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相似文献
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1.
沙眼衣原体(Chlamydia trachamatis,Ct)主要外膜蛋白(MOMP)为Ct最重要的免疫原之一,由于其蛋白结构的特殊性,其已被进行广泛研究,它不仅可用于Ct基因型分型,而且为Ct疫苗研究中最重要的候选成分。现将Ct MOMP基因及蛋白的特性、MOMP的免疫学特性、MOMP的基因型分型及在临床诊断中的应用等作一综述。  相似文献   

2.
目的:构建热休克蛋白65(HSP65)与沙眼衣原体(C.trachomatis,Ct)主要外膜蛋白(MOMP)T细胞表位(简称ctm1)融合蛋白(简称H-ctm1)的原核表达载体,并将其表达及纯化。方法:用PCR技术获得HSP65基因和ctm1基因,并分别将其克隆入pMD18-T载体,采用酶切与连接的方法从pMD18-T载体上获得HSP65基因片段,并将其克隆入pET28a表达质粒,再用相同的方法将ctm1基因连接于HSP65基因片段的下游,从而完成H-ctm1的基因重组。用IPTG诱导转化H-ctm1表达载体的大肠杆菌,以镍金属螯合亲和层析法纯化融合蛋白质。结果:构建了HSP65与ctm1的表达载体pET28a-H-ctm1,DNA序列测定结果表明构建正确。以镍金属螯合亲和层析获得纯度为98%的融合蛋白质。结论:用分子克隆技术正确构建HSP65与Ct MOMP T细胞表位融合蛋白的表达载体,并成功表达与纯化出具有生物活性的融合蛋白。  相似文献   

3.
E型沙眼衣原体MOMP基因重组质粒的构建与表达   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:构建E型沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白(MOMP)基因重组真核表达质粒pVAX1-MOMP,为探索安全的E型CtDNA疫苗奠定基础。方法:根据Genebank中E型Ct MOMP基因序列设计引物,用高保真PCR方法从E型Ct基因组DNA中扩增得到约1.1kb的MOMP片段,克隆至pcDNAⅡ载体,测序后亚克隆至表达载体pVAX1,构建卡那霉素抗性真核重组表达质粒pVAX1-MOMP,并以重组质粒转染COS-1细胞进行表达,用Western blotting方法鉴定表达产物。结果:从E型Ct基因组DNA中扩增出特异的MOMP基因片段,酶切鉴定及DNA序列测定证实pVAX1-MOMP重组质粒构建正确,能在COS-1细胞内表达,表达产物能与抗MOMP单克隆抗体特异性结合。结论:成功构建E型沙眼衣原体MOMP真核表达质粒pVAX1-MOMP,并在真核细胞内获得表达。  相似文献   

4.
目的:预测和分析EBV潜伏膜蛋白2(LMP2)的结构和功能。方法:采用互联网数据库和生物软件,从SwissProt蛋白质数据库中检索LMP2的氨基酸序列,通过生物软件分析预测其理化性质、二级结构及空间结构。结果:分析显示LMP2由497个氨基酸组成,分子量53 011.4 Da,等电点4.85,为疏水性蛋白;具有12个疏水跨膜区,其N端含有免疫受体酪氨酸活化基序(ITAM)和脯氨酸富集基序(PY基序),前者位于氨基酸序列74~77和85~88处,后者位于56~60和97~101处;含有15个α螺旋结构和7个β片层结构,通过无规则卷曲连接α螺旋和β片层。结论:通过对LMP2生物信息学的分析,获得了此蛋白的理化特性及部分参与调节跨膜信号传导功能区的信息,为进一步研究EBV的感染与致病机制、研制EBV亚单位疫苗等奠定基础。  相似文献   

