DNP增加胰岛素刺激骨骼肌细胞摄取葡萄糖作用的机制研究

目的：观察2,4二硝基酚（DNP）增加胰岛素作用的机制。方法：分别测定在胰岛素或,和DNP不同孵育条件下骨骼肌细胞AMP激活的蛋白激酶（AMPK）、胰岛素受体底物（IRS1）、蛋白激酶B（AKT）及其底物（AS160）和核糖体S6蛋白激酶（S6K）的磷酸化水平。结果：相对于基础组,DNP刺激AMPK的磷酸化,胰岛素刺激Akt和AS160的磷酸化,DNP可以使胰岛素刺激的IRS1丝氨酸磷酸化降低并增加Akt和AS160的磷酸化。结论：DNP刺激L6骨骼肌细胞株（L6-GLUT4myc）成肌细胞AMPK的活性,降低S6K活性,从而降低IRSI丝氨酸磷酸化,增加胰岛素信号分子Akt和AS160的活性,提示DNP可以通过刺激AMPK,增加胰岛素刺激葡萄糖摄取的作用。     

脂肪细胞缺氧对骨骼肌细胞胰岛素作用的影响

目的：观察脂肪细胞缺氧对骨骼肌细胞胰岛素作用的影响。方法：缺氧（5％CO2、85％N2、10％H2或200μmol／L CoCl2）处理小鼠3T3-L1脂肪细胞,制备条件培养基孵育小鼠骨骼肌细胞。通过对胰岛素信号通路中关键蛋白的磷酸化水平和葡萄糖转运子4（GLUT4）转位得以检测骨骼肌胰岛素作用的改变。结果：缺氧处理的3T3-L1脂肪细胞条件培养基抑制骨骼肌胰岛素信号通路,其中胰岛素受体底物10RS1Set307）磷酸化水平呈显著增高,相反蛋白激酶B（AktSer473）磷酸化水平呈显著下降,最终显著抑制了胰岛素刺激的GLUT4myc转位（p〈0．05）。结论：抑制胰岛素刺激的GLUT4myc转位,其机制与IRSt的Ser307的磷酸化水平升高和Akt的Ser473的磷酸化水平降低有关。     

电刺激促进大鼠骨骼肌细胞GLUT4转位并激活Akt信号通路

目的：利用L6细胞模型研究电脉冲刺激对骨骼肌细胞GLUT4转位及其信号通路的影响.方法：将稳定过表达GLUT4myc-AS160的L6-GLUT4myc-AS 160大鼠骨骼肌细胞体外培养于6孔培养板中,用含2％胎牛血清的细胞分化液诱导分化为肌管,将6孔板随机分成对照组、胰岛素组和电脉冲刺激（EPS）组,用终浓度为100 nmol/L的胰岛素或电刺激仪对细胞刺激,对照组不做任何处理.ELISA测定细胞膜上的GLUT4myc含量,免疫印记法测定蛋白激酶B（Akt）和Rab-GTPase激活蛋白AS160的磷酸化.结果：与对照组相比,1h电刺激显著增加细胞膜表面GLUT4myc水平并磷酸化Akt及Rab-GTPase激活蛋白AS160.结论：电刺激促进L6骨骼肌细胞GLUT4myc转位,激活Akt信号通路.     

骨骼肌细胞膜去极化对葡萄糖转运子4转位的调节作用

目的：探讨高钾造成的骨骼肌细胞膜去极化对葡萄糖转运因子4（GLUT4）转位的调节作用。方法：用55mmol／L的葡萄糖酸钾孵育L6GLUT4myc肌管使细胞膜去极化。用偶联抗体的比色法检测细胞膜上GLUT4的数量。结果：膜去极化介导的GLUT4myc转位呈时间依赖性,2min和5min时细胞膜上GLUT4myc的含量显著高于基础组（P〈0．05）,并随时间的延长回复到基础状态：去极化作用同样急性增加钙,钙调蛋白依赖性蛋自激酶Ⅱ的磷酸化。结论：高钾诱导的细胞膜去极化可使膜表面GLUT4myc快速增加,钙,钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ可能参与高钾刺激的骨骼肌细胞GLUT4myc转位的机制。     

