siRNA干扰survivin表达对腺样囊性癌细胞株ACC-M的抑制作用

目的探讨靶向survivin基因RNAi对腺样囊性癌增殖的抑制效应。方法设计、合成siRNA(small interfering RNA),构建表达载体pGenesil-shRNA-survivin,将重组质粒导入人腺样囊性癌ACC-M细胞株。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western-blot法分别检测转染后的ACC-M细胞中survivin mRNA和蛋白表达的变化,用噻唑蓝(MTT)法来检测细胞的增殖。结果测序证实表达载体构建成功,在pGenesil-shRNA-survivin的ACC-M细胞株中,survivin mRNA及蛋白表达明显降低,ACC-M细胞增殖受到抑制。结论pGenesil-shRNA-survivin重组质粒能有效抑制腺样囊性癌细胞增殖。     

沉默VEGF基因对腺样囊性癌细胞侵袭的影响

目的:利用RNAi技术沉默腺样囊性癌细胞株ACC-2中VEGF的表达,探讨其对肿瘤细胞侵袭能力的影响。方法:利用RNAi技术沉默VEGF表达,用Transwell侵袭实验检测细胞体外侵袭能力的变化。结果:与对照组比较,VEGF的siRNA能有效地抑制实验组ACC-2细胞的侵袭能力。结论:沉默VEGF减弱腺样囊性癌的侵袭能力。     

CDH12基因siRNA对涎腺腺样囊性癌细胞侵袭力的影响

目的:探讨钙粘素12(Cadherin 12,CDH12)对涎腺腺样囊性癌(Salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)细胞侵袭和转移能力的影响.方法:以人涎腺腺样囊性癌高转移细胞株(Salivary adenoid cystic carcinoma cell line with hi...     

金环蛇毒体外对人类小涎腺腺样囊性癌细胞的抑制作用

目的:研究金环蛇(BANDED KRAIT)蛇毒体外抗人类小涎腺腺样囊性癌(NACC)细胞活性.方法:以不同浓度的金环蛇毒作用于NACC细胞,应用三磷酸腺苷-生物荧光肿瘤化疗药物敏感试验法(ATP-TCA法)测定细胞的增殖状态;应用细胞形态学分析细胞凋亡.结果:实验显示金环蛇毒对体外培养的NACC细胞有明显的抑制作用,与浓度和作用时间呈正比.HE染色观察到金环蛇毒作用NACC细胞后其形态发生改变.结论:金环蛇毒能抑制NACC细胞增殖并诱导其凋亡.     

槲寄生碱对人腺样囊性癌细胞的抑制作用

目的：研究槲寄生碱对人腺样囊性癌（ACC）细胞生长的抑制作用。方法：以5-氟尿嘧啶(5-FU)作用组为阳性对照组，以不加药组为阴性对照组，实验组为0.625、1.250、2.500和5.000 mg•L^-1槲寄生组。采用CCK-8试剂盒测定槲寄生碱对ACC细胞的抑制作用， 通过绘制细胞生长曲线观察药物作用后细胞的生长情况及状态。利用PCNA免疫化学染色观察槲寄生碱对ACC细胞增殖的影响。 结果：槲寄生碱可抑制ACC细胞的生长，其IC₅₀值为2.24 mg•L^-1；生长曲线显示，药物作用后的ACC细胞生长较对照组缓慢；形态学观察显示药物作用后的ACC细胞逐渐变为圆形，附壁性减弱；药物作用后的ACC细胞PCNA的表达率明显弱于对照组（P<0.001）。结论：槲寄生碱可以抑制ACC细胞生长、增殖，有望成为临床治疗ACC的辅助药物。     

姜黄素与β-榄香稀联用对涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-LM生长抑制和凋亡的协同作用

[目的]研究姜黄素与β-榄香稀联合对体外培养涎腺腺样囊性癌细胞株SACC—LM生长抑制和凋亡的情况。[方法]应用MTF测定法、流式细胞术和透射电镜观察等方法观察姜黄素协同β-榄香稀（浓度比1：1）诱导SACC—LM细胞凋亡率及凋亡方式。[结果]1）用MTT测定法,姜黄素协同β-榄香稀（浓度比1：1）作用SACC—LM细胞24h后,其抑制率有明显协同效应。2）联合用药对SACC—LM肿瘤细胞Caspase-3的表达阳性率为（46．2&#177;3．2）％明显高于单独用药组。3）用流式细胞术,10μg／mL姜黄素与10μg／mLβ-榄香稀联合作用SACC—LM细胞24h后诱导SACC—LM细胞发生凋亡,并将细胞周期阻滞于S期。4）用透射电镜观察,协同用药（浓度比1：1）作用SACC—LM细胞24h后,出现明显细胞凋亡特征。[结论]姜黄素和β-榄香稀（浓度比1：1）联合应用可增强对SACC—LM细胞株的敏感作用,并诱导其产生凋亡,使其细胞周期阻滞于S期。     