5.
目的:预测并分析比较衣原体MOMP蛋白的二级结构和B细胞表位。方法:以各株衣原体MOMP蛋白的氨基酸序列为基础,采用Gamier—Robson法、Chou—Fasman法和Karplus-Schulz法预测蛋白二级结构;按Kyte-Doolittle法、Emini法和Jameson—Wolf法预测蛋白的抗原表位;以ClustalX软件序列比对分析其多变区。结果:各株MOMP蛋白含多个抗原位点,各序列在第80—107、165—178、249—264、332—346位序列高度差异,并出现比对“空沟”。多个强表位位于序列保守区内。结论:MOMP蛋白有较强的免疫原性,预测的抗原位点为之后蛋白相互作用研究、单抗制备、亚单位疫苗设计提供了理论依据。  相似文献   

6.
目的 制备高效价E型沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白(MOMP)168多表位特异性免疫血清并研究其免疫学特性.方法 纯化的Trx-his/Ct MOMP168融合蛋白经弗氏佐剂乳化后,小鼠背部皮下多点免疫注射,间隔2周后加强免疫,共3次,并分别于免疫前和每次免疫后2周取血,采用ELISA法检测血清融合蛋白和E型Ct全菌体特异性抗体水平及变化趋势,通过体外中和反应检测多表位特异性血清的免疫学特性.结果 小鼠用Ct MOMP168多表位融合蛋白全程免疫后产生了抗融合蛋白和E型Ct全菌体特异性抗体,ELISA法检测最高滴度达1:500.ELISA和体外中和实验检测结果显示,该抗体能特异性识别MOMP 多表位蛋白和E型Ct全菌体,并能有效抑制E型Ct感染Hela229细胞.结论 沙眼衣原体MOMP多表位融合蛋白免疫血清可特异性结合并中和E型Ct.  相似文献   

7.
在用临床标本作沙眼衣原体(Ct)基因分型中,主要外膜蛋白(MOMP)基因扩增至关重要,本文用ct分离培养,质粒PCR、MOMPPCR作比较研究,502例宫颈标本中Ct培养阳性145例(28.9%),220例质粒PCR和培养比较,质粒PCR敏感性为90.6%,特异性为98.1%。150例MOMP和质粒PCR比较,MOMPPCR敏感性为71.7%,特异性为100%,本文结果提示,宜先用质粒PCR初筛临床标本,阳性者再作MOMPPCR。  相似文献   

8.
目的:生物信息学的发展为通过在线软件预测新基因的相关信息提供了众多有重要价值的参考信息。文中利用生物信息学方法预测泛素结合酶2S( ubiquitin-conjugating enzyme 2S, UBE2S)生物学功能。方法以人肝癌HepG2细胞为材料,从构建的cDNA文库基因组中筛选和克隆了UBE2S基因。利用NCBI的BLAST在线分析工具分别对GenBank的非冗余核酸数据库和非冗余蛋白质数据库序列进行比对分析;采用NCBI ORF finder在线分析工具预测开放阅读框;利用ExPASy在线工具ProtParam统计基因中各种氨基酸含量,并预测理论分子量和等电点;应用ProtScale程序进行蛋白质的疏水性分析;蛋白质亚细胞定位采用在线工具( nibb.ac.jp/form.html)预测,通过NCBI数据库GenBank分析蛋白质保守结构域;采用Protfun在线工具预测UBE2S的功能分类;采用同源模型服务软件SWISS-MODEL预测UBE2S的三维结构;采用MEGA5.05软件进行系统进化树的构建。结果 UBE2S基因编码241个氨基酸,预测相对分子质量为23770,理论等电点为8.81。跨膜结构域分析表明,UBE2S蛋白不含跨膜位点;亚细胞定位预测,UBE2S蛋白具有生长因子、离心通道、结构蛋白功能的概率为8.904、0.313和0.291。同源性比较分析结果表明,其碱基序列与已经报道的其他12个物种的相似率为90%~97%,且符合种属之间的进化关系。结论 UBE2S蛋白结构和功能的分析不仅丰富了其家族基因信息,还将为后续肝癌发生发展的分子机制实验研究奠定基础。  相似文献   

