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相似文献
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1.
目的:研究离体人支气管上皮经5-氟尿嘧啶(5-)FU损伤前后P糖蛋白(P-gp)的表达。方法:5-FU造成离体人支气管环严重损伤,分别取正常组及5-FU作用后的支气管上皮,应用流式细胞仪和蛋白印迹法检测P-gP的表达;RT-PCR法检测其mRNA的表达。结果:5-FU作用后支气管上皮细胞中P-gP阳性细胞所占比例较正常组增高,在蛋白及mRNA水平,5-FU作用后支气管上皮P-gp的表达均较正常组增加。结论:5-FU作用后.表达P-gp的支气管干细胞占残留活细胞的比例增多,由它们完成损伤的修复。  相似文献   

2.
目的 :探讨生存素、P-糖蛋白及 bcl-2在急性白血病细胞中的表达及其与耐药的关系。方法 :应用间接免疫荧光染色检测急性白血病 43例 P-糖蛋白、bcl-2蛋白的表达 ,逆转录 -聚合酶链反应检测生存素的表达。结果 :急性白血病患者细胞中 P-糖蛋白、bcl-2及生存素的阳性率均高于正常对照组 (P<0 .0 5 ) ;3者的表达在急性髓细胞性白血病与急性淋巴细胞性白血病中无明显差异 (P>0 .0 5 ) ;P-糖蛋白、bcl-2、生存素阳性的患者耐药率均明显高于阴性者 (P<0 .0 5 ) ;3因素中生存素与 bcl-2的表达呈轻度正相关 ;生存素和 P-糖蛋白及生存素和 bcl-2双阳性患者的耐药性明显高于双阴性的患者 ;生存素、P-糖蛋白和 bcl-2 3者都阳性患者的耐药性明显高于双阳性、单阳性或 3阴性的患者 (P<0 .0 5 )。结论 :急性白血病中存在着生存素、bcl-2和 P-糖蛋白的高表达 ,其中生存素与 bcl-2的表达有相关性 ,3指标中 2项或 2项以上阳性的患者耐药性明显增高。  相似文献   

3.
目的:研究衰老对小鼠肺组织干细胞在生理状态和支气管上皮细胞( Clara细胞)损伤后修复能力的影响。方法通过流式细胞术对老龄和低龄组小鼠的肺组织干细胞比例进行分析,研究衰老对肺组织干细胞稳态维持的影响;通过免疫组化染色对肺组织病理切片进行分析,确立支气管上皮细胞( Clara细胞)损伤模型;通过流式细胞术、免疫组化染色、肺组织病理切片研究老龄和低龄组小鼠在支气管上皮细胞( Clara细胞)损伤后肺组织干细胞的损伤修复能力。结果老龄组肺组织干细胞比例(肺上皮干细胞/前体细胞,肺间质干细胞/前体细胞)在稳态维持的情况下较低龄组改变不显著;在肺支气管上皮细胞( Clara细胞)损伤后,老龄组小鼠支气管上皮出现较严重的细胞受损;在接下来的观察中发现,小鼠肺组织前体细胞/肺组织总细胞比例在老龄组显著下降,且增殖细胞在肺组织前体细胞和肺组织干细胞中的比例出现显著下降;同时,小鼠支气管上皮恢复程度在老龄组明显较差。结论在稳态维持的状态下,衰老对肺组织干细胞的比例没有影响。在支气管上皮细胞受到损伤后,肺组织干细胞占肺总细胞比例降低,修复与再生能力显著下降。可能为临床上衰老更易产生肺组织损伤及病变更严重的原因。  相似文献   

4.
目的 观察Bcl-2 siRNA对人类肝癌细胞HepG2 5-氟尿嘧啶(5-FU)敏感性的影响。方法 Bcl-2 siRNA表达载体构建并稳定转染至肝癌细胞HepG2中,用G418筛选稳定的阳性细胞克隆。用RT-PCR检测Bcl-2 mRNA水平,免疫荧光检测目的基因Bcl-2蛋白水平的表达。用131、30、1300和13 000 mg/L 5-FU处理稳定转染细胞,用MTT观察细胞对药物敏感性的影响,用流式细胞术观察细胞凋亡情况。Western blot检测Bcl-2和Bax蛋白水平。结果 5-FU处理细胞24 h,Bcl-2 siRNA转染组的细胞生长抑制率明显高于阴性载体转染组和正常细胞;Bcl-2 siRNA转染组细胞凋亡率高于正常细胞和阴性载体转染组;在Bcl-2表达下调时,Bax蛋白表达水平不变。结论 siRNA下调目的基因Bcl-2能增强人类肝癌细胞HepG2对5-FU的敏感性;HepG2细胞对5-FU的敏感性增强与Bax/Bcl-2的比例增高有关。  相似文献   

