STAT3抑制剂LL1增强结直肠癌对5-FU的敏感性

目的 研究新型小分子STAT3抑制剂LL1对结直肠癌细胞对5-FU敏感性的影响,并初步探讨其机制.方法 不同浓度LL1(0,2,4μmol/L)处理结直肠癌HT-29细胞24 h,使用RT-PCR法检测各组细胞c-Myc、Survivin和Bcl-2 mRNA表达水平.CCK-8法检测不同浓度的LL1(0,1,2,4,...     

鞘氨醇激酶2抑制5-氟尿嘧啶诱导的人结肠癌HCT116细胞凋亡

目的 探讨鞘氨醇激酶2(SphK2)在5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导的人结肠癌HCT116细胞凋亡中的作用。方法 采用Hoechst33342染色检测5-FU作用48 h后HCT116细胞凋亡形态学的变化;流式细胞术检测5-FU作用48 h后HCT116细胞的凋亡率,并分析SphK2的干扰或过表达对5-FU诱导的HCT116细胞凋亡率的影响;用蛋白质印迹法观察5-FU诱导HCT116细胞SphK2活性的改变及干扰或过表达SphK2对5-FU诱导凋亡中凋亡标记蛋白的影响。结果 5-FU能诱导HCT116细胞凋亡,细胞出现了明显的核固缩、染色质凝集等凋亡形态变化。细胞SphK2被干扰后,与未被干扰的细胞相比,5-FU诱导后的细胞凋亡率增高(P<0.01),凋亡标记蛋白表达水平升高;而过表达SphK2的细胞在5-FU作用下其凋亡率较对照组(空质粒处理)下降(P<0.01),凋亡标记蛋白表达水平亦下降;5-FU可诱导磷酸化SphK2水平增高。结论 SphK2对5-FU诱导的HCT116细胞凋亡具有负调控作用。     

STAT3-siRNA对人结直肠癌细胞SW480的干涉作用

【目的】应用经小干扰RNA（shortinterfereRNA，smNA）表达盒介导的RNAj对结直肠癌细胞中的STAT3基因进行干涉作用以研究STAT3-siRNA对STAT3基因表达阳性的结直肠癌细胞凋亡的影响。【方法】用脂质体转染试剂将STAT3-siRNA表达盒（STAT3-siRNA expression cassettes，STAT3-SECs）体外转染至人结直肠癌SW480细胞及人成纤维细胞中。于48h后收集细胞，先经荧光染色方法观察细胞表象变化，再通过流式细胞仪检测人结直肠癌SW480细胞凋亡情况，最后分别提取细胞总RNA，用RT—PCR测定STAT3基因在mRNA水平的表达。【结果】SW480STAT3-SECs组的细胞可见凋亡小体，出现明显的凋亡现象，而其它实验组均未出现明显的凋亡现象。流式细胞术结果显示SW480STAT3-SECs组中凋亡细胞百分比由0．2％增加至26．0％；S期细胞比率由32．3％下降至9．2％。在mRNA水平上，SW480STAT3-SECs组细胞的STAT3基因表达减少了（62．16±12．50）％，显著低于SW480对照组（P〈0.01）。【结论】应用RNAi技术沉默STAT3基因可以降低人结直肠癌SW480细胞中STAT3的表达，诱导细胞的凋亡。     

苦参碱联合5-FU诱导人胃癌细胞凋亡的机制

目的探讨苦参碱和5-氟尿嘧啶(5-FU)联用诱导人胃癌细胞SGC7901凋亡的机制。方法1.0mg/mL苦参碱联合20mg/L5FU作用于SGC7901细胞48h,RTPCR和免疫细胞化学检测bcl-2、bax、Fas、Fas-L的mRNA和蛋白表达;免疫细胞化学、酶联免疫吸附试验和Westernblot检测活性caspase3的表达,并与空白对照组和单独苦参碱或5-FU用药组比较。结果联合用药组bcl2下调,bax、Fas上调,与空白对照组有显著差异(P<0.05),与单独用药组相比无显著性差异(P>0.05);联合用药组活性caspase-3表达显著增高,与各组比较均有显著差异(P<0.01)。结论苦参碱和5FU联用通过上调bax、下调bcl2/Fax,显著提高活性caspase3的表达,从而协同诱导胃癌细胞SGC7901的凋亡。     