RNA干扰iNOS基因对腺样囊性癌细胞增殖活性的影响

目的：采用RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术下调腺样囊性癌细胞株ACC-M中iNOS的表达,探讨其对肿瘤细胞增殖活性的影响。方法：采用siRNA干扰技术下调iNOS表达,RT-PCR法测定细胞内iNOS mRNA的表达;MTT法测定ACC-M细胞增殖活性的变化。结果：与对照组比较,iNOS的siRNA能有效地抑制实验组ACC-M细胞中iNOS的表达（P〈0.05）,并且实验组细胞的体外增殖活性降低（〈0.05）。结论：RNA干扰iNOS可以降低腺样囊性癌的增殖活性。     

CDH4对涎腺腺样囊性癌细胞侵袭力的影响

目的探讨CDH4对涎腺腺样囊性癌(SACC)细胞侵袭和转移能力的影响。方法以人SACC高转移细胞株SACC-M为研究对象,利用CDH4小分子干扰RNA对CDH4基因进行沉默,Western blot检测转染前后CDH4蛋白的表达变化,体外侵袭实验比较细胞侵袭能力的变化,体外迁移运动实验比较细胞运动能力的改变。结果 CDH4siRNA明显下调CDH4基因的表达。CDH4表达下调后,SACC-M细胞体外侵袭能力显著降低,体外迁移运动能力明显降低。结论 CDH4可以明显地促进SACC细胞的体外侵袭和迁移运动,提示CDH4可能在SACC的恶性进展中起着重要作用。     

眼镜蛇毒体外抗人类小涎腺腺样囊性癌细胞活性研究

目的：研究眼镜蛇毒（Cobra venom）体外抗人类小涎腺腺样囊性癌（NACC）细胞活性以及对细胞凋亡的影响。方法：以不同浓度的眼镜蛇毒作用于NACC细胞,应用三磷酸腺苷-生物荧光肿瘤化疗药物敏感试验法（ATP-TCA法）测定细胞的增殖状态;应用细胞形态学和流式细胞仪分析细胞凋亡。结果：实验显示眼镜蛇毒对体外培养的NACC有明显的抑制作用,与浓度和作用时间呈正比。用浓度2．0mg／L的眼镜蛇毒处理癌细胞48h后,试验组细胞凋亡率（52．4％）显著高于对照组（5．7％）。HE染色观察到眼镜蛇毒作用NACC细胞后其形态发生改变。结论：眼镜蛇毒能抑制NACC细胞增殖并诱导其凋亡。     

广西眼镜蛇毒对人类小涎腺腺样囊性癌细胞株的抑制作用

目的研究广西眼镜蛇毒（guangxi cobravenom）对人类小涎腺腺样囊性癌（NACC）细胞在体外生长的抑制作用。方法以不同浓度的眼镜蛇毒作用于NACC细胞，应用三磷酸腺苷一生物荧光肿瘤化疗药物敏感试验法（ATP—TCA法）测定细胞的增殖状态；应用细胞形态学和流式细胞仪观察细胞凋亡。结果实验显示眼镜蛇毒对体外培养的NACC有明显的抑制作用，与浓度和作用时间呈正比。用浓度2．0μg／mL的眼镜蛇毒处理癌细胞48h后，试验组细胞凋亡率显著高于对照组。HE染色观察到眼镜蛇毒作用NACC细胞后其形态发生改变。结论眼镜蛇毒能抑制NACC细胞增殖并诱导其凋亡。     

凋亡相关蛋白在大肠癌中的表达及其与凋亡关系的研究

目的 探讨大肠癌中survivin和caspase-3的表达及其与细胞凋亡的关系.方法 采用免疫组织化学法测定50例正常大肠黏膜和66例大肠癌组织中survivin和caspase-3的表达.结果 survivin在大肠癌中的表达明显高于正常大肠黏膜组织(48.5%vs0,P<0.01),与淋巴结转移和分化程度有关(P<0.05).caspase-3在大肠癌中的表达明显低于正常组织(46.9%vs80.0%,P<0.05),与Dukes分期有关(P<0.05).survivin和caspase-3的表达具有相关性(P<0.05).结论 survivin、caspase-3与大肠肿瘤的细胞凋亡密切相关,参与细胞凋亡的调节机制,在大肠癌恶变的过程中发挥重要的作用.     

