细胞外信号调节激酶信号通路与基质金属蛋白酶-26在肺腺癌表达中的关系

目的 研究细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)通路与基质金属蛋白酶-26(ma-trix metalloproteinase-26,MMP-26)在肺腺癌表达的相关性及意义.方法 应用免疫组织化学(S-P)法检测pERK、pp38MAPK及MMP-26在44例肺腺癌组织巾的表达.Western blot柃测U0126阻断ERK信号通路后肺腺癌A549细胞MMP-26蛋白表达水平的变化.分析 pERK和MMP-26表达与肺腺癌预后的关系.结果 pERK、pp38MAPK及MMP-26蛋白在肺腺癌组织巾高表达率分别为59.1%、20.4%、54.5%,pERK与MMP-26表达存在正相关(r=0.63,P＜0.05),并与肺腺癌的临床分期及淋巴转移状况有统计学差异(P＜0.05),而与患者年龄、肿瘤大小无统计学差异(P＞0.05).pp38MAPK与MMP-26表达无关(r=0.01,P＞0.05),与患者年龄、淋巴转移、肿瘤大小、临床分期均无统汁学差异(P＞0.05).用ERK阻断剂U0126阻断ERK信号通路可降低MMP-26蛋白表达水平,并且随U0126浓度升高MMP-26蛋白表达水平逐渐降低.肺腺癌组织pFRK、MMP-26蛋白的表达与肿瘤的预后显著相关(分别为Log-Rank=5.52、Log-Rank=7.01,P=0.019、P=0.008).结论 ERK信号通路可能通过上凋MMP-26的表达促进肺腺癌的恶性进展,ERK信号通路可能是肺腺癌侵袭和转移的重要途径,pERK和MMP-26的表达可辅助用于肺腺癌的预后评估.     

ERK信号通路与MMP-9在肺腺癌表达中的相关性

目的研究细胞外信号调节激酶(ERK)通路与基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在肺腺癌表达中的相关性及意义。方法应用免疫组织化学(SP)法检测磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)、MMP-9在67例肺腺癌组织中的表达。Western blot检测PD98059阻断ERK信号通路后肺癌细胞MMP-9蛋白表达水平的变化。结果 pERK蛋白在肺腺癌组织和正常组织中高表达率分别为65.6%、14.3%;MMP-9蛋白在肺腺癌组织和正常组织中高表达率分别为73.1%、21.4%。pERK与MMP-9表达存在正相关(r=0.57,P<0.05)。pERK、MMP-9的表达均与肺腺癌的TNM分期及淋巴转移状况相关(P<0.05),而与患者年龄、肿瘤大小无明显相关性(P>0.05)。用ERK阻断剂PD98059阻断ERK信号通路可降低MMP-9蛋白表达水平,并且随PD98059浓度升高MMP-9蛋白表达水平逐渐降低。结论 ERK信号通路可能通过上调MMP-9的表达促进肺腺癌的恶性进展,ERK信号通路可能是肺腺癌侵袭和转移的重要途径。     

宣威地区肺腺癌病人肺组织特异miRNAs表达谱和靶基因及其信号通路预测

目的 筛选出宣威地区肺腺癌病人肺组织miRNAs差异表达谱,预测其相关靶基因和信号通路.方法 选取来自宣威地区肺腺癌24例和非宣威地区肺腺癌10例患者手术切除的肺癌组织和正常肺组织标本,miRNAs芯片检测34对肺癌切除标本,筛选宣威肺腺癌miRNAs差异表达谱,AGO分析和KEGG Pathway分析预测其miRNAs的生物与肺癌相关的靶基因和信号通路.结果 miRNAs芯片检测:与非宣威肺腺癌比较,宣威肺腺癌差异表达显著的特异miRNAs34个:表达上调的miRNAs有23个,表达下调的miRNAs有11个.AGO富集分析及KEGG数据库映射分析发现:预测主要集中在PI3K/Alt信号通路附近,其预测靶基因有:GF、RTK、SOS、IRS1、BCAP、CYTOKINSR、ECM、ITGB、FAK和GBY,可能对肺癌生物学功能产生影响的靶基因主要集中在PI3K/Alt,WNT和MAPK通路.结论 筛选出这些特异性miRNAs可能在宣威肺腺癌癌变和进展中起重要作用,预测的靶基因可能与调节PI3K/Alt,WNT和MAPK信号通路的作用有关.     