5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导尖锐湿疣细胞凋亡的临床观察研究

目的:5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导尖锐湿疣细胞凋亡治疗。方法:60例外阴尖锐湿疣(CA)女性患者,用5-氟尿嘧啶或聚肌胞等疣体局封治疗,观察临床治疗后疣体消退及有无复发以及CA细胞的超微结构有无改变。结果:通过5-氟尿嘧啶治疗可使小的成片状或表浅的疣体组织萎缩、消失,出现细胞凋亡,与聚肌胞组相比,差异有统计学意义。结论:5-氟尿嘧啶可抑制胸腺嘧啶核苷酸合成酶,干扰CA细胞核苷酸和DNA的生物合成,诱导尖锐湿疣细胞凋亡,疣体局封具有疗效高、复发率低,操作简便的临床特性。     

GSK-3β在结直肠癌细胞凋亡中的作用

目的探讨糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)在结直肠癌细胞凋亡中的作用机制.方法以化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导结直肠癌细胞colo320凋亡,应用Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡百分率,用Western blot检测凋亡细胞总GSK-3β,分离细胞核与细胞浆蛋白,分析细胞浆/核GSK-3β和转录因子NF-κB水平.结果 Colo320细胞凋亡比例随5-Fu作用剂量增加和时间延长显著提高.对照组细胞GSK-3β和NF-κB主要位于胞浆中,凋亡组细胞总GSK-3β水平没有明显改变,但发生了细胞浆到细胞核的迁移.结论 GSK-3β以细胞浆/核迁移方式参与并促进了5-Fu诱导的结直肠癌细胞凋亡,其机制可能是通过抑制转录因子NF-κB向核中移位,从而阻断NF-κB的促生存作用.     

GSK-3β在结直肠癌细胞凋亡中的作用

目的探讨糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)在结直肠癌细胞凋亡中的作用机制。方法以化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导结直肠癌细胞colo320凋亡,应用Annexin V／PI双染流式细胞术检测细胞凋亡百分率,用Western blot检测凋亡细胞总GSK-3β,分离细胞核与细胞浆蛋白,分析细胞浆／核GSK-3β和转录因子NF—κB水平。结果Colo320细胞凋亡比例随5-Fu作用剂量增加和时间延长显著提高。对照组细胞GSK-3β和NF—κB主要位于胞浆中,凋亡组细胞总GSK-3B水平没有明显改变,但发生了细胞浆到细胞核的迁移。结论GSK-3β以细胞浆／核迁移方式参与并促进了5-Fu诱导的结直肠癌细胞凋亡,其机制可能是通过抑制转录因子NF—κB向核中移位,从而阻断NF—κB的促生存作用。     

苦参碱联合5-FU诱导人胃癌细胞凋亡的机制

目的探讨苦参碱和5-氟尿嘧啶(5-FU)联用诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的机制.方法 1.0 mg/mL苦参碱联合20 mg/L 5-FU作用于SGC-7901细胞48 h, RT-PCR和免疫细胞化学检测bcl-2、bax、Fas、Fas-L的mRNA和蛋白表达;免疫细胞化学、酶联免疫吸附试验和Western blot检测活性caspase-3的表达,并与空白对照组和单独苦参碱或5-FU用药组比较.结果联合用药组bcl-2下调,bax、Fas上调,与空白对照组有显著差异(P<0.05),与单独用药组相比无显著性差异(P>0.05);联合用药组活性caspase-3表达显著增高,与各组比较均有显著差异(P<0.01).结论苦参碱和5-FU联用通过上调bax、下调bcl-2/Fax,显著提高活性caspase-3的表达,从而协同诱导胃癌细胞SGC-7901的凋亡.     