RNA干扰沉默survivin基因在抑制卵巢癌裸鼠移植瘤中的作用

目的 观察pshRNA-survivin在体内是否能抑制卵巢癌移植瘤体的生长.方法 建立人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,瘤内注射pshRNA-survivin,观察肿瘤生长情况.半定量RT-PCR、免疫组织化学检测移植瘤的survivin表达情况,TUNEL检测移植瘤的细胞凋亡情况.结果 pshRNA-survivin能明显抑制肿瘤组织中survivin的表达,促进肿瘤细胞的凋亡,减缓肿瘤生长速度.结论 pshRNA-survivin明显抑制了卵巢癌裸鼠移植瘤的增殖.     

RNA干扰Survivin基因对Hela细胞凋亡及抗肿瘤药物敏感性的影响

目的:研究RNA干涉Survivin基因表达对人宫颈癌Hela细胞凋亡及抗肿瘤药物敏感性的影响.方法:将Sur-vivin SiRNA片段通过脂质体的介导转染宫颈癌Hela细胞系;RT-PCR检测Hela细胞中Survivin mRNA的表达,Western Blot检测Survivin蛋白表达;确定转染成功使干扰组细胞Survivin表达下调后,以流式细胞仪检测细胞凋亡率变化;细胞计数后绘制生长曲线观察细胞增殖能力变化;MTT法检测细胞对抗肿瘤药物的敏感性变化.结果:与对照组相比,两个Survivin基因干扰组的mRNA和蛋白表达抑制率分别为55%,60%和42%,55%,表达均下降(P<0.05);细胞凋亡率分别为19%和22%,较对照组高(P<0.05);生长曲线显示干扰组的细胞增殖能力下降;同一剂量药物作用下,各组细胞对抗肿瘤药物的敏感性均有提高,其中NVB组和PDD组有统计学意义(P<0.05).结论:Survivin SiRNA片段转染进入Hela细胞后,Survivin mRNA和蛋白表达水平均下降,Hela细胞的凋亡率增加,对抗肿瘤药物的敏感性增加.     

survivin和caspase-3在弥漫大B细胞性淋巴瘤中的表达及意义

目的：探讨survivin和caspase-3在弥漫大B细胞性淋巴瘤（DLBCL）的表达及意义。方法：用免疫组化SP法检测86例DLBCL中survivin和caspase-3的表达,并用SPSS 17.0统计软件进行统计分析。结果：按性别、年龄、分期及LDH高低分组,survivin与caspase-3的高表达差异无统计学意义。按国际预后指数（IPI）分组,从低危到高危,survivin的高表达率分别为35.8%、67.9%、85.2%、88.2%,caspase-3的高表达率分别为78.6%、32.1%、29.6%、17.6%,survivin与caspase-3的高表达差异均有统计学意义（χ2=17.44,P=0.003;χ2=14.12,P=0.003）。按疗效分组,（CR＋PR＋SD）组与PD组比较,survivin的高表达率分别为66.7%与90.0%,caspase-3的高表达率分别为43.9%与10.0%,sur-vivin与caspase-3的高表达差异均有统计学意义（χ2=4.154,P=0.042;χ2=7.669,P=0.006）。结论：survivin和caspase-3可以作为DLBCL的疗效及预后指标。     

人肝细胞生长因子基因表达对CCl4损伤的人肝细胞及大鼠肝星状细胞株的影响及其机制

目的：探讨人肝细胞生长因子(hHGF) 基因的表达对CCl4损伤的人肝细胞及大鼠肝星状细胞株（CFSC-2G）生物学效应的影响及其对CCl4损伤的人正常肝细胞株（HL-7702）的保护作用,进一步探讨凋亡产生的机制。方法：将获得的稳定转染HL-7702细胞克隆,分为4组,Ⅰ组为转染PCI-neo-hHGF实验组,Ⅱ组为转染PCI-neo空载体对照组,Ⅲ组为仅加入脂质体的对照组,Ⅳ组为空白对照组。采用MTT法测定细胞增殖活性。采用Western blotting测定转染PCI-neo-hHGF的HL-7702细胞和CFSC-2G细胞中hHGF、caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白质的表达。结果：HL-7702细胞转染PCI-neo-HGF并培养48 h后,细胞的增殖活性明显高于PCI-neo空载体对照组、脂质体转染对照组和空白对照组HL-7702细胞（P<0.01）,而且随着转染PCI-neo-HGF剂量增加,细胞的增殖活性有一定的增长趋势,但各组间比较差异无显著性（P>0.05）;PCI-neo-HGF转染的HL-7702细胞caspase-3蛋白质表达量较CCl4损伤的HL-7702细胞和PCI-neo转染的HL-7702细胞明显降低,未检测到caspase-8和caspase-9蛋白质的表达;PCI-neo-HGF转染的CFSC-2G细胞caspase-3蛋白质表达量较CCl4诱导的CFSC-2G增加,caspase-9蛋白质表达也呈阳性。结论：PCI-neo-HGF可促进体外培养的HL-7702细胞的生长增殖,能够抑制CCl4损伤的HL-7702细胞的凋亡,促进大鼠CFSC-2G细胞的凋亡,其作用机制可能与上调caspase-3和caspase-9蛋白质表达有关。     