9.
E型沙眼衣原体MOMP基因重组腺病毒的构建及免疫原性研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的:构建E型沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白(MOMP)基因重组腺病毒,为沙眼衣原体腺病毒疫苗的研究奠定基础。方法: 根据Genebank中E型Ct MOMP基因序列设计引物,用高保真PCR方法从E型Ct基因组DNA中扩增得到MOMP基因片段,克隆至pcDNAII载体,测序后连接入腺病毒穿梭载体pDC316。穿梭载体pDC316 MOMP与含腺病毒基因组的辅助质粒PBHGlox△E1,3Cre共转染至HEK293细胞,在Cre loxP重组酶作用下进行重组,包装成重组腺病毒颗粒,用PCR和RT PCR方法进行鉴定。并用动物免疫试验检测重组腺病毒的免疫原性。结果:从E型Ct基因组DNA中扩增出约1.1?kb的特异MOMP基因片段,酶切鉴定及DNA序列测定证实穿梭载体pDC316 MOMP构建正确。穿梭载体pDC316 MOMP与含腺病毒基因组的辅助质粒PBHGlox△E1,3Cre共转染至293细胞,出现明显细胞病变效应。收集重组腺病毒,PCR法证实重组腺病毒含有MOMP基因,RT PCR证实重组腺病毒在293细胞能表达MOMP基因。重组腺病毒免疫小鼠可诱导特异性抗体产生,证明重组腺病毒具有良好免疫原性。结论:成功构建了E型沙眼衣原体MOMP基因重组腺病毒,该重组腺病毒可诱导小鼠产生特异性抗体。  相似文献   

10.
HIV-1 CRF01_AE毒株gp41蛋白生物信息学预测   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:对HIV-1 gp41蛋白的膜外区和跨膜区进行预测,并分析该蛋白的结构和功能。方法:从NCBI GenBank数据库获取gp41基因及其蛋白编码序列,利用ExPASy ProtParam tool、ProtScale、SignalP 4.0 Server、TMHMM Server v.2.0、SWISS-MODEL、PredictProtein等工具对gp41蛋白的生物学特性进行预测。结果:HIV-1 gp41基因ORF长度为666 bp,编码222个氨基酸,蛋白分子式为C1164H1815N317O325S6,等电点(isoelectric point,pI)=8.60,属于稳定、疏水性蛋白。该蛋白具有跨膜区,信号肽切割位点位于第20和21位氨基酸处。其二级结构由无规则卷曲、β折叠和α螺旋组成,属于全螺旋型蛋白。而且该蛋白具有N-端信号肽,能引导蛋白分泌到胞外。此外gp41蛋白具有4个蛋白质-蛋白质和1个蛋白质-核酸结合位点,这些位点能调控gp41蛋白的多种生物学功能。结论:对gp41蛋白的结构和功能进行了预测,为深入研究其参与疾病发生发展的分子机制奠定了基础。  相似文献   

11.
目的:探讨qRT-PCR检测中β-Actin Ct值与检测因子Ct值检出率和相关性分析.方法:以32只成年SD大鼠脊髓为实验样本进行两次qRT-PCR检测,并分别测β-actin Ct值和PENK、CNTF、PDGF Ct值,随后进行独立样本T检验、卡方检验、一元线性回归分析.结果:两次qRT-PCR检测β-Actin Ct值无统计学差异(P>0.05);两次检测均显示β-actin Ct值小于20与β-act-in Ct值大于20对其他因子的检出率有显著性影响(P<0.05); β-actin Ct值与检测因子Ct值有显著的线性相关性,线性回归方程为y=-0.983+0.708x(y:欲检测基因Ct值,x:实际测得β-actin Ct值).结论:qRT-PCR检测中可通过β-Actin Ct值预测需检测因子的Ct值.  相似文献   

