Troglitazone对人腹膜间皮细胞TGF-β1和纤维连接蛋白表达的影响

目的:研究过氧化物增生体激活受体γ(PPAR-γ)激动剂troglitazone(曲格列酮,TGZ)对高浓度葡萄糖刺激下体外培养的人腹膜间皮细胞(HPMCs)中TGF-β1和细胞外基质纤维连接蛋白(Fn)表达的影响.方法:采用胰蛋白酶消化法从人大网膜组织中分离间皮细胞,建立稳定的体外培养模型.根据细胞增殖与毒性实验选择troglitazone的最佳浓度15 μmol/L,干预高浓度葡萄糖(30 mmol/L D-葡萄糖)刺激下的人腹膜间皮细胞.采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)半定量检测HPMCs中PPAR-γ,TGF-β1以及Fn的mRNA表达;采用双抗夹心法酶联免疫吸附实验检测HPMCs培养液中TGF-β1蛋白质水平;Western印迹检测Fn蛋白质水平.结果:高糖(30 mmol/L D-葡萄糖)刺激可在mRNA和蛋白质水平明显上调HPMCs表达TGF-β1和Fn(P＜0.01),troglitazone干预高糖孵育的HPMCs,可使TGF-β1和FnmRNA和蛋白质的表达明显下调(P＜0.05).结论:Troglitazone能够明显抑制在高糖刺激下的HPMCsTGF-β1和Fn的表达,这可能为临床防治长期腹膜透析患者的腹膜纤维化提供一种较为有效的方法.     

Galectin-1 在高糖腹透液诱导人腹膜间皮细胞转分化中的作用

目的：研究人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs) 中galectin-1 的表达和在高糖腹透液(peritoneal dialysate solution, PDS) 刺激下galectin-1 表达的变化及其与上皮细胞- 间充质细胞转分化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT) 的关系。方法：以HPMCs 为研究对象,实验分为：正常对照组(5.5 mmol/L 葡萄糖),含1.5% 葡萄糖的PDS(1.5% PDS) 组,2.5%PDS 组及4.25% PDS 组。培养48 h 后,采用实时定量PCR 和Western 印迹检测galectin-1,vimentin 和zo-1 mRNA 和蛋白的表达水平,分析galectin-1 与vimentin 和zo-1 表达的相关性。使用阳离子脂质体转染galectin-1 siRNA 至HPMCs 内,实验分为：正常对照组(5.5mmol/L 葡萄糖),高糖组(4.25% PDS) 和转染组(galectin-1 siRNA +4.25% PDS)。观察galectin siRNA 干预后vimentin 和zo-1 mRNA 和蛋白的表达水平。结果：不同浓度PDS 刺激HPMCs 48 h 后,与对照组比,galectin-1mRNA 表达上调,尤以4.25%PDS 组明显(P<0.05),其蛋白水平的表达均明显上调(P<0.05),且具有浓度依赖性;同时 vimentin mRNA 表达上调,以2.5%PDS 组和4.25%PDS 组更明显(P<0.05),其蛋白水平的表达均明显上调(P<0.05);而zo-1 mRNA 和蛋白水平的表达均明显下调(P<0.05)。不同浓度高糖PDS 刺激下galectin-1 mRNA 和蛋白表达水平与vimentin mRNA 和蛋白表达水平呈正相关(P<0.05);与zo-1 mRNA 和蛋白表达水平呈负相关(P<0.05)。Galectin-1 siRNA 干预后vimentin mRNA 和蛋白水平的表达较高糖组明显下调(P<0.05),而zo-1 mRNA 和蛋白水平的表达较高糖组明显上调(P<0.05)。结论：Galectin-1 与高糖PDS诱导的HPMCs EMT 相关,galectin-1 siRNA 能够抑制高糖PDS 诱导的HPMCs 转分化。 Galectin-1 可能参与腹膜纤维化的发生环节,成为防治腹膜纤维化的新靶点。     

脂联素干预对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞表达色素上皮衍生因子的影响

目的:探讨脂联素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞中色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响.方法:体外常规培养大鼠系膜细胞,传代后分组:对照组(培养液葡萄糖浓度5.6 mmol/L) 、高糖A 、B组(培养液葡萄糖浓度分别为15,30 mmol/L)、脂联素A、B、C、D组 (30 mmol/L葡萄糖培养液+脂联素,使培养液脂联素浓度分别为2.5,5,10,20 mg/L),分别作用24 h后,RT-PCR法测定各组细胞PEDF mRNA的表达水平;ELISA法测定各组上清液中PEDF蛋白的含量.结果:(1)与对照组相比,高糖各组大鼠肾小球系膜细胞PEDF mRNA及PEDF蛋白表达显著降低(P<0.05);(2)脂联素干预各组高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞PEDF mRNA及PEDF蛋白表达恢复(P<0.01).结论:高糖可抑制大鼠肾系膜细胞PEDF的表达,脂联素干预可逆转这一改变.     

