丁酸钠对胰腺癌BxPC-3细胞凋亡机制的影响

目的:探讨丁酸钠对胰腺癌BxPC-3细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:采用MTT法观察不同浓度丁酸钠对BxPC-3细胞增殖的抑制作用;应用流式细胞仪检测丁酸钠作用于BxPC-3细胞后的凋亡情况;TRAP-ELISA法检测细胞端粒酶活性的变化;RT-PCR技术分析人端粒酶逆转录酶(hTERT)、bcl-2 mRNA的表达水平。结果:丁酸钠作用BxPC-3细胞能明显抑制细胞增殖,其作用具有时间和剂量依赖性。丁酸钠处理72 h的BxPC-3细胞凋亡率明显提高(P<0.01),S期细胞比例显著下降(P<0.05),G0/G1期细胞比例显著升高(P<0.05)。经丁酸钠处理的实验组端粒酶活性为0.96±0.12,未经丁酸钠处理的对照组端粒酶活性为4.18±0.34,二者之间差异有显著性(P<0.05)。丁酸钠处理的实验组hTERT mRNA水平为0.168±0.045,与对照组0.685±0.141比较差异有统计学意义(P<0.01),bcl-2实验组水平为0.138±0.034,与对照组0.715±0.026比较有统计学差异。结论:丁酸钠具有强烈诱导胰腺癌BxPC-3细胞凋亡的作用,其发生机制与丁酸钠下调hTERT Bcl-2 mRNA表达水平直接相关。     

双自杀基因CD+TK对胰腺癌BxPC-3细胞的影响

目的探讨逆转录病毒介导的双自杀基因对胰腺癌BxPC-3细胞的杀伤作用及胰腺癌的基因治疗方法。方法通过脂质体将含有双自杀基因的逆转录病毒载体MMLV—CD＋TK导入包装细胞PA317，经G418筛选后大量培养产病毒的阳性克隆PA317／CD＋TK细胞株，收集病毒上清液，浓缩后转染胰腺癌BxPG3细胞系，再次经G418筛选，获得稳定表达双自杀基因的BxPC-3／CD＋TK细胞株。用RT—PCR检测双自杀基因的表达。给予前体药物5-氟胞嘧啶（5-flourocytosine，5-FC）和（或）无环鸟苷（Ganciciovir，GCV）后，MTT法测定转基因组及未转基因组胰腺癌BxPC-3系细胞的存活率。结果双自杀基因在胰腺癌BxPC-3系细胞中可稳定表达，联合使用5-FC和GCV对细胞增殖的杀伤作用及旁杀伤效应效果明显。结论逆转录病毒介导自杀基因可有效杀死胰腺癌Bx-PC-3系细胞，双自杀基因具有更强的抗肿瘤作用。     

p73β基因转染对胃癌细胞的生物学影响

目的研究人p73β基因转染对人胃癌细胞SGC-7901的生物学影响,探讨p73β基因抑制SGC-7901细胞增殖的机制。方法用脂质体转染法瞬时转染SGC-7901细胞,转染重组质粒pcDNA3.1-p73β（SGC-7901-pcDNA3.1-p73β组）和空载质粒pcDNA3.1-N0（SGC-7901-pcDNA3.1-N0组）,并用未转染质粒具有相同遗传背景和代数的SGC-7901细胞作为空白对照（SGC-7901组）。逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞中P73β、p21、c-myc表达量变化,MTT法观察细胞增殖的活力,原位细胞凋亡检测TUNEL法观察细胞凋亡。结果RT-PCR检测发现SGC-7901-pcDNA3.1-p73β组细胞与SGC-7901-pcDNA3.1-N0和SGC-7901两对照组相比,其p73β表达明显增高,p21相对表达量明显增多,c-myc相对表达量明显减少。与两对照组相比,SGC-7901-pcDNA3.1-p73β组细胞增殖率明显减弱,细胞凋亡率明显增高（均P〈0.05）。结论p73β基因可以促进SGC-7901细胞内p21基因的表达,抑制c-myc基因表达。p73β基因可降低胃癌细胞增殖力,诱导胃癌细胞凋亡。     

