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相似文献
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1.
VEGF165反义RNA表达对人胃癌细胞恶性生物学行为的影响   总被引:12,自引:4,他引:8  
目的利用本室构建的反义VEGF165(血管内皮生长因子,vascular endothelial growth factor)真核表达载体,研究VEGF反义RNA表达对人胃癌细胞生物学表型的影响. 方法用阳性脂质体介导的基因转染技术,将VEGF反义RNA重组体转入人胃癌细胞系,观察转染细胞的细胞周期、增殖能力及致瘤生长情况等生物学表现. 结果 VEGF反义RNA重组体转染胃癌细胞后,斑点杂交、间接免疫荧光等分析显示,反义RNA基因转染技术可使VEGF的表达明显减弱;与未转染的细胞相比,G2/M期细胞增加(0.39),而S期细胞减少(0.54);克隆形成率(2.2%)低于未转染细胞(4.0%);肿瘤细胞接种裸鼠后33 d时,VEGF反义RNA表达人胃癌细胞所致的移植瘤体积(345±136) mm3明显小于未转染细胞所致的移植瘤体积(1534±363) mm3. 结论 VEGF反义RNA可以通过抑制肿瘤组织血管生成而防治肿瘤的生长,另外VEGF的表达可能与细胞增殖能力有关.  相似文献   

2.
目的 探讨应用血管内皮生长因子165(VEGF165)反义RNA治疗人脑胶质瘤的可行性。方法 构建和鉴定反义VEGF165真核表达载体 ;将其转染入人脑胶质瘤细胞SHG44 ,检测其转染前、后的生物学性状 ;比较转染前、后SHG44细胞的裸鼠皮下致瘤性 ;分别应用免疫印迹、免疫组织化学、微血管计数、电镜和流式细胞仪检测上述改变。结果 成功构建反义VEGF165真核表达载体并在SHG44细胞获得表达 ,该细胞生物学性状不受外源基因表达影响 ,其在裸鼠皮下致瘤性和血管生成能力明显下降。肿瘤终体积 :实验组 2 12mm3,对照组 7897mm3(P <0 .0 1) ;血管计数 :实验组 5 .5 0 ,对照组11 2 2 (P <0 .0 1)。结论 VEGF165反义RNA能有效抑制人脑胶质瘤血管生成和肿瘤生长 ,为基因治疗实体瘤奠定了基础  相似文献   

3.
目的 探讨过表达血管内皮生长因子(VEGF)对垂体瘤微血管生成的影响.方法 用携带VEGF165基因的腺病毒质粒转染垂体瘤MMQ细胞,并建立稳定的过表达VEGF165的MMQ细胞株.制备鸡胚尿囊膜血管生成模型(CAM),观察过表达VEGF165 MMQ细胞的上清液对CAM血管生成的影响.分别接种过表达VEGF165 MMQ细胞、空载体细胞和正常MMQ细胞于裸鼠皮下并形成皮下移植瘤.CD31免疫荧光法检测过表达VEGF基因对裸鼠皮下MMQ细胞移植瘤微血管密度的影响.结果 大部分转染组细胞镜下呈现绿色荧光,RT-PCR和Western blot证实转染携带VEGF165基因的腺病毒质粒(Adv-GFP-VEGF165)的MMQ细胞中目的 基因能够有效表达.VEGF过表达能够诱导CAM局部血管生成,并显著增加MMQ细胞裸鼠皮下移植瘤的微血管密度.结论 VEGF在垂体瘤血管生成过程中起重要作用.  相似文献   