去甲斑蝥素对高糖刺激的HK-2 细胞FN,Col IV 和TGF-β1 mRNA 及蛋白表达的影响

目的:观察去甲斑蝥素(NCTD) 对高糖刺激的HK-2 细胞外基质和TGF-β1 表达的影响。方法:常规培养HK-2 细胞,无血清DMEM 培养基同步培养24 h,细胞分为正常葡萄糖组(C,D-glucose 5.5 mmol/L)、甘露醇对照组(M,5.5 mmol/L D-glucose+24.5 mmol/L mannitol)、高糖组(HG,30 mmol/L D-glucose)、高糖+NCTD 干预组(30 mmol/L D-glucose+0.5~40 mg/L NCTD)。台盼蓝排斥实验检测NCTD 对高糖刺激的细胞毒性。MTT 法检测NCTD 对高糖刺激的细胞增殖的影响。收集培养6,24,48 h 后细胞总RNA 及蛋白,用RT-PCR 检测细胞FN,Col Ⅳ和TGF-β1 mRNA 的表达,采用Western 印迹检测FN,Col Ⅳ和TGF-β1 蛋白的表达。结果:不同浓度NCTD 作用72 h 后,浓度超过5 mg/L 的NCTD 对高糖环境下的HK-2 细胞有明显的毒性。RT-PCR 和Western 印迹结果显示: 30 mmol/L D- 葡萄糖可引起HK-2 细胞FN,Col Ⅳ和TGF-β1 mRNA 及蛋白水平的升高(P<0.05),而5 mg/L NCTD 可抑制高糖刺激的FN,Col Ⅳ和TGF-β1 的表达(P<0.05)。相同渗透浓度的D- 甘露醇组对上述指标均无影响(P>0.05)。结论:NCTD 能下调HK-2 细胞FN,Col Ⅳ及TGF-β1 的表达。     

α-硫辛酸抑制高糖诱导的系膜细胞增殖及细胞间黏附分子1的表达

目的:探讨α-硫辛酸对高糖诱导的大鼠系膜细胞增殖及细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响.方法:体外条件下采用正常糖浓度(5.6 mmol/L,NG)、高糖浓度(25 mmol/L,HG)及HG 不同浓度α-硫辛酸(50、100、200、300 μmol/L)分别与大鼠系膜细胞共同培养不同时间(12、24、48 h).MTT法测定系膜细胞增殖;RT-PCR法检测细胞ICAM-1 mRNA的表达;ELISA法测定细胞培养上清ICAM-1蛋白的浓度. 结果:50～300 μmol/L的α-硫辛酸可抑制系膜细胞增殖.高糖刺激24 h时, 200 μmol/L的α-硫辛酸干预组ICAM-1的蛋白浓度[(288.4±23.4) ng/ml]明显低于HG组[(542.3±35.6) ng/ml,P<0.01].100 μmol/L及200 μmol/L的α-硫辛酸均可下调高糖诱导的ICAM-1 mRNA的表达.结论:一定浓度的α-硫辛酸可抑制高糖诱导的系膜细胞增殖,并可降低ICAM-1蛋白和mRNA的表达.     

重组人红细胞生成素对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖和分泌MCP-1的影响

目的 研究重组人红细胞生成素(rHuEPO)对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞(MC)增殖和表达MCP-1的影响.方法 以大鼠MC为研究对象,高糖组浓度为30 mmol/L,分别以不同浓度rHuEPO(1,10,50,100 IU/ml)分别干预24,48,72 h,CCK-8比色法检测细胞增殖情况.用ELISA法和reahime PCR法测定干预24,48,72h时细胞MCP-1表达水平.结果 rHuEPO能促进高糖诱导的MCs增生,呈剂量和时间依赖性.正常培养的系膜细胞MCP-1蛋白和mRNA有低水平的表达,高糖组刺激24,48,72h均有高水平的表达,rHuEPO在1,10,50,100 IU/ml时,作用于高糖培养的MCs,细胞MCP-1的表达均显著降低.结论 rHuEPO能刺激高糖培养的系膜细胞增殖,抑制高糖培养的系膜细胞表达MCP-1.     