Ghrelin改善骨骼肌细胞胰岛素抵抗的机制研究

目的观察酰化ghrelin和非酰化ghrelin分别对胰岛素抵抗（insulinresistance,IR）骨骼肌细胞的胰岛素受体后信号通路关键因子P13Kp85α、Akt／PKB及GLUT4的影响。方法大鼠L6成肌细胞经棕榈酸诱导分化,建立IR模型成功后入选实验,分为酰化ghrelin组（AG组）、非酰化ghrelin组（UAG组）、P13K抑制剂（LY）＋酰化ghrelin组（LY＋AG组）、LY＋非酰化ghrelin组（LY＋UAG组）和对照组（IR—CO组）。各组经处理因素干预24h后,激光共聚焦和流式细胞术检测各组骨骼肌细胞在胰岛素刺激下对荧光葡萄糖的摄取能力,免疫印迹法检测骨骼肌组织的磷酸化／总P13Kp85α、磷酸化／总Akt、细胞膜／总GLUT4的蛋白表达,实时荧光定量PCR法检测骨骼肌组织P13Kp85α、Akt、GLUT4mRNA的表达。结果L6成肌细胞诱导分化及IR模型建立成功;AG组和UAG组的细胞在胰岛素刺激下的葡萄糖摄取分别是IR—CO组的1．25和1．28倍,磷酸形总P13Kp85α相对蛋白表达量分别是IR-CO组的1．78和1．89倍,磷酸化／总Akt、细胞膜／总GLUT4的蛋白表达是IR—CO组的1．84和1．80倍,细胞P13Kp85α、Akt／PKB、GLUT4的mRNA表达均较对照组显著升高,LY＋AG组和LY＋UAG组细胞的上述指标较单独使用酰化ghrelin或非酰化ghrelin作用时显著下降。结论酰化ghrelin和非酰化ghrelin均能改善骨骼肌细胞的IR,增加骨骼肌细胞在胰岛素刺激下的葡萄糖摄取;能够上调骨骼肌细胞的磷酸化P13Kp85α、磷酸化Akt／PKB、细胞膜GLUT4的相对蛋白表达和3者的mRNA表达,PI3K抑制剂LY294002能够抑制酰化和非酰化ghrelin的上述改善作用。     

糖耐康对肥胖Zucker大鼠血糖的影响及其机制

目的：观察中药复方糖耐康对肥胖Zucker大鼠糖代谢和胰岛素抵抗的影响。 方法：6周龄雄性肥胖Zucker大鼠12只,适应性喂养2周后,随机分为对照组和糖耐康组（3.24 g/kg）,所有大鼠给予高脂饲料喂养,疗程为4周。每周检测体质量和血糖;入组前和治疗14、28 d时行口服葡萄糖耐量实验（oral glucose tolerance test,OGTT）并检测空腹血清胰岛素水平;第28天时检测空腹血脂4项和血浆游离脂肪酸（free fatty acids,FFA）水平;第29天时进行高胰岛素正葡萄糖钳夹实验检测平均葡萄糖输注率（glucose infusion rate,GIR）;实验结束后处死大鼠并取材,检测骨骼肌中蛋白激酶B（protein kinase B,PKB/Akt）、磷酸化蛋白激酶B（phospho-Akt, p-Akt/Thr308）、葡萄糖转运蛋白4（glucose transporter protein 4,GLUT4）的表达和脂肪组织GLUT4的蛋白表达。 结果：与对照组相比,治疗4周后,糖耐康组血清胰岛素水平没有变化,餐后血糖和OGTT中120 min时的血糖水平均显著下降;糖耐康组高胰岛素正葡萄糖钳夹实验后GIR显著提高;糖耐康能显著增加骨骼肌Akt、p-Akt（Thr308）的蛋白表达,减少脂肪组织GLUT4的蛋白表达;糖耐康有降低体质量、血脂（三酰甘油、胆固醇、低密度脂蛋白）和FFA含量的趋势,但两组比较差异无统计学意义。 结论：糖耐康可能是通过增加骨骼肌Akt和p-Akt（Thr308）的表达,增强GLUT4的葡萄糖转运能力来实现降低血糖,改善外周胰岛素抵抗的功效。     

