶局部脑挫裂伤后,损伤灶皮层和同侧海马BBB开放呈双相性变化,BBB开放中间期仍然有很少量EB渗出。     

颅脑损伤后脑组织中水通道蛋白4表达的变化

目的研究颅脑损伤后水通道蛋白4（AQP-4）在脑组织中表达的变化及其临床意义。方法对27例颅脑损伤患者行开颅手术,将术中取得的挫伤水肿脑组织（损伤组）和颞极减压获得的相对正常脑组织（对照组）进行AQP-4的免疫组化和re-al- time PCR检测。结果损伤组各时点挫伤水肿脑组织AQP-4的表达量均明显高于对照组（均P＜0.05）;损伤24h后周围水肿脑组织中的AQP-4表达量显著升高。结论颅脑损伤后脑水肿的形成和发展与AQP-4的异常表达密切相关。