人肺腺癌与癌旁组织mRNA差异表达及信号通路的变化

目的:利用全基因组表达谱芯片对人肺腺癌和癌旁组织中差异表达的mRNA进行检测,对mRNA在肺腺癌发生过程中可能涉及到的信号通路变化进行分析。方法:提取6例人肺腺癌与癌旁组织标本中的总RNA,体外逆转录制备ds-cDNA并用Cy3荧光标记,与含有19 000条mRNA的芯片进行杂交,扫描软件扫描芯片荧光信号图像,筛选差异表达的mRNA并进行信号通路分析。结果:1差异表达的mRNA总共有832条,其中在肿瘤组织中相对高表达的mRNA有407条,相对低表达的mRNA有425条(大于2倍变化且P<0.05)。2信号通路分析发现差异表达的mRNA参与了9个信号通路的调控,其中同源重组信号通路、人转化生长因子-β通路、丝裂原激活蛋白激酶信号通路、细胞周期信号通路、p53信号通路等5条信号通路与肿瘤的发生有关。结论:人肺腺癌组织中有大量mRNA发生差异表达,差异表达的mRNA在多个与肺腺癌发生密切相关的信号通路中发挥重要的调控作用。     

EGFR基因在肺腺癌中突变的研究

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)基因酪氨酸激酶域体细胞在肺腺癌患者中突变的相关因素。方法:分析和检测64例肺腺癌石蜡包埋标本EGFR基因突变状况,采用PCR和序列分析技术进行EGFR基因18、19和21外显子突变分析。结果:64例PAC患者中有16例(25%)酪氨酸激酶域存在体细胞突变。其中2例(3.1%)为18外显子,7例(10.93%)为19外显子,7例(10.93%)为21外显子。结论:肺腺癌(PAC)患者肿瘤组织中EGFR基因突变主要集中于19、21外显子突变,女性高于男性。     

基于生物信息学方法识别肺腺癌预后相关基因

目的利用生物信息学方法筛查肺腺癌的差异基因,分析其在肺腺癌的发生发展过程中可能参与的信号传导通路,寻找肺腺癌的关键基因并评估其对肺腺癌预后的意义。方法从GEO数据库中获取肺腺癌基因表达芯片数据集GSE10072、GSE32863、GSE43458和GSE116959,将四组数据集整合后获得肺腺癌的差异表达基因,采用STRING数据库对差异表达基因构建肺腺癌蛋白-蛋白互相作用网络,通过在线网站DAVID对差异基因进行GO富集分析和KEGG通路分析,用Cytohubba筛选关键基因,并利用GEPIA分析关键基因与预后的相关性。结果初步筛查得到214个差异基因,包括42个上调基因和172个下调基因,最后筛选得到6个关键基因。生存分析显示PECAM1、SPP1和KIAA0101的表达对肺腺癌的预后有显著影响(P<0.05),Diseasemeth分析显示SPP1、KIAA0101、COL3A1、GNG11和FOS基因在肺腺癌组织中的甲基化水平异常(P<0.05)。结论这6个基因可能参与了肺腺癌的发生发展,对肺腺癌的诊断、靶点治疗和预后提供一定参考。     

肺癌nm23基因产物核苷二磷酸激酶的表达及其临床意义

为了探讨肺癌中ｎｍ２３基因产物核苷二磷酸激酶的表达及其临床意义，应用免疫组化方法（Ｓ Ｐ法）检测肺癌组织标本中ｎｍ２３基因产物核苷二磷酸激酶的表达．结果，ｎｍ２３基因产物核苷二磷酸激酶在肺癌中表达阳性率为５４％，其中鳞癌４２％，腺癌６９％，两者有显著差别．ｎｍ２３基因产物核苷二磷酸激酶表达与肺鳞癌有无淋巴结转移显著相关，与肺腺癌有无淋巴结转移无显著相关性．ｎｍ２３基因可能在不同类型肺癌的形成和转移过程中起不同的调节作用，在肺鳞癌淋巴结转移过程中发挥负性调控作用     