5.
目的初步明确健脾化瘀方对肝癌细胞表面多药耐药蛋白表达的影响,并探讨可能机制。方法选择肝癌细胞bel-7402、肝癌耐药细胞bel-7402/5-FU做为实验细胞,以流式细胞仪(FCM)检测细胞表面P~糖蛋白(P-gP)、MDR相关蛋白(MRPl)的表达率及细胞内罗丹明123(Rho123)的蓄积浓度。以MTT比色法测定不同浓度健脾化瘀方对bel-7402/5-FU细胞增殖的抑制。FCM检测复方作用后bel-7402/5-FU细胞表面P-gP的表达率及Rho123的蓄积浓度。结果bel-7402/5-FU细胞表面P-gP的表达高于亲本bel-7402细胞,细胞内Rho123蓄积浓度低于亲本细胞。健脾化瘀方可显著抑制细胞生长,并呈量效关系。浓度0.5mg·mL。的健脾化瘀方作用bel-7402/5-Fu细胞48h后,细胞表面P-gP的表达率明显下降,细胞内Rho123蓄积浓度升高。结论健脾化瘀方可能具有逆转肝癌耐药细胞多药耐药的作用,途径可能是通过降低P-gP的表达而实现的。  相似文献   

6.
目的:探讨中西药联合逆转胃癌多药耐药亚系SGC-7901/ADR细胞MRP介导的耐药性作用。方法:以SGC-7901/ADR细胞为靶细胞,以不加药组为阴性对照组,5-FU组、斑贞1号组、班贞1号+5-FU组、班贞1号+5-FU+TMP组为实验组,采用半定量RT-PCR法检测SGC-7901/ADR细胞在不同药物作用下MRP mRNA的表达情况。结果:5-FU组与阴性对照组比较,耐药细胞MRP mRNA表达差异无统计学意义(P〉0.05),提示MRP参与SGC-7901/ADR细胞对5-FU的多药耐药性;其他实验组组间比较及与阴性对照组比较,MRP mRNA表达差异均有统计学意义(P〈0.01),中西药联合组(斑贞1号+5-FU+TMP)MRP mRNA表达量最低(仅为0.07)。结论:中西药联合可以克服SGC-7901/ADR细胞由MRP介导的多药耐药性,为当前胃癌的治疗提供了新的理论依据。  相似文献   

7.
目的:研究氨氯地平衍生物CJX2对K562/DOX细胞阿霉素耐药的逆转作用。方法:应用流式细胞仪和MTT法观察了CJX2对K562/DOX细胞P-糖蛋白(P-glycoprotein,Pgp)的抑制作用及对K562/DOX细胞阿霉素耐药的逆转作用。结果:CJX2能剂量相关性地增加K562/DOX细胞对罗丹明123(rhodamine123,Rh123)的摄取以及细胞内Rh123的累积,明显抑制Pgp介导的Rh123外排,显著增强阿霉素对K562/DOX细胞的细胞毒作用,提高细胞caspase3活性,增加K562/DOX细胞内阿霉素水平。结论:氨氯地平衍生物CJX2能显著抑制Pgp的外排功能,逆转Pgp介导的K562/DOX细胞的多药耐药性。  相似文献   

8.
目的 研究EZH2特异性shRNA对人结肠癌细胞株SW480细胞的抑制作用和化疗药物5-FU对其干预作用的影响。方法 体外将EZH2特异性shRNA表达载体转染SW480细胞,RT-PCR和Western blotting检测细胞EZH2 mRNA及蛋白的表达,M TT法检测细胞增殖活性;将靶向EZH2的shRNA表达的SW480细胞接种于裸鼠,5-FU对其进行干预,RT-PCR检测瘤组织EZH2 mRNA的表达。结果 与阴性对照组相比,基因沉默组EZH2 mRNA表达明显降低(P<0.01),EZH2蛋白表达明显降低(P<0.05);与空白对照组相比,基因沉默组细胞生长受到明显抑制(P<0.05);接种于裸鼠后,与正常组相比,5-FU基因沉默组与基因沉默组瘤组织体积、质量、EZH2 mRNA的表达均明显降低(P<0.01),与基因沉默组相比,5-FU基因沉默组EZH2 mRNA的表达明显降低(P<0.05)。结论 靶向EZH2的shRNA表达在体外及体内均可显著抑制SW480细胞EZH2 mRNA和蛋白表达及细胞生长;5-FU能显著抑制体内EZH2基因沉默的SW480细胞EZH2 mRNA的表达。  相似文献   