野生型p53基因对胰腺癌细胞的抑制作用

目的：观察人类野生型p53（wtp53）基因对人胰腺癌细胞的抑制作用。方法：用逆转录病毒为载体将外源性wtp53基因导入人胰腺癌细胞系PC－2，通过体外及小鼠体内实验研究转入基因的表达及对肿瘤的抑制作用，结果：p53在转染细胞PC－2／p53中表达水平提高，外源性wtp53基因的导入和表达能使PC－2细胞的生长速率减低，软琼脂集落形成能力下降，G0＋G1期细胞比例增加，凋亡指数升高，裸鼠体内成瘤能力明显下降，结论：逆转录病毒载体介导的外源性野生型P53能抑制人胰腺癌细胞生长。     

反义MAT1重组腺病毒对人胰腺癌细胞BxPC-3的周期调控作用

目的探讨MAT1基因在胰腺癌BxPC3细胞周期G1/S转换中的作用。方法应用同源重组技术构建含反义MAT1基因的腺病毒载体;细胞生长分析采用台盼蓝染色计数法;Western印迹检测细胞MAT1、细胞周期素D1(cyclinD1)、cyclinE和pRb的蛋白表达;采用流式细胞仪分析反义MAT1基因转染后BxPC3细胞周期的变化。结果编码反义MAT1的重组腺病毒Ad MAT1AS感染滴度为5×1010pfu/ml;BxPC3细胞感染Ad MAT1AS后,MAT1、cyclinE和pRb蛋白表达明显下调,同时出现了明显的细胞G1期阻滞,79%的细胞处于G0/G1期,而空白对照组及空载体组则为40%至44%的细胞处于G0/G1期。结论MAT1基因在胰腺癌BxPC3细胞周期G1→S转换中发挥重要作用。     

PAMD对BxPC-3细胞病理形态、细胞凋亡及细胞周期影响

目的:研究人胰腺癌细胞BxPC-3在蝙蝠葛酚性碱(PAMD)的干预下出现增殖抑制的作用,以及观察PAMD作用于BxPC-3细胞使其产生的病理形态、细胞凋亡及细胞周期的影响。方法:培养BxPC-3细胞,进行以下实验:(1)利用台盼蓝染色测定法测定各组中BxPC-3细胞的生长周期,并根据周期绘制其生长曲线;同时采用MTT法检测法测定各组中BxPC-3细胞的增殖情况;(2)利用透射电镜观察PAMD对BxPC-3细胞病理形态的变化;然后利用流式细胞术检测法检测各组BxPC-3细胞的细胞周期及其细胞凋亡的情况。结果:(1)根据盼蓝染色测定实验可知,各给药组细胞的生长较为缓慢;MTT实验可知,各组细胞的增殖抑制率PAMD高剂量组最高,其次是5-FU组,最后PAMD低剂量;(2)透射电镜显示:各给药组与对照组相比较各给药组的细胞核固缩,并伴有凋亡小体样形成;流式细胞术结果显示:各给药组与对照组的相比,各给药组细胞均停滞在细胞周期中的G1期并且各给药组细胞的细胞凋亡率均有所上升,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论:PAMD使BxPC-3细胞被阻滞在G1期然后阻断其复制增殖,促进细胞凋亡,并且对肿瘤细胞的超微结构造成一定的影响。BxPC-3在PAMD的作用下出现增殖抑制。     