4.
目的探讨过表达血管内皮生长因子(VEGF)对垂体瘤微血管生成的影响。方法用携带VEGF165基因的腺病毒质粒转染垂体瘤MMQ细胞,并建立稳定的过表达VEGF165的MMQ细胞株。制备鸡胚尿囊膜血管生成模型(CAM),观察过表达VEGF165 MMQ细胞的上清液对CAM血管生成的影响。分别接种过表达VEGF165 MMQ细胞、空载体细胞和正常MMQ细胞于裸鼠皮下并形成皮下移植瘤。CD31免疫荧光法检测过表达VEGF基因对裸鼠皮下MMQ细胞移植瘤微血管密度的影响。结果大部分转染组细胞镜下呈现绿色荧光,RT-PCR和Western blot证实转染携带VEGF165基因的腺病毒质粒(Adv-GFP-VEGF165)的MMQ细胞中目的基因能够有效表达。VEGF过表达能够诱导CAM局部血管生成,并显著增加MMQ细胞裸鼠皮下移植瘤的微血管密度。结论 VEGF在垂体瘤血管生成过程中起重要作用。  相似文献   

5.
目的 应用RNAi技术沉默血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)基因,探讨其对人结肠癌细胞系HCT116裸鼠移植瘤生长及其血管生成的影响.方法 将自行构建的以VEGF基因为靶向表达短发夹状RNA的重组质粒(pAVU6 27-VEGF-siRNA)转染到结肠癌HCT116细胞株中(C组),以空质粒(pAVU6 27)转染为阴性对照(B组),经G418筛选出阳性克隆细胞,未转染质粒的HCT116细胞株为空白对照(A组),建立裸小鼠皮下移植瘤模型.通过测量移植瘤的质量、体积观察移植瘤生长;免疫组化检测瘤组织中VEGF蛋白表达及组织内的微血管密度(microvessel density,MVD)改变.结果 C组肿瘤瘤块的体积(0.169±0.009)cm3和质量(0.192±0.022)g明显小于A、B组(P<0.05).A、B组荷瘤组织中VEGF均表达强阳性,表达位于肿瘤细胞的细胞质及细胞膜上,呈棕黄色.C组荷瘤组织中VEGF呈弱阳性表达,组间差异显著(P<0.05).C组荷瘤组织中MVD明显小于两对照组,组间差异显著(P<0.05).VEGF表达与MVD呈显著正相关(r=0.810,P<0.01).结论 应用RNAi技术沉默VEGF基因能明显抑制人结肠癌细胞系HCT116裸小鼠移植瘤的生长,其机制与其抑制移植瘤中VEGF的表达和瘤组织内血管生成有关.  相似文献   

6.
反义VEGF165真核表达载体的构建和表达   总被引:1,自引:1,他引:0  
吴景文  章翔  费舟  高大宽  屈延  粱景文  刘先珍 《医学争鸣》2000,21(10):1174-1177
目的 进行抗血管生成治疗人脑胶质瘤实验,构建和鉴定携带人反义VEGF165基因的真核表达载体。方法 将VEGF165cDNA反向克隆入pcDNA3,构建CMV启动子控制的真核表达载体pcDNA-AVEGF165,用酶切鉴定结果;应用该载体转染人脑胶质瘤细胞SHG44,G418筛选阳性克隆;Western blot和免疫组化检测转染前、后瘤细胞的VEGF表达。检测转染前、后瘤细胞的生物学性状。结果 获得反向构建的pcDNA-AVECF165真核表达载体,VEGF165反义RNA阻断了SHG44细胞的VEGF表达,该细胞生物学性状不受外源基因的表达影响。结论 成功构建的反义VEGF165真核表达载体,为人脑胶质瘤的反义基因治疗提供了必要的条件。  相似文献   