Nrf2调控PI3K/Akt信号通路促进肺腺癌进展的机制研究

目的 探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)调控磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(Akt)信号通路促进肺腺癌进展的可能机制。方法 收集2020年10月至2021年10月在徐州医科大学附属医院住院并接受手术治疗的30例肺腺癌患者的癌组织及癌旁组织标本，通过RT-qPCR法、免疫组化法、Western blot法检测Nrf2在肺腺癌组织与癌旁组织中的表达情况；体外培养A549肺腺癌细胞株，转染Nrf2的小干扰RNA(siRNA)沉默片段与过表达质粒后随机分为Nrf2沉默表达组（si-Nrf2组）、沉默表达阴性对照组（si-NC组）、Nrf2过表达组（vector-Nrf2组）和过表达阴性对照组（vector组），通过EdU染色、Transwell实验检测Nrf2对肺腺癌细胞增殖、迁移能力的影响，并通过Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白的表达水平，探讨Nrf2对PI3K/Akt信号通路的调控作用。结果 肺腺癌组织中Nrf2 mRNA、蛋白表达水平均高于癌旁组织（均P<0.05）。Nrf2沉默显著抑制A549细胞增殖和迁移能力（均P<0.05）,Nrf2过表达则...     

SAC复合体相关基因TTK和MAD2L1基因在肺腺癌中过表达：基于大数据的生物信息学分析

目的 通过大数据筛选与肺腺癌预后相关的关键基因并探讨其临床价值和潜在机制。方法 基于基因表达综合数据库（GEO）中获得的GSE18842,GSE27262以及GSE33532基因表达谱进行数据分析;生物信息学方法筛选肿瘤组织和正常肺组织的差异表达基因,对其进行京都基因与基因组百科全书（KEGG）和基因本体论（GO）富集分析后进行蛋白质-蛋白质相互作用网络（PPI）、模组、表达差异和预后分析和筛选。35例非小细胞肺癌标本和35例配对的癌旁正常组织,共70例组织标本分为肿瘤组和正常组对MAD2L1和TTK的表达进行了免疫组化验证。结果 共有256个基因的表达谱数据有统计学差异（P<0.05）,包括66个上调基因,190个下调基因。进行功能分析后筛选出 32 个上调基因。32个基因中的29与肺腺癌预后显著相关。相较与正常肺组织,所有29个基因均在肺腺癌组织中高表达并主要富集在细胞周期通路。其中7个关键基因与纺锤体组装检查点（SAC）复合体紧密相关,负责调控细胞G2/M期行为。我们选择了SAC相关基因TTK和MAD2L1,在肺腺癌患者组织标本中观察到了TTK和MAD2L1相较与癌旁正常肺组织的过表达。结论 以TTK和MAD2L1为代表的7个SAC复合体相关基因在肺腺癌患者中存在过表达,且其过表达与预后相关。     