CGI-58抵抗5-FU诱导的巨噬细胞凋亡

目的 观察CGI-58对5-FU诱导的巨噬细胞凋亡的影响,并探讨其作用及机制.方法 用5-FU处理巨噬细胞(PLKO)与CGI-58敲低(knockdown)的巨噬细胞(CGI-58 KD)后分别用CCK-8法检测其细胞增殖能力;流式细胞术检测其细胞周期与凋亡;Westem blot检测其凋亡蛋白(cleaved Caspase-3)的表达水平;Seahorse Assays检测其线粒体功能.结果 CCK-8检测发现CGI-58 KD+ 5-FU组细胞活力降低更明显(P＜0.01);流式细胞术结果显示经5-FU处理后,CGI-58 KD组的细胞凋亡率明显高于PLKO组(P＜0.01),Western blot检测发现CGI-58 KD+ 5-FU组cleaved Caspase-3的表达水平明显高于PLKO+ 5-FU组(P ＜0.01);Seahorse Assays检测发现CGI-58 KD组其基础耗氧率OCR明显降低(P＜0.0l),ATP生成减少(P＜0.05),ROS表达增加(P＜0.01);抗氧化剂NAC处理可拮抗巨噬细胞CGI-58缺失诱导的ROS增加(P＜0.05)、5-FU杀伤作用(P＜0.05)及cleaved Caspase-3表达水平.结论 CGI-58缺失可增强5-FU对巨噬细胞的杀伤作用并损伤巨噬细胞的线粒体功能,其作用机制可能是通过增加ROS的产生来实现的.     

巨噬细胞在结肠癌CT-26细胞获得性5-FU耐药中的作用

目的 探讨巨噬细胞在结肠癌CT26细胞对5-FU产生获得性耐药过程中的作用及其机制.方法 分别用正常培养基(NM)、巨噬细胞培养上清(CM)及预先用低剂量5-FU处理过的巨噬细胞培养上清[CM(5-FU)]处理CT-26细胞,并给予10μmol/L 5-FU处理,用CCK-8检测各组细胞增殖情况,PI/Annexin-V流式细胞术检测各组细胞凋亡情况及Western blot检测各组细胞凋亡信号通路.建立CT26小鼠皮下移植瘤模型,应用上述条件培养基处理联合5-FU化疗,动态观察移植瘤生长情况.结果 检测细胞凋亡情况发现,5-FU处理组CT26细胞的凋亡细胞百分比显著高于对照组(P＜0.05);Western blot检测结果显示5-FU处理组凋亡相关蛋白cleaved caspase-3及P-JNK的表达较对照组显著上调(P＜0.05);Western blot检测结果及结肠癌CT26细胞小鼠移植瘤模型发现P-JNK抑制剂可显著抑制由5-FU诱导的CT26细胞Caspase-3凋亡信号通路的激活;CCK-8检测结果及小鼠移植瘤模型中均发现CM(5-FU)能够显著降低CT26细胞对5-FU的化疗敏感性;细胞凋亡检测及Western blot检测结果发现CM(5-FU)可抑制由5-FU诱导的P-JNK/Caspase-3凋亡信号通路的激活.结论 5-FU可激活结肠癌CT-26细胞的P-JNK依赖的Caspase-3凋亡信号通路以发挥抗癌作用;5-FU诱导的巨噬细胞可导致结肠癌CT26细胞产生5-FU获得性耐药,其机制可能是5-FU诱导的巨噬细胞上清可拮抗CT-26细胞中5-FU激活的P-JNK/Caspase-3凋亡信号.     

奥沙利铂与氟尿嘧啶亚叶酸钙联合治疗晚期大肠癌的临床观察

目的奥沙利铂与氟尿嘧啶、亚叶酸钙联合治疗晚期大肠癌的临床疗效和不良反应。方法应用奥沙利铂与氟尿嘧啶、亚叶酸钙联合治疗晚期大肠癌40例,其中初治19例,复治21例,21天为一个周期,2个周期后评价疗效。结果40例患者中,总有效率为38%.直肠癌18例,PR6例,SD8例,PD4例,有效率为33.3%;22例结肠癌患者中,CR1例,PR9例,SD8例,PD4例,有效率为45.5%。初治患者19例,CR1例,PR7例,有效率为42.1%。复治患者21例,PR8例,有效率为38.1%,毒副反应主要表现为I度的神经毒性和I-II度的消化道反应以及骨髓抑制。结论奥沙利铂与氟尿嘧啶、亚叶酸钙联合治疗晚期大肠癌有效率高,毒副作用可以耐受,值得广泛应用于临床。     