蝙蝠葛酚性碱对胰腺癌BxPC-3细胞增殖抑制作用及其对Hh信号通路影响

目的:探讨蝙蝠葛酚性碱(PAMD)对人胰腺癌BxPC-3细胞的增殖抑制作用,以及通过观察PAMD对胰腺癌BxPC-3细胞Hedgehog信号通路中Shh、Ptch1 mRNA和蛋白表达的影响,进一步讨论PAMD抗胰腺癌的作用机制及其作用靶点。方法:对人胰腺癌BxPC-3细胞进行体外培养,以不同终浓度的PAMD培养液进行干预,对照组用正常培养液培养,进行以下实验:(1)利用台盼蓝染色测定各组中BxPC-3细胞生长周期;(2)运用MTT法检测各组BxPC-3细胞增殖情况;(3)利用RT-PCR、Western Blot技术检测各组BxPC-3细胞中Shh、Ptch1mRNA及蛋白的表达。结果:(1)各给药组与对照组相比,癌细胞生长缓慢;(2)PAMD高、低剂量组及5-FU组细胞的增殖抑制率分别为72.35%、44.62%、56.07%;(3)与对照组相比,Shh、Ptch1 mRNA的表达均下降,差异显著(P0.01),具有统计学意义。结论:PAMD对人胰腺癌BxPC-3细胞有增殖抑制作用,对Hedgehog信号通路关键位点的表达有一定的抑制作用。由此推断,PAMD对胰腺癌的抗癌作用机制可能与Hedgehog信号通路有关。     

TGF-β1对胰腺癌细胞BxPC-3增殖的影响及机制

目的观察不同浓度梯度及不同时间梯度下外源性TGF-β1对胰腺癌细胞株BxPC-3增殖的影响,并探讨其可能的机制。方法以正常培养的BxPC-3细胞为空白对照,分别采用1.0、2.0、4.0、6.0、8.0ng/mL的TGF-β1干预BxPC-3细胞4d。MTT法观察各组胰腺癌细胞的生长情况,并计算肿瘤生长抑制率。同时以正常培养的BxPC-3细胞为对照组,以2.0ng/mL的TGF-β1分别干预BxPC-3细胞1～7d,MTT法绘制两组细胞生长曲线。另外,以2.0ng/mL的TGF-β1干预培养至第4天时分别采集两组细胞,用FCM检测细胞周期,Western blot方法检测细胞周期蛋白CyclinD1的表达。结果与空白对照组相比,TGF-β1干预组BxPC-3增殖受抑,并呈时间及浓度依赖。2.0ng/mL的TGF-β1干预组的最大生长抑制率为12.5%,出现在第4天;细胞周期阻滞在G1/S期;CyclinD1的蛋白表达也明显下调。结论外源性TGF-β1可轻度抑制Smad4纯合子缺失的BxPC-3胰腺癌细胞的生长,机制与细胞周期G/S阻滞及Cyclin D1下调有关。     

p73、p63和p53基因在人非小细胞肺癌组织中的表达

目的：探讨p73、p63和p53在非小细胞肺癌（NSCLC）的表达及与预后的关系。方法：免疫组化法测定93例NSCLCp73、p63和p53的表达并对其与年龄、性别、吸烟、病理类型、组织分化等因素进行统计学分析。结果：p53、p63和p73在正常肺组织表达阳性率分别为25％、25％和12．5％，在NSCLC的表达阳性率分别为65．6％、54．8％和71％，差异有显著性（P〈0．05）。p53表达阳性率与淋巴结转移相关（P〈0．05）；p63表达阳性率与肺癌的组织类型和淋巴结转移有关（P〈0．05）；肺鳞癌组织p63随分化程度降低表达增强（P〈0．05）。结论：p53、p63和p73均参与了NSCLC的发展、浸润和转移，可作为了解NSCLC的生物学行为和判断预后的指标。     

p73基因的研究进展

p73基因被公认为是p53基因家族中的一员,其编码蛋白质在序列上的同源性和功能性上都与p53蛋白相似;而p53基因是经典的抑癌基因,野生型的p53基因维护正常的细胞分裂并诱导凋亡,阻止肿瘤的发生.因此p73基因作为候选抑癌基因,倍受广泛研究者的关注.     