双氢睾酮逆转棕榈酸诱导的小鼠骨骼肌细胞胰岛素抵抗及其机制

目的:探讨双氢睾酮(DHT)对棕榈酸(PA)诱导的C2C12小鼠骨骼肌细胞胰岛素抵抗的影响及其分子机制.方法:分别用牛清蛋白(BSA)、PA或PA+DHT孵育C2C12细胞24 h,Western印迹检测胰岛素信号通路蛋白激酶B(Akt)、Akt底物AS160以及炎症相关蛋白核因子κB抑制蛋白(IκB)激酶(IKK)、...     

MAPK通路在G蛋白偶联受体40介导的小鼠胰岛NIT-1细胞脂性凋亡中的作用

目的：探讨丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路在G蛋白偶联受体40（GPR40）介导的小鼠胰岛NIT-1细胞脂性凋亡中的作用.方法：利用小RNA干扰（siRNA）技术抑制GPR40在NIT-1细胞表达,观察对细胞脂性凋亡（棕榈酸、油酸干预）的影响.采用Hoechst33342染色、TUNNEL及流式细胞仪检测细胞凋亡.Western Blot检测棕榈酸、油酸孵育NIT-1细胞各时间点及GPR40 siRNA转染NIT-1细胞丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路激酶磷酸化水平.并予相应激酶阻断剂预处理后观察细胞脂性凋亡变化.结果：棕榈酸孵育后空转组,对照siRNA转染和GPR40 siRNA转染细胞凋亡率差异无统计学意义.予棕榈酸和油酸共孵育,GPR40 siRNA转染细胞凋亡率明显高于空转组细胞;油酸孵育使ERK1/2呈时间依赖性地激活（磷酸化）,ERK的特异性抑制剂预处理NIT-1细胞后,继予棕榈酸和油酸共孵育,NIT-1细胞凋亡率较对照组明显升高.油酸刺激GPR40 siRNA转染细胞的ERK磷酸化水平较空转组明显下降.结论：棕榈酸诱导NIT-1细胞脂性凋亡不依赖GPR40,而不饱和脂肪酸油酸对NIT-1细胞脂性凋亡的保护作用至少部分通过GPR40介导.其可能的假设机制为不饱和脂肪酸通过受体GPR40,激活ERK-MAPK通路,导致抗凋亡效应产生.     

罗格列酮对高脂饲养大鼠骨骼肌AMPK活性的影响

目的观察罗格列酮对高脂饲养大鼠骨骼肌AMP激活的蛋白激酶(AMPK）α、葡萄糖转运体4(GLUT4）、胰岛素受体底物1(IRS1）及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ）表达的影响,为临床有效的预防和控制脂毒性提供科学依据。方法雄性Wistar大鼠30只,随机分为对照、高脂和高脂加罗格列酮［1?mg/(kg·d)］三组,每组10只。喂养5个月后,采用Real time PCR法测定大鼠骨骼肌中AMPKα1、AMPKα2、GLUT4的mRNA水平,RT PCR法测定IRS1、PPARγmRNA的表达,Western blot法测定P AMPK、T AMPK和GLUT4的含量。结果高脂组大鼠除AMPKα1和IRS1的mRNA表达无变化外,AMPKα2、 GLUT4、PPARγ的mRNA水平及P AMPK、T AMPK、 GLUT4的蛋白水平均比对照组降低（P<0.01或P<0.05）。与高脂组相比,罗格列酮显著增加大鼠骨骼肌GLUT4、PPARγ、IRS1的mRNA水平及 P AMPK、GLUT4的蛋白水平（P<0.01或P<0.05）, 而对AMPKα1、AMPKα2的mRNA水平和T AMPK的蛋白水平无明显影响。结论罗格列酮可增加高脂喂养大鼠的骨骼肌P AMPK、GLUT4、PPARγ和IRS1的表达,提示其具有参与改善胰岛素抵抗、缓解脂毒性的作用。     