肺腺癌关键基因筛选及CDC20在肺腺癌中的表达

目的：筛选肺腺癌的关键基因,揭示肺腺癌潜在的分子机制。方法：利用3个肺腺癌相关基因芯片数据集,共包括156例肺腺癌和106例正常肺组织,进行肺腺癌潜在关键基因的筛选。结果：通过芯片数据分析得到341个重叠差异表达基因（differentially expressed gene,DEG）,DEG主要富集的生物学过程是细胞外基质组织、调控化学激酶介导的信号通路、细胞对转化生长因子刺激的反应、细胞外基质组装、调控新生血管生成等。通过蛋白互作网络（protein protein interaction,PPI）筛选出10个关键基因,其中8个基因AURKA（aurora kinase A）、CDC20（cell division cycle 20）、CDH5（cadherin 5）、COL1α1（collagen Ⅰ,α1）、EDN1（endothelin 1）、MMP9（matrix metalloprotein 9）、PECAM1（platelet endothelial cell adhesion molecule 1）、SPP1（secreted phosphoprotein 1）与肺腺癌预后相关。其中CDC20与肺腺癌预后相关性最高,亚组分析发现,CDC20在肺腺癌各年龄段患者中的表达均明显高于正常组,CDC20在一期肺腺癌中表达低于二期、三期、四期,CDC20在腺泡型、实性为主型、混合型、透明细胞型表达高于其他亚型,CDC20在吸烟的肺腺癌患者中的表达低于不吸烟者。免疫组化检测显示CDC20在肺腺癌组织中表达明显高于正常肺组织,且腺泡型、实体型表达高于其他亚型。结论：CDC20在肺腺癌中高表达,且其高表达与肺腺癌的不良预后显著相关。CDC20有可能成为肺腺癌治疗的新靶点。     

多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗患者血清miRNA差异表达及二甲双胍干预作用

目的：二甲双胍对多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗（PCOS-IR）患者血清基因表达谱的影响。方法：选择PCOS-IR患者6例为治疗组，健康育龄期女性6例为健康对照组，采用基因芯片和RT-PCR的方法研究临床诊断为PCOS-IR患者的血清miRNA表达变化及二甲双胍干预后的血清miRNA变化。对筛选并验证后具有差异表达的miRNA先用生物信息学方法，再用Gene Ontology和KEGG通路的数据库进行功能和通路分析。结果：系统聚类结果显示治疗组治疗前与健康对照组和治疗后均存在差异。通过RT-PCR验证，治疗组治疗前与健康对照组比较，得到10个差异表达变化的miRNA（P＜0.05）；治疗组治疗前与同组治疗后比较，得到8个差异表达变化的miRNA（P＜0.05）。GO分析显示：差异表达基因与转录调控、信号转导、跨膜转运、细胞增殖、细胞凋亡、细胞代谢、细胞黏附、蛋白磷酸化、蛋白质运输、多细胞生物发育、凝血功能、神经传导等有关。KEGG分析显示，差异表达miRNA参与显著表达的通路有：EGFR酪氨酸激酶抑制剂抗性、Rap1信号通路、wnt信号通路、前列腺癌通路、mTOR信号通路、cAMP信号通路、磷脂酰肌醇信号系统、MAPK信号通路。共得到878个与PCOS-IR及其二甲双胍治疗更相关的靶基因。结论：部分miRNA参与PCOS-IR的发病和二甲双胍治疗过程。     

整合素β1信号通路参与非小细胞肺癌吉非替尼获得性耐药

目的 探讨整合素β1及其下游信号转导通路在非小细胞肺癌表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR) 酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor, TKI)吉非替尼获得性耐药中的作用。方法 以人肺腺癌细胞株PC-9和吉非替尼耐药株PC-9/G作为研究对象,用MTT法检测吉非替尼和/或磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制剂LY294002、细胞外调节蛋白激酶（ERK）抑制剂PD98059对细胞增殖抑制率的影响;用Annexin Ⅴ/PI试剂盒和TUNEL试剂盒检测细胞凋亡。免疫印迹分析检测整合素β1、Akt、磷酸化Akt蛋白的表达。结果 吉非替尼耐药株PC-9/G高表达整合素β1,RNAi抑制整合素β1表达能够抑制PC-9/G细胞的生长、促进调亡。ERK抑制剂PD98059不能恢复PC-9/G细胞对吉非替尼的敏感性。PC-9/G细胞中吉非替尼对Akt的磷酸化的抑制作用弱于PC-9细胞。PI3K抑制剂LY294002能恢复PC-9/G细胞对吉非替尼的敏感性,RNAi抑制整合素表达后Akt的磷酸化水平降低。结论 表达升高的整合素β1通过PI3K途径激活下游信号分子可能是一种重要的EGFR-TKI耐药机制。     