Survivin反义寡核苷酸诱导胃癌SGC7901细胞凋亡及对白藜芦醇的增敏作用

目的:观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对胃癌SGC7901细胞的增殖、凋亡及对白藜芦醇敏感性的影响. 方法:人工合成survivin硫代ASODN,通过脂质体转染胃癌细胞株(SGC7901)后,用MTT法检测细胞毒作用;用荧光染色、流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR、免疫组化技术检测survivin mRNA及蛋白的表达. 结果: ①survivin ASODN抑制胃癌SGC7901细胞的增殖呈时间和剂量依赖性; ②survivin ASODN处理组SGC7901细胞24 h后凋亡率为(33.6±1.2)%,正义寡核苷酸(SODN)组为(10.7±0.8)%,两组相比,差异有显著性(P＜0.05);③survivin ASODN处理组SGC7901细胞survivin蛋白及mRNA的表达水平显著下降. ④survivin ASODN和白藜芦醇联合处理组SGC7901细胞24,48,72 h生长抑制率,显著高于单用survivin ASODN组(P＜0.05)和单用白藜芦醇组(P＜0.05). 结论:survivin ASODN能够抑制胃癌SGC7901细胞的增殖、诱导凋亡,并能增加胃癌细胞株SGC7901对白藜芦醇的敏感性,推测可能通过下调survivin mRNA及蛋白表达而起作用.     

甘草黄酮诱导肝癌ＳＭＭＣ-７７２１细胞凋亡及其对相关蛋白ｓｕｒｖｉｖｉｎ表达的影响

目的:探讨甘草黄酮(GF9)对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的诱导作用及其机制.方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测GF9对人肝癌细胞SMMC-7721细胞生长的影响,Hoechst染色法和电镜观察GF9诱导细胞凋亡的形态变化,流式细胞仪检测GF9诱导的细胞凋亡率,并通过免疫印迹法检测凋亡相关蛋白survivin和pro-caspase-3表达水平的变化.结果:GF9可抑制SMMC-7721细胞增殖,并呈时间剂量效应;400 μmol/L GF9可诱导细胞凋亡,呈时间依赖性;随着GF9作用时间的延长,survivin和pro-caspase-3表达下调.结论:GF9能诱导SMMC-7721细胞凋亡,这可能与GF9能够引起抑制凋亡蛋白survivin的下调有关.     

RNAi沉默survivin基因表达对膀胱癌EJ细胞增殖的影响

目的 通过RNA干扰(RNAi)阻断EJ细胞中survivin基因的表达,研究survivin基因沉默后对细胞生长和细胞凋亡的影响.方法 将合成的DNA正义链及反义链变性、退火,形成的双链DNA与pSilencer2.0线性质粒以T4 DNA连接酶连接,重组质粒经酶切、DNA测序鉴定后,用脂质体法转染EJ细胞,通过RT-PCR、免疫印迹检测干扰效果.MTT法检测细胞生长的影响,流式细胞仪检测转染后EJ细胞的凋亡变化.结果 酶切及测序证实设计合成的DNA片段已正确插入载体.RT-PCR、免疫印迹检测实验表明:pSilencer2.0-SVV1、pSilencer2.0-SVV2重组载体均能有效地阻断EJ细胞中survivin基因的表达,使survivin基因在mRNA和蛋白水平上的表达明显下调(P<0.01),后者抑制效果更佳.转染后的EJ细胞生长速度明显变慢.转染pSilencer2.0-SVV2实验组细胞的凋亡增加了17.0%.结论 重组真核载体能有效抑制EJ细胞的survivin表达,抑制细胞的增殖,诱导细胞凋亡.