7.
[目的]构建含有人血管内皮生长因子165(VEGF165)基因的重组腺病毒载体并观察其在C17.2神经干细胞的表达,为下一步脑缺血的转基因细胞移植治疗提供基础.[方法]将VEGF165基因克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrackCMV,获得重组质粒pAdTrack VEGF165,经酶切线性化后,与腺病毒骨架质粒pAdEasy共同转染大肠杆菌BJ5183同源重组获得重组腺病毒质粒,将线性化的重组腺病毒质粒转染293细胞包装获得有感染能力但复制缺陷的重组腺病毒pAdCMV VEGF165,转化体外培养的C17.2神经干细胞.通过RT-PCR、原位杂交、免疫组化、Western blot法检测其在C17.2神经干细胞中的表达.[结果]重组腺病毒AdCMV VEGF165在293细胞中包装成功,病毒滴度达2×1011efu/mL.病毒上清液经ELISA检测VEGF165表达的量为(1135±138)ng/L.重组腺病毒转染神经干细胞后有稳定表达.[结论]成功构建pAd VEGF165重组腺病毒,获得了稳定表达VEGF165的神经干细胞克隆,为下一步脑缺血的转基因细胞移植治疗提供了基础.  相似文献   

8.
目的 构建血管内皮生长因子(VEGF165)真核表达载体pcDNA3.1(-)/VEGF165,转染鼠膀胱平滑肌细胞并检验其生物学活性.方法 将VEGF165 cDNA克隆于真核表达载体pcDNA3.1(-),构建真核表达载体pcDNA3.1(-)/VEGF165;并转染入鼠膀胱平滑肌细胞,采用RT-PCR和免疫荧光染色检测VEGF165基因在鼠膀胱平滑肌细胞中的表达,并用MTT法检测转染后细胞上清液中VEGF165的生物学活性.结果 和结论将构建的真核表达载体pcDNA3.1(-)/VEGF165转染入鼠膀胱平滑肌细胞后,VEGF的表达增高,转染后细胞上清液具有促使内皮细胞增殖的生物学活性.  相似文献   

9.
血管内皮生长因子反义RNA抑制人喉鳞癌的生长   总被引:2,自引:0,他引:2  
孙永柱  崔鹏程  陈文弦  李贵泽 《医学争鸣》2002,23(19):1773-1775
目的 观察血管内皮生长因子1 6 5反义 RNA对人喉鳞癌细胞 Hep- 2的作用 ,探讨其治疗喉癌的可行性 .方法 采用亚克隆技术 ,构建并鉴定反义 VEGF1 6 5真核表达载体 ;重组质粒转染人喉鳞癌细胞 Hep- 2后 ,将其接种于裸鼠皮下 ,利用原位杂交、EL ISA、激光共聚焦、图像分析及微血管计数等方法 ,观察转染前后 Hep- 2细胞的生物学性状和致瘤性的改变 .结果 构建的 VEGF1 6 5反义真核表达载体在 Hep- 2细胞中获得表达 ,转染后的细胞 VEGF1 6 5的表达下降 70 % ,其生物学性状不受外源基因表达的影响 ,但其在裸鼠皮下的致瘤性和血管生成能力明显下降 ,实验组、空载体组和对照组肿瘤体积分别为 (736± 2 6 2 ) ,(74 4 0± 335 )和 (772 0± 35 0 ) mm3(P<0 .0 1) ,微血管密度分别为 (9.6± 5 .4 ) ,(45 .5± 8.4 )和 (48.4± 7.6 ) mm- 2 (P<0 .0 1) .结论  VEGF1 6 5反义 RNA能够显著减少喉癌细胞内 VEGF1 6 5的表达 ,具有抑制肿瘤生长和血管生成的作用 ,有望成为抗喉癌的新基因治疗手段 .  相似文献   