小分子Janus 激酶抑制剂在炎症性肠病中的应用

Janus 激酶是细胞内酪氨酸激酶,在许多参与免疫的细胞因子的信号传导途径中起着关键作用。 JAK-STAT 信号通路对于细胞的增殖、凋亡及免疫调节等起到了重要作用,目前与疾病及药物创新相干的研 究都集中于炎症疾病及肿瘤疾病。JAK 激酶可能成为炎症性肠病治疗的新靶点。该文就小分子Janus 激酶抑 制剂在炎症性肠病中的应用做一综述。     

阻断PI3K/Akt通路对云南宣威肺腺癌细胞放射敏感性研究

目的研究抑制磷脂酰肌醇3激酶和(或)蛋白激酶B(PI3K/Akt)生存传导通路能否改变云南宣威肺腺癌(XWLC-05)细胞的放射敏感性。方法用XWLC-05细胞株为实验对象,分别接受单纯放射、Ly294002(PI3K抑制剂)以及二者同时作用。应用细胞克隆形成实验法分析细胞增殖性凋亡,流式细胞术测定不同条件下细胞的周期分布比例和细胞凋亡情况。结果 XWLC-05细胞经Ly294002(20μmol.L-1)处理后细胞存活率显著降低(P<0.01);Ly294002(20μmol.L-1)处理不同放射剂量XWLC-05细胞12、24、36 h后G2/M期细胞相对增加,凋亡细胞增加(P<0.05);Ly294002结合放射可增加XWLC-05细胞放射后诱导的细胞凋亡,经2 Gy照射后的细胞存活分数(SF2)值的放射增敏比为1.05。结论抑制PI3K通过降低Akt活性,增加XWLC-05细胞对放射的敏感性,为更好地筛选放射敏感剂提供了实验依据。     

γ分泌酶抑制剂阻断Notch信号通路对肺腺癌细胞A549增殖的影响

目的观察γ分泌酶抑制剂MW167阻断Notch信号对肺腺癌细胞A549增殖的影响。方法正常氧条件下培养肺腺癌细胞A549,通过Western blotting及RT-PCR方法检测Notch受体各亚型的表达。在正常氧条件下,不同浓度(5、10、20μmol/L)MW167处理肺腺癌细胞A549(加药组),48 h后采用Western blotting方法检测Notch1蛋白表达的变化,采用RT-PCR方法检测Notch信号通路下游基因HES1mRNA表达的变化,应用MTT法检测MW167对细胞增殖的影响;每个浓度设二甲基亚砜对照组。结果 Notch1～4各亚型在A549细胞均有表达。5、10、20μmol/L MW167处理肺腺癌A549细胞48 h后,各加药组与对照组相比,Notch1蛋白表达升高(P<0.05),而HES1 mRNA表达下降(P<0.05),随MW167浓度升高,对HES1 mRNA表达的抑制率逐渐升高(r=0.927,P<0.01)。MTT法检测结果显示各加药组吸光度高于对照组(P<0.05),且随MW167浓度升高,细胞增殖率相应升高(r=0.904,P<0.01)。结论在正常氧条件下,MW167可阻断Notch信号通路,对A549细胞起促增殖作用;Notch1信号通路可能在A549细胞中起一定抑癌作用。     

尼洛替尼和伊马替尼对慢性粒细胞 白血病表达谱的影响

目的 探索尼洛替尼和伊马替尼对慢性粒细胞白血病（CML）细胞基因表达谱的影响,阐明酪氨酸 激酶抑制剂（TKI）抑制白血病的分子机制。方法 从在线基因表达数据库中下载表达谱数据集GSE19567, 利用BRB-ArrayTools 软件进行质量控制并筛选差异表达基因（DEGs ）,然后分别对差异基因进行GO 功能 富集分析、KEGG 通路富集分析、pathway 互作网络和基因互作网络分析。结果 共筛选出差异基因519 个, 其中177 个上调表达,342 个下调表达。GO 富集分析发现DEGs 主要涉及小分子代谢、血液凝固、转录调控、 细胞增殖与凋亡调控等生物过程,发挥的分子功能集中在蛋白结合、蛋白二聚化、序列特异性DNA 结合和 ATP 结合等。KEGG 富集分析发现代谢通路、PI3K-Akt 信号通路、Jak-STAT 信号通路和HIF-1 信号通路 等pathway 显著富集。网络分析挖掘出的核心基因有SHMT 2、CBS 、CTH 、HK 2,核心pathway 包括MAPK 信号通路、细胞周期和细胞凋亡等。结论 酪氨酸激酶抑制剂影响了CML 细胞代谢通路和信号转导通路的相 关基因,通过细胞周期阻滞和诱导凋亡等机制抑制白血病,为白血病的靶向治疗提供了基础。     