9.
高温合并化疗对耐药性大鼠肝癌CRBH-7919细胞系的协同作用   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的 探讨高温合并阿霉素对耐药性大鼠 CRBH-7919细胞株的作用 .方法  4 2 .5℃持续 1h、阿霉素 32 mg·L- 1 ,单独或联合作用于耐药性大鼠 CRBH- 7919细胞 ,MTT法检测不同处理后细胞的存活率 ;免疫组化检测不同处理后细胞膜 P-糖蛋白 (P- glycoprotein,P- gp)的表达 .结果 加温可增加阿霉素对耐药性 CRBH- 7919细胞的杀伤作用 ;免疫组化提示 ,正常培养下该细胞 P- gp染色强阳性 ,单独用药和单独加热作用下 P- gp染色为阳性 ,加温合并阿霉素作用下 ,P- gp染色为极弱阳性 .结论 高温合并化疗 (热化疗 )可以显著提高耐药性 CRBH- 7919细胞对阿霉素的敏感性 .  相似文献   

10.
目的:探讨中西药联合(班贞1号+5-FU+TMP)对胃癌SGC-7901/ADR细胞MRP、LRP基因表达的影响。方法:以胃癌多药耐药细胞株SGC-7901/ADR为靶细胞,以不加药组为阴性对照组,5-氟尿嘧啶(5-FU)组、班贞1号组、班贞1号+5-FU组、中西药联合组为实验组,采用半定量RT-PCR法检测SGC-7901/ADR细胞在不同药物作用下MRP、LRP mRNA的表达。结果:5-FU组与阴性对照组相比,MRP、LRP mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。中西药联合组MRP、LRP mRNA表达明显降低,与阴性对照组及其他实验组比较有统计学意义(P<0.05)。结论:中西药联合能够抑制SGC-7901/ADR细胞MRP、LRP mRNA表达,逆转了SGC-7901/ADR细胞的耐药性,其机制可能与下调MRP、LRP基因表达有关。  相似文献   

11.
目的 探讨大鼠气管上皮损伤后,气管干细胞增殖分化过程中Shh信号通路的动态变化。方法 大鼠麻醉后,暴露气管,于平胸骨上缘处离断,与肺相连一端行气管插管维持呼吸,近端应用5-氟尿嘧啶(5-FU)诱发气管上皮损伤,动态观察修复过程;同时在观察的各个时间点取气管上皮标本通过IKT—PCIK检测Shh的表达情况。结果 5-Fu作用30min后大鼠气管上皮细胞绝大部分脱落,仅残留少量裸核样G0期细胞位于基底膜上,之后这些细胞数目逐渐增多,逐渐经过扁平、立方形态,向纤毛细胞、粘液细胞、基底细胞等分化,于去除5-FU后48h基本恢复假复层纤毛柱状上皮;正常组织及5-FU作用30min时的气管上皮均无Shh表达,去除5-Fu恢复3h后可见Shh轻度表达,于恢复12h表达达高峰,之后表达减弱,48h时Shh表达已极微弱。结论 shh参与了气管干细胞的增殖分化过程。  相似文献   

12.
目的:探讨大鼠气管上皮损伤后,气管干细胞增殖分化过程中Shh信号通路的动态变化.方法:应用5-氟尿嘧啶(5-FU)诱发气管上皮损伤,通过RT-PCR检测气管上皮Shh的表达.结果:5-FU作用30 min后大鼠气管上皮细胞绝大部分脱落,仅残留少量裸核样G0期细胞位于基底膜上.之后细胞数目逐渐增多,经过扁平、立方形态,向纤毛细胞、黏液细胞、基底细胞等分化,去除5-FU后48 h接近恢复假复层纤毛柱状上皮;正常气管上皮及5-FU作用30 min气管上皮Shh无表达,去除5-FU恢复3 h后Shh轻度表达,6 h后表达增强,12 h达高峰,之后表达减弱,48 h已极微弱.结论:Shh参与了气管干细胞的增殖分化过程.  相似文献   