12.
目的:探讨沙眼衣原体主要外膜蛋白多表位(Ct MOMP168)重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)/Ct MOMP168免疫小鼠的有效免疫剂量,为体内免疫学效应的研究提供实验依据.方法:在重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)/Ct MOMP168构建成功的基础上,抽提纯化质粒,分3个免疫剂量组,即50、100和150μg剂量组,同时设PBS对照组.肌肉注射免疫BALB/c小鼠3次,间隔2周,于免疫的0、2、4、6、8周分别尾静脉取血,分离血清,间接ELISA法检测小鼠血清中Ct MOMP多表位特异性抗体IgG的生成量,并于0、1、3、5、7周取小鼠阴道冲洗物,检测Ct MOMP多表位特异性SIgA的生成量,分别进行统计学分析.结果:3个不同免疫剂量组,血清特异性抗体IgG生成量于免疫第4周后均开始随免疫时间延长而逐步增加,150μg剂量组抗体IgG的生成水平高于其他剂量组(P<0.05).免疫小鼠阴道分泌物中特异性抗体SIgA生成较快,免疫开始后1周,150 μg剂量组SIgA的产生水平高于其他组,7周后SIgA开始下降,但150 μg剂量组抗体水平仍高于其他剂量组(P<0.05).结论:重组质粒DNA免疫小鼠的特异性抗体生成显示了剂量依赖关系,高剂量(150μg)免疫组小鼠血清特异性抗体IgG和阴道分泌性特异性抗体SIgA生成水平优势显著.  相似文献   

13.
目的:分析和预测家蝇黏蛋白mucin-46基因及其编码蛋白的结构和特性.方法:利用EST测序技术从家蝇幼虫cDNA文库中获得家蝇黏蛋白mucin-46基因cDNA序列,采用美国国家生物技术信息中心(NCBI)、瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(Expasy)中的相关工具,对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、疏水性、信号肽、二级结构和亚细胞定位等方面进行预测和分析.结果:家蝇黏蛋白mucin-46基因的cDNA序列具有完整的开放阅读框(ORF),全长1 383 bp,编码460个氨基酸;其编码的蛋白质理论分子量为46.42 kDa,等电点4.13;无信号肽及跨膜区,属于亲水性蛋白,具有4个几丁质结合功能域,含有4个糖基化位点及多个蛋白磷酸化作用位点;二级结构β折叠(E)和无规则卷曲(L)的比例是14.13∶85.87,没有α螺旋(H)结构类型;主要分布于细胞核.结论:应用生物信息学方法从家蝇cDNA文库中筛选出了家蝇黏蛋白mucin-46基因序列并预测了其结构及功能等生物学信息,为进一步研究家蝇围食膜蛋白的功能奠定了一定的基础.  相似文献   

14.
目的:应用半巢式聚合酶链反应-微孔板杂交法(半巢式PCR-MPH)检测泌尿生殖道沙眼衣原体(Ct)。方法:分别用质粒和主要外膜蛋白基因引物进行扩增,将下游引物用生物素标记,经半巢式PCR扩增Ct主要外膜蛋白基因后,扩增产物被包被有链霉亲和素的微孔板捕获,经碱变性后与标有荧光素的特异性探针进行杂交,然后通过辣根酶标记的抗荧光素抗体与杂交分子反应,经过酶底物显色,通过测定吸光度来判断结果。结果:主要外膜蛋白基因引物半巢式PCR较质粒引物PCR更敏感,比半巢式PCR产物酶切后电泳法高10倍,半巢式PCR-MPH法特异性强,该法重复法好,批内CV值<10%,批间CV值<15%,该法在包被浓度为4mg/L,产物1:20稀释,与微孔板结合20min后加入10pmol/mL探针杂交30min,用1:3000稀释的酶显色条件下有最佳结果,结论:该法操作简便,敏感性和特异性均高,无放射性和EB染料污染,适于临床样本的常规检测。  相似文献   