血管紧张素Ⅱ对L6大鼠成肌细胞胰岛素作用机制的研究

目的研究血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对L6大鼠成肌细胞的胰岛素信号传导的影响,探讨AngⅡ影响胰岛素信号传导通路的可能机制。方法培养及诱导分化IJ6细胞,根据AngⅡ或JAK2-PKA抑制剂H89干预的不同,将其分为4组：对照组、胰岛素组、胰岛素＋AngⅡ组及胰岛素＋AngⅡ＋H89组。采用RT-PCR方法检测IRS1、GLUT4mRNA的表达水平,Westernblot方法检测IRS1、ptyr_IRS1、总蛋白和膜蛋白中GLUT4的蛋白表达。结果RT—PCR检测4组间GLUT4mRNA表达差异无统计学意义（P〉0．05）,后3组间IRSImRNA表达差异无统计学意义（P〉0．05）,但均较对照组增加（P〈0．05）。Westernblot检测后3组IRS1、ptyr_IRS1、膜蛋白中GLUT4表达均较对照组升高（P〈0．05）,而3组间IRSl表达差异无统计学意义（P〉0．05）,4组间GLUT4表达差异无统计学意义（P〉0．05）,胰岛素＋Angll＋H89组ptyr_IRSI、GLUT4较胰岛素＋AngⅡ组表达增加（P〈0．05）,较胰岛素组表达减少（P〈0．05）。结论AngⅡ在骨骼肌细胞中通过JAK2-PKA通路抑制IRS1的酪氨酸磷酸化,抑制GLUT4由胞浆转移至胞膜,进而导皲哺岛素括精．     

棕榈酸致大鼠L6肌细胞胰岛素抵抗与JNK1活化的关系

目的建立棕榈酸(PA)诱导的大鼠L6肌细胞胰岛素抵抗模型,初步探讨其机制与C-jun氨基末端激酶1(JNK1)活化的关系。方法不同浓度PA分别培养已分化的L6肌细胞2、4、8、12、24、36 h,用葡萄糖试剂盒分别检测各组培养液中剩余葡萄糖浓度,观察不同浓度PA对骨骼肌细胞葡萄糖摄取的影响。MTT法检测棕榈酸对L6细胞活性的影响。建立L6肌细胞胰岛素抵抗模型,Western blot检测正常组(NG组)和胰岛素抵抗组(IR组)的JNK1和p-JNK1的蛋白表达水平。结果 0.4 mmol/L的PA孵育24～36 h与0.6、0.8 mmol/L的PA孵育8～24 h后细胞上清液葡萄糖浓度明显高于NG组(P<0.05),MTT结果显示0.8、1.0 mmol/L的PA作用24、36 h时对细胞的活性有影响。Western blot结果显示:NG组JNK1和p-JNK1的表达量较低,IR组JNK1和p-JNK1的表达量上升,其中p-JNK1表达量上升较JNK1明显,但与NG组比较,IR组的JNK1表达差异无统计学意义,p-JNK1、p-JNK1/JNK1表达差异均有统计学意义(P<0.05)。结论通过一定浓度和时间的PA刺激可导致大鼠L6成肌细胞胰岛素抵抗的形成,其机制可能和JNK1的活化有一定关系。     