Resveratrol对高糖所致大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1表达的影响

目的:探讨高糖对大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1表达的影响及Resveratrol的干预作用.方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞.①分为正常对照组(NC组,匍萄糖浓度5.6 mmol/L)、高糖组(HG组,葡萄糖浓度30 mmol/L),分别观察24、48、72 h;②分为NC组、HC组、Resveratrol组(Res组,葡萄糖浓度5.6 mmol/L+Resvemtrol 20 μmol/L)和高糖+Rcsvcratrol组(HG+Res 组,葡萄糖浓度30 mmol/L+Resveratrol浓度分别为5、10、15、20 μmol/L),各组细胞分別培养48 h.用半定量RT-PCR和Western blotting法检测细胞内TGF-β1 mRNA和蛋白表达变化.结果:①与NC组相比,HG刺激后大鼠系膜细胞TGF-β1 mRNA和蛋白表达明显增加,差异均有显著性,P值均<0.01;②与HC组相比,HG+Resveratrol干预后,大鼠系膜细胞TGF-β1 mRNA和蛋白表达呈浓度依赖性减少,差异均有显著性(P值分别为<0.05,<0.01).Res组和NC组之间TGF-β1 mRNA和蛋白表达的差异无显著性(P>0.05).结论:高糖能上调大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1 mRNA和蛋白表达,Resveratrol可能通过抑制高糖引起的系膜细胞TGF-β1高表达而在糖尿病肾病中起治疗作用.     

梓醇对内皮细胞炎症因子表达的影响

目的:研究梓醇(Catalpol)对高糖高脂诱导的人脐静脉血内皮细胞(HUVECs)炎症反应的影响。方法:体外培养人脐静脉血内皮细胞,用CCK-8法检测不同浓度梓醇溶液对HUVECs细胞增殖活性的影响。将细胞分为空白对照组、高糖高脂组(给予33mmol/L葡萄糖+500μmol/L棕榈酸作用48h)、高糖高脂+1 000mg/L梓醇预处理组(梓醇1 000mg/L预处理24h后,给予33mmol/L葡萄糖+500μmol/L棕榈酸作用48h,以下简称梓醇预处理组),收集细胞上清液,用ELISA检测上清液中的炎症因子TNF-α、IL-6的浓度。结果:梓醇作用于HUVECs细胞的最佳浓度为1 000mg/L。高糖高脂组中TNF-α和IL-6浓度较空白对照组均明显增高(t=7.03、6.68,P均<0.01)。与高糖高脂组比较,梓醇预处理组上清液中炎症因子TNF-α及IL-6浓度均下降(t=-2.87、-3.76,P均<0.05)。结论:高糖高脂可诱导血管内皮细胞炎症反应,而梓醇对高糖高脂诱导的炎症反应有一定的改善作用。     

重组人红细胞生成素对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖和TGF-βmRNA的影响

目的探讨重组人红细胞生成素(rHuEPO)对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞(MCs)增殖和表达TGF-βmRNA的影响。方法以大鼠M Cs为研究对象,分为正常对照组(NC组,葡萄糖浓度为5 mmol/L),高糖组(HG组,葡萄糖浓度为10、20、30、40、50 mmol/L),其中30 mmol/L的高糖组分别以不同浓度rHuEPO(1、10、50、100、1 000 U/mL)分别干预24、48、72 h,Cell Counting Kit-8(CCK-8)比色法检测细胞增殖情况。用RealtimePCR法测定干预24、48、72 h时细胞TGF-βmRNA表达水平。结果在30 mmol/L以下时,葡萄糖能明显刺激M Cs的增殖,以30 mmol/L培养72 h反应最佳,rHuEPO在低于100 U/mL时能促进高糖诱导的M Cs增殖。rHuEPO在1 000 U/mL时,细胞毒性明显,大部分细胞死亡。结论高糖在一定时间和浓度内有刺激大鼠M Cs增殖的效应,rHuEPO在一定浓度和时间内能刺激高糖培养的MCs增殖,抑制高糖培养的MCs表达TGF-βmRNA。     