13.
5-氟尿嘧啶和奥沙利铂诱导结肠癌SW620细胞死亡的比较   总被引:2,自引:0,他引:2  
【目的】研究5-氟尿嘧啶和奥沙利铂分别诱导结肠癌细胞株SW620的细胞凋亡的作用效果。【方法】用80μg/ml 5-氟尿嘧啶和25μg/ml奥沙利铂分别作用SW620细胞8h,并应用AnnexinV—FITX/PI双标记流式细胞术对细胞凋亡进行检测,观察凋亡细胞的比例。【结果】80μg/ml 5-氟尿嘧啶处理8h组与空白对照组比较,凋亡细胞比例上升约11.9%(P〈0.01);25μg/ml奥沙利铂处理8小时组与空白对照组比较,凋亡细胞比例上升约21.4%(P〈0.01)。【结论】在特定条件下,5-氟尿嘧啶和奥沙利铂均能明显诱导结肠癌细胞株SW620的细胞凋亡;奥沙利铂对结肠癌细胞的诱导凋亡作用要强于5-氟尿嘧啶。  相似文献   

14.
目的 观察大鼠局灶性脑缺血90 min再灌注后p-糖蛋白(P-gp)在脑组织中的表达及其变化规律.方法 采用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型,选取26只成年健康SD雄性大鼠,其中1只用于2,3,5--三苯基氯化四氮唑(TTC)染色,其余25只随机分为对照组(n=5)、假手术组(n=5)、脑缺血再灌注1、3、7d组(n=5).用免疫组织化学DAB单标,观察P-gp在正常脑组织和缺血脑组织中的分布变化;用Mdr-1抗体分别和神经元标记物(Neun)、星形胶质细胞标记物(GFAP)、微血管内皮细胞标记物(CD31)进行免疫荧光双标,观察P-gp在缺血再灌注后脑组织的表达;用实时定量PCR技术检测脑缺血再灌注后大脑皮质及纹状体微血管P-gp mRNA的表达变化.结果 对照组仅在脑组织微血管内皮细胞表达P-gp,缺血再灌注组除微血管内皮细胞表达P-gp外,在部分神经元及星形胶质细胞的突起也有表达.脑缺血再灌注后1d皮质P-gp mRNA表达降低,但3d表达明显增高,7d又下降,其升高和降低水平与对照组及假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05).脑缺血再灌注后1、3、7d纹状体P-gp mRNA表达均增多,其中以1、3d增多明显,与对照组和假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 脑缺血再灌注后P-gp在大脑皮层及纹状体微血管P-gp的表达呈现不同的趋势,这可能是脑组织的自我保护机制之一.  相似文献   

15.
目的探讨Src酪氨酸激酶抑制剂逆转人胃癌顺铂耐药细胞SGC7901/DDP的作用及机制。方法以Src酪氨酸激酶抑制剂逆转前后的人胃癌顺铂耐药细胞SGC7901/DDP为研究对象,应用Western blot观察细胞内p-Src表达的变化,MTS法检测细胞的药物敏感性,流式细胞仪检测细胞Rh123外排及P-gp表达的水平。结果 Src酪氨酸激酶抑制剂可下调SGC7901/DDP细胞中p-Src表达,在5μmol/L及10μmol/L Src酪氨酸激酶抑制剂作用下,SGC7901/DDP细胞对顺铂的药物敏感性分别提高了1.52倍和3.96倍,细胞中Rh123含量分别提高了1.24倍和2.64倍,P-gp表达水平分别降低了65.8%和47.4%。结论 Src酪氨酸激酶抑制剂可逆转SGC7901/DDP细胞多药耐药性,其耐药表型的逆转可能与降低细胞Rh123外排及P-gp表达水平有关。  相似文献   