15.
观察烫伤大鼠结畅Kit、Kid及Gjal基冈表达与肠道推进速率的改变,初步探讨严董烫伤后胃畅动力障僻的发生机制及临床意义。方法:56只Sprague—Dawley大鼠随机分为正常对照组(8只),烫伤组(6个时恫点碍8只,麻醉再背靴剃毛造成10cmX7cm的Ⅲ度创面)。烫伤组经乳酸钠林格液复苏后,于伤后3h、6h、9h、16h、24h、48h处死;对照组除烫伤外处理同实验组;处死前30min行碳素墨水灌胃(1ml/只),测量墨水最远端与幽门距离,示为畅道推进速率;冗取起始段结畅,提取总RNA后进行实时定量RT—PCR。肠道推进速率及基因2-△△ct值采用方差分析进行统计学处理。结果:伤后各时段大鼠肠道推进速率及qal、Kitl mRNA表达显著减弱(P<O.05或O.01);KitmRNA表达除伤后3h外叫显降低瞅(P<.05或(0.01)。结论:烫协后各时相大鼠肠道运动明显受抑;上述基因表达除3h时Kit外均显著减弱;至48h,各基因表达及肠道推进速率有所回升但仍明显低于正常水平。推测肠组织中Kit、Kitl与Gjal基因表达下调及其后续转录、翻译异常,可能参与了烫伤后胃肠运动障扛导的发生过程。  相似文献   

16.
目的:观察5-氮胞苷(5-aza)对成人脂肪间充质干细胞(ADMSCs)向心肌细胞方向诱导分化的毒理遗传学影响.方法:自成人脂肪组织中分离培养ADMSCs,用5-aza对ADMSCs进行诱导,设立不同诱导浓度的I,II,III,(5,10,20μmol/L)组及对照组IV,光镜下观察细胞的生长情况及形态学变化,免疫细胞化学方法检测心肌特异性肌钙蛋白I(cT-nI),RT-PCR方法检测cTnI基因的表达,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,并对各诱导组常规核型分析.结果:诱导后4wk I,II,III组ADMSCs呈现类似心肌细胞的形态学特征.I,II,III组免疫组化结果见cTnI阳性表达,RT-PCR条带见cTnI基因表达.各组染色体结构及数目均未见异常.结论:5-aza作为诱导剂对ADMSCs遗传性无不良影响.  相似文献   

17.
目的:应用双向电泳及免疫印迹技术分析乳腺癌MCF-7细胞总蛋白,寻找乳腺癌相关抗原。方法:提取乳腺癌MCF-7细胞总蛋白,双向电泳技术(2-DE)对总蛋白进行分离后转膜,将健康人血清(对照组)和乳腺癌患者血清(实验组)作为一抗进行蛋白质印迹(Western blotting)分析,寻找杂交蛋白点的差异。结果:MCF-7总蛋白双向电泳考马斯亮蓝染色图谱共检测到248个蛋白质斑点,Western blotting显示实验组抗原抗体反应点23个,对照组为13个,找到10个差异蛋白点。结论:乳腺癌患者血清中的抗体表达水平有改变,这10个差异蛋白点有可能是乳腺癌相关抗原。  相似文献   

18.
胡小东  马信文 《海南医学》2014,(13):1877-1879
目的检测骨关节炎(0A)患者骨桥蛋白(0PN)的表达,探讨Wnt/β-catenin信号通路对OPN的表达调控作用。方法分离OA患者(骨关节炎组12例)的软骨细胞,并取非OA患者软骨细胞作为正常对照(8例),荧光定量PCR检测OPN基因的表达;基因转染双链siRNA干扰β-catenin基因的表达;Western blot实验检测β-catenin和OPN蛋白的表达改变。结果骨关节炎组和正常对照组软骨细胞OPN的mRNA表达量分别为(0.642±0.155)和(0.226±0.077),两组比较差异有统计学意义(t=6.74,P〈0.01)。特异性靶向双链siRNA可以下调伊catenin的表达,Western blot检测显示下调β-catenin蛋白的表达后软骨细胞OPN蛋白的表达也出现了相应的下调。结论骨关节炎患者中存在骨桥蛋白的表达上调,骨桥蛋白的上调受到Wnt/β-catcnin通路的调控。  相似文献   

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