蛋白激酶C抑制剂对高糖致血管内皮细胞高通透性的保护作用

目的探讨不同浓度糖对人脐静脉内皮细胞通透性的影响,以及蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro-31-8425对高糖刺激下血管内皮的保护作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞株(EA.hy926),选取3-4代细胞进行实验。分为对照组(5.5 mmol/L)、糖刺激组(10、15、20、25.5、30 mmol/L),采用测定异硫氰酸萤光素-右旋糖酐(FITC-DX)透过Transwell小室荧光强度的方法,研究不同浓度高糖对EA.hy926单层细胞通透性的影响。再选取25.5 mmol/L为高糖组,此时可分为对照组(5.5 mmol/L)+生理盐水、高糖(25.5 mmol/L)+生理盐水组、高糖(25.5 mmol/L)+PKC抑制剂Ro-31-8425(10μmol/L)组,进而探讨高糖对PKC蛋白水平的影响以及PKC抑制剂Ro-31-8425对通透性改变的作用。结果高于正常血糖的各浓度糖刺激组均可使EA.hy926血管内皮细胞通透性明显增加(P<0.01),并呈浓度依赖性。25.5 mmol/L高糖可导致PKCα以及PKCβⅡ磷酸化水平上升(P<0.01)。PKC抑制剂Ro-31-8425预处理组可通过抑制高糖刺激下PKCα、PKCβⅡ磷酸化水平上升(P<0.01),从而抑制血管内皮细胞通透性增加(P<0.01)。结论高糖可通过激活PKC导致血管内皮细胞通透性受损,PKC抑制剂Ro-31-8425可以降低通透性,起到一定的保护作用。     

NF-κB介导大鼠肾小球系膜细胞Visfatin对促纤维化因子和细胞外基质表达的影响

目的观察大鼠肾小球系膜细胞中内脏脂肪素(Visfatin)对促纤维化因子和细胞外基质(ECM)表达的影响并探讨核因子-κB(NF-κB)在此过程中的作用。方法分别构建Visfatin表达质粒及Visfatin RNAi质粒,将细胞分为八组:A组:正常糖对照组;B组:正常糖+NF-κB特异性抑制剂吡咯烷二硫基甲酸酯(PDTC)组;C组:过表达Visfatin组;D组:过表达Visfatin+PDTC组;E组:空白表达载体组;F组:空白表达载体+PDTC组;G组:Visfatin RNAi组;H组:空白沉默载体组。比较过表达或沉默Visfatin前后促纤维因子及细胞外基质基因及蛋白表达的变化。用Realtime-PCR方法检测转录生长因子β(TGF-β)、结缔组织生长因子(CTGF)、纤维蛋白溶解酶原激活物抑制剂(PAI-1)、纤维连接蛋白(FN)、I型胶原(Col I)、IV胶原(Col IV)等基因表达的变化,用Western Blot检测Visfatin、CTGF、FN等蛋白的表达,用电泳迁移率变动分析法(EMSA)检测NF-κB活性;以及通过观察PDTC处理对照组、过表达Visfatin组、空白表达载体组前后上述指标的变化。结果大鼠肾系膜细胞过表达Visfatin后,NF-κB活性、Visfatin、TGF-β、CTGF、PAI-1、FN、Col I、Col IV的m RNA表达量及Visfatin、CTGF、FN蛋白表达量显著升高(P0.05)。下调Visfatin表达后,NF-κB活性、Visfatin、TGF-β、CTGF、PAI-1、FN、Col I、Col IV的m RNA表达量及Visfatin、CTGF、FN蛋白表达量均显著降低(P0.05)。PDTC处理的各组,NF-κB活性、TGF-β、CTGF、PAI-1、FN、Col I、Col IV表达量与对应的未经PDTC处理组相比显著降低(P0.05)。结论在大鼠肾小球系膜细胞中,Visfatin可通过NF-κB通路诱导促纤维化因子和细胞外基质的表达。     