短链脂肪酸对C2C12小鼠骨骼肌细胞AMPK的作用研究

目的:探讨短链脂肪酸对C2C12小鼠骨骼肌细胞AMPK的作用。方法:分别用不同浓度的乙酸钠、丙酸钠和丁酸钠孵育C2C12细胞24 h,MTS试验检测细胞活力,Western blot检测AMPK磷酸化水平。结果:与对照组相比,1 mmol/L和4 mmol/L乙酸钠,4 mmol/L丙酸钠以及4 mmol/L、8 mmol/L和16 mmol/L丁酸钠升高AMPK磷酸化水平,但不影响其总蛋白水平。结论:短链脂肪酸激活C2C12小鼠骨骼肌细胞AMPK。     

游离脂肪酸对大鼠肝脏和骨骼肌细胞PBP1B蛋白表达的影响

目的 研究游离脂肪酸大鼠肝脏和骨骼肌细胞酪氨酸磷酸酶蛋白量的影响,以探讨游离脂肪酸在肥胖诱发的胰岛素抵抗中的作用机理。方法 分离培养Ｗｉｓｔａｒ大鼠肝脏和骨骼肌细胞,分别与软脂酸（０．２５ｍｍｏｌ／Ｌ）或油酸（０．１２５ｍｍｏｌ／Ｌ）共同孵育６￣２４小时,应用Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交方法检测ＳＨ－ＰＴＰ２和ＰＴＰ１Ｂ的蛋白水平。结果 肝脏和骨骼肌细胞的ＰＴＰ１Ｂ蛋白量显著增高（Ｐ〈０．０５）,以２４小时     

Ghrelin对高脂环境下大鼠成肌细胞糖脂代谢的影响

 目的探讨Ghrelin 对高脂环境下大鼠成肌细胞糖脂代谢的影响,为深入研究2 型糖尿病的防治提供理论依据。方法对照组用含0.5%BSA 的DMEM培养12 h;高脂组用0.3 mmol/L 棕榈酸（PA,含0.5%BSA）培养12 h;干预组分为3 组,分别在高脂干预同时加入10-11 mol/L、10-9 mol/L、10-7 mol/L Ghrelin 作用12 h。用油红O染色法检测成肌细胞脂肪变性后甘油三酯沉积;用GPO-POD 酶法测定成肌细胞脂肪变性后甘油三酯含量;用同位素示踪法检测葡萄糖摄取。结果与对照组比较,在0.3mmol/L PA 组中,甘油三酯沉积和含量明显增加,葡萄糖摄取明显下降。与0.3 mmol/L PA 组对比,随着给予Ghrelin 的浓度逐渐增加,甘油三酯沉积和含量逐渐下降,葡萄糖摄取逐渐增加,并呈剂量依赖关系,其中10-7 mol/L Ghrelin 对损伤的修复作用最为明显。结论Ghrelin可减少大鼠成肌细胞的甘油三酯沉积,增加高脂环境下大鼠成肌细胞的糖摄取,并且存在剂量依赖关系。     

中链脂肪酸对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响

目的 观察中链脂肪酸对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响.方法 采用WST-1试剂检测200μmmol/L浓度的不同脂肪酸：辛酸（C8∶0）、癸酸（C10∶0）、豆蔻酸（C14∶0）、棕榈酸（C16∶0）、硬脂酸（C18∶0）、油酸（C18∶1）、亚油酸（C18∶2）、α-亚麻酸（C18∶3）对THP-1细胞活性的影响;建立ApoA1介导的胆固醇流出细胞模型;不同浓度脂肪酸（0μmmol/L、100μmmol/L、200μmmol/L）干预富集3H-胆固醇的THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞24h后,用液体闪烁计数仪检测并计算胆固醇的流出率.结果 不同脂肪酸在200μmmol/L浓度时,对THP-1细胞无细胞毒性作用（P＞0.05）;与空白组比较,ApoA1介导的细胞胆固醇流出明显增加（P＜0.05）;随着脂肪酸浓度的增加,C8∶0、C18∶0、C18∶1和C18∶3脂肪酸对细胞胆固醇流出影响差异有统计学意义（P＜0.05）;在200μmmol/L浓度时,C8∶0和C18∶3脂肪酸与对照组比较更能促进细胞胆固醇的流出（P＜0.05）,且C8∶0脂肪酸对促进胆固醇流出的影响明显高于C10∶0、C14∶0、C16∶0、C18∶0、C18∶1、C18∶2脂肪酸（P＜0.05）.结论 中链脂肪酸C8∶0能够促进THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇的流出,且在200μmmol/L浓度时明显优于其他脂肪酸.     