健脾益气化瘀解毒方含药血清对结肠癌 HCT116细胞增殖、周期、凋亡的影响

目的探讨健脾益气化瘀解毒方含药血清对人结肠癌HCT116细胞增殖、周期、凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),凋亡相关蛋白Bcl-x L和Bax蛋白表达的影响。方法 10%、15%、20%健脾益气化瘀解毒方含药血清处理HCT116细胞12、24、48、72 h后,MTT法检测细胞增殖;不同浓度含药血清处理24、48 h后,碘化丙啶染色法检测细胞周期及凋亡率。蛋白质印迹法(Western blot)检测HCT116细胞内Caspase-3,Bcl-x L和Bax蛋白的表达;对照组均予以相同浓度空白鼠血清及10%胎牛血清(FBS)。结果细胞增殖:12 h后15%、20%含药血清与相同浓度鼠空白组比较,对HC116细胞的抑制作用具有统计学意义(P0.05),72 h对HCT116细胞的抑制作用最强(P0.05),健脾益气化瘀解毒方含药血清对HCT116细胞增殖具有良好的抑制作用,并与时间、浓度呈正相关。细胞周期:10%及15%含药血清组G2期细胞减少,而G1期与S期细胞增多,20%含药血清组G1期与S期细胞减少,而G2期细胞增加,48 h作用明显,而空白鼠血清细胞周期则无明显变化,说明含药血清能阻滞细胞周期,与时间呈正相关。细胞凋亡:与相应浓度对照组比较,含药血清处理24、48 h后,HCT116细胞晚期凋亡率增加,并且随浓度、时间增加凋亡率增加(P0.05),说明含药血清能促使HCT116细胞凋亡,与时间、浓度呈正相关。Western blot检测显示,与空白鼠血清组相比,15%含药血清可上调Bax蛋白表达,下调Caspase-3、Bcl-x L的蛋白表达(P0.05)。结论健脾益气化瘀解毒方可能通过将结肠癌HCT116细胞周期阻滞,从而抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,通过上调凋亡相关蛋白Bax,下调Caspase-3、Bcl-x L蛋白的表达诱导细胞凋亡。     

5-氟尿嘧啶和奥沙利铂诱导结肠癌SW620细胞死亡的比较

【目的】研究5-氟尿嘧啶和奥沙利铂分别诱导结肠癌细胞株SW620的细胞凋亡的作用效果。【方法】用80μg／ml 5-氟尿嘧啶和25μg/ml奥沙利铂分别作用SW620细胞8h,并应用AnnexinV—FITX／PI双标记流式细胞术对细胞凋亡进行检测,观察凋亡细胞的比例。【结果】80μg／ml 5-氟尿嘧啶处理8h组与空白对照组比较,凋亡细胞比例上升约11．9％（P〈0．01）;25μg／ml奥沙利铂处理8小时组与空白对照组比较,凋亡细胞比例上升约21．4％（P〈0．01）。【结论】在特定条件下,5-氟尿嘧啶和奥沙利铂均能明显诱导结肠癌细胞株SW620的细胞凋亡;奥沙利铂对结肠癌细胞的诱导凋亡作用要强于5-氟尿嘧啶。     