10.
目的 构建针对血管内皮生长因子(VEGF)的短发夹环RNA(shRNA)质粒(pEGFPH1 /VEGF),观察其在体内和体外对胶质瘤细胞株U251生长的抑制作用。方法 应用PCR构建携带绿色荧光蛋白(EGFP)基因的RNA干扰真核表达载体pEGFP- H1,并利用该载体介导VEGFshRNA。用阳离子脂质体转染U251细胞,通过荧光显微镜和流式细胞仪观察EGFP的表达,用RT- PCR检测VEGFmRNA的表达,以酶联免疫吸附实验(ELISA)检测培养液中VEGF蛋白的含量。同时筛选转染pEGFP- H1和pEGFP- H1 /VEGF的U251稳定细胞株,制备裸鼠U251细胞移植瘤模型,观察肿瘤生长情况。结果 与空载体转染组相比, pEGFP- H1 /VEGF对VEGF的抑制率达77. 9%。对照组和pEGFP -H1组裸鼠肿瘤重量分别为1 .7g±0 4g和1 .5g±0 .7g,体积分别为1573mm3 ±330mm3 和1430mm3 ±382mm3,两组之间重量和体积差异均无统计学意义(P>0 .05 ),而pEGFP- H1 /VEGF组肿瘤重量为0 .5g±0 .4g,体积为401mm3 ±272mm3,与对照组比较差异有统计学意义(P<0. 01)。结论 pEGFP H1介导的VEGFshRNA能有效抑制U251细胞中VEGF的表达,并在体内抑制肿瘤生长。  相似文献   

11.
TGIF,MMP9和蛋VEGF白在胃癌中的表达及临床病理联系   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的:探讨TG IF,MMP9和VEGF蛋白在胃癌中的表达及其临床病理联系。方法:运用连续切片HE染色法观察SGC-7901细胞、PcDNA3.1转染细胞和TG IF转染细胞荷瘤裸鼠瘤组织有无血管浸润和远处转移,同时以免疫组织化学法分析转移相关分子MMP2,MMP9和VEGF在裸鼠瘤组织中的表达变化,并分析TG IF,MMP9和VEGF蛋白在76例胃癌组织中的表达水平及其临床病理联系。结果:3种细胞的荷瘤裸鼠均无远处转移,SGC-7901细胞和PcDNA3.1转染细胞接种组裸鼠瘤组织有癌栓形成,但TG IF组无癌栓形成;对照组MMP9和VEGF均呈强阳性表达,表达水平明显高于TG IF组,但MMP2在3组间的表达无明显差别。胃癌组织中TG IF蛋白表达阳性,阳性率为46.1%(35/76),明显低于断端胃黏膜(78.1%)(P<0.05),且它的低表达与淋巴结转移有关(P<0.05)。MMP9表达阳性率为59.2%,明显高于断端胃黏膜(31.3%)(P<0.05),且其高表达与淋巴结转移有关(P<0.05)。VEGF蛋白的阳性表达率为56.6%,明显高于断端胃黏膜(31.3%)(P<0.05),且其表达与淋巴结转移和胃癌的浸润深度密切相关(P<0.05)。TG IF与VEGF和MMP9蛋白的表达呈负相关(P<0.05)。结论:TG IF可能通过下调VEGF和MMP9蛋白的表达抑制胃癌的转移。  相似文献   

12.
TGIF,MMP9和VEGF蛋白在胃癌中的表达及临床病理联系   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的:探讨TGIF,MMP9和VEGF蛋白在胃癌中的表达及其临床病理联系。方法:运用连续切片HE染色法观察SGC-7901细胞、PcDNA3.1转染细胞和TGIF转染细胞荷瘤裸鼠瘤组织有无血管浸润和远处转移,同时以免疫组织化学法分析转移相关分子MMP2,MMP9和VEGF在裸鼠瘤组织中的表达变化,并分析TGIF,MMP9和VEGF蛋白在76例胃癌组织中的表达水平及其临床病理联系。结果:3种细胞的荷瘤裸鼠均无远处转移,SGC-7901细胞和PcDNA3.1转染细胞接种组裸鼠瘤组织有癌栓形成,但TGIF组无癌栓形成;对照组MMP9和VEGF均呈强阳性表达,表达水平明显高于TGIF组,但MMP2在3组间的表达无明显差别。胃癌组织中TGIF蛋白表达阳性,阳性率为46.1%(35/76),明显低于断端胃黏膜(78.1%)(P〈0.05),且它的低表达与淋巴结转移有关(P〈0.05)。MMP9表达阳性率为59.2%,明显高于断端胃黏膜(31.3%)(P〈0.05),且其高表达与淋巴结转移有关(P〈0.05)。VEGF蛋白的阳性表达率为56.6%,明显高于断端胃黏膜(31.3%)(P〈0.05),且其表达与淋巴结转移和胃癌的浸润深度密切相关(P〈0.05)。TGIF与VEGF和MMP9蛋白的表达呈负相关(P〈0.05)。结论:TGIF可能通过下调VEGF和MMP9蛋白的表达抑制胃癌的转移。  相似文献   