游离脂肪酸对大鼠肝脏和骨骼肌细胞PTP1B蛋白表达的影响

目的研究游离脂肪酸对大鼠肝脏和骨骼肌细胞酪氨酸磷酸酶蛋白量的影响，以探讨游离脂肪酸在肥胖诱发的胰岛素抵抗中的作用机理。方法分离培养Ｗｉｓｔａｒ大鼠肝脏和骨骼肌细胞，分别与软脂酸（０．２５ｍｍｏｌ／Ｌ）或油酸（０．１２５ｍｍｏｌ／Ｌ）共同孵育６～２４小时，应用Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交方法检测ＳＨＰＴＰ２和ＰＴＰ１Ｂ的蛋白水平。结果肝脏和骨骼肌细胞的ＰＴＰ１Ｂ蛋白量显著增高（Ｐ＜００５），以２４小时为著；ＳＨＰＴＰ２蛋白量无改变（Ｐ＞００５）。结论游离脂肪酸促进大鼠肝脏和骨骼肌细胞ＰＴＰ１Ｂ表达，提示游离脂肪酸可能通过增高ＰＴＰ１Ｂ蛋白量抑制胰岛素信号传导诱发胰岛素抵抗     

棕榈酸诱发的肝细胞脂质沉积和炎症机制中AMPKα2的作用研究

目的:探讨AMP活化蛋白激酶（AMPK）α2在棕榈酸（PA）诱发的肝细胞脂质沉积和脂多糖（LPS）诱导的炎症中的作用和机制。方法:分离小鼠原代肝细胞,将一部分细胞分为非特异性小干扰RNA（siRNA）对照组（siNR）和敲除AMPKα2 （siAMPKα2）组,每组细胞再分别用10%牛血清白蛋白（BSA）、200 μmol/L PA、磷酸盐缓冲液（PBS）、10 μg/mL LPS孵育16 h或6 h。油红O染色检测细胞中的脂质,Western 印迹检测核因子κB抑制蛋白（IκB）激酶（IKK）和激活c-Jun氨基末端激酶（JNK）的磷酸化。将另一部分肝细胞分为转染对照腺病毒组（Ad-GPF）和AMPKα2腺病毒组（Ad-AMPKα2）,每组再分别用10% BSA、200 μmol/L PA、PBS、10 μg/mL LPS孵育16 h或6 h,Western 印迹检测JNK和IKKα/β的磷酸化。结果:与对照组相比,siAMPKα2组 PA诱导的细胞内脂质积累增加（t=2.133,P<0.05）,PA和LPS磷酸化JNK（1.51±0.08,t=2.701,P<0.05）和IKKα/β（1.35±0.03,t=1.657,P<0.05）的作用加强,而AMPKα2腺病毒组PA和LPS升高JNK和IKKα/β磷酸化的作用显著受抑制。结论:AMPKα2可能通过抑制JNK及核因子-κB信号通路,改善PA诱导的肝细胞脂质沉积以及和PA和LPS诱导的肝细胞炎症。     

二甲双胍对慢性暴露于高糖及高游离脂肪酸的HIT-T15细胞胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶活性的影响