长链非编码RNA LINC01106通过STAT3通路调控结直肠癌细胞增殖及凋亡

目的 探讨LINC01106在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞增殖及凋亡能力的影响。方法 分析公共数据库结直肠癌患者的肿瘤组织及正常组织LINC01106表达水平及其对患者预后的影响;构建LINC01106敲减及过表达结直肠癌细胞株;采用CCK-8实验检测LINC01106敲减及过表达对结直肠癌细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测LINC01106敲减对结直肠癌细胞凋亡水平的影响;免疫印迹检测LINC01106敲减对结直肠癌细胞p-STAT3、STAT3、Bcl-2蛋白表达的影响;建立裸鼠移植 瘤模型观察LINC01106表达水平对结直肠肿瘤体内生长的影响,随机分为2组,9只/组。对照组：接种SW480细胞,敲减组：接种LINC01106敲减的SW480细胞。结果 TCGA数据库分析结果显示结直肠癌肿瘤组织LINC01106的表达水平明显高于正常组织,且LINC01106的表达水平与结直肠癌患者预后相关,差异具有统计学意义（P<0.05）;敲减LINC01106可以明显抑制SW480结直肠癌细胞增殖,促进凋亡（P<0.05）,过表达LINC01106可以明显促进SW480结直肠癌细胞增殖;敲减LINC01106可以抑制p-STAT3和Bcl-2蛋白表达水平;下调LINC01106可以抑制裸鼠移植瘤体内生长。结论 LINC01106在结直肠癌患者肿瘤组织中表达显著上调,且与患者预后相关。INC01106可以通过STAT3/Bcl-2信号调控SW480结直肠癌细胞增殖及凋亡;LINC01106有望成为结直肠癌诊断及预后评估的潜在标志物。     

三氧化二砷诱导肠癌HT-29细胞周期阻滞及凋亡的研究

目的：探讨三氧化二砷（AsO3）对结肠癌细胞增殖的抑制作用及对细胞周期和凋亡的影响。方法：采用MTr法测定细胞增殖活力，通过细胞形态学观察细胞分裂及凋亡，应用流式细胞仪进行细胞周期解析、凋亡的检测。结果：As2O3呈剂量-时间依赖性抑制结肠癌HT-29细胞系的增殖，作用24、48及72h后抑制50％细胞生长的药物浓度（IC50）分别为40．03,13．76,4．53μmol/L，与对照组差异显著（P〈0．05）。2μmol/L与5μmol/L的As2O3作用24h后，细胞周期出现G2/M期阻滞及亚二倍体凋亡峰，随着作用时间的延长，凋亡细胞随岛，M期细胞减少而逐渐增多。细胞形态学观察分裂期细胞及凋亡细胞明显增加。结论：As12O3抑制结肠癌HT-29细胞的增殖，诱导G2/M期阻滞及细胞凋亡。     

奥曲肽联合5-FU对体外培养的大肠癌细胞增殖及突变型p53蛋白表达的影响

目的：通过生长抑素类似物奥曲肽（OCT）联合5-FU对体外培养的大肠癌细胞作用及对p63蛋白的影响为大肠癌的临床治疗提供一定的理论依据。方法：采用结肠癌细胞原代培养，采用MTT比色分析法测定奥曲肽与5-FU联合是否抑制作用增强；流式细胞仪间接免疫荧光技术检测药物作用后的肿瘤细胞突变型p63蛋白表达情况。结果：5-FU和奥曲肽联合应用对大肠癌的抑制率高于单独应用。5-FU和1．0μg/ml OCT组均抑制突变型p63蛋白的表达，联合用药组更为明显。结论：奥曲肽和5-FU都能抑制肿瘤细胞的突变型p63蛋白的表达，且联合应用抑制作用强于两者的单独应用，这可能是奥曲肽能增强5-FU对结肠癌细胞抑制作用的机制之一。     

EGCG对人结肠癌细胞株HCT116、SW116增殖、凋亡及JAK／STAT3信号通路的影响

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCC）对人结肠癌细胞株HCT116、SW116增殖、凋亡及JAK／信号转导子与转录激活子3（STA33）信号通路的影响。方法体外培养结肠癌细胞株,采用不同浓度的EGCG对其进行干预。分别采用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,ELISA法检测磷酸化STAT3（P—STA33）蛋白表达,RT—PCR法检测Bcl-2、Cyclin D1、C—myc mRNA的表达。结果EGCG抑制结肠癌细胞株增殖,促进其凋亡,降低p-STA33蛋白的表达水平,作用呈浓度依赖性;EGCG可以抑制结肠癌细胞株中Bcl-2、Cyclin D1、C-myc mRNA表达水平。结论EGCG抑制结肠癌细胞株增殖、促进其凋亡的机制可能与抑制JAK／STA33信号通路有关。