16.
目的 建立耐5-氟尿嘧啶(5-FU)的人结肠癌细胞株HCT-116/5-FU,初步探讨Runt相关转录因子3(RUNX3)与结直肠癌耐药的关系。方法 采用低浓度梯度递增联合大剂量间断冲击法建立人结肠癌耐药细胞株HCT-116/5-FU,CCK-8法检测5-FU对亲本株HCT-116及耐药株HCT-116/5-FU的半数抑制浓度(IC50值),绘制细胞生长曲线,计算细胞群体倍增时间(TD);qRT-PCR和Western blot法检测亲本株HCT-116细胞及耐药株HCT-116/5-FU细胞中RUNX3、P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)和肺耐药蛋白(LRP)的mRNA和蛋白表达。采用siRNA技术敲低HCT-116细胞中RUNX3的表达,分为RUNX3敲低组(si-RUNX3-1组、si-RUNX3-2组)和阴性对照组(si-NC组),qRT-PCR和Western blot法分别在mRNA水平和蛋白水平验证RUNX3的敲低效率;CCK-8法测定si-RUNX3组和si-NC组的IC50值,Western blot法测定两组中P-gp、MRP1和LRP的表达情况。结果 成功构建稳定的人结肠癌耐药细胞株HCT-116/5-FU,耐药倍数为7.7倍;HCT-116/5-FU耐药细胞株群体TD较HCT-116亲本株明显延长(P<0.001),耐药细胞群体TD是亲本细胞的1.38倍(P=0.002),耐药株细胞形态发生变化。耐药细胞HCT-116/5-FU的RUNX3 mRNA表达水平较亲本细胞株HCT-116明显降低(P=0.048),P-gp(P=0.008)、MRP1(P=0.001)和LRP mRNA(P=0.001)表达水平较亲本细胞株HCT-116明显升高;耐药细胞HCT-116/5-FU的RUNX3蛋白质相对表达量较亲本细胞株HCT-116明显降低(P<0.001),P-gp、MRP1、LRP蛋白的相对表达量较亲本细胞株明显升高(P均<0.001)。成功构建了RUNX3低表达的HCT-116细胞模型,si-RUNX3-1组RUNX3 mRNA的表达与si-NC组相比差异无统计学意义(P=0.064),si-RUNX3-2组明显低于si-NC组(P=0.034);si-RUNX3-1组和si-RUNX3-2组RUNX3蛋白的表达量均明显低于si-NC组(P均<0.001),si-RUNX3-2组的敲低效率更高。选用si-RUNX3-2组完成后续实验,si-RUNX3组的IC50值较si-NC组明显升高,下调RUNX3的表达能明显降低HCT-116细胞对5-FU的敏感性(P<0.001);si-RUNX3组的P-gp、MRP1和LRP蛋白相对表达量均明显高于si-NC组(P均<0.001)。结论 RUNX3表达下调能降低人结肠癌HCT-116细胞对5-FU的敏感性,可能与RUNX3表达的降低上调P-gp、MRP1和LRP等耐药蛋白表达,从而增加细胞的耐药性有关。  相似文献   

17.
Over-expression of P-glycoprotein(P-gp),an ATP-dependent drug efflux pump,represents one of the major mechanisms that contribute to multidrug resistance(MDR) in cancer cells.This study examined the effects of troglitazone,a ligand of peroxisome proliferator-activated receptor gamma(PPARγ),on P-gp-mediated MDR in SGC7901/VCR cells(a vincristine-resistant human gastric cancer cell line).The expression of P-gp was detected by RT-PCR and Western blotting,respectively.The SGC7901/VCR cells were treated with 0.1 ...  相似文献   

18.
目的:探讨双氢青蒿素(Dihydroartemisinin,DHA)在白血病多药耐药中的应用。方法:采用MTT检测DHA联合阿霉素(adriamycin,ADM)对白血病多药耐药细胞(K562/ADM)生长增殖的影响;应用流式细胞技术分析细胞内罗丹明123(Rhodamine 123)浓度,以检测DHA对白血病细胞膜P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)泵功能的影响;免疫组化方法检测DHA对白血病细胞P-gp表达水平的影响。结果:10、20、40μmol/L DHA实验组的细胞耐药逆转倍数分别为1.46、2.16和3.52倍。DHA使用前、后K562/ADM细胞膜P-gp表达水平无明显差异;Rh123蓄积试验中DHA应用后使K562/ADM细胞内Rh123浓度由用前的22.16%升至89.18%,Rh123外排试验中DHA应用后使K562/ADM细胞内Rh123浓度由用前的27.15%升至60.51%。结论:DHA:能有效逆转白血病细胞的MDR机制为通过抑制肿瘤细胞膜上P-gp的药泵功能,增加耐药细胞内化疗药物浓度逆转耐药性,而不是抑制和P-gp表达。  相似文献   

19.
Intheprocessofchemotherapyfortu-mors,multidrugresistance(MDR)P-gly-coprotein(P-gp)expressionoftenoccurstoinduceMDR.PreviousstudiesconfirmedthatmanynormaltissuecellsalsoexpressedP-gp['J.So,whenthedrugsthatdisturbP-gpfunctionwereusedtoreverseMDRofthetumorceIls,thenormalP-gpfunctionofthesecellswouldbeaffectedtocausedamage.Recently,new-typeMDRreversalagentswerebeingdeveIopedandtheirphar-macologicalactionwasagainsttheP-gponthetumorcellmembrane[2].However,theeffectsoftheMDRreversalagentson…  相似文献   

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