过表达miR-199-3p/5p诱导胰腺癌细胞BxPC-3、Panc-1铁死亡的作用机制

目的探讨过表达miR-199-3p/5p诱导胰腺癌细胞BxPC-3和Panc-1铁死亡的作用机制。 方法瞬时转染miR-199-3p/5p模拟物和抑制物至BxPC-3、Panc-1细胞中。qRT-PCR检测细胞中miR-199-3p/5p表达水平;Western blotting检测SCL7A11、BTRC、TFRC蛋白水平。谷胱甘肽(GSH)、Fe2＋、脂质过氧化物(LPO)试剂盒检测细胞GSH、Fe2＋、LPO水平。免疫共沉淀检测BTRC、TFRC泛素化水平。双荧光素酶报告实验检测miR-199与靶基因的相互作用。 结果转染miR-199-3p/5p模拟物后,胰腺癌BxPC-3、Panc-1细胞株中miR-199-3p/5p、TFRC蛋白水平显著上调;SLC7A11、BTRC蛋白水平显著降低;LPO、Fe2＋含量升高,GSH含量降低。过表达BTRC能够显著降低TFRC蛋白水平。miR-199-3p靶向结合SLC7A11,miR-199-5p靶向结合BTRC。 结论过表达miR-199-3p/5p诱导胰腺癌细胞BxPC-3和PANC-1铁死亡,可能与靶向抑制BTRC、SLC7A11促进LPO累积有关。     

薏苡仁油对人原位胰腺癌BxPC-3细胞生长及VEGF和bFGF表达的影响

目的 研究薏苡仁油（康莱特注射液）体外对人原位胰腺癌BxPC-3细胞生长和血管生长因子的影响,探讨薏苡仁油抗肿瘤作用机制。方法 薏苡仁油作用BxPC-3细胞后,经瑞氏染色观察细胞形态,Hoechst 33258荧光染色、DNA梯度电泳观察细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞周期的变化;ELISA法检测血管内皮生长因子（VEGF）、成纤维细胞生长因子（bFGF）的变化。结果 薏苡仁油（2 mg/mL,20 μL/mL）作用于BxPC-3细胞后,瑞氏染色可见细胞出现典型的凋亡小体,Hoechst 33258荧光染色可见BxPC-3细胞出现特征性凋亡变化,琼脂糖电泳观察到明显的细胞凋亡特征性DNA梯形条带;细胞周期阻滞在G₀/G₁期;细胞上清液中VEGF、bFGF的表达水平明显下调。结论 薏苡仁油能影响BxPC-3细胞生长周期,导致细胞周期阻滞,下调VEGF和bFGF的表达水平,可能对抑制胰腺癌细胞的扩散产生一定作用。     

肺癌中细胞凋亡水平和p73基因的转录表达的研究

目的：通过观察肺癌癌组织,对应癌旁组织和远癌肺组织中细胞凋亡及p73基因转录表达水平的变化,探讨细胞凋亡及P73基因转录表达水平与肺癌发生,发展的关系。方法：采用TUNEL及RT－PCR技术检测32例非小细胞肺癌癌组织,癌旁组织和7例肺良性病变组织,以及对应正常肺组织细胞凋亡和P73 mRNA的表达水平,并结合临床病理学资料进行统计学分析,结果：（1）肺癌组织中的凋亡指数明显高于癌旁肺组织和远癌肺组织（P＜0．01）,细胞凋亡水平与肺癌组织学类型,分化程度和P－TNM分期无明显关系（P＞0．05）;（2）肺癌组织中p73 mRNA表达水平和表达率明显高于癌旁肺组织,远癌肺组织和肺良性病变组织（P＜0．01）;（3）组织中凋亡指数的升高和P73基因转录表达水平的增加呈显著的正相关（P＜0．01）。结论：肺癌组织中存在细胞凋亡水平的升高和P73基因的过度转录表达。     

乳癌组织p73基因的分析

目的 :研究p73基因与乳癌的关系。方法 :应用免疫组化、RT PCR等技术检测乳癌组织p73基因的表达情况。结果 :45例乳癌组织p73基因表达阳性者 2 1例 ,明显高于良性乳腺肿瘤 (P <0 .0 5) ;淋巴结转移阳性者p73基因表达明显高于阴性者 (P <0 .0 5)。结论 :p73基因表达增多可能与乳腺癌发病有关     