目的 观察二甲双胍(MF)对慢性高糖和高脂处理后的HIT-T15细胞(β细胞系)胰岛素受体(IRc)酪氨酸蛋白激酶(TPK)活性的影响,探讨MF对β细胞糖脂毒性,即β细胞胰岛素抵抗的改善作用机制.方法 实验分为对照组、对照 MF组、高糖组、高糖 MF组、高脂组、高脂 MF组.将HIT-T15细胞分别接种于含有5.5 mmol/L、16.7 mmol/L葡萄糖(G)及0.5 mmol/L软脂酸的培养液中,培养48 h后,加入2.5 μg/mL MF干预24 h.用放射性酶分析法测定β细胞IRc TPK活性.结果 高糖[(52.5±18.6) pmol/(min·μg), P＜0.01],且与对照组相比差异无统计学意义.MF对对照组HIT-T15细胞IRc TPK活性无明显影响.结论 高糖和高脂可抑制β细胞IRc TPK活性.MF能明显改善受高糖及高脂所抑制的HIT-T15细胞IRc TPK活性,且恢复到接近正常水平.提示MF对糖脂毒性所致β细胞胰岛素抵抗的改善作用可能与增加IRc TPK活性有关.     

苯丙氨酸对C2C12细胞葡萄糖摄取能力的影响及与mTOR-p70S6K通路的关系探讨

目的 观察苯丙氨酸对小鼠成肌细胞系C2C12葡萄糖摄取能力的影响,以及刺激后细胞内哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）-p70S6K信号通路分子的变化。方法 体外培养C2C12细胞,分化诱导为多核的肌管细胞后进行饥饿处理,然后分别用不同浓度苯丙氨酸（1.25、2.5、5、10、20 mmol/L）处理细胞,以KRB平衡液作为对照。通过检测2-NBDG评价细胞葡萄糖摄取能力。用Western blot方法检测细胞内mTOR、p70S6K、胰岛素受体底物（IRS）-1、蛋白激酶B(Akt)的表达情况。结果 与KRB平衡液对照相比,5 mmol/L亮氨酸使C2C12细胞的葡萄糖摄取能力下降了约30%（P=0.001）,5 mmol/L苯丙氨酸使C2C12细胞摄取葡萄糖的能力上升了约40%（P＜0.01）,且苯丙氨酸的这种促进作用随浓度增大有逐渐增强的趋势。苯丙氨酸对细胞内mTOR Ser2448磷酸化水平无明显影响。除1.25 mmol/L外,其它浓度苯丙氨酸均能抑制p70S6K Thr389的表达。亮氨酸使IRS-1 Ser636/639磷酸化水平表达增高（P＜0.01）,除1.25 mmol/L外,其它浓度的苯丙氨酸均有抑制IRS-1 Ser636/639表达的趋势,但与对照相比差异无统计学意义（P=0.381）。高浓度短时间的苯丙氨酸刺激对C2C12细胞内的Akt Ser473表达无明显影响。结论 苯丙氨酸可能通过减少p70S6K的磷酸化,继而减少p70S6K对IRS-1的刺激作用而使细胞葡萄糖摄取能力增强。但苯丙氨酸对mTOR-p70S6K通路的抑制作用不通过Akt的激活。     

游离脂肪酸对大鼠骨骼肌细胞葡萄糖转运蛋白4和胰岛素信号传导蛋白的影响

目的：观察游离脂肪酸对大鼠骨骼肌细胞葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）和胰岛素信号传导蛋白Grb2及ERK2的影响。方法：分离、培养新生Sprague-Dawley大鼠骨骼肌细胞,分别与软脂酸（0．25mmol/L)或油酸（0．125mmol/L)孵育12、24、36h,提取蛋白后用Western印迹法检测GLUT4、Grb2和ERK2的蛋白水平;用斑点印迹杂交法检测骨骼肌细胞内GLUT4 RNA含量的变化。结果：经软脂酸和油酸孵育12、24、36h后,大鼠骨骼肌细胞GLUT4的蛋白和RNA水平均显著降低（P＜0．05）;同时,Grb2和ERK2的蛋白水平也明显下降（P＜0．05）。结论：游离脂肪酸可抑制GLUT4的基因及蛋白表达和降低胰岛素信号传导蛋白Grb2和ERK2的蛋白表达水平,这可能会影响胰岛素的信号传导作用和骨骼肌的葡萄糖摄取,引起骨骼肌的胰岛素抑抗。