敲低galectin-1可抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭并促进其凋亡

目的 探讨半乳糖凝集素-1（galectin-1）对肺腺癌细胞的影响及其机制。方法 收集并比较肺腺癌组织和癌旁正常组织galectin-1的表达水平。qRT-PCR法检测肺腺癌细胞系A549、H1299与正常支气管上皮细胞细胞BEAS-2b中galectin-1的表达差异。通过si-RNA敲低galectin-1,分为对照组和si-RNA组,对照组转染同剂量NC-siRNA片段。通过qRT-PCR和Westernblot检测galectin-1mRNA和蛋白水平的表达情况。CCK8、Transwell实验、划痕实验和流式细胞术检测敲低galectin-1后对肺腺癌细胞增殖能力、侵袭和迁移能力和细胞凋亡的情况。Western blot检测敲低galectin-1后凋亡相关蛋白BAX、BCL-2、Caspase3等蛋白和AKT、ERK二条通路蛋白的相对表达情况。结果 galectin-1的mRNA在肺癌组织和肺腺癌细胞株中表达量明显升高（P<0.05）。抑制galectin-1表达后,细胞增殖、迁移和侵袭等下降,凋亡率明显升高（P<0.05）。在抑制galectin-1表达后,ERK信号通路磷酸化水平明显降低（P<0.05）。结论 galectin-1具有抑制肺腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和促进其凋亡的作用,其机制可能与ERK通路的磷酸化激活水平有关。     

Panx1基因在非小细胞肺癌中的表达及生物学功能生物信息分析

目的 探讨泛连接蛋白1基因在人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中表达和预后关系。 方法 首先在癌症基因组图谱数据库(TCGA)中对Panx1基因差异表达情况进行分析。在STRING数据库中构建Panx1基因编码蛋白相互作用网络。对Panx1基因功能进行富集和注释,并分析相关信号通路。根据Panx1基因在患者癌组织中的表达水平分为高表达和低表达组,分析高低表达组生存期差异有无统计学意义。同时选取NSCLC患者61例,采用免疫组织化学法检测患者手术标本中癌和癌旁正常组织中Panx1表达水平,分析比较Panx1表达与患者临床病理特征及预后的关系。 结果 Panx1基因在NSCLC患者癌组织中表达水平明显高于正常肺组织;Panx1基因在不同分期NSCLC患者中差异存在统计学意义(F=3.300,P=0.020)。Panx1基因编码产物主要参与了多器官发育、细胞间交流和对刺激的反应生物学过程;信号通路主要富集于细胞增殖信号通路、凋亡信号通路和钙离子相关信号通路。PAFAH1B2与Panx1基因表达水平呈正相关(r=0.650,P=0.023),而C22orf32与Panx1基因表达呈负相关(r=-0.340,P=0.032)。Panx1基因高表达与NSCLC患者总生存(OR)相关,高表达组OS低于低表达组(HR=1.400,P=0.001),而Panx1基因表达水平与患者无疾病进展生存(DFS)无明显相关性。亚组分析显示,Panx1基因表达与肺腺癌OS生存有关(HR=1.400,P=0.017)。Panx1表达水平与NSCLC患者TNM分期(χ2=7.244,P=0.007)和纵隔淋巴结转移有关(χ2=7.582,P=0.006)。 结论 Panx1基因在非小细胞肺癌患者肿瘤组织中表达水平上调,高表达与患者的总生存期较短有关。