13.
目的:观察胃安宁颗粒对SGC-7901荷瘤裸鼠血管VEGF、Ki-67表达的影响。方法:将裸鼠皮下接种胃癌SGC-7901细胞后随机分为对照组、阳性药组及胃安宁颗粒大、中、小剂量组,用药后分别计算瘤重系数,并将肿瘤组织进行免疫组织化学染色,检测VEGF、Ki-67表达的情况。结果:胃安宁颗粒大、中剂量均能明显降低荷瘤裸鼠瘤重和瘤重系数(P〈0.05~0.001),免疫组织化学染色显示,应用胃安宁颗粒后肿瘤组织VEGF、Ki-67的表达有所下降。结论:胃安宁颗粒可能通过抑制VEGF、Ki-67的表达起到抑制肿瘤血管生成的作用,从而达到抗肿瘤的目的。  相似文献   

14.
目的:探讨类表皮生长因子域7(EGFL7)基因沉默对胃癌裸鼠模型瘤内血管生成的影响。方法:构建EGFL7短发夹状RNA表达质粒并转染SGC-7901细胞(pshEGFL7组),以空质粒转染为对照组,观察两组皮下种植瘤生长曲线及体积;免疫组织化学法检测抗-CD34、血管内皮生长因子(VEGF)、血小板反应蛋白(TSP1)表达,RT-PCR检测MMP-2和TIMP2表达。结果:pshEGFL7组种植瘤体积为(1.86±0.65)cm3,微血管密度(MVD)为20.84±6.38,分级为1~2级;对照组种植瘤体积为(4.86±1.15)cm3,MVD为39.48±9.01,分级为3~4级;两组种植瘤体积、MVD和分级的差异有统计学意义,P值均〈0.05;EGFL7组TSP1蛋白阳性表达,而VEGF蛋白为弱阳性或阴性表达,MMP-2mRNA表达下调,而TIMP2mRNA表达上调,与对照组比较差异有统计学意义,P值均〈0.01。结论:EGFL7基因沉默可降低胃癌种植瘤血管生成,与调节MMP-2/TIMP2表达,影响VEGF/TSP1平衡有关。  相似文献   

15.
目的研究环氧合酶(COX)-2表达与肿瘤细胞增殖和凋亡的关系,探讨利用RNA干扰技术作为肿瘤基因治疗的方法。方法构建靶向COX-2的短发夹状双链RNA(shRNA)的真核表达质粒WBH1转染人胃癌细胞系SGC-7901,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹分别从mRNA和蛋白质水平检测抑制效果。四甲基偶氮唑蓝(MTT)和流式细胞仪检测COX-2表达被抑制后细胞的增殖和凋亡情况。15只裸鼠随机分为3组,每组5只,皮下接种胃癌细胞。抑制组接种转染抑制质粒的胃癌细胞;正常对照组接种未转染的胃癌细胞;阴性对照组接种转染阴性对照质粒的胃癌细胞。4周后观察比较各组裸鼠皮下形成瘤体的大体和病理情况并计算抑瘤率。结果WBH1高效特异地抑制了人COX-2的表达,抑制率达70.42%。COX-2表达被抑制后,细胞增殖受到明显抑制(P=0.002),细胞凋亡率明显增高,与未转染和转染阴性对照质粒的胃癌细胞的凋亡率相比有统计学意义(52.28%±17.91%、0.52%±0.27%、0.54%±0.16%,P=0.009,实验重复5次)。正常对照组和阴性对照组所有裸鼠均有瘤体形成,平均瘤重分别为(0.490g±0.017g,5只)和(0.490g±0.013g,5只)。抑制组仅2只有瘤体形成平均瘤重0.050g±0.003g,与正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),抑瘤率为89.8%。结论COX-2与肿瘤细胞的增殖和凋亡密切相关,抑制细胞中COX-2的表达可以抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡。通过构建靶向COX-2的shRNA真核表达载体导入细胞可以高效特异地抑制人胃癌细胞中COX-2的表达。  相似文献   