胃癌组织p53、p73蛋白及细胞凋亡的研究

目的 探讨p53、p73蛋白及细胞凋亡在胃癌发生发展中的可能机制.方法 选择57例手术切除的胃癌及胃癌旁组织,用免疫组化方法检测组织中的p53、p73蛋白表达,同时用TUNEL方法检测组织中的凋亡细胞.结果 胃癌组织p53、p73表达率显著高于胃癌旁组织;低、未分化型腺癌表达率显著高于高、中分化型腺癌;有淋巴转移显著高于无转移组;p53、p73高表达的癌组织,细胞凋亡减少,早期胃癌凋亡低于晚期胃癌.结论 胃癌组织p53、p73蛋白高表达,可延缓细胞凋亡;细胞凋亡机制障碍可能是胃癌细胞发生发展的基础.     

p73基因在人非小细胞肺癌组织中的表达

目的　研究人非小细胞肺癌中p73基因的mRNA表达状况 ,并探讨其表达水平与肿瘤各项临床病理指标间的相关性。方法　应用半定量RT PCR方法检测人非小细胞肺癌组织、相应癌旁肺组织及远癌肺组织中p73的mRNA表达。结果　p73基因的表达水平及表达阳性率在肺癌组织中为 87.5 % (2 8/32 )明显高于相应的癌旁肺组织和远癌肺组织 (P <0 .0 1) ;不同临床病理学类型、分化程度及TNM分期的肺癌组织间p73mRNA的表达差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　p73基因在人非小细胞肺癌组织中的表达显著上调。     

p16基因转染对胰腺癌JF305细胞的抑制作用

目的 :探讨抑癌基因 p1 6对胰腺癌 JF30 5细胞的抑制作用。方法 :以L ipofectamine TM2 0 0 0脂质体介导 p1 6基因转染胰腺癌 JF30 5细胞 ,MTT法测定 OD值 ,计算细胞生长抑制率 ,描绘 p1 6基因转染后 JF30 5细胞增殖曲线。结果 :p1 6基因转染对JF30 5细胞具有明显抑制作用 ( t=4.0 6,P<0 .0 1 ) ,细胞抑制率为 2 6.85 % ,细胞增殖曲线较 JF30 5细胞明显降低。结论 :p1 6基因转染对胰腺癌 JF30 5细胞具有明显抑制作用。     

电穿孔结合苦参素注射液对胰腺癌裸鼠BxPC-3细胞凋亡的影响

目的观察电穿孔结合苦参素对胰腺癌裸鼠BxPC-3细胞凋亡的影响。方法2008年3月至2008年9月．用胰腺癌BxPC-3细胞系建立胰腺癌裸鼠移植瘤模型,随机分为电穿孔结合苦参素组（B＋E＋）、苦参素组（B＋E-）、电穿孔组（B—E＋）和阴性对照组（B—E-）,采用原位末端标记法分别观察各组胰腺癌裸鼠的细胞凋亡率。结果在电穿孔和苦参素的共同作用下,胰腺癌裸鼠的细胞呈凋亡改变,且电穿孔结合苦参素组的细胞凋亡率明显高于其他3组。结论电穿孔结合苦参素可以有效抑制胰腺癌细胞的增殖,提高胰腺癌细胞的凋亡率。     

增强miR-146b-3p表达对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨增强miR-146b-3p表达对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 Real time PCR检测miR-146b-3p在6种人胰腺癌细胞系(MIA PaCa-2、BxPC-3、AsPC-1、PANC-1、SW1990、PC-3)和手术切除的12对胰腺癌/癌旁组织中的表达.将Pre-miR-hsa-miR-146b-3p Precursor 转染MIA PaCa-2 细胞,Real time PCR检测转染后miR-146b-3p的表达变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-8的表达变化.结果 与正常胰腺组织相比,miR-146b-3p在6种胰腺癌细胞系中均呈低表达,以MIA PaCa-2细胞最为明显;12对胰腺组织中,癌组织miR-146b-3p表达水平均低于癌旁组织.同阴性对照组比较,转染前体组的MIA PaCa-2细胞,miR-146b-3p表达增强383.25倍,细胞增殖能力下降,细胞凋亡率增加,蛋白Bcl-2表达降低(50.0%),Bax表达升高(4.29倍).结论 miR-146b-3p在胰腺癌细胞系和癌组织中低表达;上调胰腺癌细胞MIA PaCa-2中 miR-146b-3p的表达,能够抑制增殖和诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2表达,上调Bax的表达有关.