高糖对人腹膜间皮细胞的增殖和损伤及分泌细胞因子的影响

目的：探讨高糖介导腹膜纤维化的可能机制。方法：原代培养的第3代人腹膜间皮细胞（HPMCs）分为不同时间（24，48h）的对照组（F12）和高糖组（F12＋4％葡萄糖）。用MTT法测定细胞增殖，乳酸脱氢酶（LDH）法观察细胞损伤程度，采用酶联免疫法（ELISA）测定纤维连接蛋白（FN）、转化生长因子β1（TGF-β1）和结缔组织生长因子（CTGF）蛋白水平以及采用RT-PCR测定FN，TGF-β1和纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）mRNA表达。结果：①高糖明显抑制细胞增殖，24h和48h高糖组与同一时间点对照组比较，MTT吸光度值均明显下降（P〈0．001或P〈0.01）；②高糖明显导致细胞损伤，24h和48h高糖组与同一时间点对照组比较，培养液中LDH含量均明显增加（均P〈0.001）；③高糖培养24，48h均使FN，CTGF和TGF-β1蛋白表达增加（P〈0．05或P〈0.001）；④高糖使FN，TGF-β1和PAI-1 mRNA表达均上调。结论：高糖能够抑制HPMCs增殖，损伤HPMCs，并刺激HPMCs分泌更多的TGF-β1，CTGF，FN和PAI-1，从而使HPMCs细胞外基质生成增多、降解减少，最终导致腹膜纤维化的形成。     

曲尼斯特延缓糖尿病肾病肾间质纤维化的作用及机制

目的：研究曲尼斯特延缓糖尿病肾病肾间质纤维化的作用及机制。方法：建立糖尿病肾病（DKD）大鼠模型：SD大鼠随机分为正常对照组（n=6）、DKD模型组（n=8）、曲尼斯特低剂量（n=8）和高剂量治疗组（n=8）。采用高糖高脂饲料喂养联合低剂量STZ注射构建大鼠DKD模型。成模后,分别予以曲尼斯特200mg／（kg．d）（曲尼斯特低剂量组）和400mg／（kg．d）（曲尼斯特高剂量组）分2次灌胃。于第8周末处死大鼠,收集大鼠24h尿液测24h尿白蛋白排泄量,收集血测。肾功能及血白蛋白;取部分肾组织置于4％中性甲醛溶液中固定,采用免疫组织化学检测肾组织补体C3a受体（C3aR）,E-钙黏附蛋白（epithelial cadherin,E—Cadherin）,a—SMA,纤维连接蛋白（fibronectin,FN）,I型胶原蛋白（collagen I,ColI）,干细胞生长因子（stem cell factor,SCF）和干细胞因子受体c-kit）的表达以及分布;Western印迹检测肾组织E—cadherin,a-SMA,FN,ColI,SCF和c-kit蛋白的表达;RT-PCR检测肾组织FN,ColI,SCF,c-kit mRNA的表达。结果：曲尼斯特能抑制肥大细胞在DKD大鼠肾组织的浸润;DKD模型组肾小管上皮细胞E-cadherin的表达较正常对照组减少,并可见a-SMA表达,曲尼斯特可一定程度逆转这一过程;与正常对照组比较,DKD模型组肾小管间质区域ColI和FN的表达增加,曲尼斯特能剂量依赖性地抑制col I和FN的表达;DKD大鼠肾组织SCF,c-kit蛋白及mRNA表达增加;肾组织SCF,c-kit蛋白表达与肥大细胞浸润程度及肾小管间质FN,ColI蛋白的表达呈显著正相关。曲尼斯特能抑制SCF,c—kit mRNA及蛋白的表达（P〈0．05）。结论：肥大细胞参与了DKD大鼠肾间质纤维化的发生发展,曲尼斯特可能通过阻断SCF／c—kit信号通路,抑制肥大细胞的募集而逆转DKD大鼠肾小管上皮细胞的EMT,抑制肾间质纤维化。     