16.
目的:建立多药耐药人胃癌细胞裸鼠移植瘤模型并探讨移植瘤的耐药特性。方法:将人胃癌细胞株SGC-7901和耐药细胞株SGC-7901/HCPT分别接种于裸小鼠左侧背部皮下和右侧背部皮下,在SPF级动物合格环境下饲养,观察肿瘤细胞成瘤情况,用MTT法比较移植瘤细胞对羟基喜树碱的敏感性及免疫组化测定其耐药基因TOPO-Ⅰ表达的变化。结果:SGC-7901和SGC-7901/HCPT裸小鼠移植成瘤率为100%,无自行消退现象。MTT法测定SGC-7901/HCPT和SGC-7901/HCPT/nude的IC50分别为4.686μg/mL和4.381μg/mL,与移植前细胞比较,差异无统计学意义。耐药基因TOPO-Ⅰ表达分别为2.964±0.162和2.953±0.172,差异无著性意义。结论:以SGC-7901/HCPT细胞建立的裸鼠皮下耐药移植瘤模型,仍保持体外的耐药活性和基因表型,为耐药机制和逆转的研究提供了良好的动物模型。  相似文献   

17.
目的:研究重组人生长激素(rhGH)对裸鼠人胃癌移植瘤生长及血清VEGF水平的影响。方法:取60只雄性裸鼠进行实验,通过免疫细胞化学染色法检测胃癌细胞株SGC-7901及MKN-45生长激素受体(GHR)的表达状况,将GHR阳性表达的胃癌细胞株SGC-7901及GHR阴性表达的胃癌细胞株MKN-45分别接种于4只裸鼠皮下,制作裸鼠胃癌皮下移植瘤模型,3周后取出移植瘤制成组织匀浆,接种于剩余52只裸鼠。依据接种细胞种类不同分为移植瘤GHR阳性表达和GHR阴性表达裸鼠,不同GHR表达的裸鼠进一步分为对照组(C组:予0.9%NaCl,0.2 ml.d-1)、rhGH低剂量组(L组:予rhGH0.5 U.kg-1.d-1)、rhGH高剂量组(H组:予rhGH2.5 U.kg-1.d-1),连续给药14 d,观察并记录各组裸鼠体重和肿瘤体积变化,酶联免疫吸附法测定血清VEGF含量。结果:SGC-7901为GHR阳性表达的人胃癌细胞株,MKN-45为GHR阴性表达的人胃癌细胞株。对于接种GHR阳性表达的人胃癌细胞株的裸鼠,rhGH给药组皮下移植瘤体积较对照组增大(P<0.05),且H组促增长效应显著(P<0.05),3组...  相似文献   

18.
血管内皮生长因子165反义RNA治疗人脑胶质瘤的实验研究   总被引:8,自引:0,他引:8  
目的 探讨应用血管内皮生长因子165(VEGF165)反义RNA治疗人脑胶质瘤的可行性。方法 构建和鉴定反义VEGF165真核表达载体;将其转染入人脑胶质瘤细胞SHG44,检测其转染前、后的生物学性状;比较转染前、后SHG44细胞的裸鼠皮下致瘤性;分别应用免疫印迹、免疫组织化学、微血管计数、电镜和流式细胞仪检测上述改变。结果 成功构建反义VEGF165真核表达载体并在SHG44细胞获得表达,该细胞  相似文献   

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