TGF-β1刺激对人腹膜间皮细胞内Smad信号转导通路的影响

目的：探讨人腹膜间皮细胞内Smad信号转导通路在TGF-β1致腹膜纤维化过程中是否发挥作用。方法：取健康成年人大网膜进行人腹膜间皮细胞原代培养，经鉴定95%以上为人腹膜间皮细胞。用5 ng/ml TGF-β1刺激第三代培养细胞，采用免疫组织化学染色、Western blotting，ELISA以及RT-PCR等方法，分别观察人腹膜间皮细胞内磷酸化Smad2/3（p-Smad2/3）的蛋白表达以及在细胞内的迁移；细胞内Smad7的蛋白和mRNA表达；细胞外纤维连接蛋白（FN）的蛋白、细胞内FN的mRNA以及细胞内I型胶原（COL1）的蛋白和mRNA表达。结果：人腹膜间皮细胞内p-Smad2/3的蛋白表达在TGF-β1刺激后15 min即开始显著增加，此时p-Smad2/3的阳性细胞率为29%，细胞着色主要分散在细胞质中，30 min阳性细胞率81%至1 h阳性细胞率84%增加最明显，细胞着色加深且集中在细胞核及周边，2 h蛋白表达明显回落，此时阳性细胞率为37%，细胞着色转淡并又分散至细胞质中；细胞内Smad7的蛋白表达在TGF-β1刺激后24 h明显增加，48 h时达高峰，mRNA表达呈时间依从性增强；细胞外FN的蛋白、细胞内FN的mRNA以及细胞内COL1的蛋白和mRNA表达从TGF-β1刺激后24 h起均明显增加，且均显示一定的时间依从性。结论：人腹膜间皮细胞内Smad信号转导通路能被TGF-β1特异性激活，并在TGF-β1致腹膜纤维化过程中发挥效应；经TGF-β1刺激后，在该通路中主要起抑制作用的Smad7蛋白和mRNA表达均反馈性增加。     

氟伐他汀对高糖腹透液诱导人腹膜间皮细胞纤维连接蛋白表达的影响

目的:探讨氟伐他汀(fluvastatin,Flu)对高糖腹透液(high-glucose peritoneal dialysate,HGPDS)诱导人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)纤维连接蛋白(fibronectin,FN)表达的影响?方法:体外培养HPMCs,同步化24 h后,分为正常对照组?HGPDS组?HGPDS+Flu组?单纯氟伐他汀组?DMSO对照组,各组分别刺激不同时间后,噻唑蓝(MTT)检测各组细胞的活力,RT-PCR检测FN的mRNA表达,ELISA法检测上清液FN蛋白表达的变化?结果:与正常对照组比较,HGPDS明显抑制细胞活力,HGPDS联合Flu共同培养24?36 h,细胞活力有所恢复,其中,1 × 10-6 mol/L Flu作用24 h,细胞活力改善差异有统计学意义(P < 0.05);与正常对照组比较,HGPDS明显增加人腹膜间皮细胞FN mRNA及蛋白表达(P < 0.05),并呈时间依赖性,其中FN mRNA于6 h达高峰,FN蛋白于24 h达高峰?Flu 可抑制HGPDS诱导的FN的高表达(P < 0.05),并呈浓度依赖性?结论:HGPDS诱导体外培养人腹膜间皮细胞FN表达增加,此作用可被Flu 抑制?     

RNA干扰下调Gremlin表达对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞分泌FN、ColⅣ的影响

目的探讨在高糖培养条件下,应用慢病毒介导的RNA干扰下调Gremlin表达对大鼠肾小球系膜细胞(RMCs)分泌纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)的影响及机制。方法构建Gremlin基因特异性的短发夹双链RNA(shRNA)慢病毒GREM1-RNAi-LV,感染RMCs后,分为5.5 mmol/L葡萄糖组、30 mmol/L葡萄糖组、30 mmol/L葡萄糖+GREM1-RNAi-LV组及30 mmol/L葡萄糖+NC-GFP-LV(感染携带绿色荧光蛋白的阴性对照慢病毒)组,分别处理48 h,RT-PCR检测Gremlin mRNA表达,Western Blot检测Gremlin蛋白表达,ELISA法检测细胞上清FN、ColⅣ蛋白表达变化。结果与5.5 mmol/L葡萄糖组相比,30 mmol/L葡萄糖组Gremlin mRNA和蛋白水平显著升高(P均<0.05),细胞外基质分泌FN、ColⅣ蛋白增加(P均<0.05),而RNA干扰能下调高糖诱导的Gremlin mRNA与蛋白高表达(P<0.05),降低细胞外基质FN、ColⅣ蛋白分泌(P<0.05)。结论慢病毒介导的RNA干扰可明显抑制高糖诱导的Gremlin高表达,降低细胞外基质分泌,改善肾脏纤维化,可能是一个预防和治疗糖尿病肾病新型的潜在靶点。     

BMP-7拮抗系膜细胞TGF-β1诱导MMPs的表达

目的 观察骨形态发生蛋白-7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7)对转化生长因子-β1 (transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导系膜细胞表达基质金属蛋白酶(matrix metalloprotease,MMP)2、9的影响.方法 将体外培养系膜细...